Quito - Ecuador

NORMA TCNICA ECUATORIANA

NTE INEN 0182:2012

CONSERVAS ENVASADAS DE PESCADO

DETERMINACION DEL CONTENIDO DE NITROGENO
Primera edicin
BOTTLED CANNED FISH
NITROGEN CONTENT DETERMINATION

First edition

DESCRIPTORES: .
PE:
CDU: 664.95
CIIU:
ICS:

CDU: 664.95
ICS:

Norma Tcnica
Ecuatoriana

CIIU:
MC

CONSERVAS ENVASADAS DE PESCADO

DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE NITRGENO

NTE INEN
0182:2012

1. OBJETO

Esta norma especifica un mtodo para la determinacin del contenido de nitrgeno de los alimentos
animales por el proceso de Kjeldahl.
El mtodo no mide formas oxidadas de nitrgeno o compuestos de nitrgeno heterocclico.
Este mtodo no distingue entre el nitrgeno proteico y nitrgeno no proteico. Si es importante
determinar el contenido de nitrgeno no proteico, debe ser utilizado un mtodo apropiado.

2. TERMINOLOGA

Contenido de nitrgeno. Es la cantidad de nitrgeno contenido en la muestra y determinado mediante

el procedimiento anotado en la presente norma.

3. RESUMEN

El mtodo consiste en la destilacin del amoniaco liberado de la muestra y la titulacin final del
exceso de cido receptor.

4. EQUIPOS

Equipo de laboratorio habitual y, en particular, lo siguiente.

4.1 Desmenuzador mecnico, tamao laboratorio
4.2 Balanza analtica.
4.3 Aparato de digestin, destilacin y valoracin.

5. REACTIVOS

5.1 Sulfato de potasio.

5.2 Catalizador, ya sea 5.2.1 o 5.2.2.
5.2.1 xido de cobre (II) (CuO).
5.2.2 Sulfato pentahidratado de cobre (II) (CuSO4 5H2O).
5.3 cido sulfrico, c (H2SO4) = 18 mol / l, 20 (H2SO4) = 1,84 g / ml.
5.4 Parafina.
5.5 Sacarosa.

(Contina)
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DESCRIPTORES
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MC

5.6 Los materiales estndar, ya sea 5.6.1 o 5.6.2.

5.6.1 Acetanilida, con punto de fusin 114 C; contenido de nitrgeno (N) 103,6 g / kg.
5.6.2 Triptfano, con punto de fusin 282 C; contenido de nitrgeno (N) 137,2 g / kg.
Secar antes de su uso.
5.7 Solucin de hidrxido de sodio, w (NaOH) = 33% (fraccin de masa).
5.8 Lquido colectante, ya sea 5.8.1 o 5.8.2.
5.8.1 cido sulfrico, solucin estndar, c (H2SO4) = 0,05 mol/l o c(H2SO4) = 0,125 mol/l.
5.8.2 cido brico, (H3BO3) = 40 g/l.
5.9 Soluciones para la titulacin.
5.9.1 Hidrxido de sodio, solucin estndar volumtrica, c (NaOH) 0,1 mol/l o c (NaOH) = 0,25 mol/l.
5.9.2 cido sulfrico, solucin estndar, c (H2SO4) = 0,05 mol/l o C (H2SO4) = 0,125 mol/l.
La molaridad de las soluciones volumtricas estndar debe ser conocida hasta el cuarto punto
decimal.
5.10 Indicador mezclado, punto neutro a pH 4,4 a 5,8.
Disolver 2 g de rojo de metilo y 1 g de azul de metileno en 1 000 ml de etanol [(C 2H5OH) = 95%
(fraccin volumen)].

6. PREPARACION DE LA MUESTRA

El producto drenado, se pasa por dos veces como mnimo a travs del desmenuzador mecnico y
luego se mezcla convenientemente, hasta lograr una muestra homognea.

