Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
ANUL I, SEMESTRUL I
structura de baza este un bistrat lipidic cu proprietati fluide manifestate bidimensional, axul
intregului edificiu molecular
bistratul lipidic este mozaicat cu proteine, care pot fi atasate fie la exterioriul bistratului, fie la
interior, fie cufundate in acesta, putandu-l strabate atat complet, cat si partial
de asemenea, trebuie mentionata si prezenta componentei glucidice
Cand vorbim despre membrana celulara, vorbim despre o ultrastructura alcatuita majoritar din lipide
polare si proteine, care separa, dar si uneste celula cu mediul. Denumim ultrastructura orice componenta
supramoleculara din structurile vii care nu paoate fi observata la MO, ci doar la ME. Biomembranele au o
grosime de 7-10 nm, adica sunt de aproximativ 20 de ori mai subtiri decat o structura observabila la MO.
Astfel, la baza conceptului de organizare sub forma de mozaic fluid au contribuit majoritar observatiile
din preparatele de microscopie electronica obtinute prin tehnica de inghetare-fracturare, care dovedeau
prezenta in membrana a unor structuri globulare ce se repartizau fie pe o fata, fie pe cealalta a suprafetei
de fractura, cand aceasta trecea pe la nivelul membranei printre cele doua foite ale bistratului, unde se
gaseste linia de minima rezistenta la fractura.
Membrana celulara este alcatuita din 3 componente principale:
1. Plasmalema=complexul lipoproteic, structura trilaminara, grosime de aprox. 7,5 nm
2. Glicolema= complex glicoproteic, atasata superficial, pe versantul extern al plasmalemei, grosime
de cca 50 nm
3. Citoscheletul membrana= retea de proteine ancorata versantului intern al plasmalemei, ce se
continua spre interiorul celulei cu citoscheletul asociat matricei
1% substante minerale
99% substante organice*:
Exceptie: la nivelul tecii de mielina, unde functia de bariera este esentiala rolului membranei celulelor
Scwann, procentul de masa pt lipide este de 80%
Desi in majoritatea sistemelor biologice apa reprezinta aproximativ 70-80%, in membrana situatia sta
exact invers, explicatia gasindu-se tocmai din rolul membranei: separarea a doua medii hidrofile, astfel
explicandu-se un procent redus de apa, precum si continutul in lipide al structurii de baza a membranei,
bistratul, asigurandu-se astfel caracterul hidrofob.
Lipidele sunt prezente exclusiv in plasmalema, proteinele sunt anexate ca un mozaic plasmalemei, putand
fi atasate atat la exterior, cat si la interiorul acesteia, dar o pot si strabate, cufundandu-se fie complet, fie
partial. Componenta glucidica este atasata exclusiv versantului extern al plasmalemei.
Legat de functiile membranei celulare, aceasta trebuie sa se comporte ca o barire selectiva, si nu absoluta,
intre mediile extracelular si intracelular, permitand interactiunea celulei cu mediul. De aceea, putem
afirma ca membrana celulara trebuie sa indeplineasca doua mari categorii de functii:
lipide complexe(ce contin in structura lor acizi grasi , ex: acilgliceroli, fosfogliceride,
sfingolipide, ceruri)
lipide simple(steroizi, prostaglandine, terpene)
Deoarece fosfolipidele concentreaza la un capat radicalii hidrofil si la celalalt capat radicalii hidrofobi,ele
sunt denumite molecule amfipate sau bimodale. Fosfolipidele au astfel tendinta de orientare in monostrat,
iar, atunci cand concentratia fosfolipidelor este mai mare decat cea necesara, ele se organizeaza in micelii.
Alte tipuri de fosfolipide: cardiolipide (difosfatidil gliceroli), plasmalogene (reprezinta 10% dintre
fosfolipidele creierului, iar in muschiul cardiac procentul lor ajunge pana la 50%, avand rol in protectia
miocardului fata de actiuntea radicalilor liberi de oxigen).
Legat de distributia in bistrat:
o
o
o
pe foita interna: PE, PS, PI (cu mentiunea ca aparitia PS in foita externa reprezinta un semn
timpuriu al fenomenului de apoptoza celulara)
pe foita externa: PC, sfingomieline (echivalentul PC pentru fosfosfingozide)
intre foite: colesterol
Legat de mobilitate, putem afirma ca , fosfolipidele, ca orice lipide membranare, pot executa urmatoarele
tipuri de miscari:
1. Miscari intramoleculare ( realizate in raport cu propria lor axa si geometrie)
- de rotatie (109 rotatii/secunda)
-de flexie a cozilor hidrofobe( 108 flexii/secunda)
2. Miscari intermoleculare
-de translatie(difuzie laterala) = miscarile ale lipidelor in planul membranei, unele pe langa altele, cu o
frecventa de schimbari de directie de 107 schimbari/secunda. Prezenta colesterolului in bistrat
determina o diminuare a mobilitatii laterale !!!
-de flip flop = miscari de trecere a lipidelor dintr-o foita a bistratului in cealalta, cu o frecventa extrem de
mica, practic nula, cu exceptia cazului membranei R.E
Notam de asemenea si ca fosfolipaza A2, prin actiunea sa, poate elibera acidul arahidonic, care este
precursor pentru 4 clase de substante :
1.
2.
3.
4.
Prostaglandine
Tromboxani
Prostacicline
Leucotriene
Toate aceste 4 clase de substante sunt obtinute prin complexe procese de metabolizare a acidului
arahidonic proaspat eliberat de fosfolipaza A2. Primele 3 tipuri rezulta pe calea ciclo-oxigenazei, iar cea
de-a patra pe calea lipo-oxigenazei.
De notat de asemenea ca proteinele periferice reprezinta aprox. 25% din proteinele unei membrane, se
extrag din mb cu solutii saline sau agenti chelatori, au caracter hidrofil , iar dupa extragere, isi pastreaza
solubilitatea in apa.
