LWT - Ciencia y Tecnologa de Alimentos 44 (2011) 1971e 1975

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j o u r n a l h a s p g in: w w w. e l s v i e r. c o m / l o c a t e / l w t

Nota de Investigacin

Composicin de carotenoides pigmento, contenido de polifenoles y la actividad antioxidante de

extractos de repollo chino de color naranja
Mitsuru Watanabe
a

un, *

, Keiichi Musumi , Junio Ayugase

un

Centro Nacional de Investigacin Agrcola para la Regin de Tohoku, 4 Akahira, Shimokuriyagawa, Morioka, Iwate 020-0198, Japn

Estacin de Cra Takii Plant, 1360 Hari, Konan, Shiga 520-3231, Japn

abstract
articleinfo
Historia del artculo:
Recibido 04 de octubre
2010 Recibido en forma
revisada 22 de marzo 2011
Aceptado 26 de abril 2011
Palabras clave:
Col china
Los carotenoides
Prolycopene
Polifenoles
La actividad antioxidante

Se investig la composicin de pigmento carotenoide en la col china de color naranja (OC) (Brassica rapa; cultivar (cv),
Orange reina) y (normal) de col china (NC) (B. rapa; cv, Yuki), _ y evaluado las actividades antioxidantes de los extractos de
carotenoides y compuestos fenlicos. Aunque los principales pigmentos de carotenoides en NC son la lutena y b-caroteno,
OC contena 7Z, 9Z, 7'Z, 9'Z tetra-cis-licopeno (prolycopene) y fitoeno como los principales pigmentos carotenoides junto
0
con bcaroteno. El contenido de carotenoides total de extractos de OC fue dos veces ms alta que los extractos de NC. El 2,2 Azino-Bis (-6-sulfnico 3-etilbenzotiazolina cido) (ABTS) actividad antioxidante con extractos de carotenoides de OC [169
_ 2 mmol Trolox equivalentes / 100 g de peso seco. (DW) (promedio _ SD)] fue significativaficativamente mayor que los
extractos de carotenoides de NC (132 _ 7 mmol Trolox equivalentes / 100 g DW) (P < 0.001). Por otra parte, los fenoles
totales de extractos metanlicos de OC (387 _ 11 mg / 100 g DW) fue significativaficativamente mayor que los extractos
metanlicos de Carolina del Norte (263 _ 2 mg / 100 g DW) (P < 0,001), y el radical anin superxido-barrido () actividades
de tipo SOD de extractos metanlicos de OC (70 _ 2%) fueron tambin ms altos que los extractos metanlicos de NC (61 _
2%) (P < 0.001). Estos resultados sugieren que OC contiene grandes cantidades de compuestos carotenoides y fenlicos con
actividad eliminadora de radicales en comparacin con NC.

2011 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

1. Introduccin
Col china (Brassica rapa) es un vegetal comn en Japn, y es rico en
vitamina C y minerales como el potasio, calcio, magnesio y zinc.
Composicin de pigmentos de carotenoides en muchos vegetales del gnero
Brassica, como el brcoli, las coles de Bruselas, col blanca, col roja, col
rizada, y cauliflower han sido investigados ( Podse dek, 2007), Y la lutena y
bcaroteno fueron reportados como los carotenoides dominantes. Col china
tambin contiene lutena y bcaroteno como el principal pigmento carotenoide
( Testamentos y Rangga, 1996); el contenido de bcaroteno comprendido
entre 0,01 y 0,03 mg / 100 g de peso fresco ( Singh, Upadhyay, Prasad,
Bahadur, y Rai, 2007). Repollo de color naranja china (OC), que fue
producido por el cruce de la col y el nabo (B. rapa) y posterior
retrocruzamiento chino, tiene una caracterstica de cabeza interior de color
naranja intenso. Esto sugiere que la composicin de pigmento de OC difiere
de la de col china (normal) (NC). Los pigmentos vegetales como carot-enoid
y flcompuestos avonoid (que contienen antocianinas) poseen actividad
antioxidante frente a diversas especies reactivas del oxgeno. En

