Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud

Licenciatura Qumica Farmacutica Biolgica

Modulo VI:
Evaluacin de materias primas para la elaboracin de medicamentos

Practica de laboratorio N 1
Uso de la espectroscopa ultravioleta visible para la identificacin y
cuantificacin de frmacos

Docente: Dra. Georgina Alarcn ngeles

Equipo 5
Edgar Francisco Flores de la Cruz
Cristal Aidee Jimnez Jurez
Jorge Antonio Jurez lvarez
Miguel Snchez Barba
Brbara Varela Petrissans

Laboratorio: G-202

Trimestre: 15-Primavera

Fecha: 28 de mayo de 2015

INTRODUCCIN
La espectrofotometra se refiere a mtodos de anlisis qumico que utilizan un
haz de luz para medir la concentracin de sustancias. Una de las tcnicas ms
importantes es el UV-visible debido a su aplicacin en la industria farmacutica.
(Barajas, 2011).
La espectroscopia UV-visible es utilizada en laboratorios como instrumentos para
anlisis cualitativos y cuantitativos de compuestos qumicos; y
para la
identificacin de frmacos los cuales tienden a absorber en las regiones Uvvisible, posibles, este efecto se lleva a cabo por la presencia de grupos cromforos
en las molculas que se encuentran en la muestra. Utiliza una radiacin del
espectro electromagntico con una longitud de onda comprendida entre los 100 y
los 800 nm (Elmer, 2010).
La espectroscopa UV-Visible (espectros electrnicos), en donde ocurre una
transicin de los electrones ms externos de los tomos de las molculas, desde
niveles fundamentales a niveles ms altos de energa. Esta metodologa no tiene
selectividad y por esta razn se utilizan en frmacos que presentan absorcin en
la misma regin del espectro. (Nieves, 2011).
Mediante esta tcnica son posibles preparar curvas de calibracin, mediante
patrones que muestran un cambio en la pendiente o el uso de un nuevo lote de
reactivos, tambin, se utiliza para la determinacin de mezclas de diferentes tipos
de compuestos en los frmacos. Sin embargo esto permite un mejor desarrollo
para predecir la cantidad de sustancias sin la separacin de analitos. (Arvalo,
2006).
Por consiguiente dos elementos muy importantes en este mtodo es la
transmitancia T de una sustancia en solucin que es la relacin de la cantidad de
luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, y la
cantidad de luz que incidi sobre ella y la absorbancia A que nos indica la cantidad
de luz absorbida por la muestra. (Caballero, 2011).

Antecedentes
La espectrofotometra, fue descubierta por la dispersin de la luz en 1704 por
newton, por los cuales se desarrollaron tcnicas experimentales. Aos ms tarde
fraunhofer cre un sistema ptico, con el uso de prismas y rendija lo cual permiti
detectar el espectro de la luz solar las lneas de absorcin. Gracias a esto se
obtuvieron conocimientos de que cada elemento qumico posee un espectro de
emisin de lneas caractersticas. (Tllez, 2008).

En 1859 bunsen y Kirchhoff se consideraron como los fundadores del anlisis

espectral y los primeros que construyeron un equipo antecesor al
espectrofotmetro. Aos despus el desarrollo de sistemas de deteccin
fotoelctrica permiti en los aos 40 la sustitucin de equipos de deteccin
fotogrfica poco eficientes. En ese momento la tcnica espectroscpica se
empez a utilizar. (Applied, 2010).
El desarrollo de sistemas de deteccin fotoelctrica permiti en los aos 40 la
sustitucin de los equipos de deteccin fotogrfica, poco eficientes, y la
generalizacin de esta tcnica espectroscpica. (Grisales, 2013).
El cido Acetil saliclico (AAS) (conocido popularmente como aspirina), es un
frmaco de la familia de los salicilatos, usado frecuentemente como
antiinflamatorio, analgsico (para el alivio del dolor leve y moderado), antipirtico
(para reducir la fiebre) y antiagregante. La accin de estos analgsicos se basa en
la inhibicin de la sntesis de prostaglandinas (mediadores del dolor y de la
inflamacin) en los tejidos perifricos. De ah que estas sustancias tengan una
enorme importancia sanitaria, ya que comercializadas como medicamentos y
administradas al cuerpo humano ayudan a atenuar distintas dolencias.

