Introduccin

El presente reporte consiste en la realizacin de extraccin de ADN plasmdico de la bacteria

escherichia coli, a partir sus plsmidos que son molculas de DNA extra cromosmico (adn
plasmdico), circular y generalmente es de pequeo tamao que se encuentran en muchas especies
bacterianas.
La extraccin consisti en el aislamiento y purificacin de molculas de ADN y se basa en las
caractersticas fisicoqumicas de la molcula. El ADN est constituido por dos cadenas de
nucletidos unidas entre s formando una doble hlice. Los nucletidos estn integrados por un
azcar, un grupo fosfato y una base nitrogenada. La unin de los nucletidos ocurre entre el grupo
fosfato y el azcar, mediante enlaces fosfodister, dando lugar al esqueleto de la molcula. Los
grupos fosfato estn cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al ADN una carga
neta negativa y lo hace altamente polar, caractersticas que son aprovechadas para su extraccin.
Los grupos fosfato tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga negativa, lo que
permite disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la
molcula.
Para extraer el adn del material biolgico es preciso provocar una lisis celular, inactivar las nucleasas
celulares y separar los cidos nucleicos de los restos de clulas. Dicha rotura celular se lleva a cabo
en presencia de conservantes, que garantizan la integridad del ADN; esto es, que impiden o limitan
la accin de las ADNasas presentes en las clulas o contaminantes del medio. Se eliminan las
protenas y otros contaminantes celulares, mediante precipitacin salina. Finalmente el ADN
genmico se asila mediante precipitacin en presencia de alcohol y se disuelve en agua o en una
solucin tamponada como algn detergente que puede contener conservantes del ADN.
Dentro de la extraccin del DNA plsmidico , los detergentes son los ms utilizados como el SDS que
ataca a nivel de los fosfolpidos de la envoltura celular de las bacterias provocando lisis.
Los mtodos empleados para purificar los cidos nucleicos de restos celulares suelen ser
combinaciones de dos o ms tcnicas. La centrifugacin constituye un mtodo de purificacin eficaz.
Un mtodo que permite visualizar ADN plasmdico o fragmentos y la comprobacin de la integridad
del mismo es la electroforesis en gel de agarosa, en la cual se separan en funcin de su tamao y
por electroforesis. Esta tcnica consiste en someter la mezcla de molculas de ADN embebidas en
un gel de agarosa a un campo elctrico. Las molculas de ADN son atradas al polo positivo debido a
la carga neta negativa de ambas cadenas consecuencia de sus grupos fosfato. Las molculas ms
pequeas migran ms rpido que las grandes al verse menos frenadas por el gel de agarosa en su
desplazamiento. Cuando los fragmentos se han separado, el gel se sumerge en una solucin que
contiene azul de bromofenol que migra a travs de la solucin de agarosa al menos
aproximadamente a la misma velocidad que una cadena de ADN. El azul de bromofenol es usado
como marcador del frente de avance de la electroforesis. Asimismo, su color es una ayuda visual
durante la carga de muestra en los pocillos, los colorea de azul y luego se ilumina con luz UV.