Ao de la promocin de la industria responsable y compromiso

climtico

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
PARCTICA N4
TEMA:
SIEMBRA,
MICROORGANISMOS

AISLAMIENTO

CURSO:
Microbiologa
PROFESOR:
Blog. Jorge Bermejo Benites
ALUMNO:
Ojeda Jurez, Renzo Randy
FECHA:
28 de mayo

CUANTIFICACION

DE

2014
INTRODUCCION
En los hbitat naturales, los microorganismos crecen en
poblaciones mixtas y complejas, que contienes varias especies. Esto
representa un problema para el microbilogo porque no se puede
estudiar adecuadamente un nico tipo de microorganismo en un medio
mixto. Se necesita un cultivo puro, poblacin de clulas que procede de
una nica clula, para caracterizar una especie individual. Los cultivos
puros son tan importantes, que el desarrollo de las tcnicas de cultivos
puros por el bacterilogo alemn Robert Koch transform la
microbiologa. En casi 20 aos, se aisl la mayora de los agentes
patgenos responsables de las principales enfermedades infecciosas
humanas (Prescott, Harley, Klein, 2004).
Cualquier ser vivo necesita tomar del ambiente una serie de
compuestos que se emplean como fuente de energa, y para sintetizar
los constituyentes celulares. Estos compuestos son los nutrientes. Los
nutrientes deben contener agua, C, N, S, P, Ca, K, Na, Mg, Mo, Cu y Zn.
Los factores de crecimiento son componentes que los
microorganismos utilizan como precursores o constituyentes de su
materia celular, y que pueden sintetizar a partir de formas de carbono
ms sencillas. Estos son esenciales y deben ser aadidos como
nutrientes en funcin del microorganismo que cultivemos: Aminocidos,
Bases pricas y pirimidnicas y Vitaminas, que actan como coenzimas
de distintos complejos enzimticos. Ej. B2 (riboflavina) es esencial para
la sntesis de FAD.
La necesidad de un factor de crecimiento se denomina auxotrofa,
y la prototrofa implica que un microorganismo no requiere ningn factor
de crecimiento para desarrollarse.
La siembra en profundidad que se emplea frecuentemente con
bacterias y hongos, puede tambin generar colonias aisladas. La
muestra original se diluye varias veces para reducir la poblacin
microbiana lo suficiente con el fin de obtener colonias separadas cuando
se siembren. (Prescott, Harley, Klein, 2004).
Las colonias aisladas se pueden obtener tambin mediante siembra
en estras. Las clulas individuales se irn desprendiendo del asa al
frotarla sobre la superficie y desarrollarn colonias aisladas. Las colonias

que crecen sobre la superficie se pueden utilizar tambin para inocular

un medio fresco y preparar cultivos puros. (Prescott, Harley, Klein,
2004).
El crecimiento de una poblacin bacteriana puede ser entendido
desde diferentes perspectivas y de acuerdo a stas se puede llegar a
determinar la medida del crecimiento mediante diversas metodologas.
Para algunos, el crecimiento es la capacidad para multiplicarse que
tienen las clulas individuales, esto es iniciar y completar una divisin
celular. De esta forma, se considera a los microorganismos como
partculas discretas y el crecimiento es entendido como un aumento en
el nmero total de partculas bacterianas. Existen dos formas para
determinar el nmero total de microorganismos en una muestra:
Recuento microscpico de partculas y Recuento electrnico de
partculas
MATERIALES Y METODOS
1 SIEMBRA
a Caldo nutritivo
Para hacer este procedimiento, lo primero que se realizo fue
esterilizar una asa de siembra con la que se sacara la muestra
de S.S.F, la asa se esterilizo en el fuego comenzando desde la
parte de en medio hasta la punta, adems el tubo de ensayo
que contena la muestra de S.S.F. tambin se esterilizo, se sac
el algodn que tapaba la boca del tubo, y la boca del tubo de
ensayo se llev al fuego para su esterilizacin, luego de ello
introducimos el asa de siembra ya esterilizada en el tubo de
ensayo que contena la muestra, se saca una pequea muestra
en la punta del asa de siembra, luego la boca del tubo de
ensayo se lleva al fuego para eliminar los posibles
microorganismos que quedaron all, tapamos el tubo de ensayo
con la muestra, dejamos el tubo con la muestra. Despus se
con el tubo de ensayo que contiene el caldo nutritivo, se hace
el mismo procedimiento de esterilizacin que el tubo anterior,
se coloca la asa de siembra que contiene la muestra dentro del
tubo con caldo nutritivo y se saca el asa de siembra, se lleva la
boca del tubo de ensayo al fuego para eliminar los posibles
microorganismos que hubiesen quedado hay y para finalizar se
tapa la boca del tubo con algodn. Todo este procedimiento se