Estructura qumica de AAS

OBJETIVO:

Aplicar la espectroscopia ultravioleta visible para la identificacin de

frmacos
Determinar el coeficiente de absortividad de frmacos como cido
acetilsaliclico, cafena y acetaminofn
Determinar la concentracin de una muestra problema a partir de una curva
de calibracin

MATERIAL Y REACTIVOS

Espectrofotmetro de UV-VIS
Celdas de cuarzo de 1 cm
Piseta de agua destilada
5 Matraces aforados de 100 mL

5 Matraces aforados de 10 mL
5 Matraces aforados de 5 mL
3 Vasos de precipitado de 30 mL
3 Vasos de precipitado de 10 mL
3 Pipetas volumtricas de 1mL
2 Pipetas graduadas de 1 mL
1 Esptula

cido acetilsaliclico
metanol
Agua desionizada

METODOLOGA
Identificacin del frmaco.
Prepare por triplicado una solucin del frmaco de estudio que contenga al
1mg/100mL en metanol. Obtenga el espectro de absorcin en la regin del
Ultravioleta, y determine la longitud de onda mxima y el coeficiente de
absortividad.
Preparacin de la Curva de calibracin
Preparar la solucin del frmaco, pesando 10 mg y disolver en metanol a
100ml, a partir de esta solucin preparar por triplicado 5 soluciones que contengan
10g/ml, 8g/ml, 6g/ml, 4g/ml, 2g/ml, en matraces aforados de 10 o 5 ml
(segn convenga). Leer las absorbancias a la longitud de onda correspondiente.

Procedimiento
1) Pese exactamente la cantidad que se requiere, anote el peso real con todos los
decimales
2) Prepare las soluciones a las concentraciones deseadas, sea exacto en el aforo
3) Obtenga los espectros de absorcin
4) El blanco (blanco se refiere al disolvente con el cual se disolvi el frmaco, se
dice tambin que es todo lo que contiene la solucin sin el analito)
5) El frmaco iniciando con la concentracin de
6) Seleccione la longitud de onda de estudio para la curva de calibracin

7) Obtenga las absorbancias de: el blanco, posteriormente de las soluciones

del frmaco de la ms diluida a la ms concentrada.
8) Haga una Tabla de concentracin y Absorbancia
9) Obtenga los siguientes parmetros: coeficiente de absortividad al 1%,
coeficiente molar, la ecuacin de la recta
10)Obtenga la absorbancia de las muestras problema y determine la
concentracin.
DIAGRAMA DE FLUJO

Pesar 10 mg de AAS

Seleccionar las
longitudes de onda
de estudio

Obtener espectro de
absorcin de a
solucin de las
concentrciones de la
mas diluida a la mas
concentrada

Disolver en metanol
y aforar en 100 mL

Obtener espectro de
absorcin de a
solucin 10g/mL

Hacer una tabla de

concentracin y
Absorbancia

Preparar soluciones
de concentracin
20g/mL, 16 g/mL,
12g/mL, 10g/mL,
8g/mL, 4g/mL

Obtener espectro de
absorcin del blanco

Realizar curva de
calibracin

PLAN DE TRABAJO
ANALIST
A
Edgar

ACTIVIDAD

Lavado del rea de trabajo

Preparacin de solucin de concentracin 14 g/mL

Lectura del espectro Uv-Vis de las concentraciones 4g/mL

Lavado de material para entrega

Antonio

Miguel

Lavado de material
Pesada de AAS
Preparacin de disolucin de concentracin 100 g/mL,
20g/mL y 10g/mL

