UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA

FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del compromiso

Climtico

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MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

Laboratorio N01
MATERIALES DE LABORATORIO DE
MICROBIOLOGIA, LIMPIEZA,
DESINFECCION, ESTERILIZACION Y
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO.

CURSO: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

DOCENTE: Martnez, Martin
ESTUDIANTE: SALAZAR LEIVA, Vctor Eduardo
CDIGO: 20110338K
ESPECIALIDAD: INGENIERIA AMBIENTAL
11 de Abril de 2014
LIMA-PER

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INDICE:

I.

OBJETIVOS ................................................... 2

II.

FUNDAMENTO TEORICO ............... 2

III.

MATERIALES DE LABORATORIO ........................................... 4

IV.

PROCEDIMIENTO ......................... 5

V.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES .. 5

VI.

DISCUSIONES .................................................. 6

VII. CONCLUSIONES ................................ 7

VIII. RECOMENDACIONES ................... 7
IX.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS . 8

X.

ANEXO CUADRO INSTRUMENTOS DE LABORATORIO 8

XI.

ANEXO - NORMAS DE SEGURIDAD ............. 14

XII. ALGUNOS SIMBOLOS DE SEGURIDAD 15

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I.

OBJETIVOS:
Reconocimiento de los materiales de laboratorio de microbiologa.
Aprender a realizar el proceso de desinfeccin y esterilizacin de los
materiales.
Aprender y aplicar las normas de seguridad.

II.

FUNDAMENTO TEORICO:
Los microorganismos pueden ser eliminados, inhibidos o muertos por agentes
qumicos, fsicos o procesos fsicos. Actualmente se dispone de una gran
variedad de tcnicas y agentes que actan de manera diferente y cada uno
tiene su aplicacin y lmite de uso. Algunos de estos procesos son:

1. Esterilizacin:
La esterilizacin consiste en la destruccin completa de todos los
microorganismos, incluidas las formas resistentes como las esporas
bacterianas, virus sin envoltura (no lpidos) y hongos. Ello puede conseguirse
mediante esterilizacin fsica, esterilizacin gaseosa y esterilizacin qumica.
Los esterilizantes fsicos, como el calor hmedo y el calor seco son los
mtodos de esterilizacin ms usados para la mayora de los materiales, con
excepcin de los termosensibles o los que poseen componentes qumicos
txicos o voltiles.

a) Esterilizacin por Calor Hmedo (Vapor bajo Presin):

Este mtodo se emplea para esterilizar desechos biolgicos peligrosos y
objetos termoestables; con este fin se utiliza un autoclave, que
bsicamente es una gran olla de presin. El calor hmedo bajo la forma
de vapor saturado a una atmosfera de presin ( 1,05 kg/cm 2 = 15 psi
[lb/pie2]), provoca la desnaturalizacin irreversible de las enzimas y las
protenas estructurales, el tipo de esterilizador de vapor ms comn en el
laboratorio microbiolgico es el de desplazamiento por gravedad.

b) Esterilizacin por Calor Seco:

Este mtodo requiere un periodo de exposicin ms prolongado (1,5 3
horas) que el calor hmedo y temperaturas superiores (160 180 grados
centgrados), se utilizan estufas de calor seco para esterilizar elementos
como material de vidrio, aceite, vaselina o polvos.
El esterilizante gaseoso utilizado ms a menudo es el xido de etileno,
aunque es muy eficiente, se trata de una sustancia inflamable, explosiva y
cancergena y existen unas estrictas regulaciones que restringen su
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utilizacin. Los vapores de perxido de hidrgeno tambin constituyen

unos esterilizantes eficaces como consecuencia de la naturaleza oxidante del
gas. El perxido de hidrgeno se utiliza para la esterilizacin de
instrumentos.
Tambin existen esterilizantes qumicos como el cido paraactico y el
glutaraldehido. El cido paraactico es un agente oxidante con actividad
excelente y origina productos secundarios no txicos (p. ej., cido actico y
oxgeno).Por el contrario, la utilizacin de
glutaraldehdo supone diversos problemas de seguridad, por lo que se deben
tomar siempre precauciones al manipular este compuesto qumico.

