Espectrofotometria de Absoro Atmica

com chama ou com cmara de grafite para

determinao do Mg, Cu, Zn e Se

Sandra Isabel Costa

Departamento de Promoo da Sade e Preveno de Doenas No Transmissveis
(DPSPDNT)
Unidade de Diagnstico Laboratorial e Referncia
(UDLR)
Lisboa, 29 de Novembro de 2013

1- Fundamentos tericos da EAA-chama para a

determinao do zinco, magnsio cobre e da EAAcmara de grafite para a determinao do selnio.

2- Avaliar os resultados do novo programa de AEQ

no qual comemos a participar em 2013 -Trace
elements
3-Validao da metodologia de EAA para as
determinaes do Mg, Cu, Zn e Se

Espectroscopia de Absoro Atmica- EAA

Os trs campos da Espectroscopia Atmica so:
-Emisso
-Absoro
-Fluorescncia

A EAA uma tcnica analtica de deteo qualitativa e determinao

quantitativa de determinados elementos, recorrendo absoro de
radiao pelos tomos no seu estado gasoso.

A sua elevada sensibilidade, torna este mtodo adequado para a anlise

de microelementos ou elementos vestigiais, presentes como impurezas
ou como componentes normais de amostras.

Espectroscopia de Absoro Atmica- EAA

Quando a radiao com um comprimento de onda adequado incide
num grupo de tomos livres, no seu estado fundamental, os tomos
podem absorver essa radiao, passando estes para um estado
excitado- Absoro Atmica .

Atravs da medio da quantidade de radiao absorvida pode-se

determinar quantitativamente o elemento presente.

EAA por chama

Etapas do processo de atomizao por chama:

Aspirao da amostra
Formao do aerossol
Formao do vapor atmico
Absoro da radiao eletromagntica
Transies energticas

TS CEAGP.

o tomo no estado
fundamental passa para
um estado energtico
mais elevado (excitado)

Os tomos mantm-se no estado

fundamental podendo absorver
radiao de comprimento de
onda conveniente.

chama onde
convertida em
tomos livres.

I0

Monocromador

DET

AMP

Lmpada de
ctodo co

Modulador

Queimador

Passa para um
nebulizador, onde se
forma uma neblina
fina (aerossol).

Nebulizador

A amostra em soluo
aspirada

T = I/I0
Abs = log I0/I

Evaporao do
solvente

Evaporao dos
solutos

Quebra de
ligaes

Queimador

Nebulizador

Absoro de radiao

EAA por chama

Componentes bsicos de um EAA por chama

Atomizador
Fonte emissora de radiao
Monocromador
Detetor de radiao
Sistema de amplificao e medio do sinal
Fonte emissora de radiao
Lmpada de ctodo co
Lmpada de descarga de vapor
Lmpada de descarga sem elctrodo
Lmpada de ctodo de intensidade elevada

EAA por chama

Fonte emissora de radiao
Lmpada de ctodo co

Constituda por um nodo e um ctodo que contm o

elemento ao qual a lmpada se destina.
Os elctrodos esto hermeticamente fechados numa atmosfera
de um gs monoatmico ultra puro, non ou rgon.
S possivel analisar um elemento de cada vez (substituir a
lmpada sempre que se analisam elementos diferentes.)
Requerem uma fonte de tenso muito estvel.

EAA - Interferentes
A absoro atmica conhecida como uma tcnica muito especfica
com poucas interferncias.
Interferncias em absoro atmica podem ser divididas em duas
categoriais:

1-Espectrais
resultam da absoro de radiao caracterstica por outros
elementos presentes.

2-No espectrais
afetam a formao dos tomos do analito, e podem ser devidas a:
efeito matriz
interferncias quimcas

interferncias de ionizao

EAA - Interferentes
Efeito matriz
A eficincia de nebulizao pode ser diferente
entre amostras e padres.

Nebulizador

se a amostra mais viscosa,

e/ou se a tenso superficial diferente dos padres

Compensar este tipo de interferncia:

ajustar o mais possvel a matriz dos padres matriz das amostras.
Ex glicerol
cido ou outro reagente adicionado s amostras durante a preparao,
dever ser adicionada aos padres e ao branco nas mesmas
concentraes.
mtodo de adio padro
desvantagem: aplicado amostra a amostra (cada amostra implica uma
calibrao analitica).