7. PROCEDIMIENTO

ADVERTENCIA - Las operaciones descritas en los prrafos 7.3.1 y 7.3.2 deben llevarse a cabo en
una campana bien ventilada o en una campana de humos que sea resistente al cido sulfrico.
7.1 General
Para obtener instrucciones generales sobre la aplicacin del mtodo de Kjeldahl, vase la Norma ISO
1871.
7.2 Porcin de prueba
Pesar, con precisin de 1 mg, una masa de la muestra elegida de acuerdo con el contenido de
nitrgeno esperado de tal forma que la muestra de ensayo contenga entre 0.005 g y 0,2 g de
nitrgeno y, preferiblemente, ms de 0,02 g.
La masa de la porcin de ensayo de muestra homognea seca al aire debe estar entre 0,5 g y 2,0 g.
La masa de la porcin de ensayo de muestras hmedas y / o no homognea debe estar entre 2,5 g y
5,0 g.
7.3 Determinacin
7.3.1 Digestin de la materia orgnica
Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente a un matraz de digestin Kjeldahl de tamao
adecuado (normalmente 800 ml).
Aadir 15 g de sulfato de potasio (5.1).
(Contina)
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Aadir una cantidad apropiada de catalizador de la siguiente manera: 0,3 g de xido de cobre (II)
(5.2.1) o 0,9 g a 1,2 g de sulfato pentahidrato de cobre (II) (5.2.2).
Aadir 25 ml de cido sulfrico (5.3) para el primer gramo de materia seca de la porcin de ensayo y
6 ml a 12 ml para cada gramo adicional de materia seca. Mezclar bien, asegurando humectacin
completa de la muestra problema.
Apoyar el matraz de manera que su eje est inclinado en un ngulo de 30 a 45 con la vertical.
Mantener el matraz en esta posicin a lo largo del calentamiento.
Calentar el matraz primero con moderacin para evitar que la espuma suba en el cuello del matraz o
escape del matraz.
NOTA 1 Puede ser aconsejable aadir un agente anti-espumante tal como cera de parafina (5.4).
Calentar moderadamente, agitando de vez en cuando, hasta que la masa haya carbonizado y la espuma haya
desaparecido.

A continuacin, calentar ms intensamente hasta que el lquido hierva de forma constante.

NOTA 2 El calentamiento es adecuado si se condensa el cido en ebullicin hacia el centro del cuello del matraz
Kjeldahl.

Evitar el sobrecalentamiento de las paredes del matraz no en contacto con el lquido.

NOTA 3 Si se utiliza una llama, el sobrecalentamiento, por ejemplo se puede evitar colocando el matraz en una
hoja de material resistente al calor con una abertura de dimetro ligeramente inferior que la del matraz en el nivel
del lquido.

