Universidade Estadual de Campinas

Instituto de Qumica
QA316 Qumica Analtica

Prof: Fabio Augusto

Cromatografia em coluna: Separao dos

pigmentos de espcies vegetais
28/05/2014

Naylil M. R. Capreti

RA: 147522

Renata Pinheiro Sanches

RA: 147803

Brbara Corra Tudisco RA: 145383

Helena Munhoz Erbolato
Introduo

RA: 148612

A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao, baseada

na migrao diferencial dos componentes de uma mistura devido a
diferentes interaes entre a fase mvel e a fase estacionria.
Cromatografia lquida clssica uma tcnica que muito utilizada
para isolamento de produtos naturais e purificao de produtos de reaes
qumicas. As fases estacionrias mais utilizadas so slica e alumina,
levando separao por adsoro.
Neste experimento, realizou-se um procedimento semelhante ao do
botnico russo Tswett que descreveu suas experincias na separao dos
componentes de extratos de folhas, ondea passagem de ter de petrleo
(fase mvel) atravs de uma coluna de vidro preenchida com carbonato de
clcio (fase estacionria), qual se adicionou o extrato, levou separao
dos componentes em faixas coloridas.

Figura 1: Esquema geral da separao em coluna cromatogrfica.

A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos,
para a purificao de compostos e para a separao dos componentes de
uma mistura.
A grande variedade de combinaes entre fases mveis e
estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de grande
aplicao.

Objetivo

Avaliar uma tcnica de separao preparativa e a separao em fase

normal de pigmentos de vegetais(no caso, espinafre) por cromatografia em
coluna.

Procedimento
1) Preparo da coluna
A fase mvel, mistura de hexano, ter de petrleo e acetona em
50:25:25 (v/v/v), foi preparada pelos tcnicos.
Para fase estacionria, pesou-se 10 g de slica gel 60 (0,063-0,2 mm)
para cromatografia, adicionando 20mL da fase mvel e agitando para obter
uma suspenso.
Em uma bureta de 25 mL com a torneira fechada, introduziu-se um
pequeno chumao de l de vidro at conexo do corpo da bureta. Fixou-a na
posio vertical e adicionou-se 6 mL de fase mvel.
Transferiu-se a suspenso de fase estacionria para bureta, abriu-se a
torneira e, dando pequenas batidas na lateral,esperou-se at que a altura
da fase mvel atingisse cerca de 2 cm acima da fase estacionria dentro da
bureta.
2) Preparo da amostra
As folhas de espinafre foram maceradas em almofariz com e 1
esptula de sulfato de sdio anidro, adicionou-se 20 mL de acetona
mistura, obtendo um lquido de colorido.
3) Procedimento de separao em coluna cromatogrfica clssica
Uma poro do extrato de espinafre foi adicionando na bureta com
uma pipeta, deixando a amostra fluir atravs da coluna de slica, abrindo-se
a torneira da bureta, at que a amostra fique cerca de 2 cm acima do nvel
da fase estacionria.
Ento fechou-se a torneira, adicionou-se coluna cerca de 10 mL de
fase mvel e a torneira foi novamente aberta para realizar a eluio da
amostra. Repetir adio de fase mvel bureta at a eluio total da
amostra atravs da coluna.
As solues dos trs pigmentos foram coletados separadamente e
obtidos seus espectros na regio do visvel (380-700 nm).

Resultados e discusses
Nesse experimento, utilizou-se uma coluna cromatogrfica clssica,
constituda por uma fase estacionria empacotada em um tubo e uma fase
mvel, para separar pigmentos contidos no espinafre. A separao que
ocorre nesse sistema deve-se as diferentes interaes dos componentes da
mistura com as fases.

Como a fase mvel era apolar e a estacionria polar, o esperado era a

eluio mais rpida de compostos apolares antes de compostos polares,
pois estes interagem mais fortemente com a fase estacionria.
A figura a seguir a coluna realizada com os pigmentos separados.

Figura 2: Separao dos pigmentos na coluna cromatogrfica

Sendo assim, os carotenos hidrocarbonetos so os primeiros
compostos a serem eluidos, pois estes so compostos apolares. O espectro
da primeira banda coletada encontra-se na figura 3.

Espectro do primeiro eluido

0.3
0.25
0.2
Absoro

0.15
0.1
0.05
0
300

400

500

Comprimento de onda /nm

Figura 3: Espectro dos carotenos

600

700

Figura 4: Estrutura do caroteno.

O segundo composto a ser eluido clorofila.
A clorofila encontrada em plantas verdes possui dos tipos, sendo eles
a e b. O tipo a difere do b na presena do radical CH 3 no lugar deCHO .
Como pode-se observar na figura 3, a clorofila possui grupos polares, como
os carbonilicos, heterotomos bastante eletronegativos, alm do magnsio
no centro de sua estrutura. Esses grupos interagem com a fase estacionria,
sendo assim, sua reteno maior. O espectro de banda da clorofila est
localizado na figura 4.

Espectro do segundo eluido

1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
Absoro
0.4
0.3
0.2
0.1
0
500

600
Comprimento de ona /nm

Figura 5: Espectro da clorofila

700

Figura 6: Estrutura da clorofila.

A ltima banda obtida foi dos compostos xantofilas. E o espectro obtido est
na figura 7.

Espetro do terceiro eluido

0.4
0.35
0.3
0.25
Absoro

0.2
0.15
0.1
0.05
0
350

400

450

500

550

600

Comprimento de onda /nm

Figura 7: Espectro dos compostos xantofilas

650

700

Figura 8: Estrutura da xantofila.

Na figura8 pode-se observar a presena de grupos hidroxila na
estrutura da xantofila. Esses grupos interagem com os grupos silanis da
slica, que compe a fase estacionria, atravs de ligaes hidrognio.
Sendo assim, sua reteno muito maior comparada aos outros grupos.

Concluso
A cromatografia em coluna clssica mostrou como importante a
construo de uma coluna cromatogrfica bem empacotada, pois se ela no
for feita de maneira correta a separao dos analitos presentes no ser
eficiente e dessa forma no se consegue analisar todos a amostra de forma
confivel.

Bibliografia
C. H. Collins; G. I. Braga; P. S. Bonato; Fundamentos de Cromatografia,
Editora da Unicamp, Campinas, SP, 2006.
http://qnint.sbq.org.br/qni/visualizarConceito.php?idConceito=33
http://qnesc.sbq.org.br/online/qnesc20/v20a10.pdf