EAA - Interferentes
Interferncia qumica
Formao de compostos termicamente mais estveis com o analito,no
sendo este totalmente decomposto pela energia disponvel na chama

Existem duas maneiras de abordar o problema:

- Adicionar em excesso um outro elemento que ir formar
preferencialmente um composto termicamente estvel com
o interferente
-Ex. xido de lantnio (determinao do Mg)
- aumentar a energia da chama, atravs do uso de outra
combinao de oxidante/combustvel (nem sempre
possivel porque o elemento a analisar pode decompr-se)

Queimador
Nebulizador

EAA - Interferentes
Interferncia de ionizao
Estas interferncias devem-se perda de um ou mais electres dos
tomos excitados.
Ex chamas de elevada temperatura (protxido de azoto/acetileno).
Este tipo de interferncias minimizam-se:
adio de um elemento facilmente ionizvel
(a presena de um excesso de electres livres faz diminuir a ionizao da
amostra, aumentando assim a sensibilidade do elemento em estudo.

EAA com atomizao electrotrmica

EAA com atomizao eletrotrmica tambm conhecida por em
forno de grafite, ou em cmara de grafite, por ser habitualmente
um pequeno tubo de grafite, o dispositivo onde ocorre a atomizao.
A amostra no estado lquido, suspenso ou slida, introduzida
num forno ou cmara de grafite, a qual sujeita a um aquecimento
progressivo previamente programado.
O programa de temperaturas aplicado cmara depende do
elemento a analisar e da matriz da amostra.
A preciso e exactido dos resultados obtidos por esta tcnica esto
relacionados com o tempo e temperatura programados.

Um programa tpico de temperaturas compreende quatro patamares

EAA com atomizao electrotrmica

Etapa de secagem
Evaporao do solvente, deve ser feita de
modo suave para que no ocorram projeces
da amostra (decisivo para a preciso).
Nesta etapa faz-se passar um fluxo de gs
inerte atravs do tubo para uma secagem
rpida e suave da amostra.
Etapa da pirlise
Mineralizao dos componentes da matriz,
deve ser feita a uma temperatura to alta
quanto possvel sem que haja perda do
elemento a analisar.
Nesta etapa tambm se faz passar um fluxo
de gs inerte atravs do tubo para eliminar
vapores de constituintes da matriz ou fumos.

EAA com atomizao electrotrmica

Etapa de Atomizao
Produo do vapor atmico, deve ser feita
temperatura mais baixa que conduza
maxima atomizao do elemento a analisar
(mxima sensibilidade).
Nesta etapa, em geral, o fluxo de gs
inerte interrompido, uma vez que reduz
o tempo de residncia dos tomos no tubo
de grafite, e consequentemente a
sensibilidade do mtodo.
Etapa de Limpeza
Eliminao de vapores constituintes da matriz.

Nesta etapa h passagem de fluxo de gs inerte.

EAA com atomizao eletrotrmica

Modificadores de matriz
Substncias que tm como funo alterar as propriedades do analito ou
da matriz.

Objetivo
Estabilizar (tornar menos voltil) o analito de modo a permitir efetuar
a pirlise a temperaturas mais elevadas:
maior eliminao dos componentes da matriz
menor probabilidade de ocorrerem interferncias.

Nitrato de Pd, Nitrato de Mg, Dihidrogenofosfato de amnio,...

EAA com atomizao eletrotrmica

Background
Pode ocorrer uma atenuao adicional do feixe de absoro especfico,
ao nvel da nuvem atmica devido a uma absoro molecular e a uma
disperso da radiao
Processos/Sistemas de correo do background:
Uso de lmpadas de deutrio
Com base no efeito de Zeeman
Com base no efeito de Smith-Hiettje

EAA com atomizao eletrotrmica

Background
Lmpadas de deutrio

1 Quando o chopper (modulador

rotatorio) d passagem radiao
da lmpada de deutrio D2, medese o Background
2 Quando o chopper d
passagem radiao da lmpada
de ctodo oco mede-se a
atenuao total do feixe (AA+Bkg)
3 Subtraindo o primeiro valor ao
segundo, temos a Abs. Atmica (AA)
especfica.