Autor para correspondencia. Tel. / Fax: 81 19 643

3513.
Direccin
de
correo
electrnico:
wata@affrc.go.jp (M. Watanabe).
0023-6438 / $ e see front matter 2011 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
doi: 10.1016 / j.lwt.2011.04.010

2. Materiales y mtodos
breves, pigmentos carotenoides pueden apagar el oxgeno singlete (1O2) (
Conn, Schalch, y Truscott, 1991; Mascio, Kaiser, y Sies, 1989), y
flcompuestos avo-noid como antocianinas y flavonol poseen actividad
(similar a SOD) anin superxido-radical compactacin ( Watanabe, 2007) y
exhiben inhibicin de la peroxidacin de lpidos ( Fremont, Gozzelino,
Franchi, y Linard, 1998). En este estudio, el carotenoide Se analizaron los
pigmentos en NC y OC, y se evaluaron las actividades antioxidantes de los
extractos de carotenoides y compuestos fenlicos.

2.1. Col y preparacin del polvo chino

NC (cv, Yuki)_ y OC (cv, Orange reina) se cultivaron usando el mismo
mtodo de cultivo de tnel en el mismo perodo. Despus de ajustar las
plantas de vivero, se cubrieron con polietileno film, y cultivado de febrero a
junio de 2008 en la Planta Takii Estacin de Cra. Tres jefes de NC y OC, que
_
eran de la media del peso en fresco, se recolectaron y almacenaron a _20 C
hasta su uso. Para preparar polvos de coles chinas, cabezas enteras se
liofilizaron y tierra individualmente utilizando un molino de muestra
vibrante. Adems, se utiliz el interior de la cabeza de color naranja de otra
planta

1972

M. Watanabe et al. / LWT - Ciencia y Tecnologa de Alimentos 44 (2011) 1971e1975

para preparar polvo de la misma manera como cabezas

enteras con el fin de investigar la composicin de
pigmento carotenoide.

fotodiodos, 450 y 280 nm (espectro, 200e600 nm).

Lutena Estndar, b-caroteno, y fitoeno, que se
utilizaron
para
la
identificacinficacin
y
cuantificacin de pigmentos carotenoides, se
obtuvieron de Funakoshi (Tokio, Japn).

2.2. Preparacin de extractos de carotenoides

Extractos de carotenoides de NC o OC se
prepararon de acuerdo con el mtodo general de
Takaichi, Mimuro, y Tomita (2006) con menor
modificationes. En breve, se extrajeron 5 g de polvo de
NC o OC con 100 ml de diclorometano: solucin de
metanol (2: 1, v / v) y centri-fuged a 17.000 _ se
recogieron g, y el sobrenadante. Adems extraccin de
pigmentos carotenoides a partir del residuo se realiz
dos veces con 100 ml de diclorometano. Los extractos
combinados se fifiltra a travs de un 1.0-mm
Polytetrafluoroethylene (PTFE) de membrana fifiltro
(JAWP04700; Nihon Millipore, Tokio, Japn), y luego
100 ml de hexano y un volumen igual de NaCl al 5%
se aadieron a la fifiltrado. La mezcla se agit
lentamente, y despus se dej separar en dos capas. El
sobrenadante se evapor a sequedad bajo presin
reducida, y el precipitado se disolvi en 50 ml de ter
dietlico. Un volumen de 5 ml de 60% (w / v) de KOH
se aadi a la solucin, y la fase de aire se sustituye
por gas N2. Saponifide cationes se llev a cabo por
_
debajo de 10 C durante 16 h bajo condiciones de
oscuridad. Aunque el tiempo necesario para saponifide
cationes en el experimento era ms largo que el
tratamiento habitual (2e3 o 4e6 h a temperatura
ambiente) ( Khachik, Beecher, Goli, y Lusby, 1992;
Takaichi et al., 2006), no haba cativafidiferencias
signifi en el contenido de carotenoides entre la saviaonificado y unsaponifimuestras cado. Solucin de ter
dietlico: Un volumen igual (50 ml) de hexano (1: 1,
v / v) y 5% de NaCl se aadi a la
saponificacinfisolucin cado. La capa de disolvente
orgnico se recogi y se trat con 5% de NaCl y
despus se evapor hasta sequedad bajo presin
reducida. El residuo se disolvi en un pequeo
_
volumen de ter dietlico y se almacen a _80 C hasta
su uso. De este modo, se prepararon tres extractos de
NC o OC para el anlisis de pigmentos carotenoides.