Proteinele integrale reprezinta de regula 75% din proteinele unei membrane, se extrag din membrane
prin folosirea de detergenti, cu distrugerea bistratului, iar dupa extragere, raman asociate cu lipide. Aceste
proteine sunt insolubile in apa si au caracter amfifil, cu portiune hidrofoba reprezentata de zona imersata
in bistrat, si zona/zone hidrofile, reprezentata/e de domeniile lantului polipeptidic expuse in afara
bistratului.
Proteinelor transmembranare li se definesc 3 domenii structurale:
1. Ectodomeniu(portiunea expusa pe fata externa a membranei)
2. Domeniu transmembranar(portiunea ce strabate bistratul lipidic)
3. Endodomeniu(portiunea expusa pe fata interna a membranei)
De asemenea, proteinele transmembranare sufera si ele doua clasificari, si anume:
In functie de nr. de treceri ale lantului polipeptidic prin planul membranei:
5
unipas
multipas
GLICOFORINA
Este o proteina prezenta din abundenta in membrana eritrocitului, care are caracteristic faptul ca migreaza
atipic la electroforeza( se dispune undeva la 90 kDa, desi masa ei moleculara este de numai 30 kDa) .
Prezinta 131 AA si este o proteina transmembranara unipas de tip I ( cu capatul amino in ectodomeniu).
Ectodomeniul prezinta 16 lanturi glucidice ce practic dubleaza gabaritul acestei molecule, explicandu-se
astfel migrarea electroforetica atipica. Endodomeniul este mic, domeniul transmembranar este structurat
in alfa helix si contine 23 AA. Toti AA componenti sunt cunoscuti, structura este cunoscuta.
Exista mai multe izoforme de glicoforina identificate pana in prezent: A,B,C,D,E. Functia glicoforinei
NU este cunoscuta, iar "misterul" este adancit de faptul ca exista eritrocite din a caror membrane
glicoforina lipseste , iar functionalitatea nu le este afectata.
In portiunea C terminala(aflata in endodomeniu), AE1 leaga anhidraza carbonica II, importanta pentru
fucntia transportorului prin furnizarea anionului bicarbonat. Au fost identificate forme mutante pentru
aceasta proteina=> patologii specifice eritrocitelor, iar glicoforina A pare a fi de ajutor in acest caz pentru
restabilirea functiei de transport.
SPECTRINA
Impreuna cu glicoforina si cu AE1 reprezinta peste 60% (in procente de masa) din proteinele membranei
eritrocitare.
Spectrian este o proteina periferica situata pe fata interna a membranei => este o endoproteina,
reprezentand componenta de baza a citoscheletului membranar eritrocitar.
Spectrina este un heterodimer format dintr-o subunitate alfa(alfa-spectrina, 280 kDa) si o subunitate
beta(beta-spectrina, 246 kDa). Ambele subunitati sunt formate predominant din multiple unitati repetitive
de 106 AA.
Cele doua subunitati se rasucesc usor una in jurul alteia intr-o structura elicoidala=> bastonase flexibile
cu lungimea de 100 nm. Rasucirea este in contrasens, fiecare bastonas avand la capate gruparea Ntermina a unei subunitati si gruparea C- terminala a celeilalte. Capatul ce contine gruparea N-terminala a
subunitatii alfa este numit capul bastonasului, iar cel ce contine gruparea N-terminala a subunitatii beta
este numit coada bastonasului.
Bastonasele au capacitatea de a interactiona cate doua, cap la cap => tetrameri lungi de 200 nm, iar
capetele tetramerilor se pot asocia cu oligomeri de actina, formand nodurile retelei citoscheletale.
ACTINA
Este o alta proteina care participa la structurarea citoscheletului membranei, asigurand solidarizarea
componentelor acestuia la nivelul nodurilor.
In forma sa monomerica, actina este o proteina globulara cu masa de 43 kD si diametru de 5 nm. La
nivelul citoscheletului membranar formeaza fragmente mici, de 8-12 monomeri, cu rolul de a asigura
asocierea cozilor tetramerilor de spectrina in nodurile retelei citoscheletale.
BANDA 4.1
Tot in noduri se localizeaza si banda 4.1, cu masa de 80kD si conformatie globulara.
Banda 4.1 interactioneaza dinamic cu spectrina si actina in nodurile retelei citoscheletale si, pe de alta
parte, cu endodomeniul glicoforinei C, contribuind la atasarea citoscheletului pe versantul intern al
membranei, de aici rezultand un rol structural al unei izoforme a glicoforinei.
Atasarea citoscheletului asociat la membrana este datorata si unei alte proteine globulare=ankirina.
Rezumand, citoscheletul membranei este format din tetrameri de spectrina ce organizeaza lanturile
ochiurilor retelei, unde, prin intermediul ankirinei se leaga de banda 3 si din mici filamente de actina care
leaga cozile tetramerilor de spectrina la nivelul nodurilor retelei, unde, prin intermedierea benzii 4.1,
reteaua se ataseaza suplimentar la endodomeniul benzii 3. Aceste interactiuni sunt intr-o dinamica
permanenta, aceasta structura nefiind rigida, ci intr-o continua modelare care sa satisfaca nevoile celulei.
miscari de rotatie
miscari de translatie
Miscarea de rotatie a proteinelor membranare in jurul propriei axe= difuzie rotationala este de cel putin
1000 de ori mai lenta decat cea a lipidelor, avand in vedere si diferentele de gabarit.
Miscarea de translatie=difuzie laterala, este si ea mult mai lenta decat cea a lipidelor , iar aceasta
lentoare nu trebuie inteleasa numai prin diferentele de marime intre proteine si lipide, ci si prin
interactiunile pe care proteinele le stabilesc in mod dinamic intre ele, sau cu alte structuri dinauntrul sau
din afara celulei. Astfel, aceeasi proteina, in aceleasi conditii de fluiditate a bistratului lipidic, se poate
misca mai repede sau mai incet, mai mult sau mai putin, in functie de starea ei functionala de moment.
Nodurile citoscheletului membranar au o anumita dinamica si permit membranei sa isi schimbe curbura.
