ECOTOXICOLOGICAL EFFECT OF LEAD ACETATE ON LEMNA MINOR

EFECTO ECOTOXICOLGICO DEL ACETATO DE PLOMO SOBRE LEMNA MINOR

Laura Chumbimune Ilizarbe1, Yazmn Len Casos1, Carolina Mostajo Berrospi1 &
Zuleika Ponce Mora1
1

Universidad Cientfica del Sur

ABSTRACT

Key words:

RESUMEN

Palabras claves:

INTRODUCCIN
_____________________________
Lemna spp es una especie que es muy sensible a sustancias tensoactivas,
compuestos hidrofbicos o sustancias concentradas en la interfase aire- agua

(Arroyave. M; 2004) .Adems, sirve como alimento y refugio a una gran cantidad de
especies. El acetato de plomo es una sal que se piensa, influenciar en la Lemna spp
en los parmetros de clorosis, necrosis, inhibicin de hojas y ruptura de hojas. Lemna
spp crece en ambientes acuticos entre un rango de temperatura de 5 y 30 grados
centgrados .Crece bien en partes calmadas y ricas en nutrientes y soportan un amplio
intervalo de pH.
El crecimiento de Lemna spp tambin conduce indirectamente a la eutrofizacin y
crecimiento de algas, puesto que reduce el paso de luz. La lenteja de agua en
condiciones experimentales de laboratorio es una pobre acumuladora de plomo, sin
embargo es una buena acumuladora de Cd, Cu y Se (Khellaf. N y Zerdaoui. M, 2010).
Lemna spp es una especie ideal para evaluar toxicidad del agua por su pequeo
tamao, fcil extraccin, manejo y cultivo. Lemna spp tambin es una especie clave
en su hbitat por sus amplias interacciones con otras especies.
El plomo puede causar cambios destructivos en las plantas, en particular, la inhibicin
de crecimiento de las races, que se considera que es uno de los efectos morfolgicos
ms tempranos de la toxicidad del plomo, tambin causa perturbaciones en la divisin
celular, formacin de puentes cromosmicos y micro ncleos (Dirilgen, N ; 2011 ),
estos problemas mencionados han sido bien estudiados en plantas terrestres (S.
Samardakiewicz , A. Wozny, 2005)
.Por otro lado, las altas concentraciones de plomo afectan la toma y transporte de
nutrientes tales como Ca, Fe, Mg Mn, P y Zn (Patra et al; 2004) y tambin ocasiona
distorsiones a las vas metablicas. Adems, la exposicin a largo plazo de Pb
disminuye los pigmentos fotosintticos, y disminuye las actividades enzimticas para la
asimilacin de CO2 (Parys et al., 1998).Los metales txicos como el plomo entran a
las clulas por el mismo mecanismo que entran los micronutrientes (Patra et al., 2004).
En la investigacin de Neylan Dirilgen, en el 2010, se prob que el crecimiento en
Lemna minor fue inhibido con concentraciones crecientes de Pb y tambin se ha
observado la decoloracin de las frondas en concentraciones por sobre los 8 mg/l de
Pb.
Es por ello que en esta investigacin se pretende determinar los efectos que tiene el
acetato de plomo a los parmetros de clorosis, necrosis, inhibicin de hojas, ruptura de
hojas y peso, as como los efectos en la calidad del agua en temperatura,
conductividad elctrica y pH y de esta manera corroborar las afectaciones del plomo
en ambientes acuticos, teniendo como bioindicador la Lemna spp.
MATERIALES Y MTODOS
_____________________________
Muestra
Los bioensayos ecotoxicolgicos con el acetato de plomo sobre Lemna minor se
realizaron en el mbito espacial del Laboratorio de Ecologa, Facultad de Ciencias
Ambientales, Universidad Cientfica del Sur (UCSUR), Distrito de Villa El Salvador,
Lima, Per, y en el mbito temporal fue entre abril a mayo del 2015.
Material Qumico
Acetato de plomo: CAS 6080-56-4 C4H6O4Pb.3H2O (Fig. 1). Peso molecular= 379.19
gmol-1. Punto de ebullicin = 100C. Punto de fusin = 75C. Solubilidad en agua
(20C) = 443 g.L-1. ph= 5.5-6-5. Aspecto= slido blanco.