2. Desinfeccin:
Los
microorganismos
tambin
pueden
ser
destruidos
mediante
procedimientos de desinfeccin, aunque los ms resistentes pueden
sobrevivir. Existe un cierto grado de confusin entre esterilizacin y
desinfeccin. Ello se debe a que los procesos de desinfeccin se han dividido
en varios grados (alto, intermedio y bajo). La desinfeccin de alto grado por
regla general posee una eficacia semejante a la de la esterilizacin, mientras
que las esporas pueden sobrevivir tras una desinfeccin de grado
intermedio; asimismo, numerosos microorganismos pueden seguir siendo
viables despus de una desinfeccin de bajo grado.
Los desinfectantes de alto grado se utilizan para objetos empleados en
procedimientos invasivos que no pueden soportar los mtodos de
esterilizacin (p. ej., ciertos tipos de endoscopios, los instrumentos
quirrgicos de plstico u otros componentes que no se pueden someter a la
accin del autoclave).
Los desinfectantes de grado medio (p. ej., alcoholes, compuestos yodados,
compuestos fenlicos) se utilizan para la limpieza de superficies o
instrumentos en los que es poco probable la contaminacin por esporas
bacterianas o microorganismos con un alto grado de resistencia.
Los desinfectantes de grado bajo (p. ej., compuestos de amonio cuaternario)
se utilizan para tratar instrumentos y dispositivos que no revisten una gran
importancia.

III.

MATERIALES DE LABORATORIO:
- Mechero Bunsen

-Gradillas

- Pinzas para tubo de ensayo

3

-Placas de Petri

-Pinzas para crisol -Asas de siembra

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-Bagueta

-Termmetro

-Malla de asbesto

-Escobillas

-Probeta

-Portaobjetos

-Cubre objetos

-Crisol

-Fiola
-Matraz Erlenmeyer
-Gotero

-Tubos de ensayo
-Vaso de precipitado
- Esptula

-Mortero
-Encendedor

-Pipetas de vidrio y plstico

-Cubreobjetos

-Aceite de inversin

-Asa de kolle
-Mechero de alcohol

-Microscopio ptico -Contador de colonias

-Pizeta

IV.

-Balanzas

-Asas de Digralsky
-Vasos de precipitados
-Matraces
-Plancha de calentamiento
-Estufa de incubacin
-Horno de Pasteur
-Autoclave
-Frigorfico
-Pera de succin

-Buretas

PROCEDIMIENTO:
El proceso que debemos seguir es el siguiente (a pesar que no lo hicimos):

Lavar los materiales de vidrio (tubo de ensayo, matraz, vaso, etc.).

Escurrir y enjuagar con agua destilada.
Volver a dejar escurrir el material sobre una toalla (no por otro medio)
Envolver los materiales con papel craf, luego atar con un pabilo un
conjunto de tubos de ensayo, el matraz , vaso y etc. y colocarlas dentro
del recipiente metlico con tapa.
Y colocarlos en el horno a 180C por 2 horas aproximadamente.

V.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
Debido a que en este laboratorio solo hemos obtenido informacin
oralmente, tengo 1 observacin:
Se logr comprender el uso adecuado de cada material de laboratorio
para obtener buenos resultados en las siguientes prcticas.
Pude notar que al desinfectar y esterilizar los materiales nos da una
mayor certeza de que al preparar un medio de cultivo, este no est
contaminado.

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Tener conocimiento de las normas de seguridad para evitar accidentes

al momento de realizar cada practica de laboratorio y asi evitar
cualquier tipo de accidente.
Tambin tener conocimiento de los diferentes smbolos de peligro en
qumico en un laboratorio.

VI.

DISCUSION DE RESULTADOS:
Las tcnicas de esterilizacin y desinfeccin son muy utilizados al
momento de realizar trabajos de laboratorio, pero estas tcnicas tienen
distintos mtodos los cuales cada uno es ms eficiente que otro, pero
hay que tener en consideracin que para cada objetivo especfico,
existe un mtodo de esterilizacin o desinfeccin especifico, en nuestro
caso se utiliz la esterilizacin con un mtodo fsico de vapor a presin,
ya que el calor mata a los microorganismos porque coagula sus
protenas cuando se encuentran en una zona atmsfera hmeda, y en
el caso del mtodo de desinfeccin usado fue el de alto grado debido a
que se desinfectaron tambin unos instrumentos de plstico (probeta),
el cual se estropeara por esterilizacin.
Se observ sobre la mesa todos los materiales de laboratorio que
usaremos en todas las prcticas y se habl del uso de cada uno , pero
no se hablaron de sus restricciones o peligros.
Si los materiales no se desinfectan o esterilizan bien, nuestros
resultados analticos presentarn un error.
Obviamente si no tenemos en cuenta las normas de seguridad, podran
ocurrir accidentes.
Si al momento de autoclavar o desinfectar, no empleamos el tiempo
mnimo de esterilizacin los microorganismos podran quedar vivos.
Y si empleamos ms del tiempo mximo, el cultivo morira.