hace cerca del fuego, para

microorganismos del ambiente.

que

no

exponer

ms

b Agar nutritivo semi-solido

Al igual que la muestra anterior se hace el mismo
procedimiento, pero en este caso el asa e siembra termina en
punta. Se esterilizan los tubos de ensayo, se saca la muestra
del tubo en el asa de siembra, se introduce el asa en el tubo
con agar en vertical hasta el fondo, y se tapa el tubo con el
agar.
c Agar nutritivo en Pico de flauta
Se hace los mismos pasos y
esterilizaciones de los
procedimientos anteriores, pero en este caso el tubo de ensayo
se colocara en una posicin inclinada y al momento de colocar
el asa de siembra con la muestra, la cual debe ser un asa de
punta circular, en el agar nutritivo tiene que hacerse en la
superficie del agar de una forma de sic-sac, terminado este
proceso se tapara la boca del tubo de ensayo con algodn.
2 Cuantificacin: diluciones decimales
En esta prctica hubo tres tubos de ensayos los cuales se
coloc 10-1, 10-2 y 10-3 respectivamente. Con una pipeta ya
esterilizada en el fuego y con una pera para pipetear, se saca
una muestra de 1ml de S.S.F. del tubo de ensayo ya
esterilizado en el fuego, se coloca en el tubo de 10 -1,
previamente esterilizado en el fuego, luego se toma una
muestra de 1ml del tubo 10 -1 y se coloca en el tubo de 10 -2, al
igual que el anterior previamente esterilizado y despus de
terminar el paso tapado con algodn. Luego del tubo de ensayo
de 10-2 de tomo una muestra con la pipeta de 1ml y se coloc
en el tubo de 10-3. El tubo ltimo al igual k los anteriores se
esterilizo en el fuego y se tap con algodn.
Despus de eso, se saca 1ml de muestra del tubo de 10 -2 y se
coloca en una placa petri ya esterilizada en el fuego. La cual se
tapa y se envuelve en papel. Se hace lo mismo con con otra
placa petri pero con la muestra del tubo de 10-3 , se tapa, se
esteriliza y se coloca en papel. Se coloca en el autoclave y
dentro de 24-48 horas se revisa.

RESULTADOS
Por Estras
Tipos de colonias
Forma

Muestra: Escherichia
coli

Superficie
Margen

Contaminantes : opacas
E. coli: translucidas
E. coli: Circular
Contaminante: circular, convexa
Elevada
Entero

Por Difusin de Placas:

Forma
Elevacin
Margen

Circular
Elevado
Entero

Tubos de ensayo
Agar inclinado
Cantidad
Margen
Consistencia
Pigmentacin

Moderada
Entero
------------Opacos

Agar en columna
Cantidad

Moderada

Distribucin

Lnea de inoculacin
(facultativos)
Con movimiento

Caldo nutritivo
Cantidad
Distribucin
Olor

Moderada
Sedimento
Imperceptible

Diluciones
10-2
10-3

310 colonias
60 colonias

Ufc: 31x104
Ufc: 6 x 105 UFC/mL.