Prin aceasta organizare citoscheletala de la nivelul eritrocitului i se poate explica acestuia capacitatea de
a-si modifica forma cand trece prin capilare.
glicolipidele
glicoproteinele
proteoglicanii
glucoza(Glc)
galactoza(Gal)
manoza(Man)
fucoza(Fuc) (!! sg zaharida din seria L, restul apartin seriei D)
N-acetil glucozamina(GlcNAc)
N-acetil galactozamina(GalNAc)
acizii sialici (SA)
Spunem acizi sialici(la plural) deoarece ne referim la o intreaga clasa de compusi derivati din acidul
neuaraminic(precum acidul N-acetil neuraminic sau N-glicolil neuraminic). Diversitatea SA este vasta,
intrucat reprezentantii de baza pot fi O-acetilati la hidroxilii de la carbonii 4,7,8 si 9, iar, mai departe, pot
fi mono/di/tri acetilati.
In afara de aceste sapte componente, in proteoglicani intalnim si monozaharidul xiloza(necesar pentru a
lega structura glucidica de o serina din partea proteica), precum si acizi uronici(glucuronic si iduronic).
Dupa aceasta enumerare de componente, putem accentua putin ideea eterogenitatii structurarii
membranelor(indusa de lipide, si amplificat de proteine si de structurile glucidice), prin faptul ca
insiruirea glucidelor din lanturi oligozaharidice nu este aceeasi, ea diferind intre diversele glicolipide si
glicoproteine. Mai mult, legarea monozaharidelor intre ele se poate face in mai multe moduri, intrucat
exista mai multe grupari hidroxil disponibile. Totusi, nu toata aceasta gama larga de posibilitati este
exploatata de celula, lucrurile fiind limitate de tipurile de ezine numite glicoziltransferaze.
10
Glicocalixul protejeaza structura membranei celulare impotriva agresiunilor fizico-chimice din mediu.
11
2. Lectina I , izolata din Ulex europaeus (UEA I) recunoaste alfa-Fucoza aflata-n pozitia terminala a
lantului glucidic
3. DBA leaga structuri ce contin alfa-GalNAc legata de o alta GalNAc
4. WGA/LPA : leaga acizi sialici si pot recunoaste si beta-GlcNAc
5. PNA si RCA I : pentru beta-Galactoza( PNA se leaga exclusiv de Gal aflata-n pozitie terminala, in
timp ce RCA I poate recunoaste si Gal aflata-n pozitie subterminala, doar daca acidul sialic terminal e
inserat la hidroxilul carbonului 6 al acesteia)
Cu cat spectrul lectinelor folosite este mai larg, cu atat imaginea asupra glicocalixului este mai detaliata.
In plus, combinarea acestor metode cu folosirea exo- sau endo-glicozidazelor pentru degradarea specifica
secventiala sau globala a lanturilor glucidice, completeaza fericit caracterizarea citochimica a
glicocalixului.
12
In final, putem afirma ca implicarea glicocalixului in fiziologia si patologia celulara a facut ca acesta sa
fie considerat tinta terapeutica in tratamentele multor boli.
13
endocrine, atunci cand celulele se afla la distanta, iar molecula semnal trebuie sa fie transportata
de umorile organismului( de regula, de sange)
paracrine, atunci cand celulele se afla in imediata vecinatate
autocrine, atunci cand semnalul este transmis si receptat de aceeasi celula
juxtacrine, cand celulele sunt jonctionate( semnalizarea juxtacrina presupune interactiunea unor
molecule din structura membranelor celor doua celule: semnalizatoare, respectiv tinta, spre
deosebire de primele 3 cai , unde semnalizarea se face prin molecule secretate de celula
semnalizatoare)
Raspunsul celular in urma fenomenului de semnalizare determina unul din trei efecte:
1. Supravietuire
2. Proliferare
3. Moarte celulara programata=apoptoza(apare fie in lipsa oricarui semnal, fie in prezenta unor
semnale specifice)
Indiferent de raspunsul celular determinat, se definesc patru etape ale procesului de semnalizare celulara:
1. Initierea semnalizarii prin legarea ligandului de receptor ( prin interactiuni specifice de o mare
afinitate)
2. Transductia semnalului si activarea receptorului( aceasta etapa presupune modificari
conformationale la nivelul moleculei receptorului, datorate interactiunii cu ligandul)
3. Activarea efectorului si amplificarea semnalului
4. Atenuarea semnalului si desensibilizarea celulei ( aceasta etapa presupune inactivarea efectorilor
si desfacerea ligandului de receptor, prin degradarea ligandului sau prin lizarea moleculelor
activatoare, de ex scindarea GTP la GDP)
14
receptor la cortizol
receptor la estrogeni
receptor la progesteron
receptor la vitamina D
In stare inactiva, in citosol, inainte de a interactiona cu ligandul, receptorul este cuplat la un complex
proteic inhibitor. In aceasta stare complexata, inactiva, receptorul are mascate situl de legare la ADN si
domeniul de activare a transcrierii. Dupa legarea ligandului, receptorul se desprinde de complexul de
inactivare si este translocat in nucleu unde, datorita expunerii locului de legare la ADN, se atasaza in zone
favorabile activarii genei a carei transcriere este determinata , iar procesul de transcriere este declansat.
15
efector sunt variate, si depind de tipul de ligand, tipul de receptor , si mai ales de tipul de proteina G
heterotrimerica asociata.
Mesagerul prim , adica, subunitate alfa cu GTP, poate determina din partea efectorului, in functie de tipul
ligandului, un raspuns inhibat sau excitat. Dupa terminarea rolului de mesager prim, subunitatea alfa
hidrolizeaza GTP-ul inapoi la GDP, se dezataseaza de efector, si se reataseaza proteinei G heterotrimerice
de care apartine.
