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CENTRO EDUCACIONAL DA FUNDAO SALVADOR ARENA

FACULDADE DE TECNOLOGIA TERMOMECNICA

ANTONIO DOMENICO ALVES MONTEIRO n 25

BRUNO PAGANI n 32
TALITHA MELO DOS SANTOS n 26
VTOR TORRES FREIRE n 01

Radiao na forma de luz - Luminol:

Exemplo de quimiluminescncia aplicadas Cincia Forense.

Fsica Aplicada
Prof Thais Cortellini Abraho
ESA 1

So Bernardo do Campo
2012

SUMRIO

1 INTRODUO

2 REVISO DA LITERATURA
2.1 SANGUE

2.2 LUZ, ONDAS E FTONS

2.3 EXCITAO QUMICA

2.4 QUIMILUMINESCNCIA

3 LUMINOL
3.1 MECANISMO DE REAO

3.2 SENSIBILIDADE E LIMITAES

3.3 REALIDADE versus FICO

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4 CONCLUSO

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5 REFERNCIAS

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1 INTRODUO
O luminol um p de frmula qumica C8H7O2N3 descoberto em 1928. Sua aplicao
mais famosa na resoluo de crimes, como apresentado em seriados famosos como CSI
(Crime Scene Investigation). Nessas sries ele utilizado com frequncia na identificao
de sangue em cenas de crimes, mesmo que os locais, peas ou roupas tivessem sido
lavados posteriormente ao crime. Na televiso tudo parece muito simples e exato: os
criminalistas aspergem a soluo de luminol num local, s vezes aleatrio e esperam um
pouco, se houver a presena desses fluidos mesmo que antigos e apagados as
manchas tornam-se azuis, brilhantes e luminosas, facilitando a identificao exata da cena
do crime, na extrao de DNA e como prova conclusiva da culpa de algum suspeito.
Na realidade, todo o mecanismo bem mais complexo: A soluo de luminol
utilizada na vida real contm tambm uma base forte, como NaOH e gua oxigenada (H 2O2).
Essas 3 substncias juntas reagem, formando o nion de um composto chamado 3aminoftalato que emite luz naturalmente, no entanto a reao s forte o suficiente se for
catalisada por um metal, no caso, os tomos de ferro encontrados nas protenas do sangue,
da a identificao de manchas de sangue.
A luz emitida porque o 3-aminoftalato produzido inicialmente num estado
excitado, ou seja, por algum motivo estrutural seus eltrons armazenam energia alm do
natural. A tendncia o composto eliminar a energia sobressalente movimentando seus
eltrons para camadas mais internas, ocorre que a cada mudana de orbital um fton (uma
partcula de energia) liberado at que o composto se estabilize. Cada fton de cada
eltron excitado de cada molcula de 3-aminoftalato, em conjunto, formam uma onda com
um comprimento aproximado de 430 nm que aos nossos olhos de um brilho azulado.

2 REVISO DA LITERATURA
2.1 SANGUE
O sangue um tecido vivo e no corpo de um adulto circulam em mdia 5 litros
de sangue, variando de acordo com o peso. O sangue formado por parte lquida
(plasma), constituda por gua, sais, vitaminas, e fatores de coagulao, na qual
esto misturadas as partes slidas: hemcias, leuccitos e plaquetas.

A hemoglobina um dos mais importantes constituintes do sangue, sendo

uma protena globular, tendo como funo transportar oxignio das hemcias. Sua
constituio possui cerca de 150 aminocidos, alm disso, entre eles h um
heterociclo nitrogenado, chamado heme que possui o on Fe2+. So estes tomos de
ferro que catalisam de forma essencial a reao do luminol com o sangue.

Representao esquemtica da hemoglobina, importante protena do sangue que contm em seu

interior tomos de Fe no grupamento heme, mostrado em destaque. (Fonte: CHEMELLO, 2007).