EAA com atomizao electrotrmica

Efeito de Zeeman
Ocorre quando a amostra colocada num campo magntico.
A existncia de uma interaco do campo magntico com os
momentos magnticos orbital de spin do tomo, leva diviso da
linha espectral em trs ou mais.
O campo magntico alternadamente ligado e desligado (numa
frequncia de fraes de segundo durante a atomizao).
Com o campo magntico desligado mede-se a atenuao total
(Amostra + Bkg)
Com o campo magntico ligado mede-se o Bkg.

EAA com atomizao electrotrmica

Efeito de Zeeman
Quando o vapor atmico submetido a um forte campo magntico os
nveis eletrnicos so desdobrados.

fonte

: amostra + background
+: background

-+

Campo magntico

Sinal analtico

Espectroscopia de Absoro Atmica

Sinal da Chama vs Eletrotrmica

Na EAA/ chama, o sinal contnuo:

inicialmente
sobe,
correspondendo

chegada da soluo chama; depois

permanece mais ou menos constante
durante o tempo em que a soluo estiver
a ser aspirada.

Na EAA/ grafite, o sinal um pico. A

produo dos tomos e o aparecimento dos
mesmos no percurso ptico, levam ao
aparecimento de um sinal de absorvncia. O
sinal vai ser avaliado em termos da sua
rea (absorvncia integrada).

EAA com chama vs EAA cmara de grafite

Chama
S se poder aplicar em solues
necessrio um volume de
amostra superior ao utilizado na
cmara de grafite

Cmara de grafite
Sensibilidade cerca de 100 a 1000
vezes maior.

Mais rpido

Permite efectuar as
determinaes com volumes de
amostra muito mais pequenas (10
20mL).

Boa preciso

Permite fazer determinaes

diretamente em amostras slidas
Equipamento mais dispendioso

1- Fundamentos tericos da EAA-chama para a

determinao do zinco, magnsio cobre e da EAAcmara de grafite para a determinao do selnio.

2- Avaliar os resultados do novo programa de AEQ

no qual comemos a participar em 2013 -Trace
elements
3-Validao da metodologia de EAA para as
determinaes do Mg, Cu, Zn e Se

Tipos de erros
Erros sistemticos:
ocorrem sempre no mesmo sentido, mas quando identificados podem ser
corrigidos ou eliminados. Existe um desvio que assume sempre a mesma
direo (positivo ou negativo) em relao ao valor esperado, interferindo
assim na exatido.

Causas mais frequentes :

Deteriorao do equipamento
Deteriorao gradual dos materiais de controlo/calibradores e reagentes
Balana mal calibrada
Erros sistemticos na pipetagem
Erros de operao

Tipos de erros
Erros aleatrios: so erros que resultam de imprecises em medies e
portanto inevitveis. Afetam a reprodutibilidade e preciso dos resultados e
podem ser avaliados atravs da repetio de medies sobre a mesma
amostra.
Preciso e
Exato

Preciso e No
Exato

No Preciso e
Exato

No Preciso e No
Exato

Causas mais frequentes :

Variaes das condies ambiente do laboratrio (temperatura)
Limitaes dos instrumentos de medida
M homogeneizao dos reagentes/amostras
Bolhas de ar no sistema

Avaliao Externa da Qualidade

O parmetro Bias permite ao laboratrio avaliar a sua inexatido, sendo que
esta corresponde ao desvio entre o valor obtido ou a mdia de muitos valores
em repetio e o valor verdadeiro ou esperado que deveria ter sido encontrado.

Avaliao Externa da Qualidade

O erro total (ET) a combinao linear de erros aleatrios e erros
sistemticos, a qual origina um intervalo de valores associado a um
determinado nvel de confiana, que caracteriza o erro da medio.
Os dados necessrios para o seu clculo podem ser obtidos atravs do
tratamento dos dados de controlo interno e da avaliao externa da
qualidade.