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VII. CONCLUSIONES:
Aprend a reconocer los materiales y saber los nombres de los
materiales de laboratorio as como su respectivo uso.
Aprend a usar los mtodos de desinfeccin y esterilizacin, en este
caso fue el mtodo de desinfeccin por gas hmedo.
Gracias a este primer laboratorio, se tom en cuenta ciertas normas de
seguridad con el fin de evitar cualquier accidente dentro del laboratorio.
Aprendimos a reconocer algunos smbolos de peligro qumico para tener
un conocimiento mnimo de la peligrosidad de cada compuesto que
utilicemos.
Llegamos a entender los equipos e instrumentos de laboratorio para
desarrollar las prcticas en un laboratorio de microbiologa
con
responsabilidad como Ingenieros Ambientales que seremos.

VIII. RECOMENDACIONES:
Tener siempre en cuenta las normas de seguridad en el laboratorio.
Tratar de colocar las baguetas despus de desinfectar en un contenedor y
no sobre la mesa ya que se contaminaran de nuevo.
Abrir las placas de Petri de manera adecuada.
Cuando se coloquen los materiales al horno, hacerlo con mucho cuidado y
con sus respectivos guantes para no quemarse.
Saber los movimientos de diseminacin de la esptula.

IX.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
6

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Murray, Patrick R.; Rosenthal, Ken s. ; Pfaller, Michael A. MICROBIOLOGA

MDICA. Sexta edicin. Elsevier, Espaa, 2009. Pginas 89-94.
Mara de los Angeles Aquiahuatl Ramos; Mara de Lurdes Prez. MANUAL
DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL. Editorial
Universidad Autnoma Metropolitana. Pginas 13-16.
Alonso Urmeneta y otros: MANUAL DE PRACICAS DE MICROBIOLOGIA.
Segunda edicin. Editorial Masson. Pginas 1 y 2.
X.

Grfico

ANEXO CUADRO INSTRUMENTOS DE LABORATORIO.

Nombre

Balanza Analtica

Autoclave

Cintas de pH

Incubadora

Descripcin
Es un aparato que tiene
una gran sensibilidad,
algunas tienen hasta 1
diezmilsima
de
sensibilidad.

Es un equipo que se utiliza

para la esterilizacin de
material, tanto de limpio
como contaminado, que se
basa en la produccin de
vapor contenido a altas
presiones.

Es una cinta que permite

medir el pH de las
sustancias
cualitativamente
por
medio de una escala de
colores.
Se Usa para mantener
a una temperatura
constante los cultivos
microbiolgicos,
y
asegurar
el
crecimiento
de
los
microorganismos.

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Horno

Frigorfico

Contador de
Colonias

Plancha de
calentamiento

Bao Mara

Gradilla.

Pinzas para crisol

Se usa para secar el

material de vidrio usado
en el laboratorio, y
guardar
el
material
esterilizado.
Se usa para almacenar
material limpio y
conservar los
microorganismos.
Tambin se emplea para
conservar reactivos que
requieren bajas
temperaturas.
Se utiliza para aumentar la
vista de las colonias en la
placa de Petri, con el fin
de
facilitar
la
identificacin
microscpica y el conteo.
Es un aparato que permite
calentar sustancias.

Es un aparato que se
utiliza
para
des
gelificar los medios de
cultivo y mantenerlos
a una temperatura
constante.

Utensilio que sirve para

colocar tubos de ensayo.
Este utensilio facilita el
manejo de los tubos de
ensayo.

Permiten sujetar crisoles

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Pinzas para tubo de

ensayo.