2.2 LUZ, ONDAS E FTONS

Cientistas como Newton, Maxwell, Rutherford, Planck, Bohr e Einstein h muito
tentaram compreender os mecanismos das cores e das luzes a partir tanto de experimentos
quanto de clculos e teorias. Bohr, por exemplo, em 1913 unificou e aprimorou as ideias de
Planck e Rutherford, formulando os seus postulados:
- Nos tomos os eltrons orbitam em um nmero especfico de camadas ao redor do ncleo.
- Nessas camadas, chamadas rbitas estacionrias, eles no absorvem ou emitem energia.
- No entanto, o eltron ao receber ou emitir uma quantidade especfica de energia,
representada pelo fton, um "pacote" sem massa com uma quantidade definida de energia,
consegue "saltar" entre as camadas.
O fenmeno se d quando ao receber energia (seja ela trmica, eltrica ou luminosa)
o eltron salta de uma rbita mais interna para uma mais externa, com a tendncia de
retornar camada original, devolvendo a mesma quantidade de energia (ftons). Embora
esses ftons sejam tradicionalmente associados a luz, alm dela tambm podem se formar
radiao ultravioleta ou raios X, por exemplo, que nada mais so do que ondas
eletromagnticas. Essas ondas so formadas pela sucesso de ftons provenientes dos
milhes de saltos repetidos por segundo. Portanto, como o fton uma partcula fsica, mas

possui comportamento ondulatrio, isso confere luz o seu comportamento dual: ondapartcula (energia e matria).

(Fonte: FELTRE, 2004).

Verifica-se tambm que cada pacote especfico de energia garante uma "passagem"
especfica entre as camadas, assim, se da camada 1 o eltron vai para a camada 4 a
energia recebida diferente da quantidade que ele precisaria para ir para a camada 2 ou 3,
e assim sucessivamente. Como a energia do retorno igual forma-se uma sucesso de
ftons, ou seja, uma onda tambm especfica (na verdade, uma onda com um comprimento
de onda especfico).

(Fonte: FELTRE, 2004).

Como qualquer onda, a luz emitida possui caractersticas como frequncia,

velocidade e comprimento, so essas as caractersticas que so enviadas aos nossos olhos,
captadas pelas clulas, transmitidas por impulsos eltricos e interpretadas no crebro (o que
por si s j outro processo fotoqumico). A luz emitida pelo luminol, por exemplo, possui
um comprimento de onda entre 430 e 455 nm, o que, no espectro contnuo, a situa na luz

visvel, entre o roxo e o verde, e por isso a enxergamos com uma cor azulada (FELTRE,
2004).

2.3 EXCITAO QUMICA

Sabe-se que cada tomo possui uma eletrosfera com orbitais que s armazenam
dois eltrons dentro de si, devendo eles possuir spins (sentidos de rotao) opostos para
que obtenham maior estabilidade. Quando, por algum motivo, como simetria e proximidade
com outros eltrons, os spins de alguns dos muitos eltrons de um tomo possuem o
mesmo sentido de rotao num mesmo orbital, diz-se que os eltrons esto em um "estado
excitado". A tendncia de qualquer eltron sair do estado excitado e retornar ao estado
fundamental, que se d justamente com o intercmbio dos estados singleto e tripleto (spins
emparelhados ou spins paralelos). A mudana de um estado para o outro leva a eliminao
de um quanta de energia, ou seja, um fton (ATKINS & JONES, 2012).
Logo, a luz emitida pelo luminol vm de um processo ligeiramente diferente da
formao de ftons mais comuns, mas segue os mesmos princpios.
A parte da fsica que estuda esses estados a mecnica quntica avanada, e por
isso, costuma-se representar a emisso de luz em uma reao simplesmente por h j
que a energia (E) de uma onda pode ser expressa por:

E = h
Onde h um constante chamada constante de Planck e o seu comprimento de
onda. J os estados excitados so comumente representados por colchetes e um asterisco.