DISCUSIONES
El crecimiento de los microorganismos presentes en sustratos que
se encuentren en condiciones que lo propicien, se traducir primero en
el aumento de los componentes celulares, y en seguida por el aumento
del tamao y el incremento del nmero de clulas. Los estudios
relacionados con el anlisis de muestras como agua, alimentos, leche y
aire requieren de una enumeracin cuantitativa de los microorganismos
presentes en estos compuestos, ya que la calidad microbiolgica de
estos productos est en relacin directa con la calidad sanitaria y la
seguridad para el consumo de ellos. (Paola Andrea Acua Gonzlez,
2008).
Las colonias que crecen sobre la superficie se pueden utilizar
tambin para inocular un medio fresco y preparar cultivos puros.
(Prescott, Harley, Klein, 2009). En esta prctica se realiz la siembra por
estras, que como dice los autores, es otra forma de obtener colonias
aisladas para cultivos puros. Se us un asa de siembra, ya que no
contamos con un hisopo. Se extendi en varios sentidos como nos
seala el autor, pero tambin es vlido un solo sentido. Es muy
importante resaltar que el buen aislamiento depende de la separacin
adecuada de las clulas individuales, como lo remarca los autores. Es
cierto, sino tendramos varios obstculos en nuestra investigacin, como
el problema de que no tengamos un cultivo puro.
El aislamiento de las bacterias a partir de nuestras se realizan, en
la mayor de los casos, mediante la produccin de colonias en cultivos. El
crecimiento explosivo de las bacterias permiten producir un numero de
ellas a partir de una nica clula inicial de forma que, tras un periodo de
incubacin en las condiciones ambientales adecuadas, se produce una

colonia observable a simple vista y formada por individuos iguales (un

clon bacteriano) (LEBOFFE, 2006)
La cuantificacin de microorganismos es un elemento crtico en los
estudios de ecologa microbiana y microbiologa clnica. No solo es
importante conocer al responsable de un efecto benfico o identificar al
microorganismo potencial de causar alguna infeccin severa, si no
tambin es importante saber el nmero de microorganismos implicados,
para establecer se estos sern capaces de desarrollar una funcin
benfica o perjudicial (Andres Corral, 2012)
El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se
realiza, en la mayora de los casos, mediante la produccin de colonias
aisladas en cultivos slidos. El crecimiento explosivo de las bacterias
permite producir un gran nmero de ellas a partir de una nica clula
inicial de forma que, tras un periodo de incubacin en las condiciones
ambientales adecuadas, se produce una colonia observable a simple
vista y formada por individuos iguales (un clon bacteriano).
Si se extiende una mezcla de clulas sobre una superficie de agar,
cada clula aislada se multiplicar formando una colonia independiente,
formacin o agrupacin macroscpica visible de microorganismos sobre
un medio slido: cada colonia representa un cultivo puro. La siembra por
extensin es una forma directa y fcil de conseguir este resultado.
(Prescott, Harley, Klein, 2004).
CONCLUSIN
Luego de realizada la prctica de Laboratorio se lleg a las siguientes
conclusiones:
Se aprendio hacer cultivos de microorganismos.
La muestra original se diluye varias veces para reducir la
poblacin microbiana lo suficiente con el fin de obtener colonias
separadas cuando se siembren.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Andres Corral, Y. E. (2012). cuantificacion de bacterias cultivables

mediante el metodo "Goteo en Placa por Sellado". Massive Stamping
Drop Plate.

Concepcion Casado Gonzales, G. T. (2012). Medios de Cultivo en un

Laboratorio de Microbiologia.

LEBOFFE, M. (2006). Microbiology Laboratory Theory and Application.

Morton Publishing.

Paola Andrea Acua Gonzlez, L. S. (2008). Aislamiento e identificacin

de microorganismos. Facultad Ciencias de la Salud.

PRESCOTT, L. (2005). Microbiology. Columbus: Princete Hall.

Prescott, Harley, Klein. Microbiologa. 2004. Quinta Edicin. Editorial

McGRAW Hill Interamericana.