2.3. Anlisis de pigmentos de carotenoides

Segn lo informado por Rodrguez-Bernaldo de
Quirs y Costa (2006), Ionizacin qumica a presin
atmosfrica tcnica (APCI) LC-MS se utiliza con
frecuencia para el anlisis de carotenoides. Por lo
tanto, se analiz la composi-cin de extractos de
carotenoides de NC o OC utilizando un Pulsar-i
sistema LC-MS QSTAR (Applied Biosystems, Foster
City, CA, EE.UU.) con el modo de iones positivos de
la APCI y un sistema de HPLC equipado con una
fotodiodo detector de matriz. Segn el mtodo de
HPLC de anlisis de carotenoides por Kanamaru,
Wang, Abe, Yamada, y Kitamura (2006), acetonitrilo
y etanol se utilizaron como fases mviles. Las
condiciones para LC-MS fueron las siguientes:
_
temperatura de la fuente de iones APCI, 450 C;
columna, ODS Simetra 5C18 (4.6 _ 250 mm) (Waters,
Milford, MA, EE.UU.); columna temperamento_
ratura, 35 C; disolvente, acetonitrilo: etanol 8: 2;
flvelocidad de flujo, 1 ml / min; deteccin de matriz de

2.4. Preparacin de extractos metanlicos y la

determinacin de los fenoles totales de los
extractos
Polvos de NC o OC (0,2 g cada uno) se extrajeron
_
con 10 ml de metanol a 75 C bajo reflux durante 1 h.
El extracto se evapor hasta sequedad bajo presin
reducida, y el precipitado se dis-resuelto en 0,2 ml de
metanol. Tres extractos de NC o OC se prepararon
para analizar el contenido de polifenoles y para
determinar la actividad de tipo SOD.
Los fenoles totales de extractos de NC y OC se
determin por el mtodo de FolineMtodo Denis (
AOAC International, 1995) Utilizando D-() -catechin
Como un estndar para la calibracin.

2.5. ABTS actividad de los radicales de captacin

ABTS actividad de los radicales de captacin se
midi mediante la modificacin del mtodo descrito
por Roberta, Pellegrini, Pannala, Yang, und ArrozEvans (1999). En resumen, 0,1 g de muestra
pulverizada era extrac-ted con 5 ml de diclorometano
y se centrifug a 11.000 _ se recogi g durante 10 min,
y el sobrenadante. El sobrenadante se evapor a
sequedad bajo presin reducida, y el precipitado se
disolvi en acetona: solucin de etanol (1: 1, v / v).
Tres extractos se prepararon para determinar ABTS
actividad antioxidante con. Un 50 amL alcuota de
etanol se aadi a un volumen igual de extracto en cada
pocillo de una microplaca de 96 pocillos, y la reaccin se
inici aadiendo 50 mL de solucin de radical ABTS (0,4
mM de ABTS y peroxodisulfato potsico 0,15 mM).
Despus de 10 min a temperatura ambiente, la absorbancia
a 620 nm se midi utilizando un lector de microplacas.
ABTS actividad de los radicales de captacin del extracto
se expres como Trolox (SigmaeAldrich, St. Louis,
EE.UU.) equivalentes.

2.6. Actividad similar a SOD

Medicin de la actividad de tipo SOD se realiz
por el mtodo de ensayo WST utilizando un kit de
SOD-WST (Dojindo, Kumamoto, Japn) que contiene
la sal de tetrazolio soluble en agua, 2 (4-yodofenil) 3
(4-nitrofenil) - 5 (2,4 disulphophenyl) 2H-tetrazolio,
sal mono-sodio (WST-1) como se describe
previamente ( Watanabe, 2007). Actividades de SODcomo se ensayaron de acuerdo con el
fabricante'instrucciones
s
utilizando
extractos
metanlicos a partir de polvos de NC o OC (2 mg).
Actividad similar a SOD se expres como el
porcentaje de inhibicin de formacin de colorante
formazn soluble en agua.