2.4 QUIMILUMINESCNCIA
Por uma comparao simples, podemos dizer que a quimiluminescncia o
resultado oposto a de uma reao fotoqumica: Enquanto nesta a energia de ativao dos
reagentes fornecida pela luz, na reao quimiluminescente ocorre o contrrio, pois o
resultado da reao, junto com os produtos, inclui radiao luminosa, ou seja, luz. O motivo
pelo qual se formam compostos que liberam energia na forma de luz pode ser explicada
desse modo:
Em uma reao quimiluminescente, ocorre uma reao qumica, que
leva produo de uma substncia no estado eletrnico excitado, que,
pelo decaimento para o estado eletrnico fundamental, emite luz.
Analisando simplificadamente, este processo ocorre porque o produto
inicial da reao qumica produzido, preferencialmente, no estado
eletrnico excitado, devido semelhana energtica e geomtrica
entre os nveis eletrnicos do reagente e do produto excitado.
(STEVANI & BAADER, 1999).
Logo, pode-se dizer que por semelhana estrutural e eletrnica com os reagentes,
alguns compostos formados aps certas reaes armazenam energia em excesso,

tornando-se instveis. Para se estabilizar, estes compostos tendem a liberar a energia

sobressalente sob a forma de ftons, que como visto anteriormente, formam uma onda
eletromagntica interpretada como luz.

3 LUMINOL
3.1 MECANISMO DE REAO
Nem todas as etapas da reao de luminescncia do luminol esto totalmente
elucidadas at hoje, principalmente no que se refere aos compostos intermedirios, pois
dependem do modo como a reao efetuada e dos diversos reagentes que podem ser
utilizados um no lugar do outro. O modelo mecanstico mais usual sugere que a reao se
d quando o luminol interage com o perxido de hidrognio (H 2O2) na presena de uma
base forte. Ambos perxido e base j se encontram na soluo comercialmente utilizada,
mas a reao s ocorre da forma esperada quando catalisada por outras substncias
especficas, no caso das cincias forenses, o principal reativo o grupo heme do sangue
que contm ferro (ALBERTIN, 1998).
importante lembrar que a reao bem sensvel, ou seja, so necessrias
mnimas quantidades de sangue para que ocorra e que vrios catalisadores podem atuar
alm do sangue (como o Cu 2+, Co2+ ou Fe3+), gerando um resultado falso-positivo para este
fluido. O conjunto, em ambiente escuro o suficiente para ser detectado luminesce azul; o
que se retrata na reao a seguir:
NH2

NH2

O
N
N

(1)

NH2

H2O2

N
O

NH2

NH

NH2

OH-

NH

NH2

(3)

+ N2

O
-

-h

emisso
de fton
O

O
Estado tripleto

(2)

(4)

Estado singleto

Ocorre que em soluo alcalina (1) o luminol tem a tendncia a se equilibrar com
seus nions tautmeros (2), nas formas cetol (quando as cargas se encontram nos tomos
de nitrognio) e enol (quando as cargas esto nos tomos de oxignio).
A forma enol reage facilmente com oxignio molecular (O 2) que surge pela
decomposio natural do H2O2 j presente no meio (3), decomposio esta que catalisada
pelo ferro do sangue. Desta reao surge o nion 3-aminoftalato, um perxido cclico (ou
endoperxido) muito instvel, j que possui muita energia, sendo que ao se degradar libera
uma molcula de N2 e um fton de luz (4), na tentativa de se estabilizar. Essa forma menos

energtica do 3-aminoftalato justamente menos energtica porque grande parte da

energia saiu na forma de radiao luminosa, ou seja, de luz.
Tambm podem substituir o H2O2, nions como o hipoclorito (ClO-1), o permanganato
(MnO4-1) ou o dicromato (Cr2O7-2) por exemplo, que atuam como agentes oxidantes,
atacando o luminol da mesma forma. importante lembrar, que como grande parte das
reaes quimiluminescentes, a reao de oxidao do luminol rpida, mas o tempo de
emisso da radiao luminosa bastante curto.
Outro modo, relativamente mais simples, de como a reao pode ocorrer descrito
pela seguinte reao:

(1)

(2)

(3)

(4)

(5)
(Fonte: Adaptado de FERREIRA & ROSSI, 2002).