Permiten sujetar tubos de

ensayo

Bagueta

Estn hechos de varilla de

vidrio y se utilizan para
agitar o mover sustancias..

Asa de siembras

Se usan para inocular

muestras o bacterias puras
en los medios de cultivo.

Pera de succin

Se usa
lquidos
pipetas.

Pipetas Pasteur

Se usan para tomar

pequeos volmenes de
sustancias.

Portaobjetos

Se usan para depositar en

ellos las muestras a
observar al microscopio.

Cubreobjetos

Se usan para cubrir las

muestras que estn sobre
el portaobjetos.

Placas de Petri

Se usan para contener los

medios de cultivo donde
posteriormente se realiza
la siembra.

para absorber
a travs de

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Crisol

Esptula

Mechero bunsen

Mortero de
porcelana.

Permite
calentamiento
sustancias
a
temperaturas.

realizar
de
altas

Permite tomar sustancias

qumicas y medios de
cultivo.

Son utensilios metlicos

que permiten calentar
sustancias.
Se utilizan para triturar
materiales de poca dureza
y los de gata para
materiales que tienen
mayor dureza.

Termmetro

Es un utensilio que
permite
medir
la
temperatura que tienen
algunas sustancias .

Malla de asbesto

Son usadas cuando no se

requiere calentamiento a
fuego directo, el asbesto
es buen aislante del calor.

Escobillas

Para el lavado del material

de vidrio.

Fiola

10

Son de vidrio que

permiten
realizar
soluciones valoradas, los
hay de diversas medidas .

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Pipetas.

Este material existe en dos

presentaciones:
Pipetas aforadas.
Pipetas volumtricas.
Las primeras permiten
medir diversos volmenes
segn la capacidad de
esta, las segundas no estn
graduadas y slo permiten
medir un volumen nico.

Probeta.

Este material permite

medir volmenes,
las hay de vidrio y de
plstico y de diferentes
capacidades.

Frasco gotero.

Vasos de precipitado

Matraces

Pizeta

Tubos de ensayo

11

Permite
contener
sustancias
que
se
necesitan
agregar
en
pequeas cantidades.

Permite
calentar
y
contener sustancias
Son recipientes de vidrio,
esfricos,
de
fondo
redondo, provistos de un
cuello,
sirven
para
calentar lquidos. Hay
balones con cuello ms
largo y soldado a l un
tubo estrecho inclinado
ligeramente hacia abajo
(balones de destilacin).
Es un recipiente que se
utiliza para contener agua
destilada, este utensilio
facilita la limpieza de
electrodos.
Estos utensilios sirven
para hacer experimentos o
ensayos los hay en varias
medidas y pueden ser de
vidrio o de plstico.

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Trpode

Microscopio
compuesto

Asas de Digralsky

XI.

Aparato de 3 patas que

sirve para estabilizar un
objeto.

Sirve
para
especialmente
translucidos.

ver
objetos

Se utilizan para la
extensin
de
microorganismos sobre la
superficie de un medio de
cultivo en placa Petri.

ANEXO - NORMAS DE SEGURIDAD:

El uso de la bata de laboratorio es indispensable para asistir a la prctica.
No se debe comer, fumar, ni beber en el laboratorio.
Mantenga la mesa libre de todo lo que no sea esencial.
Limpiar y desinfectar la superficie de mesones antes y despus del trabajo del da.
Lave sus manos con agua y jabn carbnico antes y despus de cada prctica. Luego
asegure de frotarse las manos con alcohol.
Llevar registro de sus anlisis indicando: Tipo de muestra, procedencia, fecha, tipo de
siembra o mtodo, cultivos empleados y resultados obtenidos.
No pipetear con la boca.
El material a examinar debe tocarse exclusivamente con instrumentos estriles.
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Flamear el asa antes y despus de usarla.

uso adecuado y cuidadosamente de los mecheros Bunsen.

Descarte todo el material usado en recipientes destinados para tal fin por ningn motivo
en los desages o lavatorios.
Tenga cuidado con las preparaciones teidas ya que puede salpicar colorantes a
mesones y pisos.
Tener en consideracin la ficha de seguridad de cada insumo qumico a usar.
Al final de la prctica dejar el lugar limpio y ordenado.

XII. ALGUNOS SIMBOLOS DE PELIGRO:

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