Figura 1. Formula qumica del Acetato de plomo

Se emplea como reactivo de laboratorio, anlisis, investigacin y qumica fina (CTR,
2011).
Instrumentos y procedimientos
Se emple la Lemna minor. Los individuos se recolectaron en un recipiente de 5L de
capacidad en uno de los pantanos ubicado a los alrededores de la universidad, con las
coordenadas geogrficas -12.221859 S, -76.977246 W. Se aclimataron en el
laboratorio por cuatro das en el mismo recipiente. Para las pruebas de toxicidad se
emplearon cuatro concentraciones (0,313; 0,625; 1,25; 2,5 y 5 g.L-1) y un control
negativo a base de agua declorinada. Las concentraciones siguieron mayormente un
factor de dilucin de 0,5. La unidad de muestra para los bioensayos fueron recipientes
de plstico de 250 mL, con 200 mL de agua declorinada. La temperatura ambiental de
los ensayos fue de 20 2C. El fotoperodo fue de 11 h luz / 13 h oscuridad y calidad
de luz a base de un fluorescente, blancofro. La humedad relativa de 75-85 %. El agua
present un pH entre 4,68 -7,01; conductividad elctrica entre 0.45 -1.47mS;
temperatura de 24.2C -24.7C.
Diseo experimental y tratamiento de datos
Las pruebas de toxicidad se evaluaron en cinco concentraciones ms el control con
cuatro rplicas por concentracin conteniendo diez colonias de dos frondas por cada
unidad experimental. Al finalizar la disposicin de las colonias en cada envase se
procedi a evaluar pH, conductividad elctrica (CE) y temperatura; los datos anteriores
se calcularon con un medidor multiparmetro; se midieron las tres variables en una
repeticin por cada tratamiento y despus se lav el equipo con agua destilada en un
vaso precipitado para luego proceder con el siguiente tratamiento. Pasados 5 das se
procedi a medir estos mismos parmetros en cada repeticin y despus se lav el
equipo con agua destilada en un vaso precipitado para luego proceder con la siguiente
repeticin en cada tratamiento. Los datos de clorosis, necrosis, nmero de frondas,
formacin de hojas nuevas y ruptura de colonias de las colonias de cada repeticin; se
midieron en placas Petri con ayuda de una vareta y siendo observadas bajo el
Estereoscopio. Se procedi a medir el peso del papel y el peso hmedo de todas las
repeticiones de cada tratamiento mediante una balanza calibrada. El peso seco se
calcul colocando a la estufa todas las muestras a una temperatura de 35 grados
centgrados durante 48 horas.
Los datos empleados para el anlisis estadstico fueron porcentaje de clorosis,
necrosis, nmero de frondas, formacin de hojas nuevas y ruptura de colonias, las
transformaciones de los datos se realizaron mediante las frmulas en la Tabla 1.
El diseo fue en bloque completamente aleatorizado de 6 x 4. Se evaluaron los
parmetros de % de clorosis, % de necrosis, % de ruptura de colonias, % de frondas
nuevas y peso hmedo. La eficacia de los tratamientos y repeticiones se evaluaron a
travs de un anlisis de varianza (ANOVA). Las muestras no paramtricas se
evaluaron a travs de Kruskal Wallis y la prueba de Dunn. (p<0.05). Se emple el

paquete estadstico Minitab, versin 17,0 para Windows 7 para el clculo de los
parmetros estadsticos descriptivos e inferenciales.
RESULTADOS
_____________________________
Parmetros fsicos y qumicos del medio
Los valores de pH fueron antes y despus del experimento de 4.68-7.01 y 5.38-7.08,
respectivamente, de la misma manera la conductividad elctrica (CE) dio valores entre
0.45-0.968 mS y 0.6-1.39 mS, respectivamente. La temperatura del agua antes y
despus del experimento fue de 24.2-24.7C y 2.8-24C, respectivamente (Tabla 2).
Efectos de toxicidad
Se evalu el efecto txico del acetato de plomo en el porcentaje de clorosis, necrosis,
frondas nuevas, ruptura de colonias y humedad en Lemna minor de 5 das de
exposicin (Tabla 3). Las muestras no presentaron necrosis durante los das de
exposicin. Respecto al porcentaje de clorosis se observaron diferencias significativas
entre el control y las cinco concentraciones evaluadas. Solo se encontr diferencias
estadsticamente significativas entre el control y las concentraciones mayores a 0.625
g.L-1; siendo este el valor de LOEC y finalmente NOEC 0.3125 g.L-1.
DISCUSIN
_____________________________
Parmetros fsicos y qumicos del medio de crecimiento
Se evidenci que la temperatura no observ un cambio significativo (Tabla 2). De
manera opuesta el pH presento un ligero aumento del pH a medida que aumentaba la
concentracin de Acetato de plomo en los diversos tratamientos, a partir de esto se
infiero un efecto positivo en el aumento de pH a pesar que en condiciones normales el
plomo no reacciona con el agua (Realpe Burbano, S.L. 2010). Sin embargo el acetato
de plomo en combinacin de agua podra formar carbonato de plomo y as causar el
aumento de pH en todos los tratamientos. A pesar de esto el pH no caus distorsiones
en el resto de parmetros analizados debido a que el rango de la Lemna minor se
ubica en un pH 3.5 a 10.5, pero con mayor adaptabilidad entre pH de 4.5 a 8.3 (Khellaf
.N y Zerdaoui .M, 2010), siendo este rango mantenido durante el desarrollo del
experimento.
La conductividad elctrica refleja la capacidad del agua para conducir la corriente
elctrica, y por lo tanto refleja la cantidad de sales en el medio (Roldn, G. 2003), lo
que concuerda con un aumento de esta en tratamientos con mayor cantidad de
acetato de plomo.
Efectos de toxicidad
Los porcentajes de clorosis sobre Lemna minor mostraron una muy alta sensibilidad a
esta sustancia qumica. La literatura muestra que la acumulacin de plomo (Pb)
aumenta con el incremento de la concertacin (Saygideger, S.D., G. Keser, M. Dogan,
2013.) El efecto de clorosis en la muestra control y el tratamiento 1 (0,313 g.L -1) no
mostraron diferencias significativas; asimismo la concentracin 5 g.L -1 fue 29 veces
ms grande que el tratamiento control (p<0.05), a 2.5 g.L -1 fue 24 veces ms grande
que el tratamiento control (p<0.05) y a 1.25 g.L -1 fue 22.5 veces ms grande que el
tratamiento control (p<0.05). Lemna minor es una macrfitas flotante absorben el
metal directamente del agua (Saygideger and Dogan, 2004; Drost et al., 2007) por esta
razn la concentracin de metales en los tejidos y efecto de toxicidad (clorosis) estn