Em meio aquoso (1), um metal de transio age como catalisador, convertendo o

luminol a uma diazoquinona (2). Esta diazoquinona reage com o perxido de hidrognio
hidrolisado, ou seja, com seu nion HO 21-, formando um endoperxido reativo e instvel (3),
que para se estabilizar se quebra em uma molcula de N 2 e em um nion excitado de 3aminoftalato (4). A ocorrncia de luz se d quando o eltron excitado do 3-aminoftalato
retorna ao seu estado natural, emitindo luz (5).
A diferena entre os dois compostos (estado energizado e estado fundamental) pode
ser expressa pelo diagrama a seguir, onde a diferena entre um e outro justamente a
energia emitida na forma de luz:

(Fonte: Adaptado de FERREIRA & ROSSI, 2002).

3.2 SENSIBILIDADE E LIMITAES

O luminol capaz de indicar a presena de sangue mesmo em concentraes
extremamente pequenas. Existem estudos que apontam a deteco de sangue em
superfcies submetidas a at dez lavagens, demonstrando o alto grau de sensibilidade do
teste, descrito na literatura como 1:5.000.000 em tecidos de algodo e 1:100.000 em
superfcies no absorventes.
Uma das limitaes que o reagente deve ser preparado no momento da utilizao
e mantido sob refrigerao para preservar suas propriedades e a confiabilidade do teste,
acarretando dificuldade no transporte e aumentando o seu custo.
O luminol pode induzir a resultados falso-positivos com ons metlicos como ferro,
cromo ou cobalto, que catalisam a reao e desencadeiam a emisso de luz, alm de certas
enzimas encontradas naturalmente nos vegetais. O hipoclorito presente na maior parte dos
alvejantes domsticos tambm pode levar produo de resultados positivos ilusrios.
Contudo, pesquisas demonstraram que a luminescncia gerada pelo hipoclorito no possui
o mesmo comprimento de onda (430 3 nm) daquela gerada pelo sangue (455 2 nm),
alm do tempo de durao da emisso de luz e sua forma de extino que no so
compatveis, porque a luminescncia produzida pelo sangue decresce com o passar do
tempo, enquanto a advinda do hipoclorito dissipa-se da superfcie em que se encontra.
necessria muita ateno e experincia ao cientista forense para diferenciar essas
emisses, que se tornam ainda mais semelhantes em fotografias. Existem estudos e
tcnicas para eliminar essas interferncias. Os alvejantes contm estabilizantes volteis que
evaporam, e a luz emitida pelo hipoclorito no interfere aps 8 h da sua aplicao e tambm
por meio da adio de aminas primrias e secundrias ao preparar o reagente, pois elas
inibem a quimiluminescncia causada pelo hipoclorito, porque as aminas reagem com o
hipoclorito, no deixando que o hipoclorito reaja com o luminol. Deve-se ter ateno, pois
aminas tercirias causam o efeito inverso: aumentam a produo da luminescncia.

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A exposio do resduo hemtico a fatores ambientais pode influenciar os resultados

dos testes. Vestgios enterrados, submersos em gua, ou com o decorrer do tempo, podem
fazer com que esses testes j no apresentem a eficcia inicialmente esperada, porm sua
efetividade ainda alta, tornando-o o reagente indicado para testar amostras envelhecidas
ou em mau estado de conservao.
Estudos apontam sua capacidade de detectar traos de sangue depositado no solo
aps seis anos de exposio ao ar livre. O experimento foi iniciado no ano de 2004, foi
marcado um X com sangue no cho, deixado sob as condies locais e testado com luminol
a cada dois meses para verificar o tempo de permanncia de vestgios; e finalizado em 2010
quando ainda era possvel perceber traos hemticos no local com a aplicao do reagente.