Un exemplu de receptor ce functioneaza cuplat cu proteine G heterotrimerice ar fi cel al receptorilor
adrenergici. Adrenalina este ligandul, se leaga la receptor-> modificari conformationale-> fosforilarea
GDP la GTP , detasarea subunitatii alfa, care se leaga de efectorul ADENILAT CICLAZA ,o enzima
proteica ce catalizeaza reactia de formare a mesagerului secund AMP ciclic, din ATP.
Hormonii care activeaza adenilat ciclaza sunt reprezentati de glucagon, adrenalina(prin receptorii beta1 si
beta2), ACTH, parathormon , acestia legandu-se de receptorii legati de proteine G heterotrimerice de tip
stimulator.
Hormonii care inhiba adenilat ciclaza sunt adrenalina(legata prin receptori alfa2) si somatostatina.
Presupunand o activare a adenilat ciclazei A , aceasta va sintetiza AMP ciclic, mesager secund ce va
migra mai departe si va interactiona cu o alta proteina, numita protein-kinaza A.
Toate protein-kinaza au o structura ce contine un cap si 2 cozi. Fiecare coada are cate o subunitate
reglatoare si cate o subunitate catalitica.Atata timp cat subunitatea reglatoare si cea catalitica sunt
amandoua anexate cozii, protein-kinaza A este inactiva.
In schimb, la interactiunea cu AMP ciclic, subunitatile catalitice disociaza in citosol, ele fiind
responsabile de efectele adrenalinei, in acest caz.
Regulatori negativi ai proteinelor G
1) Presupunand o proteina G heterotrimerica ramasa activa in mod anormal, ramasa deci fara subunitate
alfa pentru o perioada mare de timp, si deci aflata in plin proces de semnalizare, rezulta ca , receptorul va
avea atasate doar subunitatile beta si gama. Acestea, in lipsa subunitatii alfa, ataseaza o alta proteina
numita beta-adrenergic receptor kinase(BARK), care va fosforila proteina G.
Regiunile fosforilate anterior de BARK vor atrage alte proteine, numite BETA-ARRESTINS , care vor
trage intreg complexul receptor-subunitati beta-gama in interiorul celulei, astfel inactivandu-l, prin
scoaterea din contact cu moleculele ligand, care se gasesc in afara celulei.
2) Un alt regulator negativ este proteina fosfodiesteraza, care are o abordare ceva mai putin radicala decat
beta-arrestins, contracarand practic actiunea adenilat ciclazei, adica, transformand AMPciclic, aflat in
cantitati mari in celula in urma activitatii prelungite a lantului de semnalizare pornti de la proteina G,
inapoi in AMP aciclic.
Cofeina este un inhibitor al fosfodiesterazei, ducand deci la prezenta in organism a cantitati crescute de
AMP-ciclic, lucru ce confera senzatia specifica de energie.
16
17
Acest efect al NO asupra vaselor sanguine explica mecanismul de actiune al ntiroglicerinei, utilizata de
peste 100 de ani in tratamentul anginei pectorale, fiind convertita la NO pentru a relaxa vasele sanguine
din inima, asigurand cresterea fluxului sangvin spre muschiul cardiac.
Alte roluri ale NO:
este produs ca mediator local de catre neutrofilele si macrofagele activate pentru a ucide
microorganismele invadatoare
eliberat de nervii autonomi din penis, determinand dilatarea locala a vaselor sanguine
responsabile pentru erectie
transport pasiv
transport activ
Transportul pasiv este numit si transport disipativ, de la procesul de difuziune= trecerea de substanta de la
concentratie mare la concentratie mica.
Unele molecule mici pot strabate membrana celulara strecurandu-se printre lipidele membranare. Astfel
de molecule sunt moleculele nepolare=hidrofobe(O2, N2, CO2, NO, CO, eter etilic, benzen), dar si
moleculele polare mici(sub 100 Da), precum apa, etanol, uree, glicerina. Acest tip de transport este numit
difuzie simpla.
Pentru moleculele polare mari (100-800 Da), dar si pentru ioni, transportul prin membrana se face doar
prin implicarea de proteine transmembranare, ce poarta in acest caz denumirea de transportori(pentru
molecule polare mari: glucoza, aminoacizi, nucleotide) sau canale ionice(pt ioni: H,Na, HCO3, K, Ca2+,
Cl-, Mg2+). Transportul pasiv prin transportori sau prin canale ionice se numeste si difuzie facilitata.
In functie de numarul tipurilor de substante transportate simultan, difuzia facilitata poate fi clasificata in:
Ca exemplu de transport uniport, amintim transportorul de glucoza din mb eritrocitara GLUT1, o proteina
multipas de 45 kDa, cu 12 treceri in alfa-helix prin planul membranei. In mb eritrocitara exista peste 200
000 de molecule de transportor GLUT1 pentru o celula. GlUT1 face parte dintr-o familie de transportori
de glucoza cu 14 membri ( GLUT1 -14), toti cu cate 12 treceri in alfa-helix prin planul membranei si cu
capetele N- si C- terminale in endodomeniu.
18
Trecerea apei printr-o membrana poarta denumirea de osmoza. Apa poate trece prin mb celulara atat prin
dufuzie simpla, cat si prin difuzie facilitata, prin complexe proteice transmembranare cu numele de
aquaporine, prin care apa poate trece in ambele sensuri, depinzand de presiunile coloid-osmotice existente
de cele doua parti ale membranei.
JAK 1
JAK 2
JAK 3
Tyk 2
JAK's se fosforileaza intre ele, precum si fosforileaza si astfel activeaza proteine numite STATs (signal
transducers and activators of transcription). Proteinele STAT sunt localizate in citosol si sunt gene
regulatorii latente, deoarece ele migreaza in nucleu si induc transcriere DOAR dupa ce sunt activate.
19
Mecanismul cailor JAK-STAT ( a se urmari desenul in paralel cu cititul , pentru o completa intelegere)
Receptorii pentru cytokine sunt dimeri sau trimeri stabil asociati cu 1 sau 2 din kinazele Janus cunoscute (
JAK1,JAK2,JAK3, Tyk 2) .