Despus de que el lquido ha quedado claro con un ligero color verde-azul, calentar durante otras 2 h.
Deje que se enfre. Si el digerido comienza a solidificarse, agregar un poco de agua y mezclar por
agitacin.
7.3.2 Destilacin de amonaco
7.3.2.1 Aadir cuidadosamente 250 ml a 350 ml de agua para disolver completamente los sulfatos. Si
es necesario, facilitar la disolucin calentando el matraz en agua caliente. Mezclar por agitacin y
dejar enfriar.
Aadir unas pocas ayudas de ebullicin (5.12).
Para algunas muestras especficas, los sulfatos no pueden disolverse completamente en el agua
aadida. En ese caso, se recomienda repetir la digestin con una masa reducida de sulfato de
potasio (5.1).
7.3.2.2 Pipetear, poner en el matraz recolectante del aparato de destilacin, 25 ml de cido sulfrico
(5.8.1), la eleccin de la concentracin de acuerdo con el contenido de nitrgeno esperado de la
porcin de ensayo. Aadir 100 ml a 150 ml de agua. Aadir unas gotas de la mezcla de indicadores
(5.10). Proceda de acuerdo con 7.3.2.4.
7.3.2.3 Alternativamente, transferir en el matraz de recoleccin de 100 ml a 250 ml de cido brico
(5.8.2). Aadir unas pocas gotas de indicador mixto (5.10).
La valoracin simultnea del amonaco (vase 7.3.3.3) durante la destilacin es recomendable ya que
facilita la verificacin del final de la destilacin.
7.3.2.4 Sumergir el extremo del refrigerante en el lquido contenido en el matraz de recogida, a una
profundidad de menos de 1 cm.
Verter lentamente 100 ml de solucin de hidrxido sdico (5.7) en el matraz de digestin a lo largo de
la pared.
Conectar inmediatamente el matraz al aparato de destilacin.
(Contina)
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Calentar el matraz de tal manera que aproximadamente 150 ml de destilado se recoja en 30 min. Al
final de este tiempo, comprobar el pH del destilado a la punta del condensador con el papel de
tornasol (5.11). Si la reaccin es alcalina, continuar la destilacin.
IMPORTANTE - Levantar el condensador del lquido justo antes del final de la destilacin, para evitar
contraflujo.
Si, durante la destilacin utilizando cido sulfrico como lquido colectante, el contenido del matraz
colectante se convierte en alcalino, recomenzar la determinacin, haciendo los ajustes apropiados.
7.3.3 Titulacin
7.3.3.1 Se recomienda la titulacin con indicacin de punto final automtico usando un pH-metro. De
lo contrario, el punto final se indica por el cambio en el color de la mezcla de indicadores (5.10)
aadido en 7.3.2.
7.3.3.2 Si se utiliza cido sulfrico como lquido colectante, se valora, en el matraz colector, el cido
sulfrico en exceso con una solucin de hidrxido de sodio (5.9.1), c (NaOH) = 0,1 mol / l c (NaOH)
= 0,25 mol / l, segn corresponda, hasta que el punto final se indique mediante el pH-metro o hasta
que el color cambia de violeta a verde.
7.3.3.3 Si el cido brico se utiliza como lquido colectante, valorar el amonaco con cido sulfrico
(5.9.2), c (H2SO4) = 0,05 mol / l o C (H2SO4) = 0,125 mol / l, segn proceda, hasta que el punto final
se indique mediante el pH-metro o cambie el color de verde a violeta.
Si la titulacin simultnea no es posible (vase 7.3.2.3), la valoracin debe llevarse a cabo tan pronto
como sea posible despus de que la destilacin est completa, asegurando que la temperatura del
destilado no exceda de 25 C. Bajo estas condiciones, se evitan las prdidas de amonaco.
7.4 Ensayo en blanco
Realizar un ensayo en blanco utilizando aproximadamente 1 g de sacarosa (5.5) en lugar de la
muestra problema.
7.5 Comprobar la prueba
Realizar una prueba de comprobacin mediante la determinacin del contenido de nitrgeno de la
acetanilida (5.6.1) o triptfano (5.6.2) despus de adicin de 1 g de sacarosa (5.5).
La eleccin de la sustancia para el ensayo de control debe estar relacionada con la digestibilidad de
las muestras que se ha analizado. La acetanilida se digiere fcilmente, mientras que la digestin de
triptfano es ms difcil.
La recuperacin de nitrgeno a partir de la acetanilida o triptfano debe ser al menos el 99,5% para la
acetanilida y al menos 99,0% para el triptfano.

8. CLCULOS

8.1 Clculo del contenido de nitrgeno

8.1.1 Destilado recogido en cido sulfrico
A condicin de que los volmenes de cido sulfrico utilizado para recoger el amonaco para la
determinacin (7.3) y para el ensayo en blanco (7.4) sean iguales, calcular el contenido de nitrgeno,
W N1, en gramos por kilogramo de la muestra de ensayo, por la siguiente ecuacin:

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En donde
V0 es el volumen en ml de la solucin de hidrxido de sodio (5.9.1) que se requiere para el ensayo en
blanco;
V1 es el volumen, en mililitros, de la solucin de hidrxido de sodio (5.9.1) que se requiere para la
determinacin;
c1 es la concentracin, en moles por litro, de la solucin de hidrxido de sodio (5.9.1) utilizada para las
valoraciones;
M es la masa molar, en gramos por mol, de nitrgeno (M = 14 g / mol);
m es la masa, en gramos, de la porcin de ensayo.
Reporte el resultado con una precisin de 0,01 g / kg.
8.1.2 Destilado recogido en cido brico
Calcular el contenido de nitrgeno de la muestra de ensayo por la ecuacin:

En donde:
wn2 es el contenido de nitrgeno, en gramos por kilogramo, de la muestra de ensayo;
V2 es el volumen, en mililitros, del cido sulfrico (4.9.2) requerido para el ensayo en blanco;
V3 es el volumen en ml de cido sulfrico (4.9.2) que se requiere para la determinacin;
M es la masa molar, en gramos por mol, de nitrgeno (M 14 g / mol);
C2 es la concentracin, en moles por litro, del cido sulfrico (4.9.2) utilizado para las valoraciones;
m es la masa, en gramos, de la porcin de ensayo.
Reporte el resultado con una precisin de 0,01 g / kg.