Avaliao Externa da Qualidade

ndice de Desvio - usado para a avaliao do desempenho individual.
Estima a exatido comparativamente mdia ponderada/calculada pelo
laboratrio organizador.

A apreciao feita seguindo os seguintes critrios:

ID 0,5

Excelente

0,5 < ID 1,0

Bom

1,0 < ID 2,0

Satisfaz

ID > 3,0

No satisfaz

Determinaes realizadas no DPSPDNT por EAA (chama e

cmara de grafite )
Microelementos

Tipo de amostra

Zn (10,7 18,4 mmol/L)

Soro

Se (0,58 1,82 mmol/L)

Soro

Cu (10,99 21,98 mmol/L)

Soro

Cu (0,03 1,26 mmol/L)

Urina

Mg (0,7 0,91 mmol/L)

Soro

Mg(1,0 3,0 mmol/L)

Mg*
*em 2014

Sangue
Urina

Avaliao Externa da Qualidade

NEQAS -Programa de Qumica Clinica-2013
Cu (soro)
N
Ensaios

50

Mg (soro)
N
Ensaios

64

Excelentes

24

48,0

18

28,1

Bom

21

42,0

38

59,4

Satisfaz

8,0

7,8

No Satisfaz

2,0

4,7

Participmos em 114 ensaios:

Cu (50 ensaios - soro) 90% de desempenho bom ou excelente
Mg (64 ensaios - soro) 88% de desempenho bom ou excelente

Avaliao Externa da Qualidade

Cobre no soro
Magnsio no soro
% 8,0
6,0

4,0

2,0

0,0

-2,0

-4,0

Representao grfica dos ID calculados a partir da mdia de

resultados obtidos com todos os mtodos e o respectivo desvio
padro, para a determinao do Cu e o Mg, no soro, NEQAS- Qumica
Clnica ,2013

Avaliao Externa da Qualidade

NEQAS Programa Trace elements (soro, urina, sangue) incio no ano de 2013

Cu (soro)
N
Ensaios

14

Cu (urina) Mg (soro) Mg (sangue)

N
Ensaios

14

N
Ensaios

14

N
Ensaios

14

Zn (soro)
N
Ensaios

14

Se (soro)
N
Ensaios

14

Excelentes

57,1

57,1

57,1

10

71,4

50,0

14,3

Bom

42,9

42,9

42,9

28,6

42,9

50,0

Satisfaz

0,0

0,0

0,0

0,0

7,1

28,6

No Satisfaz

0,0

0,0

0,0

0,0

0,0

7,1

Avaliao Externa da Qualidade

Cobre no soro
%

4,00

Cobre na urina

3,00
2,00
1,00
0,00
-1,00

-2,00
-3,00
-4,00

Representao grfica dos ID calculados a partir dos resultados

obtidos para os laboratrio que utilizam o mesmo mtodo que ns,
para a determinao do io Cu no soro e urina, NEQAS Trace
Elements, 2013

Avaliao Externa da Qualidade

Mg no soro
%

4,0

Mg no sangue

3,0
2,0

1,0
0,0
-1,0
-2,0
-3,0
-4,0

Representao grfica dos ID calculados a partir dos resultados

obtidos com todos os mtodos, para a determinao do io Mg no
soro e no sangue, NEQAS Trace Elements, 2013

Avaliao Externa da Qualidade

Zinco no soro
Selnio no soro

%
4,0

2,0

0,0

-2,0

-4,0

-6,0

-8,0

Representao grfica dos ID calculados a partir dos resultados

obtidos para os laboratrio que utilizam o mesmo mtodo que ns,
para a determinao do io Zn e io Se no soro, NEQAS Trace
Elements, 2013