Lectura del espectro Uv-Vis de las concentraciones

20g/mL, 10g/mL, 8g/mL

Clculos de para preparar las soluciones

Preparacin de solucin de concentracin 12 g/mL

Lectura del espectro Uv-Vis de las concentraciones 12

g/mL

Recoger el material con el laboratorista

Preparacin de solucin de concentracin 16 g/mL

Lectura del espectro Uv-Vis de las concentraciones 16

g/mL, 4g/Ml

Desecho de reactivos

Brbara

PREPARACIN DE DISOLUCIONES
C1= 103 g/mL
V1= 2mL

(103
C 2=

g
)(2 mL)
mL
= 20.6 g/mL
10 mL

C2= 20.6 g/mL

V2= 10 mL
C1= 103 g/mL
V1= 1.6 mL
C2= 16.48 g/mL
V2= 10 mL
C1= 103 g/mL

(103
C 2=

g
)(1.6 mL)
mL
10 mL

= 16.48 g/mL

(103

V1= 1.4 mL

C 2=

g
)(1. 4 mL)
mL
10 mL

= 14.42 g/mL

C2= 14.42 g/mL

V2= 10 mL
C1= 103 g/mL
V1= 1.2 mL

( 103
C 2=

g
)(1.2 mL)
mL
10 mL

= 12.36 g/mL

C2= 12.36 g/mL

V2= 10 mL

C1 = 103 g/mL
V1= 1 mL

g
)(mL)
mL
10 mL

( 103
C 2=

= 10.3 g/mL

C2= 10.3 g/mL

V2= 10 mL
C1 = 103 g/mL
V1= 0.8 mL

( 103
C 2=

g
)(0.8 mL)
mL
10 mL

= 8.24 g/mL

g
)(0.4 mL)
mL
10 mL

= 4.12 g/mL

C2= 8.24 g/mL

V2=10 mL
C1 = 103 g/mL
V1= 0.4 mL

(103
C 2=

C2= 4.12 g/mL

V2=10 mL

RESULTADOS
Conversin de concentraciones (De g a M)
20.6 g
1g
1 mol 1000mL
mol
x
x
x
=1.143 x 104
6
mL
180.6
g
1
L
L
1 x 10 g

16 .48 g
1g
1mol 1000 mL
mol
x
x
x
=9.14 x 105
6
mL
1L
L
1 x 10 g 180.6 g
12.36 g
1g
1 mol 1000 mL
mol
x
x
x
=6.86 x 105
6
mL
180.6
g
1
L
L
1 x 10 g
8.24 g
1g
1 mol 1000 mL
mol
x
x
x
=4.573 x 105
6
mL
1L
L
1 x 10 g 180.6 g
4 .12 g
1g
1 mol 1000 mL
5 mol
x
x
x
=2.28 x 10
6
mL
180.6
g
1
L
L
1 x 10 g

Clculos de absorbancia tericos de mayor a menor concentracin (20

g/mL-4 g/mL)

)(

4
L
A= 6890
1.143
x
10
mol cm1

mol
L

) (1 cm )=0.629

)(

mol
L

) ( 1 cm )=0.472

5
L
A= 6890
6.86 x 10
1
mol cm

)(

5
L
A= 6890
4.573 x 10
1
mol cm

(
(

A= 6890

) ( 1 cm )=0.787

)(

5
L
A= 6890
9.14
x
10
mol cm1

mol
L

)(

5
L
2.28 x 10
1
mol cm

mol
L

mol
L

) ( 1 cm )=0.314

) ( 1 cm )=0.157

Resultados de las mediciones en el espectrofotmetro UV-Vis

Concentracin
(g/mL)
4.12

210
nm
0.307

225
nm
0.172

230
nm
0.154

4.12

0.278

0.16

0.151

4.12

0.277

0.144

0.131

8.24

0.512

0.379

0.352

8.24

0.498

0.349

0.324

8.24

0.495

0.345

0.323

10.3

0.547

0.474

0.44

12.36

0.652

0.548

0.526

12.36

0.647

0.543

0.523

12.36

0.66

0.55

0.532

16.48

0.716

0.676

0.639

16.48

0.754

0.702

0.666

16.48

0.744

0.741

0.706

20.6

0.864

0.89

0.853

20.6

0.883

0.962

0.922

20.6

0.862

0.882

0.847

Tabla promedio de la medicin de las absorbancias y coeficiente de correlacin

Concentracin (g/mL)

Longitudes de onda ()
210 nm

225 nm

230 nm

4.12 g/Ml

0.287

0.158

0.145

8.24 g/mL

0.501

0.357

0.333

12.36 g/mL

0.653

0.547

0.527

16.48 g/mL

0.738

0.706

0.670

20.6 g/mL

0.869

0.911

0.874

0.986

0.999

0.998

CURVA DE CALIBRACIN DEL CIDO ACETILSALICLICO A DIFERENTES max

1
0.9
0.8
0.7
210 nm
225 nm
230 nm

0.6
ABSORBANCIA 0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
4.12

8.24

12.36

16.48

20.6

CONCENTRACIN (g/mL)