Legarea ligandului de tip cytokinic ( spre ex: gama interferon, alfa interferon, eritropoetina) produce
modificari conformationale, in sensul in care apropie intre ele kinazele Janus de pe fiecare monomer al
receptorului cytokinic. Astfel, JAK's se fosforileaza intre ele, sporindu-si reciproc activitatea. De
asemenea, JAK's fosforileaza resturi de tyrozina din structura receptorului, creand situsuri
fosfotyrozinice. Aici se
vor lega STAT's.
Dupa legarea proteinelor
STAT in situsurile
fosfotyrozinice, sunt si
ele la randul lor
fosforilate de JAK's =>
dezatasarea fiecarei
proteine STAT de pe
receptorul dimeric ,
urmand dimerizarea in
citosol a celor 2 STAT ,
prin intermediul
domeniilor SH2.
In aceasta forma,
dimerul STAT este
translocat in nucleu,
unde activeaza
transcrierea genica.
Ca mecanisme de
feedback/inhibitie,
trebuie precizat faptul ca
dimerii STAT pot activa
transcrierea unor gene ce codifica sinteza unor proteine inhibitorii ale caii in sine, prin desfosforilari fie
ale kinazelor Janus, fie ale dimerilor STAT.
Nota: Legarea cytokinei la receptor fie induce dimerizarea a 2 lanturi polipeptidice(monomeri) ale (ai)
receptorului, fie le orienteaza catre un dimer preformat. In orice sens, scopul este apropierea tyrozinkinazelor Janus pentru a se fosforila intre ele si a incepe intregul proces descris anterior.
In unele cazuri, putem vorbi si de alcatuirea unui trimer .
20
21
fosfolipide 70-75%
o fosfogliceride
PC
PE
PS
PI
PA
o fosfosfingozide
colesterol 20-25%
glicolipide 1-10%
Reamintim ca in poz 1 a glicerinei este de obicei esterificat un acid gras saturat(C14,C16,C18), iar in poz
2 se afla unul nesaturat(C18:1, C18:2, C18:3, C20:4) , putand exista multiple combinatii.
Proteinele din mb pot fi:
periferice(extrinseci)
o ectoproteine
o endoproteine
integrale(intrinseci)
o transmembranare
ectodomeniu
endodomeniu
domeniu transmembranar
o cufundate partial
Glucidele pot fi :
22
Diversitatea de molecule care organizeaza membranele celulare prezinta o permanenta dinamicitate, ceea
ce le confera un comportament fluid. Mai mult, miscarea componentelor lipidice si proteice se
realizeaza numai in planul membranei, fara rasturnari ale moleculelor care sa permita trecerea lipidelor
dintr-o foita a bistratului in cealalta, sau proteinelor sa isi treaca portiunile expuse la exterior catre
interior, sau invers. Aceste restrictii de mobilitate determina caracterul fluid manifestat bidimensional
al membranelor.
Lipidele membranare executa urmatoarele tipuri de miscari:
Intramoleculare(pe care lipidele le realizeaza in raport cu propria lor axa si greutate)
o de rotatie(109 rotatii/s)
o de flexie a cozilor hidrofobe(108 rotatii/s)
Intermoleculare
o de translatie(miscari ale lipidelor in planul membranei, unele pe langa altele- 107/s
schimbari de directie)
o flip-flop(miscari de trecere a lipidelor dintr-o foita a bistratului in cealalta, au o frecventa
foarte mica, practic nula, cu exceptia cazului membranei R.E)
Manifestarea bidimensionala a fluiditatii bistratului lipidic da mb celulare caracter de structura cu
proprietati mezomorfe, asemeni cristalelor lichide. Acest comportament mezomorf este accentuat si de
capacitatea lipidelor de a organiza microdomenii bogate-n sfingolipide, colesterol si anumite proteine
membranare=plute lipidice.
Modulatori ai fluiditatii:
1. Fizici : temperatura (d.p) si presiunea(i.p)
2. Chimici intrinseci : acizi grasi nesaturati(d.p) si colesterol (i.p)-->provoaca rigidizare
3. Chimice extrinseci (pot fi fiziologici, patologici sau terapeutici)
Fluiditatea mai este modulata si de componentele proteice si de glicocalix.
Miscarea bidimensionala asigura mentinerea asimetriei din organizarea membranei. Semnificatia
biologica a permanentei miscari a componentelor biochimice in membrana este aceea ce permite acestora
sa se asocieze intr-o diversitate de modalitati, pentru a indeplini o multitudine de activitati.
23
24
Regiunile fosforilate anterior de BARK vor atrage alte proteine, numite BETA-ARRESTINS, care vor
trage intreg complexul receptor-subunitati beta-gama in interiorul celulei, astfel inactivandu-l, prin
scoaterea din contact cu moleculele ligand, care se gasesc in afara celulei.
2) Un alt regulator negativ este proteina fosfodiesteraza, care are o abordare ceva mai putin radicala decat
beta-arrestins, contracarand practic actiunea adenilat ciclazei, adica, transformand AMPciclic, aflat in
cantitati mari in celula in urma activitatii prelungite a lantului de semnalizare pornti de la proteina G,
inapoi in AMP aciclic.
Cofeina este un inhibitor al fosfodiesterazei, ducand deci la prezenta in organism a cantitati crescute de
AMP-ciclic, lucru ce confera senzatia specifica de energie.
Activarea canalelor respecta un mecanism ciclic, care asigura inactivarea lor chiar in conditiile care au
determinat scaderea, deoarece pot prezenta trei stari:
starea inchisa, de repaus, in absenta stimulului
starea deschisa, care permite trecerea ionilor, dupa aparitia stimulului
starea inactiva, inchisa la prezenta prelungita a stimulului
Aceasta trecere intr-o stare refractara a canalelor ionice asigura mentinerea homeostaziei ionice
intracelulare in conditiile de persistenta a semnalelor, refacerea potentialului membranar, desprinderea
ligandului, si, eventual, metabolizarea sa, cu revenirea celulei la starea bazala=starea de neexcitatie, astfel
incat sa devina sensibila la o noua stimulare.