Avaliao Externa da Qualidade

Cu (soro) Qumica clnica

N Ensaios

50

Cu (soro) Trace Elements

N
Ensaios

14

Excelente

24

48,0

57,1

Bom

21

42,0

42,9

Satisfaz

8,0

0,0

No Satisfaz

2,0

0,0

Avaliao Externa da Qualidade

Mg (soro) Qumica clnica

N Ensaios

64

Mg (soro) Trace Elements

N
Ensaios

14

Excelente

18

28,1

57,1

Bom

38

59,4

42,9

Satisfaz

7,8

0,0

No Satisfaz

4,7

0,0

Avaliao Externa da Qualidade

Zn (soro) Qumica clnica

N Ensaios

35

Zn (soro) Trace Elements

N
Ensaios

14

Excelente

14,3

50,0

Bom

27

77,1

42,9

Satisfaz

2,9

7,1

No Satisfaz

0,0

0,0

Avaliao Externa da Qualidade

NEQAS Programa Trace elements (soro, urina, sangue) incio no ano de 2013

Durante este ano participamos em 84 ensaios com um desempenho de

93% de Bom ou Excelente, 6 % de Satisfaz e 1% de No satisfaz

Zn (14 ensaios - soro) 93% de desempenho bom ou excelente

Mg (28 ensaios soro e sangue) 100% de desempenho bom ou
excelente
Cu (28 ensaios soro e urina) 100% de desempenho bom ou
excelente
Se (14 ensaios - soro) 64% de desempenho bom ou excelente

Vantagens Participao na AEQ - Trace Elements

Incluir o Selnio
Inclui as naturezas de amostra: soro, urina e sangue
Maior n de participantes com o mesmo mtodo e/ou utilizando
mtodos comparveis ex. ICP
Melhor desempenho na AEQ

Desvantagens Participao na AEQ - Trace Elements

Acrscimo no custo das determinaes

1- Fundamentos tericos da EAA-chama para a

determinao do zinco, magnsio cobre e da EAAcmara de grafite para a determinao do selnio.

2- Avaliar os resultados do novo programa de AEQ

no qual comemos a participar em 2013 -Trace
elements
3-Validao da metodologia de EAA para as
determinaes do Mg, Cu, Zn e Se

Guia Relacre - Validao de Mtodos internos de

ensaio em anlise qumica
Sempre que um Laboratrio utiliza mtodos internos de ensaio ter que realizar um
processo de validao desses mtodos, que inclua todos os registos obtidos.
A validao dos mtodos internos deve ser adaptada a cada caso, sendo
progressivamente mais exigente para as situaes indicadas:
1 - Uma modificao menor da tcnica relativamente norma . Neste caso as
alteraes no levantam dvidas sobre a equivalncia tcnica dos resultados
2 - Uma modificao maior da tcnica relativamente norma . Neste caso as
alteraes levantam dvidas sobre a equivalncia tcnica dos resultados.
3 - Mtodo baseado em tcnica de ensaio conhecida, cuja aplicao ao ensaio
pretendido venha descrita em literatura cientfica, no existindo uma norma
de ensaio correspondente.
4 - Mtodo baseado em tcnica de ensaio conhecida, mas cuja aplicao ao ensaio
pretendido no venha descrita em literatura cientifica.
5 - Mtodo baseado em tcnicas de ensaio inovadoras e no descritas na literatura
cientifica.

A situao 1,2 e 3 so mais frequentes.

A situao 4 e 5 encontram-se mais em laboratrios de investigao.

Validao da metodologia
Os requisitos mnimos para a validao de mtodos internos de
ensaio so:

1 - Gama de Trabalho/ Linearidade

2 - Limiares analticos

3 - Sensibilidade
4 - Preciso
5 - Exatido

Validao da metodologia
1 - Gama de trabalho/ Linearidade
Metodologia que envolve o traado de uma curva de calibrao

Curva de calibrao- norma ISO 8466-1 so recomendados dez pontos

de calibrao, no devendo ser um nmero inferior a cinco,
distribuindo-se de igual modo na gama de concentraes.
Nos processos lineares deve-se garantir a linearidade.