CURVA DE CALIBRACIN DEL CIDO ACETILSALICLICO A 225 nm

225 nm

1
0.9
0.8
0.7
0.6
ABSORBANCIA 0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
4.12

8.24

12.36

16.48

CONCENTRACIN (g/mL)

COEFICIENTE DE ABSORTIVIDA MOLAR

20.6

0.474
A
=
mol
=
= 8291.061
(5.7171 x 105
)(1 cm)
Cl
L

L
mol

cm-1

Ecuacin de la recta para absorbancia a 225 nm:

y=0.0450 x +(0.0207)
COEFICIENTE DE ABSORTIVIDAD AL 1%
0.474
A
=
g
=
= 0.0474
(10
)(1 cm)
Cl
mL

g
mL

cm-1

CONCLUSIN
Debido a las limitaciones de algunos reactivo como el metanol y para tener un
mejor ahorro del mismo la primera solucin indicada no se realiz como en el
protocolo, se tom una va alterna, a partir de la segunda solucin se prepararon
todas las disoluciones y concentraciones planteadas.
De igual manera al momento de pesar el AAS se tuvo que realizar un ajuste a las
concentraciones y por efectos del disolvente las mismas tuvieron que ser
duplicadas para poder evitar la absorcin del disolvente y nos diera un resultado
de absorbancia errneo.
Con lo que respecta al anlisis espectrofotomtrico Uv-Vis calculando el
coeficiente de correlacin podemos concluir que nuestra prueba se encuentra
dentro de los lmites permisibles de acuerdo a la r= 0.999, esta es aproximada a
uno por lo tanto la linealidad de nuestro anlisis es aceptable.
La longitud de onda, , reportada en bibliografa nos indicaba que se encontraba
L
L
en 210 nm con un E= 5980
cm-1 y 230 nm E=6890
cm-1, por esto
mol
mol
decidimos hacer una lectura a tres distintas, en donde el aparato nos dio una
L
mejor linealidad en 225 nm con un E= 8291.06
cm-1.
mol

BIBLIOGRAFA
Applied Analitic, espectrofotometra, 2010

Arvalo h.; 2006. Evaluacin de un mtodo por espectroscopia Uv-vis para la

deteccin de contaminantes orgnicos en agua. Trabajo de graduacin
[tesis].san Carlos: universidad de san Carlos Guatemala. Facultad de
ingeniera.
Barajas G. 2011. Propuesta de mejora utilizando diseo de experimentos en el
desarrollo de tcnicas analticas en un laboratorio farmacutico. Propuesta de un
programa de divulgacin [tesis].CD de Mxico: Instituto Politcnico Nacional.
Facultad de ingeniera industrial.
Caballero R. 2011. Espectrofotometra. Universidad del valle de Mxico, qumico
farmacutico biotecnologa, monterrey.
Curso
de
Qumica
Analtica
2007.
Consultado
en:
http://www.cin.edu.uy/bqa/pdf/Parcial%202%20QA2007.pdf [Fecha 28 de mayo de
2015]
Elmer B.; 2010. Estandarizacin de la tcnica espectrofotomtrica (Uv-vis) para la
cuantificacin de antraquinonas presentes en productos a base de aloe vera.
Requisito final para optar al ttulo de tecnlogo en Qumica [tesis].Pereira:
universidad tecnolgica de Pereira. Facultad de qumica.
Grisales C.; 2013. Espectrofotometra. Laboratorio de espectrofotometra.
Universidad de Antioquia, Medelln.
Nieves D.; 2011. Espectrofometra: Espectros de absorcin y cuantificacin
colorimtrica de biomolculas. Departamento de bioqumica [tesis]. Crdoba:
Universidad de Rabanales. Facultad de Medicina.
Tllez O. espectrofotometra. Laboratorio de equilibrio y cinetica.2008

CUESTIONARIO:
1.- Que disolvente utiliz para hacer la cuantificacin?
Se utiliz metanol ya que es el disolvente que presenta el menor nmero de onda
en la absorcin.
2.- Cul fue la longitud de onda que usted seleccion?, explique su
decisin.
La longitud de onda que seleccionamos fue de 225 nm, porque nos dio una mejor
linealidad de r=0.999, adems que el espectrofotmetro nos mostr una max de
225 nm.