Exista si canale ionice ce functioneaza doar atata vreme cat sunt fosforilate. De asemenea, activitatea
canalelor ionice poate fi blocata reversibil sau ireversibil de substante inhibitoare(pot fi medicamente) sau
chiar de substante toxice, folosite de armata sau in atacuri teroriste.
25
Transportul activ reprezinta transportul prin membrana de molecule mici si/sau ioni impotriva
gradientelor de concentratie.
Transportul activ este realizat de biostructuri proteice, cu consum de energie, provenita din scindarea unor
molecule macroergice(de regula ATP), biostructuri proteice ce poarta denumirea de pompe.
Exemple:
Pompa de Na+/K+, numita de Na+/K+ ATP-aza:
27
Receptorii pentru liganzi hidrofili sunt cei mai numerosi, dintre ei facand parte si categoria receptorilor cu
activitate tirozin-kinazica.
Receptorii cu activitate tirozin-kinazica se caracterizeaza printr-o mare diversitate structurala acoperind
semnalizarea celulara prin cea mai mare parte a factorilor de crestere cunoscuti. Primul identificat a fost
receptorul la facotrul de crestere epidermal (EGF).
De regula, receptorii cu activitate tirozin-kinazica sunt proteine transmembranare unipas, tip I, care exista
ca monomeri in stare libera(exceptie fiind receptorul pt insulina, care e in stare de dimeri, uniti prin punte
sulfurica), iar dupa interactiunea cu ligandul dimerizeaza.
Domeniul transmembranar e structurat in alfa-helix. O trasatura comuna la nivelul portiunii citosolice este
reprezentata de o zona cu activitate tirozin-kinazica. Ectodomeniul contine capatul N-terminal si este
glicozilat.
Mecanismul de principiu prin care acesti receptori functioneaza ar putea fi sintetizat prin :
1. Legarea ligandului, ce produce activarea domeniului catalitic de la nivelul portiunii
citoplasmatice, cat si dimerizarea receptorilor datorita modificarilor conformationale pe care le
induce
2. Activarea si dimerizarea realizeaza conditiile unor autofosforilari incrucisate la multiple tirozine
ale domeniilor citosolice ale receptorului
3. Atragerea si interactiunea cu efectori ce contin domenii SH2
4. Activarea efectorilor legati prin SH2
Exemple de efectori care respecta mecanismul de mai sus:
1.Fosfolipaza C-gama, cu 2 domenii SH2, iar dupa activare, declanseaza cascada fosfoinozitidelor(la fel
ca si in cazul receptorilor cuplati cu proteine G heterotrimerice)
2. Fosfatidilinozitol 3'-kinaza (PI3K), tot cu 2 domenii SH2, contribuie dupa activare la formarea unor
derivati de fosfatidilinozitoli
3.Proteine care activeaza GTP-azele mici = GAP (GTP-ase-activating protein)
Proteinele GAP sunt proteine monomerice cu o masa moleculara in jur de 25 kDa care au proprietatea de
a lega GTP pe care il hidrolizeaza . Proteinele GAP sunt activate cat timp contin GTP si se inactiveaza
dupa hidroliza sa.
28
Datorita acestei capacitati de a trece ciclic din din stare activa in stare inactiva sunt cunoscute si sub
numele de comutatori moleculari.
Cand nu este nevoie de fucntia lor, proteinele GAP se gasesc in citosol complexate cu o proteina
inhibitoare numita inhibitor de disociere a guanozin-nucleotidului=GDI.
Unul din rolurile proteinelor GAP este acela de a participa la controlul corectitudinii traficului structurilor
membranare in celula(de ex traficul dintre reticulul endoplasmic si aparatul Golgi).
Pinocitoza este divers din punct de vedere al mecanismelor prin care se realizeaza. O prima forma este
pinocitoza constitutiva, ce presupune preluarea in vezicule de endocitoza a unor volume de lichid
extracelular cu tot ceea ce contine acesta.
Pinocitoza mediata de receptori, numita uzual endocitoza mediata de receptori, este un termen introdus in
1976 de Goldstein si Brown, preocupati de metabolizarea LDL (low-density-lipoprotein).
Prin acest proces, sunt internalizate de catre celula liganzi care mai intai sunt recunoscuti si legati de
receptori specifici de pe suprafata celulei. Dupa interactiunea ligand-receptor, complexele receptor-ligand
sutn adunate in adancituri ale membranei tapetate pe fata interna cu un complex de endoproteine a carui
componenta de baza este clatrina. Aceste microdomenii adancite sunt denumite structuri cu invelis si ele
se formeaza permanent , aglomerand fie receptorii in asteptarea liganzilor, fie complexele ligand-receptor,
dupa formare.
Pe masura ce receptorii expusi la suprafata celulelor sau complexele ligand-receptor se aglomereaza in
microdomeniul corespunzator al membranei, in invelisul de clatrina se formeaza adancitura membranei,
care creste pana la definitivarea formei sale sferice si desprinderea de membrana la nivelul careia s-a
format, sub forma unei vezicule cu invelis.
Deci, rolul clatrinei este acela de a aglomera complexele ligand-receptor in zona membranara destinata
endocitarii si de a controla adancirea microdomeniului membranar, care devine structura cu invelis, si
formarea veziculei cu invelis. Acest rol are la baza capacitatea clatrinei de a se asambla in trimeri numiti
trischelioni, care mai departe pot forma ochiuri hexagonale si pentagonale , ducand la formarea veziculei
propriu-zise. Trimerizarea clatrinei la trischelioni si inretelarea acestora se realizeaza prin participarea
unor molecule proteice ajutatoare= proteine adaptor (AP).
Invelisul de clatrina al veziculelor de endocitoza mediata se dezasambleaza imediat dupa desprinderea
veziculei de membrana celulara, devenind endosom, care se transforma adesea in lizosom prin fuzionarea
cu organitul preexistent in celula.
