Recuento y asilamiento de bacterias aerobias mesfilas

viables de lodo activo de la planta de tratamiento de

aguas residuales domsticas de Trujillo.

INTRODUCCIN

Dos de las categoras ms comunes de los sistemas de tratamiento de aguas

aerbicas encontradas en plantas industriales son los sistemas de lagunas
aireadas y el sistema de lodo residual activado.
El sistema de lodos activados es uno de los tratamientos biolgicos ms
empleado debido a la alta eficiencia alcanzada, asociada con una pequea
rea de despliegue requerida, en comparacin con otros sistemas. El lodo
activado consiste en una compleja asociacin de microorganismos compuesta
por bacterias, protozoarios, hongos y micrometazoarios que oxidan y
mineralizan la materia orgnica contenida en los efluentes. La comunidad
establecida en este sistema es dinmica y fundamental para el tratamiento
pues cada especie tiene su importancia para el buen funcionamiento del
proceso. Las bacterias son las que llevan a cabo la mayora de las
transformaciones de la materia orgnica contenida en los efluentes, se
encargan de la eliminacin de E.coli, reduccin de DBO5, floculacin y
remocin de slidos.
Por lo tanto, el objetivo de este trabajo es realizar un anlisis microbiolgico del
lodo activo extrado de la Planta de Tratamiento de Aguas Residuales
Domsticas de Trujillo, para lo cual se ha realizado una siembra de distintas
diluciones de dicho lodo sobre agar PCA, con la finalidad de lograr un
aislamiento y recuento de las bacterias mesfilas viables que en l se
encontraran.

I.

OBJETIVOS

II.

Conseguir colonias aisladas de bacterias heterotrficas aerobias.

Hacer un recuento bacteriano de las mismas.
Determinar el nmero de UFC/ml.

MARCO TERICO
2.1 Las bacterias en aguas residuales
Las bacterias tienen medidas tpicas entre 1-2 um de ancho y entre 2-20 um
de largo. Debido a su tamao, forma y morfologa tan pequea, solo
pueden ser examinadas utilizando un microscopio de alta resolucin
(x1000) adems de tcnicas de tintura. La tcnica de teido de Gram es el
criterio bsico utilizado para clasificar los grupos de bacterias ya sea como
gram positivas o negativas, lo cual indica una variacin fundamental de la
estructura de la pared celular. Las bacterias son tambin clasificadas
utilizando otros criterios, tales como:
Utilizacin de oxgeno al degradar materia orgnica (si utilizan oxgeno
se denomina aerbicos, si metabolizan con o sin oxgeno, facultativos o
aquellas que no utilizan oxgeno, anaerbicas).
Utilizacin de fuentes de carbono (orgnico - heterotrficas; dixido de
carbono - autotrficas).
Crecimiento ptimo a diferentes temperaturas (termfilas - 55-75 C;
mesfilas - 30-45 C; sicrficas: obligadas - 15-18 C y facultativas - 2530 C).
La mayora de los sistemas aerobios de tratamiento de aguas residuales
operan en temperaturas de entre 10-40 C y por lo tanto contienen
principalmente bacterias mesfilas. Estas incluyen tanto los tipos gram
positivos como los bacilos o los gram negativos como las seudomonas.
Adems, otros microorganismos interactan para transformar la materia
orgnica en biomasa nueva, dixido de carbono y agua. Colectivamente, a
estos microorganismos se les denomina biomasa.
La biomasa es la "fuerza de trabajo" de un sistema de tratamiento de
aguas. En un estado dinmico de flujo, diferentes microbios mueren
mientras que otros se desarrollan y se convierten en dominantes. Bajo
condiciones adversas como un choque txico, ciertas poblaciones de
bacterias pueden verse reducidas o eliminadas causando una calidad de
efluente pobre. Ejemplo de este choque txico puede ser derrames de "licor

negro" en las fbricas de papel o una alteracin de proceso en una planta

qumica que enva altos niveles de terpenos a la planta de tratamiento.
Tabla N 1: Lmites permisibles en la descarga de lquidos y aguas residuales.

PARMETROS
DBO5
Slidos Totales en Suspensin
Aceites y Grasas
pH
Oxgeno Disuelto
Fsforo
Nitrgeno Amoniacal
Temperaturas
Coliformes Totales

CRITERIO
10 ppm
< 30 mg / dm3
< 15 mg / dm3
6.95
> 3.5 mg / dm3
< 30 mg / dm3
< 20 mg / dm3
un incremento < 3C
< 1000 colonias / 100 cm3

Fuente: DIGESA. 2004

2.2 Lodos activados

Es un proceso biolgico aerobio que emplea microorganismos aerobios y
facultativos para degradar los compuestos orgnicos.
El sistema se compone de un reactor aireado artificialmente (cmara de
aireacin), seguido por un sedimentador que cumple la funcin de separar
la biomasa suspendida en la fase lquida. Una parte de la biomasa
separada en el sedimentador secundario se la recircula al reactor, el resto
se elimina como barros en exceso (purga de barros), de manera tal de
mantener la concentracin de microorganismos en la cmara de aireacin
aproximadamente constante. De esta manera, por efecto de la recirculacin
aumenta la concentracin de la biomasa en la cmara de aireacin, y el
tiempo de residencia de los mismos, obtenindose remociones similares
con instalaciones ms pequeas.
Al aumentar el tiempo de residencia de los microorganismos en el reactor,
aumenta la actividad biolgica, y disminuye, as, el tiempo de tratamiento
(del orden de horas)
Tabla N 2: Caracterizacin y composicin de lodos

III.