3.- Qu tipo de celda us y porque?

Usamos celdas de cuarzo, las celdas de cuarzo no interfieren con la
cuantificacin porque no absorben las longitudes de onda del UV y el UV.-vis.
4.- Escriba los intervalos de concentracin de las disoluciones estndar
empleadas en la curva patrn, para la Longitudes de onda de mxima
absorcin y sus Absorbancias respectivas.
La longitud de onda fue de 210, 225 y 230 nm, porque a estas longitudes de
onda, el disolvente no afecta a la cuantificacin del analito (no hay interferencias).
Ya que si elegimos las longitudes de ultravioleta lejano de 10 a 200 nm presenta
el inconveniente que el oxgeno atmosfrico absorbe en esa regin. Adems de
que el disolvente utilizado (metanol) absorbe en el espectro en longitudes de
onda de 205 a 210 nm

Concentracin (g/mL)

Longitudes de onda ()
210 nm

225 nm

230 nm

4.12 g/mL

0.287

0.158

0.145

8.24 g/mL

0.501

0.357

0.333

12.36 g/mL

0.653

0.547

0.527

16.48 g/mL

0.738

0.706

0.670

20.6 g/mL

0.869

0.911

0.874

5.- Relacione la estructura molecular con la longitud de onda, y el coeficiente

de absorcin
El efecto fotoelctrico, que se entiende que un haz de luz es un flujo de partculas
de energa llamada fotones. Cada una de estas partculas posee una energa que
est relacionada con la frecuencia de la luz mediante la ecuacin:
E=hv
En donde h es la constante de Planck. La luz de una cierta frecuencia est
asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad de energa.
Es la cantidad de energa que posee un fotn la que determina si una especie
molecular absorber o emitir la luz de la longitud de onda correspondiente.

Adems una molcula posee energa interna que son: la molcula puede rotar
en varios ejes y poseer una cierta cantidad d energa rotacional.
Los tomos o grupos de tomos que estn en la molcula pueden vibrar. Y por
ltimo una molcula posee energa electrnica, la cual es el potencial asociado
con la distribucin de las cargas elctricas negativas en los ncleos de los tomos
con carga positiva.
La absorbancia es directamente proporcional al coeficiente de absortividad por la
concentracin y la longitud del paso ptico (Ley de Lambert- Beer)
A=Cl
6.- Identifique los grupos cromforos y auxocromos
La absorcin de radiacin UV o UV-vis proviene de la excitacin de los electrones
enlazantes, y las longitudes de onda de los picos de absorcin pueden
correlacionarse con los tipos de enlaces que existen en las especies de estudio.
Los grupos cromforos son los que tienen enlaces conjugados como los grupos
carbonilos, nitrilos, azidas en general los grupos que tengan dobles enlaces.
Los auxocromos no absorben longitudes de onda pero si producen una
interferencia con respecto al analito.
7.-Identifique las transiciones electrnicas
Transiciones: - *. Un electrn de una molcula en un orbital enlazante es
excitado al correspondiente orbital antienlazado *. Respecto a otras posibles
transiciones, la energa necesaria para provocar una transicin - * es grande y
corresponde a radiaciones de frecuencias en la regin del UV de vaco.
Transiciones: n - *. Los compuestos saturados que contienen tomos con pares
de electrones no enlazantes son capaces de dar transiciones n - *. Estas
transiciones requieren menos energa que los tipo - * y pueden producirse por
radiacin de la regin entre 150 y 250 nm, apareciendo la mayora de los picos de
absorcin por debajo de los 250 nm.
Transiciones: n * y *. La espectroscopia de absorcin a compuestos
orgnicos se basa en transiciones de electrones n o al estado excitado *, ya
que la energa que se requieren para estos procesos conducen a picos en una
regin espectral de 200 a 700 nm. Ambas transiciones requieren la presencia de
un grupo funcional que suministre los orbitales. .

6.-Como afectara un cambio del solvente

Este puede aumentar el grado de conjugacin de y efectuar un
desplazamiento batocrmico, por lo tanto la estabilizacin de los estados
excitados producida por el disolvente es mayor en solutos con fuerte interaccin
ncleo-substituyente.