9. PRECISION DEL METODO

La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultneamente o en sucesin rpida no
debe exceder de 0,002 mg de nitrgeno por 100 g de muestra

10 INFORME DE PRUEBA

El informe de ensayo deber especificar:

a) toda la informacin necesaria para la completa identificacin de la muestra;
b) el mtodo de muestreo utilizado, si se conoce;
c) el mtodo de ensayo utilizado, con referencia a esta parte de la norma ISO 5983;

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ICS:

CIIU:
MC

d) todos los detalles operativos no especificados en esta parte de la Norma INEN 0182, o
considerados como opcionales, junto con detalles de cualquier incidente ocurrido durante la
realizacin del procedimiento, que puede haber influido en el resultado de la prueba (s);
e) el resultado de la prueba obtenido.

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CIIU:
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APENDICE Z
Z.1 NORMAS A CONSULTAR
INEN 179 Conservas envasadas de pescado. Muestreo.
Z.2 BASES DE ESTUDIO
Norma OFSANPAN lALUTZ 031-02-00. Determinacin de bases voltiles totales, OPS/OMS Oficina
Sanitaria Panamericana. Washington, 1968.
Norma ISO 5983-1, Alimentos para animales - Determinacin del contenido de nitrgeno y clculo del
contenido de protena cruda - Parte 1: Mtodo Kjeldahl

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DESCRIPTORES:

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INFORMACIN COMPLEMENTARIA
Documento:
TTULO: CONSERVAS ENVASADAS DE PESCADO
Cdigo:
NTE INEN
DETERMINACION DEL CONTENIDO DE NITROGENO
0182
ORIGINAL:
REVISIN:
Fecha de iniciacin del estudio:
Fecha de aprobacin anterior del Consejo Directivo
Oficializacin con el Carcter de
por Resolucin No
publicado en el Registro Oficial No.
Fecha de iniciacin del estudio:
Fechas de consulta pblica: de

Subcomit Tcnico:
Fecha de iniciacin:
Integrantes del Subcomit Tcnico:

Fecha de aprobacin:

NOMBRES:

INSTITUCIN REPRESENTADA:

Mediante compromiso presidencial N 16364, el

Instituto Ecuatoriano de Normalizacin INEN, en
vista de la necesidad urgente, resuelve actualizar
el acervo normativo en base al estado del arte y
con el objetivo de atender a los sectores
priorizados as como a todos los sectores
productivos del pas.
Para la revisin de esta Norma Tcnica se ha
considerado el nivel jerrquico de la normalizacin,
habiendo el INEN realizado un anlisis que ha
determinado su conveniente aplicacin en el pas.
La Norma en referencia ha sido sometida a
consulta pblica por un perodo de 30 das y por
ser considerada EMERGENTE no ha ingresado a
Subcomit Tcnico.

Otros trmites: Esta NTE INEN 0182:2012, reemplaza a la NTE INEN 0182:75
La Subsecretara de la Calidad del Ministerio de Industrias y Productividad aprob este proyecto de norma
Oficializada como:

Por Resolucin No.

Registro Oficial No.

Instituto Ecuatoriano de Normalizacin, INEN - Baquerizo Moreno E8-29 y Av. 6 de Diciembre

Casilla 17-01-3999 - Telfs: (593 2)2 501885 al 2 501891 - Fax: (593 2) 2 567815
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rea Tcnica de Normalizacin: E-Mail:normalizacion@inen.gob.ec
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rea Tcnica de Servicios Tecnolgicos: E-Mail:inenlaboratorios@inen.gob.ec
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Regional Azuay: E-Mail:inencuenca@inen.gob.ec
Regional Chimborazo: E-Mail:inenriobamba@inen.gob.ec
URL:www.inen.gob.ec