Para processos lineares a preciso deve ser constante ao longo

da gama de trabalho Verificar a Homogeneidade de Varincias

1 - Gama de Trabalho - Verificao da Linearidade

Anlise visual Funciona bem:
- evidente a ausncia de linearidade
-quandoR>0,995 linear
Modelo estatstico de acordo com a norma ISO 8466-1:
Teste de Mandel
A partir de um conjunto de pares ordenados, calcula-se a funo de
calibrao linear (ISO 8466-I) e a funo de calibrao no linear
(ISO 8466- II), bem como os respetivos desvios padro residuais, Sy/x
e Sy2.
Determina-se a diferena das varincias (DS2) pela seguinte equao:

DS ( N 2) S
2

2
y/x

( N 3) S

Em que N o nmero de padres de calibrao.

2
y2

1 - Gama de Trabalho - Verificao da Linearidade

Calcula-se ento o valor teste, VT

DS 2
VT 2
SY 2
Compara-se este valor de VT com o valor tabelado da distribuio de
F de Snedecor/Fisher:
Se VT F a funo de calibrao linear
Se VT > F a funo de calibrao no linear
No caso de VT > F, deve-se avaliar a possibilidade de reduzir a gama de
trabalho. Caso se justifique recorre-se ISO 8466-2 ou a uma funo
susceptvel de bom ajuste.

1 - Verificao da Linearidade
Exemplo Io Zinco
P0
P1
P2
P3
P4
P5
P6

Conc (mg/ Conc2 (mg/

Abs
Abs
experimental calculada
dL)
dL)
0,00
-0,00010 0,00305
0,0000
10,000
100,00
0,03350
0,03025
15,000
225,00
0,04379
0,04385
20,000
400,00
0,05902
0,05745
25,000
625,00
0,07041
0,07105
30,000
900,00
0,08548
0,08465
40,000
1600,00
0,11004
0,11184

Curva Zinco (SIC 20-03-2013)

0,12000
0,10000
0,08000

Abs 213,9 nm

Padro

0,06000
0,04000

y = 0,002720x + 0,003054
R = 0,996494

0,02000

0,00000
0,00
-0,02000

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

Conc. (mg/dL Zn)

Resultados da funo linear

R=
R2=
Erro - Padro (Sy/x ou S2Y1)
=
ordenada na oridem=
declive=
N

0,998245321
0,99649372

Resultados da funo quadrtica

-8,664E-06
3,066E-03
4,291E-06
1,808E-04

8,883E-04
1,710E-03

0,002337862

9,983E-01

0,001839

#N/D

0,003054286
0,002719714
7

1,150E+03
7,780E-03

4,000E+00
1,353E-05

#N/D
#N/D

2 - Teste Mandel linearidade

Este teste s avalia qual dos dois mtodos (linear ou quadrtico) melhor
1 - Teste Visual de Linearidade
R: R2 maior que 0,995 ento estamos perante uma recta.

DS2=
VT=
Fctabelado =

1,3793E-05
4,076247579
21,19768958

VT F a funo de ajuste linera adequada

1 - Gama de Trabalho- Verificao da Homogeneidade de Varincias

A homogeneidade pode ser avaliada atravs de um modelo

estatstico de acordo com a norma ISO 8466-1.
O primeiro padro e o ltimo padro so analisados em 10 rplicas
independentes.
Determina-se as varincias associadas ao primeiro e ltimo padro
do seguinte modo:

y
10

Si2

j 1

i, j

ni 1

i - o n do padro
j - o n de repeties efetuadas para cada padro

1 - Gama de Trabalho- Verificao da Homogeneidade de Varincias

As varincias so testadas para examinar se existem diferenas
significativas entre elas nos limites da gama de trabalho, efetuando o
clculo do valor teste (VT):

VT=S210/ S21

quando S210 > S21

VT=S21/ S210

quando S21 > S210

Compara-se este valor de VT com o valor tabelado da distribuio

de F de Snedecor/ Fisher, para n-1 graus de liberdade:
Se VT F: As diferenas de varincias no so significativas e a
gama de trabalho est bem ajustada.
Se VT > F: As diferenas de varincias so significativas e a gama de
trabalho deve ser reduzida at que a diferena entre varincias
relativas ao 1 e ltimo padro permitam obter o VT F
Caso se justifique, recorre-se ISO 8466/2 ou a outra funo
susceptvel de um bom ajuste.

