Informe actividad prctica

Microdilisis cerebral in-vivo

Keber Flores B.

La microdilisis es una tcnica utilizada para monitorear la qumica del espacio

extracelular en tejidos vivos. La microdilisis in-vivo, en particular, sirve para
explorar la relacin entre el cerebro y el comportamiento, permitiendo al
investigador monitorear continuamente las concentraciones de catecolaminas,
aminocidos y pptidos en el fluido extracelular del cerebro. En esta tcnica se
utiliza una cnula con una membrana semipermeable en la punta, la cual
protege el tejido circundante del posible dao producido por el influjo del
lquido de perfusin, a la vez que permite la extraccin slo de pequeas
molculas (Mason, 1988). Si bien el intercambio de molculas es en ambas
direcciones, la diferencia de concentraciones a travs de la membrana
gobierna la direccin del gradiente.
La principal ventaja de la microdilisis por sobre otras tcnicas de perfusin en
vivo yace en la construccin de la cnula. Dado que sta es ms pequea que
los dispositivos utilizados en push-pull , desplaza una menor rea de tejido.
Adems, la membrana provee una barrera fsica entre el perfundido y el tejido,
protegindola del flujo turbulento del perfundido sino tambin de substancias
de alto peso molecular. Finalmente, presenta la ventaja de permitir la infusin
de drogas u otros componentes especficos, en lugares especficos del cerebro,
y estudiar el intercambio qumico producto de este influjo (Chefer, 2009).
Esta tcnica, sin embargo, presenta desventajas como su limitada resolucin
temporal (entre 1 y 10 minutos), que impide proveer informacin en tiempo
real. Al ser una tcnica invasiva, causa algn dao al tejido en estudio.
Para vincular esta tcnica con la investigacin cientfica que sta permite, se
tom como referencia el artculo de Werkheiser et al. (2007), Nalfurafine, the
kappa opioid agonist, inhibits icilin-induced wet-dog shakes in rats and
antagonizes glutamate release in the dorsal striatum.
En este trabajo se investiga si una dosis efectiva de nalfurafina, agonista de
receptores kappa opiodes, bloquea las sacudidas inducidas por Icilina por
medio de la inhibicin de la liberacin de glutamato en el estriado dorsal, es
decir, si el estriado dorsal se ve afectado por la administracin de Icilina.
La Icilina es un agente inductor de fro que activa dos canales receptores
transitorios, TRPM8 y TRPA1, en la raz del ganglio dorsal y en las neuronas
trigeminales de la periferia. Mientras que el TRPM8 es activado por
temperaturas fras (<25C), mentol e Icilina, el canal TRPA1 es activado por
fro nocivo (<17C) e Icilina principalmente, pero no por mentol. La Icilina

evoca un incremento dosis y tiempo-dependiente en el estriado dorsal, regin

que controla la planificacin y ejecucin del comportamiento motor.
Las ratas Sprague-Dawley machos utilizadas en este estudio fueron
anestesiadas con ketamina y acepromacina, y posteriormente aseguradas en
un marco esterotxico. Se implant una cnula (CMA/12) en el estriado dorsal
de acuerdo a las coordenadas bregma AP +0.8 mm, ML +3.0 mm and DV -4.0
mm. Luego se fij la cnula con acrlico dental, y tras su solidificacin las ratas
fueron colocadas en forma individual en una jaula y devuelta a su lugar de
origen en grupos de 4 durante 2 das para su recuperacin.
En un primer experimento, las ratas fueron pre-tratadas con nalfurafina o un
vehculo 30 minutos antes de la administracin de Icilina o un vehculo (1%
Tween 80) (1mL/kg). A continuacin se recolectaron muestras por 120
minutos tras la administracin de Icilina o el vehculo y se almacenaron a 80C
para su anlisis neuroqumico.
En un segundo experimento, se administr norbinaltorphimina o aCSF durante
la duracin del experimento. Sesenta minutos despus de comenzar esta
infusin, se les administr una solucin de nalfurafina o salina. 30 minutos ms
tarde se les administr Icilina o un vehculo. A continuacin se recolectaron
muestras por 120 minutos tras la administracin de Icilina y se almacenaron a
-80C para su anlisis neuroqumico.
Encontraron que la nalfurafina inhibe la liberacin de glutamato evocado por
Icilina en el estriado dorsal, sugiriendo que los agonistas de receptores kappa
como nalfurafina pueden inhibir las sacudidas inducidas por Icilina mediante
este mecanismo.

Referencias
V. Chefer, A. Thompson, A. Zapata, T. Shippenberg, 2009. Overview of Brain
Microdialysis. Current Protocols in Neuroscience, Unit 7.1. Wiley & Sons Inc.
P.A. Mason, D. Bhaskaran, 1988. In Vivo Microdialysis. Kopf Carrier 20:1-4.
JL Werkheiser, SM Rawls, A Cowan, 2007. Nalfurafine, the kappa opioid
agonist, inhibits icilin-induced wet-dog shakes in rats and antagonizes
glutamate release in the dorsal striatum. Neuropharmacology 52: 925 - 930