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Mg. Bilogo-Microbilogo
ESTRUCTURA PARED
Medio externo
Ag O
Membrana
Core
Lpido A
externa
Porinas
Lipopolisacrido
LPS
Proteinas
Lipoproteinas
Peptidoglicano
Membrana
citoplsmica
Espacio
periplsmico
CITOPLASMA
Familia Enterobacteriaceae
Familia Vibrionaceae
Familia Aeromonaceae
Familia Campylobacteriaceae
Familia Helicobacteriaceae
Familia Pseudomonaceae
Familia Pasteurellaceae
Medios Selectivos:
Directa
Area.
Oral.
Contacto.
Sexual.
Indirecta
Agua.
Alimentos
Comidas
Artefactos
Insectos
1- Utilizacin de la Lactosa.
2- Utilizacin de la Glucosa.
3- Produccin de gas de la Glucosa.
4- Descarboxilacin de la Lisina.
5- Produccin de cido sulfrico.
6- Utilizacin del citrato.
7- Produccin de la ureasa.
8- Motilidad.
9- Produccin de Indol
entero bacterias.
expresados en porcentajes.
E. coli
Enterobact
er spp.
Serratia
spp
Pantoea
agglomeran
s
Roja
Roja
Incolora
A/Ag
A/Ag
A/A,
A/Ag
K/A,K/Ag
A/A, K/A
LIA
K/K
K/A,
K/K(E.aero
g)
K/K
VP
Negativ
o
Positivo
CITRAT
O
Negativ
o
INDOL
Prueba
s
MC
(Colonia
)
Klebsiella
Citrobacter
pneumoni
ae
oxytoca
frunc
otro
Roja
Roja
Roja
tardia
Roja
A/Ag
A/Ag
A/Ag(K/
A
K/A
K/K
K/K
K/A
Positivo
Positivo
Positivo
negativo
Negativ
o
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
negativo
Positivo
negativo
Positivo
ROJO
METILO
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativ
o
positivo
Positivo
Movilida
d
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativ
o
positivo
Positivo
UREASA
Negativ
o
Negativo
Negativo
Negativo
positiv
o
V(lento)
TSI
A/Ag
K/A
CARACTERISTICAS GENERALES
No esporulados.
Capsulados o no
Presencia de pilis.
BIOQUMICA
Anaerobios facultativos.
Catalasa positiva.
Oxidasa negativa.
MEDIOS DE CULTIVO
Medios No Selectivos
Agar Sangre
Medios Selectivos/Diferenciales:
Agar Mc Konkey
Agar EMB
Agar TSI
Mc Konkey: Colonias rosadas (fermentan
lactosa) y colonias transparentes (no
fermentan lactosa).
Agar EMB: Colonias azules (fermentan lactosa)
y colonias transparentes (no fermentan
lactosa).
MEDIOS DE CULTIVO
Agar XLD
Agar SS
PRUEBA TSI
Permite determinar las siguientes
pruebas bioqumicas:
Fermentacin de Lactosa
Fermentacin de Glucosa
Formacin de H2S
Formacin de Gas
PRUEBA TSI
Resultados en Superficie inclinada/fondo:
Alcalina/alcalina: Lactosa (-), Glucosa (-)
Pseudomonas
PRUEBA TSI
Resultados en Superficie inclinada/fondo:
Produccin de H2S
Produccin de pigmento negro: H2S (+)
No pigmento negro: H2S (-)
Produccin de Gas
Presencia de burbujas: Gas (+)
Produccin de ureasa
Produccin de indol
Motilidad
Produccin de fenilalanina
desaminasa
Prueba de la Oxidasa
El reactivo de la oxidasa ms recomendado es la
tetrametil-p-fenilendiamina (reactivo de
Kovacs).
Realizacin de la prueba:
1.Mtodo en placa directa
Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de carbono y
compuestos amoniacales como nica fuente de nitrgeno en su metabolismo, provocando una alcalinizacin del
medio. Entre las enterobacterias estas caractersticas se dan en los siguientes gneros: Enterobacter, Klebsiella,
Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmonella. Sin embargo, Escherichia, Shigella, Salmonella typhi y
Salmonella paratyphi son incapaces de crecer con esos nutrientes.
Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio
contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono
y de nitrgeno respectivamente y azul de bromotimol como indicador de
pH. Slo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn
multiplicarse en este medio y liberarn iones amonio lo que, junto con la
eliminacin del citrato (cido), generar una fuerte basificacin del
medio que ser aparente por un cambio de color del indicador de pH, de
verde a azul.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente
de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema
buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol
es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los
microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente
de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del
cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en
presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen
carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato
permeasa.
Mediante esta prueba se detecta la liberacin de indol en un cultivo bacteriano. Dicha liberacin se debe a la
degradacin del aminocido triptfano mediante el enzima triptofanasa.
Para la realizacin de esta prueba la bacteria se cultiva durante 24-48 horas en un caldo de triptona con NaCl al
0,5% (la triptona presenta abundante triptfano). Para la posterior deteccin del indol se usa el reactivo de Kovacs
Para el control de calidad del reactivo se pueden utilizar cultivos conocidos. Las ms convenientes son Escherichia
coli (indol+) y todas las especies de Klebsiella (indol-).
Si la bacteria posee la enzima triptofanasa, al aadir al medio 5 gotas del reactivo de Kovacs, se producir un anillo
de color rojo en la superficie del caldo y la prueba ser considerada positiva. Si esto ocurre despus de 24 horas, la
prueba se considera completa, pero si es negativo deber incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. Por ello es
conveniente hacer siempre la prueba no en el tubo incubado sino en una porcin de unos 2ml que se retira de l
aspticamente.
SIM Medio
Fundamento
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede
ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas
triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehdo del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un
compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen
alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la
formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a
un pH mayor a 7.2.
Siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin profunda con aguja de inoculacin
recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de
profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en lnea recta.
Incubacin
Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.
Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich.
Resultados
Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la lnea de siembra.
Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.
Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio.
Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.
Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de color.
Limitaciones
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar
en superficie un inculo ligero , usando una ansa sin
arrastrar el agar.
Incubacin
A 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4
das de incubacin.
Resultados
Limitaciones
-Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarilloamarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualizacin azul de un
resultado positivo.
-Inculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.
-Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la aguja de
inoculacin antes de inocular la prueba del citrato o sino inocularla primero. Cualquier arrastre de materia
orgnica puede originar resultados falsos positivos.