1 - Verificao da Homogeneidade de Varincias

Exemplo Io Zinco

n
mdia
S
CV(%)
Varincia
gL

P (10mg/dL)
10,9544
9,9471
10,6068
10,4337
10,9039
10,1441
10,4866
10,7568
10,2239
9,8491
10
10,43
0,39
3,69
0,1484110
9

Avaliao da varincia

VT =
Ftabelado (99% )=
gl

1,5398
5,3511
18

R: VT <F tabelado, Varincias iguais. Existe Homogeneidade de Varincias

P (40mg/dL)
38,8241
39,8711
39,0578
39,5146
40,3465
40,1784
39,7612
39,8464
40,0215
39,9234
10
39,73
0,48
1,20
0,2285161
9

2 Limiares analticos
Limite de deteo
Teor mnimo medido, a partir do qual possvel detetar a presena do
analito com uma certeza estatstica razovel.
Este limiar analtico corresponde mais pequena quantidade de substncia
que pode ser detetada numa amostra, mas no pode ser quantificada
com um valor exato.
Uma leitura inferior ao limite de deteo no significa, obviamente, a
ausncia do analito a medir. Apenas se pode afirmar com uma
probabilidade definida, que a concentrao do componente em causa ser
inferior a um certo valor.
Em termos qualitativos, o conceito de limite de deteo corresponde
concentrao mnima que possvel distinguir do branco, ou seja, de uma
amostra que contm a mesma matriz mas no contm o analito.

2 Limiares analticos
Limite de deteo
Em termos quantitativos o limite de deteo obtido por:
a) Caso geral

LD = X0 + K S0
X0 - a mdia aritmtica do teor medido de uma srie de brancos ou padres vestgios (entre
10 e 20 ensaios), preparados de forma independente e lidos ao longo de vrios dias de
trabalho, isto , reproduzindo o mais possvel a situao de rotina.
S0 representa o desvio padro associado a X0

A lei de probabilidade de X0 suficientemente conhecida e partindo do

princpio que gaussiana (distribuio normal) ento toma-se o valor de
K 3,3 para um nvel de confiana de 99,7%.
Assim
LD = X0 + 3,3 S0

2 Limiares analticos
Limite de deteo

b) Caso em que o mtodo envolve a utilizao de uma calibrao linear

3,3 S
LD
y/ x

Sy/x o desvio padro residual da curva de calibrao

b declive da reta

2 Limiares analticos
Limite de quantificao
Corresponde menor quantidade de analito presente numa amostra que
pode ser quantificada com preciso e exatido.
Na prtica, corresponde normalmente ao padro de calibrao de menor
concentrao (excluindo o branco).
Este limiar, aps ter sido determinado, deve ser testado para averiguar se a
exatido e preciso conseguida satisfatria.
Segundo recomendaes IUPAC o coeficiente de variao (desvio padro a
dividir pela mdia dos valores encontrados) para estes padres no deve
exceder 10%.

2 Limiares analticos
Limite de quantificao
Em termos quantitativos o limite de quantificao obtido por:
a) Caso geral

LQ = X0 + 10 S0
X0 - a mdia aritmtica do teor medido de uma srie de brancos ou padres vestgios
(entre 10 e 20 ensaios), preparados de forma independente e lidos ao longo de vrio
dias de trabalho, isto , reproduzindo o mais possvel a situao de rotina.
S0 representa o desvio padro associado a X0

2 Limiares analticos
Limite de quantificao (LQ)
b) Caso do Padro vestgio ou Branco fortificado
-padres vestgio ou brancos fortificados independentes
-estudar exatido e preciso
nveis aceitveis 10%
c) Caso em que o mtodo envolve a utilizao de uma calibrao linear
Neste caso ter-se-:

10 S
LQ
y/x

Em que:
Sy/x o desvio padro residual da curva de calibrao
b declive da reta

2 Limiares analticos
Limite de Deteo/ Quantificao
Existe uma relao terica entre o limite de deteo e o limite de
quantificao (ISO/TS 13530:2009)
Para a validao do mtodo, o limite de quantificao pode ser
estimado da seguinte forma:

LQ
LD
3
Exemplo Zinco
LQ (1 Padro da CC ) =10 mg/ dL
LD 3,3 mg/ dL

3 - Sensibilidade
Quociente entre o acrscimo do valor lido L e a variao da concentrao
C correspondente aquele acrscimo.