2.7. Estadsticas
Estadsticamente significativafidiferencias signifi
entre los anlisis se evaluaron mediante pruebas t de

Student utilizando el software Prism 5 (GraphPad

Software Inc., San Diego, CA, EE.UU.). Los datos se
expresan como media _ SD (n 3). Las diferencias en
P < 0,05 fue considerado significantefiperalte.
3. Resultados y discusin
El cromatograma de HPLC de los extractos de
carotenoides de NC se muestra en la Higo. 1A. Dos
grandes picos en el cromatograma de Carolina del
Norte fueron identificadosfied como lutena (P1) (
Higo. 2A) y b-caroteno (P2) ( Higo. 2B). Los datos
espectrales de P1 y P2 fueron los siguientes: Lmax de
PDA, P1 (420, 443, y 472 nm), P2 (425, 450, y 477
nm); pico de ion molecular protonado, P1 (m / z

569,4387 (M H) , C40H57O2), P2 (m / z 537,4475

(M H) , C40H57) del espectro MS. Estos datos

fueron consistentes con los de la lutena estndar y
bcaroteno. Higo. 1B muestra el cromatograma de
HPLC de los extractos de carotenoides de la cabeza
interna de OC, que es de color naranja intenso. La
cabeza OC contena dos principales pigmentos
carotenoides (P3 y P4). P4 fue identified como phyToene ( Higo. 2C) sobre la base de los datos
espectrales de Lmax de PDA (280 nm) y frmula de
composicin (C40H64) derivadas de un pico de ion

molecular protonado (m / z 545.5074, (M H) ) Del

espectro MS. Estos datos fueron consistentes con los
de una fitoeno estndar. P3 compuesto se dedujo que
7Z, 9Z, 7'Z, 9'Z tetra-cis-licopeno (prolycopene) (
Higo. 2D) sobre la base de Lmax de PDA (414, 436, y
463 nm), y la frmula de composicin (C40H56)
derivado de un pico de ion molecular protonado (m / z

537.4462, (M H) ) Del espectro MS. Debido a que

el pigmento principal carotenoide en tomate
mandarina es prolycopene (30%e50% de los
carotenoides total) ( Isaacson, Ohad, Beyer, y
Hirschberg, 2004), La identificacinficationes de P3
compuesto se realiz mediante comparacin de los
datos espectrales con prolycopene en el cromatograma
de HPLC para el tomate mandarina (lnea, LA3183)
(datos no mostrados). Los frutos de tomate mandarina
prolycopene-accu mular debido a la falta de
carotenoides funcional

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Higo. 1. cromatogramas de HPLC (450 nm y 280 nm) de extractos de carotenoides de las coles chinas. A, NC (450 nm); B, de color naranja
cabeza interna del OC (450 nm); C, de color naranja cabeza interna del OC (280 nm); D, toda la cabeza de OC (450 nm); E, toda la cabeza de
OC (280 nm). *Longitud de onda de deteccin de pico.

ms actividades in vivo, como

antioxidante, que los de NC. Higo. 1C
isomerasa (CrtISO) que convierte poli-cis-licopeno a
todo-trans-licopeno ( Isaacson, Ronen, Zamir, y
Hirschberg, 2002). Prolycopene no se ha detectado en
otros variedades de col china hasta la fecha. Se
informa sobre la tasa de absorcin de prolycopene
administrado por va oral en los seres humanos a ser
ms alta que la de todo-trans-licopeno ( Unlu, Bohn,
Francis, Clinton, y Schwartz, 2007), Lo que sugiere
que se espera pigmentos carotenoides en OC poseer

la

actividad

1973

muestra el cromatograma de HPLC de un extracto de

toda la OC incluyendo las hojas de color verdes
exteriores. Este resultado sugiere que las hojas de
color verdes exteriores que contienen pigmentos de
clorofila tambin poseen bcaroteno adems de

prolycopene y fitoeno. Adems, este resultado sugiere

que OC contiene una enzima funcional CrtISO en las
hojas exteriores que convierte la forma cis de
pigmentos carotenoides, tales como prolycopene, a la
forma trans, lo que resulta en la produccin de
bcaroteno. Aunque el