generalmente en funcin a la concentracin de metal en la medio de crecimiento. Por

otro lado, el bajo contenido de clorofila puede ser atribuido a la inhibicin de la sntesis
de clorofila por el Pb (Saygideger and Dogan, 2004; Saygideger et al., 2004). De esta
forma, se infiere que el contenido de nitrgeno decreci debido a que el nitrgeno es
un elemento estructural de la clorofila y las molculas de protena; y esta deficiencia
puede afectar la formacin de cloroplastos y la acumulacin de clorofila en Lemna
minor (Tucker, 2004).
Respecto a la humedad presentada en las muestras de Lemna minor expuestas a Pb
no mostr diferencia significativa con respecto al aumento de la concentracin.
Tericamente, tenemos que la Lemna minor posee la propiedad de captar el Pb,
provocando un aumento en su peso total (Haq Ramani y Sternberg, 1999). En nuestro
caso, el Acetato de Plomo agregado no se disolvi totalmente en el agua, por lo que
las colonias de Lemna minor no pudieron captar las partculas de Pb y por tanto, no se
acumularon en su masa folia

Tabla 1. Frmulas para el clculo de las variables evaluadas para el efecto

toxico sobre Lemna minor

Frmulas
Humedad ()=

peso hmedo peso seco

x 100
peso hmedo

Ruptura de Colonias ( )=

Hojas Nuevas ( ) =

N de frondas de 1
x 100
N total de colonias

N colonias con hojas pequeas

x 100
N total de colonias

Clorosis ( )=

N Colonias Clorticas
x 100
N total de colonias

Necrosis ( )=

N Colonias Necrticas
x 100
N total de colonias

N total de frondas=N total de 1+2+3+ 4 frondas

Tabla 2. Caractersticas fsico-qumicas del medio de cultivo de Lemna minor

H2O c/Lemna minor + Pb (Da

Tratamiento

H2O c/Lemna minor + Pb (Da

pH

0)
C.E. (mS)

C.E. (mS)

T (C)

T0

7.01

0.46

24.7

7-08

0.6

23.94

T1

5.55

0.455

24.7

6.32

0.62

23.98

T2

4.84

0.514

24.5

5.85

0.74

24

T3

4.68

0.659

24.2

5.553

0.97

24

T4

4.76

0.968

24.2

5.38

1.39

23.8

T5

4.96

1.47

24.3

5.38

2.12

23.8

T (C)

5)
pH

Tabla 3. Efecto txico del acetato de plomo sobre Lemna minor a los 5 das de
exposicin

Tratamiento

T0
T1

N
Colonias

N Total de
Frondas

Clorosis
(%)

Hojas
nuevas (%)

11
11
10
10
9

34
38
28
35
20

0
0
0
10
0

81.82
90.91
70.0
100.0
0.0

Ruptura de
Colonias
(%)
0
0
0
0
22.22

Humedad (%)
94.93
96.02
94.77
97.33
90.43

T2

T3

T4

T5

10
10
10
3
8
4
5
9
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10

21
23
20
20
20
20
19
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20

0
10
0
33.33
87.5
75
60
100
100
100
100
60
60
40
50
60
60
50
70

0.0
30.0
0.0
33.33
12.5
25.0
20.0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

10.0
0
0
466.67
50.0
300.0
180.0
22.22
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

94.06
88.86
90.12
87.11
76.06
93.12
85.31
95.81
92.13
90.30
91.55
98.50
92.59
95.42
85.00
96.87
96.29
97.00
95.97

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