3.3 REALIDADE versus FICO

A aplicao da quimiluminescncia na criminalstica vem ganhando popularidade,
com a divulgao da mdia, no jornalismo informativo e seriados policiais televisivos de
grande sucesso, que destacam a utilizao do reagente luminol para a comprovao da
presena de sangue no local do crime, nas supostas armas utilizadas para comet-los,
roupas de pessoas suspeitas, entre diversos outros itens relacionados ao fato delitivo,
mesmo depois de limpos e lavados.
Manchas de sangue so de extrema importncia em uma investigao criminal:
pode-se averiguar se o volume de sangue encontrado compatvel com o ferimento e at
verificar a presena ou dosagem de drogas. Para que isso seja possvel, necessrio
certificar-se de que tais manchas encontradas tratam-se realmente de sangue atravs de
testes, so os chamados testes de presuno. Para que tais testes sejam considerados
bons, devem englobar propriedades como rapidez, segurana, sensibilidade e
especificidade, alm de no reagir com a amostra e terminar por contamin-la, interferindo
em posteriores anlises, como a de DNA.
Uma das maiores preocupaes que o material estudado danifique sua estrutura e
prejudique anlises laboratoriais, como a extrao de DNA, que de extrema importncia
para a atividade pericial. Alguns estudos foram realizados utilizando vrios tipos de
reagentes utilizados em testes presuntivos, com a inteno de verificar uma possvel
interferncia do luminol em posteriores extraes e amplificaes de DNA. O experimento
foi conduzido com tecidos brancos de algodo manchados de sangue seco a temperatura
ambiente. Os tecidos foram lavados com detergente padro em lavadora, a 30 C e secos ao
ar livre. Uma das amostras foi testada com luminol e outra foi armazenada para realizar as
amplificaes de DNA por PCR. O tecido testado com luminol foi lavado, seco e testado com
o reagente novamente at que se obtivesse um resultado negativo para a luminescncia, o
que s ocorreu aps a dcima primeira lavagem. Aps cada lavagem foi realizada a
extrao de DNA, cuja resposta foi ainda positiva at a terceira lavagem. Essa pesquisa
indicou que no existem diferenas entre os resultados de amplificao das amostras sem o
tratamento prvio com o luminol e aquelas que foram testadas com o reagente, o que
comprova que o luminol no interfere na anlise de DNA por PCR.

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4 CONCLUSO
A partir dos anos 90 houve grande interesse por parte da mdia em promover sries,
programas e filmes voltados polcia criminal (como CSI, Cold Case, Law & Order entre
outros) assim como suas caractersticas, a realidade do seu dia-a-dia, seus mtodos
periciais e o uso das cincias forenses, atraindo com sucesso a ateno de grande pblico
no mundo todo. Muitos profissionais, principalmente educadores, j perceberam como esse
chamariz pode ser til na aprendizagem de vrias reas da cincia para pblicos de
diversas idades, desde o ensino mdio at a graduao.
Dentro da vasta qumica forense, o luminol especificamente pode ser utilizado como
forma de estmulo ao ensino desde noes bsicas sobre a radiao na forma de luz,
excitao qumica, comportamento dos eltrons, ondulatria e catlise de reaes at uma
pequena introduo fsica quntica, o estudo sobre a energia e os ftons ou mesmo sobre
uma avaliao crtica dos mtodos cientficos, ou seja, at onde se pode presumir algo com
um determinado teste, suas consequncias e implicaes.
Fora do mbito educacional vale ressaltar que o luminol e o estudo da
quimiluminescncia em geral so teis no s na resoluo de crimes, mas vm
encontrando utilidade em muitas outras reas importantes, como a qumica analtica, por
exemplo.
Com o trabalho pudemos verificar a eficincia do luminol na investigao criminal e o
seu mecanismo de ao. Atravs de diversas pesquisas constatamos que ele consegue
detectar concentraes extremamente pequenas de sangue em diversas superfcies,
mesmo depois de diversas lavagens e aps anos expostos a fatores ambientais.
Foi questionada a sua eficincia, pois ele possua algumas limitaes, como por
exemplo, reagir com o hipoclorito encontrado nos alvejantes domsticos, com o ferro e
outros minerais de algumas superfcies metlicas e algumas enzimas naturais dos vegetais,
emitindo luz aps a reao como o luminol. Porm, observamos algumas pesquisas, onde
ficou claro que essas limitaes no atrapalham o andamento da investigao, uma vez que
o comprimento de onda da luz gerada diferente da do sangue, e tambm tcnicas que
foram elaboradas e eliminam essas interferncias, tornando o luminol muito eficiente.

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5 REFERNCIAS
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