L
Sensib.
C
Esta caracterstica avalia a capacidade de um mtodo (ou equipamento) de
distinguir pequenas diferenas de concentrao de um analito.
Se a curva de calibrao for definida por um modelo linear, a sensibilidade
ser constante ao longo de toda a gama de trabalho e igual ao declive da
reta de calibrao.

3 - Exemplo do estudo da Sensibilidade io zinco

Estudo do critrio de aceitao do declive da reta de calibrao analtica
Data

Referncia

20-03-2013

01/2013

Declive
0,002641

21-03-2013

02/2013

0,002720

3
4
5
6
7
8
9
10
11
Mdia

0,002681

0,000056

n-1

CV(%)

Mdia + 2xS

0,002792

Mdia - 2xS

0,002569

4 - Preciso

Numericamente:
desvio padro,
varincia
coeficiente de variao

Repetibilidade
Condies to estveis quanto possvel (mesmo laboratrio, mesmo
analista, mesmo equipamento e num curto intervalo de tempo).
Reprodutibilidade
Condies de ensaio diferentes, utilizando o mesmo mtodo de ensaio,
sobre uma mesma amostra, fazendo-se variar as condies de medio,
tais como, diferentes laboratrios, diferentes operadores, diferentes
equipamentos
Preciso intermdia
Condies intermdias no mesmo laboratrio,
mas definindo
exatamente quais as condies a variar (uma ou mais), tais como:
Diferentes analistas
Diferentes equipamentos
Diferentes pocas

4 - Preciso
Preciso intermdia
Cu- Nvel 1 Lote 14401

mg/dL
97,66
94,50
108,50
108,43
96,66
101,30
95,15
99,61
94,73
100,12
96,70
95,36
98,60
99,87
93,57
106,10
97,75
96,35
98,41
95,24
97,65
96,64
95,06
94,17
97,70
25
98,23
4,09
8,19
12,28
4,17

Cu Absoro Atmica
Nvel 1

120,0
115,0
110,0

105,0
100,0
mg/ dL

Data
09-03-2012
14-03-2012
19-03-2012
28-03-2012
30-03-2012
18-04-2012
24-04-2012
04-05-2012
08-05-2012
16-05-2012
25-05-2012
29-05-2012
06-06-2012
06-06-2012
19-06-2012
25-06-2012
09-07-2012
17-07-2012
25-07-2012
03-08-2012
29-08-2012
31-08-2012
13-09-2012
17-10-2012
23-10-2012
Contar
mdia
sd
2s
3s
C.V. (%)

95,0
90,0
85,0
80,0
75,0
70,0
1440
1
mdia

Si(T.O) = 4,09 mg/dL

Lote
1S

2S

3S

controlo

Fabricante

5 - Exatido
Mede a concordncia de vrios resultados obtidos, por meio da
comparao do seu valor mdio, com o valor verdadeiro.
A exatido afetada diretamente pelos erros sistemticos
Parmetros estatsticos:
Bias

ID ndice de desvio

Bibliografia
Guia Relacre 3 - Validao de Resultados em Laboratrios qumico

Guia Relacre 13 - Validao de Mtodos internos de ensaio em anlises qumica

ISO 5725-3:1994 Accuracy (trueness and precision)of measurement methods and results- Part 3
Intermediate measures of the precision of a standard measurement method
ISO 8466-1:1990 Water quality Calibration and evaluation of analytical methods and stimation of
performance characteristics
Part 1 Statistical evaluatin of the linear calibration funcion

ISO 8466-2:2001 Water quality Calibration and evaluation of analytical methods and stimation
of performance characteristics
Part 2 Calibration strategy for non-linear second-order calibration funcions
NCCLS, Estimation of Total Analytical Error for Clinical Laboratory Methods; Approved Guideline;
EP21-A; Vol 23; N 20, 2009