1974

M. Watanabe et al. / LWT - Ciencia y Tecnologa de Alimentos 44 (2011) 1971e1975

A
OH

HO

Higo. 2. Estructuras de los principales pigmentos carotenoides en

OC y NC. A, lutena; B, bcaroteno; C, prolycopene (7Z, 9Z, 7'Z,
9'Z tetra-cis-licopeno); D, fitoeno.

cabeza interior de color naranja contena prolycopene,

no contena ismeros trans de los pigmentos
carotenoides, como el licopeno y bcaroteno. Estos
resultados sugieren las siguientes posibilidades para
acumulacin prolycopene en el interior de la cabeza de
OC. Una posibilidad es una mutacin por delecin en el
gen CrtISO como se encuentra en el alelo de tomate
tangerinemic. Otra posibilidad es una delecin de 348 pb
en el promotor de CrtISO, que suprime su expresin en el
fruto del tomate tangerine3183 ( Isaacson et al., 2002).
Investigaciones

Higo. 3. composicin de carotenoides y ABTS actividades

Higo. 4. Total fenoles y actividades de tipo SOD de extractos

metanlicos de OC y NC. A, fenoles totales; B, la actividad de tipo
SOD. Los datos son la media _ SD de tres-mentos expe
independientes. ***P< 0.001.

antioxidante con extractos de carotenoides de OC y NC. Una

composicin, de carotenoides; B, ABTS actividad de los radicales
de captacin; a, bcaroteno; b, prolycopene; c, fitoeno; d, lutena.
Los datos son la media _ SD de tres experimentos independientes.
***P< 0.001.

sobre las razones de la acumulacin de prolycopene en

cabezas internas del OC estn en curso. La
composicin de pigmento carotenoide en la cabeza OC
sugiere que el color naranja se atribuye a la abundance de prolycopene.
Los porcentajes de los principales pigmentos de
carotenoides en OC fueron los siguientes:
prolycopene; 48%, bcaroteno; 23%, y fitoeno; 29%. El
contenido de carotenoides total de extractos de OC fue
dos veces ms alta que los extractos de NC ( Higo.
3A). Higo. 3B muestra actividad de los radicales
ABTS-compactacin de los extractos de carotenoides.
ABTS actividad antioxidante con extractos de OC
(169 _ 2 mmol Trolox equivalentes / 100 g DW) fue
significativaficativamente mayor que los extractos de
NC (132 _ 7 mmol Trolox equivalentes / 100 g DW)
(P < 0,001), lo que sugiere que OC contiene grandes
cantidades de compuestos carotenoides con actividad
de los radicales ABTS de captacin.
Higo. 4A muestra los fenoles totales de extractos
metanlicos de NC o OC. Los fenoles totales de
extractos metanlicos de OC (387 _ 11 mg / 100 g
DW) fue mayor que los extractos metanlicos de NC
(263 _ 2 mg / 100 g DW) (P < 0.001). Adems, la

actividad de tipo SOD de los extractos metanlicos de

OC (70 _ 2%) fue tambin ms alto que los extractos
metanlicos de NC (61 _ 2%) ( Higo. 4B) (P < 0.001).
Estos resultados sugieren que OC tiene ms
compuestos fenlicos con actividad SOD radical de
captacin de NC. Sin embargo, los de HPLC
cromatogrficas-gramos de NC y OC no eran
significativamente diferentes (datos no mostrados). Las
investigaciones para determinar las composiciones de
compuestos fenlicos en NC y OC son tambin en
curso.
El contenido de carotenoides y polifenoles de las
coles chinas podran verse afectados por las
condiciones de cultivo y variedades. Por tanto, es
necesario investigar los efectos de tales condiciones en
el contenido de compuestos fenlicos y carotenoides y
sus actividades antioxidantes en NC y OC.

Agradecimientos
Los autores agradecen tomate Centro de Recursos
Genticos (CA, EE.UU.) para el suministro de
semillas de mandarina tomate (LA3183) (Solanum
Lyco-persicum L.).

M. Watanabe et al. / LWT - Ciencia y Tecnologa de Alimentos 44 (2011) 1971e1975

1975
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