Deci, acest tip de transport cu membrana este unul concentrativ, spre deosebire de pinocitoza
constitutiva. Ligandul este introdus in celula la o concentratie mai mare decat cea in care el se afla in
mediu, intrucat este acumulat si concentrat la nvielul structurii de invelis prin complexele receptor-ligand.
29
Destinatia materialului endocitat depinde de tipul de substanta. LDL se elibereaza in endozom si este
directionat catre lizozomi, in timp ce receptorul este reciclat la suprafata cellei pentru un nou ciclu de
endocitoza.
dependenta de clatrina
independenta de clatrina
o dependenta de caveolina
o independenta de caveolina
30
OBLIGATORIU : cele doua membrane celulare , care se pot aseza fie la 2 nm una fata de
cealalta(in acest caz , jonctiunea se numeste heptalaminata), fie isi pot suprapune straturile
externe proteice, excluzand astfel spatiul extracelular ( in acest caz, jonctiunea se numeste
pentalaminata)
Siruri de "proteine gemene" = Occludine : sunt proteine integrale, care se asaza cate doua fata
in fata => o structura de fermoar pe frontul extracelular ; In grosimea membranei, proteinele
gemene realizeaza o retea cu ochiuri mai mult sau mai putin regulate. Cu cat sunt mai regulate, cu
atat jonctiunea este mai putin extensibila, mai rigida. Daca ochiurile sunt largi si neregulate,
jonctiunea este foarte flexibila;
Componenta citoscheletica = microfilamentele de actina , aici ancorandu-se proteinele gemene
Inele de fuziune, alcatuite din fosfolipide ale foitei externe, ce participa si ele la ocluzionarea
spatiului extracelular
32
Inainte de a le descrie pe fiecare in parte, sa stabilim un schelet structural comun, pe baza caruia vom
descrie toate jonctiunile de atasare ( atat cele pe microfilamente de actina, cat si cele pe filamente
intermediare,abordate in subiectul urmator) :
In general, jonctiunile de atasare prezinta o organizare structurala comuna:
1. Cele doua mb atasate / mb atasata la substrat , aflate la o distanta cuprinsa intre 15-30 nm ,
aceasta fiind o distanta relativ mare, ce nu afecteaza transportul de markeri in spatiul extracelular
2. Proteina transmembranara linker, ce va stabili pe frontul extracelular legaturi
homofilice/heterofilice ( in functie de tipul de proteina) , iar pe frontul intracelular se va atasa la
3. Complexul proteic de atasare la citoschelet, care leaga proteina linker la
4. Elementul de citoschelet ( reprezentat fie de microfilamente de actina, fie de filamente
intermediare, in fucntie de tipul de jonctiune de atasare)
Revenind putin la proteinele transmembranare linker, acestea pot fi dintre urmatoarele:
Jonctiunea focala
1. Mb celulara atasata la substrat = FIBRONECTINA , situate la 15 nm distanta
2. Proteina transmembranara linker = INTEGRINA , care este chiar receptorul specific pentru
fibronectina ( integrina leaga fibronectina extracelular,stabilind legaturi HETEROFILICE, iar
intracelular se leaga la
3. Complexul proteic de atasare la citoschelet reprezentat aici de TALINA + VINCULINA
33
*A se vedea scheletul structural comun pe baza caruia descriem toate jonctiunile de atasare, prezentat la
inceputul subiectului precedent.
Desmozomul=Macula Adherens
1. Cele doua mb atasate la 30 nm una fata de cealalta
2. Proteina transmembrana linker = CADHERINA (realizeaza legaturi de tip HOMOFILIC pe
frontul extracelular)
3. Complexul proteic de atasare la citoschelet formeaza placa desmozomala si este alcatuit din :
desmoplachina, desmoglobina, desmocalmina, desmoyokina si plakoglobina
4. Elementul de citoschelet este reprezentat de filamentele intermediare( in celulele epiteliale,
filamentele intermediare sunt alcatuite din citokeratine, formand tonofilamente)
Desmozomul este localizat sub Zonula Adherens ( in cadrul Complexelor Jonctionale) , precum si in
portiunile orizontale ale discurilor intercalare, alaturi de Zonula Adherens si de filamentele intermediare
de desmina.
Hemidesmozomul
1. Mb celulara atasata la substrat = membrana bazala, situate la 15-20 nm
2. Proteina transmembranara linker= INTEGRINA
3. Complex proteic de atasare la citoschelet formeaza placa desmozomala, fiind asezat pe frontul
citoplasmatic al jonctiunii
4. Elementul de citoschelet : filamente intermediare organizate sub forma de tonofilamente
Hemidesmozomii determina rigiditate si rezistenta crescute.
TIP : Ca proteine transmembranare linker, CADHERINELE apar mereu in cazul jonctiunilor de atasare
celula-celula, iar INTEGRINELE apar mereu in cazul jonctiunilor de atasare celula-substrat
34
La mamifere exista 6 tipuri diferite de actina: 4 alfa actine, o actina beta si o actina gamma. Actinele alfa
sunt intalnite in celulele musculare, iar celelalte doua in celulele nemusculare.
Monomerul de actina globulara G are 375 reziduuri de AA si o greutate de 43 kDa. Fiecare monomer de
actina G globulara prezinta situsuri de legare ce mediaza interactiunea cap-coada cu alti doi monomeri, a.i
este posibila polimerizarea si formarea de actina F(polimerizata, filamentoasa).
Fiecare monomer este rotit cu 166 grade in cadrul filamentului, acesta fiind motivul pt care actina F se
constituie ca un dublu helix. Deoarece toti monomerii sunt orientati in aceeasi directie, filamentul de
actina are o polaritate distincta si doua capete (+ si -), diferite unul de celalalt. Aceasta polaritate a
filamentelor de actina este importanta atat in asamblarea, cat si in stabilirea unei directii unice a miscarii
relative a miozinei in raport cu actina.