MATERIAL

IV.

Muestra de lodo activo ms agua residual domstica encontrada en

la Planta de Tratamiento.
Solucin salino fisiolgica estril.
Agua destilada.
PCA ( Agar Cuenta Placa)
2 placas Petri.
9 Frascos con 9 mL de SSF
1pipetas de 1 mL.
1pipetas de 5 mL.
1mecheros.
Ron de quemar.
1 encendedor.
Incubadora calibrada 37 1C.
Autoclave 121C
Plumn marcador.
Guantes descartables.

METODOLOGA

DETERMINACION
N UFC

METODO DE
VERTIDO EN
PLACA

METODO DE
EXTENSION EN
PLACA

Tener en cuenta que el tipo de siembra se hizo por la Tcnica por

superficie en toda la placa.

Fig. 1: Mtodo de extensin en placa

Es el mtodo de eleccin para anaerobios facultativos y cultivo de

microaerofilos.
El nmero de bacterias viables por muestra se expresa en: UNIDADES
FORMADORAS DE COLONIAS (UFC). Representa cada colonia
contada y su nmero total representa el nmero total de bacterias
viables en la muestra.

V.

PROCEDIMIENTO

i.

ii.

Recolectar el Agua residual domestica de la ciudad de Trujillo (PTAR).

Se necesit para esto equipo de proteccin personal como mascarillas,
guardapolvo y lentes.
En el lugar, eliminar slidos (plsticos, piedras y otros materiales no
deseados del lodo) para su mejor desplazamiento y futuro anlisis. Se
deposit la muestra en un balde de 4L.

iii.

En el laboratorio, disponer en un matraz estril de 300 mL, aqu se

deposit la muestra del lodo para que sea ms fcil su posterior
utilizacin.

iv.

Tomar aproximadamente 0.5ml de la muestra con una pipeta y diluirla

en 4.5ml de diluyente (solucin salina fisiolgica estril) que se
encontraba en frasquitos de penicilina para empezar a hacer las
diluciones.

v.

Homogenizar y tomar una alcuota de 0.5ml para la siguiente dilucin de

10-2.

vi.

Repetir el mismo procedimiento 6 veces ms, para obtener diluciones

10-7 y 10-8. De esta manera el conteo de colonias sera ms sencillo en
las prximas prcticas.

vii.

Sembrar 0.1 ml de las dos ltimas diluciones en placas Petri estriles

que contenan agar PCA. El mtodo de siembra fue de superficie por
extensin con la ayuda del asa Drigalsky. Siempre cerca al mechero
para evitar contaminacin y con guantes y mascarillas para no
ensuciarnos en caso de que existan microorganismos patgenos.

viii.

Dejarlas secar las cajas Petri y llevarlas a incubar a 37 1 C por 48 h y

luego se somete a una temperatura ms baja (ambiente) para conservar
los microorganismos ya obtenidos y evitar que sigan proliferndose a
esta velocidad hasta la prxima semana.

ix.

VI.

Hacer recuentos de UFC/mL.

RESULTADOS Y DISCUSIN:
Terminando en conteo por cualquiera de los mtodos, se debe aplicar la
siguiente frmula para obtener el N de UFC/ml o UFC/g.

Factor de dilucin = Inversa de la dilucin.

Para la dilucin 10-7:

UFC/ml = (385 x 107)/0.1

UFC/ml = 3.8 x 1010 UFC/ml ARD

Fig 2: Placa sembrada con dilucin 10-7

Para la dilucin 10-8:

UFC/ml = (96 x 108)/0.1

UFC/ml = 9.6 x 1010 UFC/ml ARD

Fig 3: Placa sembrada con dilucin 10-8

Se encontr abundante cantidad de bacterias mesfilas viables en

las aguas residuales de Trujillo, que posiblemente al no recibir
tratamiento van a las alcantarillas y luego terminan en el mar
contaminndolo y generando problemas a especies, y tambin a la
salud humana.
Se determin el nmero aproximado de colonias de bacterias en las
aguas residuales de Trujillo por ml y este fue de 9.6 x 1010 UFC/ml
para la dilucin de 10-8 y de 3.8 x 1010 UFC/ml para la dilucin de 10-7.

VII.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
La temperatura de 37C genera el desarrollo de las bacterias a una
alta velocidad, mientras que la temperatura ambiente permite que
permanezcan vivas sin incrementar demasiado las colonias.
Las aguas residuales no reciben un tratamiento aerbico adecuado
para eliminar materia orgnica y esto genera contaminacin a la
ciudad de Trujillo.

 Las bacterias encontradas en los lodos superan los lmites

permisibles establecidos (ver tabla N 2), lo que nos indica el gran
riesgo que implica el exponerse a estos lodos o el vertimiento de
estos a los cuerpos de agua natural de nuestra ciudad.
Para trabajar con lodos (aguas residuales) es necesario la proteccin
necesaria tanto en campo como laboratorio y un ambiente totalmente
estril en el momento de siembra.
VIII.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Gua Ambiental [Blog] Calidad de Aguas Lodos activados.Argentina

(2010).
[Citado:
14/06/15].
Disponible
en:
http://www.guiaambiental.com.ar/conocimiento-calidad-de-agua-lodosactivados.html
Hernndez, M. A. (1992), Depuracin de aguas residuales. Servicio de
publicaciones de la escuela de ingenieros de caminos de Madrid, Espaa,
p. 713.