A PREPARAO DE LMINAS HISTOLGICAS: FIXAO E COLORAO

A maior parte dos tecidos no pode ser observada in vivo. Devido a esse fato, eles
devem ser submetidos a processos de fixao para que suas estruturas morfolgicas
mantenham-se preservadas. Vrios processos degenerativos de autlise celular ocorrem
logo aps a morte dos tecidos. Seu conjunto recebe o nome de degenerao post-mortem.
Para evitar essa autlise que inicia aps a morte dos tecidos e a prpria digesto
do material por bactrias decompositoras, deve-se empregar substncias que, ao se ligar
aos principais componentes estruturais do tecido (geralmente protenas), mantenham a
estrutura do material a ser estudado. Esse processo de preservao dos componentes
estruturais dos tecidos denomina-se fixao. As substncias que executam o processo de
fixao so chamadas fixadores. Os cientistas desenvolveram misturas empricas de
fixadores para compensar suas principais desvantagens. Os principais fixadores so:
formol, lquido de Bouin, lquido de Helly, aldedo glutrico e tetrxido de smio.
Para que os componentes do tecido possam ser visualizados, a luz deve atravesslos, dirigindo-se aos olhos do observador. Isto limita a espessura dos cortes a poucos
micrometros. A fim de que os tecidos suportem o processo de corte, eles devem ser
impregnados com parafina ou resinas epxi (caso o corte seja mais delgado, utilizado em
microscopia eletrnica). Esse processo chama-se impregnao. Antes da impregnao, a
pea deve passar pelos processos de desidratao e diafanizao.
Os processos histoqumicos de colorao permitem a observao dos
componentes dos tecidos devido ao contraste que produzem ao ligarem-se distintamente a
eles.
Princpios da histoqumica: o princpio bsico da histoqumica a localizao de
determinados compostos qumicos a partir de tcnicas de preparao. A observao da
presena destes compostos nas clulas pode auxiliar muito na determinao das
caractersticas celulares.
Para que os mtodos histoqumicos obtenham sucesso, so necessrios alguns
requisitos bsicos: o produto da reao histoqumica deve ser insolvel e no-difusvel,
para que a determinao de sua localizao seja precisa. Tambm importante que o
mtodo utilizado seja especfico para a substncia ou grupo qumico que est sendo
analisado, para que no ocorram concluses equivocadas.
Substncias basfilas e acidfilas - HE: a principal tcnica de colorao de tecidos
para o estudo de Histologia bsica a tcnica HE (Hematoxilina-Eosina). Atravs dessa
tcnica, podemos diferenciar pores basfilas e acidfilas do tecido estudado. A
hematoxilina (corante bsico) acidfila, ou seja, tem afinidade por substnicas cidas.
Sendo assim, ela costuma corar os ncleo, os ribossomos e o Retculo Endoplasmtico
Rugoso. A eosina (corante cido) basfila, tendo afinidade pelo citoplasma, fibras
colgenas e outras substnicias bsicas das clulas.
Localizao de lipdios: Para a localizao de lipdios, so utilizados corantes que
possuem alto grau de dissoluo em gorduras. Os corantes, misturados com uma soluo
alcolica saturada pela qual possuem baixo grau de dissociao, so colocados em
contato com o tecido e ento se transferem da soluo alcolica para os lipdios. Os

principais exemplos de corantes especficos para lipdios so o Sudan IV e o Sudan

Negro.
Localizao de cidos nuclicos: A localizao dos cido nuclicos baseia-se no
mtodo de Feulgen. Neste mtodo, o DNA reage com uma soluo de cido clordrico,
que retira as bases pricas e forma grupamentos aldedos na desoxirribose. Ento,
adicionado o reativo de Schiff (fucsina bsica descorada pelo anidrido sulfuroso) que se
combina com os radicais aldedo para formar um composto insolvel e vermelho. Esse
mtodo possui uma proporcionalidade entre a intensidade da colorao e o teor de DNA,
de modo que zonas mais coradas possuem maior teor de DNA.
O RNA pode ser identificado porque possui alta basofilia (afinidade com corantes
bsicos). Porm, como em determinados tecidos existem outras substncias de natureza
basfila, necessrio um procedimento adicional, caso se deseje localizar apenas o RNA:
deve-se preparar duas lminas, uma contendo a enzima ribonuclease e outra sem esta
enzima. Esta enzima digerir o RNA presente na lmina. Ento, coram-se as duas lminas
com um corante basfilo. Fazendo-se a subtrao das duas imagens, perceber-se-o os
locais onde previamente havia RNA.
Localizao de polissacardeos: A presena de polissacardeos pode ser determinada
pela tcnica do PAS (Periodic Acid-Schiff). O cido peridico oxida os grupamentos 1-2
glicol, produzindo aldedos. Estes aldedos reagiro com a fucsina descorada, chamada de
reativo de Schiff, dando um composto de adio, violeta e insolvel. Atravs dessa
tcnica possvel visualizar polissacardeos simples ou associados a protenas, sendo
muito utilizada nas lminas de fgado (acmulos de glicognio), estmago (camada de
revestimento de mucopolissacardeos, modernamente chamados de glicosaminoglicanas),
cartilagem hialina (glicosaminoglicanas pertencentes s proteoglicanas da matriz).
Certas substnicias tm a capacidade de alterar a cor original do corante pelo qual foram
coradas. Chamamos isso de metacromasia.