Prima treapta a polimerizarii actinei este numita nucleatie si consta in formarea unor agregate mici,
alcatuite din trei monomeri de actina G. Filamentele de actina pot in urmatoarea etapa sa creasca prin
aditie reversibila de monomeri la ambele capete(+. -).
Monomerii de actina leaga de asemenea ATP, care este hidrolizat la ADP, urmand asamblarea
filamentelor. Cu toate ca polimerizarea nu solicita ATP, monomerii de actina care leaga ATP
polimerizeaza mult mai repede decat aceia care leaga ADP.
Deoarece polimerizarea este reversibila, filamentele se pot scurta prin disocierea subunitatilor de actina,
depolimerizand cand este necesar. De aceea, exista un aparent echilibru intre forma G si forma F de
actina, care depinde de concentratia monomerilor liberi. Rata cu care monomerii de actina sunt
incorporati in filamentele de actina este d.p cu concentratia lor la nivelul citosolului.
Se numeste concentratie critica de monomeri de actina, concentratia la care rata de polimerizare in
filamente este egala cu rata de disociere. La aceasta concentratie critica, monomerii si filamentele sunt
aparent in echilibru.
Cele doua capete ale filamentelor de actina cresc cu rate diferite: monomerii de actina sunt fixati mai
rapid la capatul +, decat la capatul -. Deoarece actina legata de ATP disociaza mai lent decat actina legata
de ADP, aceasta duce la o diferente de concentratii critice de monomeri necesari pentru polimerizarea la
ambele capete. Aceasta diferenta este exprimata in fenomenul de Treadmilling, ce ilustreaza dinamica
filamentelor de actina. Deoarece ADP-actina disociaza mai rapid din filamentul de actina decat ATPactina, concentratia critica a monomerilor de actina este mai mare pentru aditia la capatul - decat la
capatul + . In aceste conditii, exista o disociere neta de monomeri legati de ADP de la capatul -, balansat
de o aditie de monomeri ATP la capatul plus.
Pentru ca sistemul sa functioneze, concentratia monomerilor de actina trebuie sa fie intermediara intre
concentratia critica ceruta de polimerizarea la capatul + si cea ceruta de capatul -. Deci, exista o pierdere
neta de monomeri, de la capatul -.
Droguri ce se leaga de actina si afecteaza polimerizarea:
Atat asamblarea, cat si dezasamblarea actinei sunt influentate de proteinele asociate actinei.
35
bandelete
retea
36
fodrine
filamina
disforina( legata de maladiile Duchenne/Becker, datorate fie lipsei disforinei fie inlocuirii ei cu o
proteina anormala)
Fiecare lant greu are cate o portiune globulara si cate o portiune alfa helicoidala. Portiunea alfa
helicoidala a unui lant greu se spiralizeaza in jurul portiunii alfa helicoidale a celuilalt lant greu si dau
nastere unui dimer ce formeaza bastonasul moleculei de miozina.
Cele doua capete globulare ale moleculei de miozina au fiecare atasat cate doua lanturi usoare.
Filamentul gros de miozina este format din cateva sute de molecula de miozina. Capetele globulare ale
moleculei de miozina formeaza puntile de legatura intre filamentele groase si cele subtiri.
Orientarea moleculelor de miozina in cadrul filamentului gros este cu capetele alfa helicoidale catre
membrana si cu capetele globulare de-a lungul filamentelor de actina in drectia capatului +.
Odata cu legarea filamentelor de actina, molecula de miozina leaga si hidrolizeaza ATP-ul, ceea ce
faciliteaza alunecarea filamentelor.
Exista si miozine necontractile. Acestea nu sunt organizate in filamente si de aceea nu sunt implicate in
contractie. Pot fi implicate in transportul celular.
In celulele nemusculare, miozina formeaza fibrele de stress si centurile de aderenta.
37
PROFILINA si GELSOLINA se lega de fosfatidilinozitoli, iar acest lucru, cuplat cu reglarea Ca2+
dependenta, arata legatura dintre semnalele extracelulare si citoscheletul de actina.
Droguri ce se leaga de actina si afecteaza polimerizarea:
38
In alte tipuri celulare decat heatia, legarea citoscheletului cortical este similara si realizata prin proteine
spectrin-like, reprezentate de:
fodrine
filamina
disforina( legata de maladiile Duchenne/Becker, datorate fie lipsei disforinei fie inlocuirii ei cu o
proteina anormala)
Fiecare miofibrila e organizata din unitati contractile numite sarcomere, ce sunt responsabile de striatiile
transversale.
Sarcomerele au cca 2 microni lungime, contin mai multe regiune distincte, decelate de microscopul
electronic. La capetele unui sarcomer se afla membrane Z. In fiecare sarcomer , banda intunecata=discul
anizotrop se dispune intre doua jumatati de discuri clare=discuri izotrope. Benzile clare corespund
absentei filamentelor de miozina.
Banda I contien numai filamente subtiri de actina, in timp ce banda A contine filamente de miozina si de
actina. Filamentele de actina si de miozina alterneaza in regiunea periferica a discului A, in timp ce in
partea centrala se gaseste zona H unde exista numai filamente de miozina.
Filamentele de actina sunt atasate cu capetele+ la mb Z, ce includ si alfa-actinina, proteina de linkare.
Filamentele de miozina sunt legate de membranele M din mijlocul zonei H luminoase.
La formarea si stabilizarea sarcomerului mai contribuie doua proteine aditionale:
Titina ( se intinde de la mb M la mb Z)
Nebulina (se asociaza actinei, stabilizand lungimea filamentului de actina)
In timpul contractiei, fiecare sarcomer se scurteaza, apropiindu-se intre ele mb Z. Nu exista nicio
modificare a discului A. Datorita scurtarii, atat discurile I cat si zona H aproape dispar, si aceasta se
datoreaza alunecarii filamentelor de actina printre cele de miozina.
http://www.youtube.com/watch?v=P1zD_MpTo0M
39
40
Miscarea cililor si a flagelilor reprezinat alunecarea relativa a dubletelor de microtubuli unele fata de
altele sub actiunea dineinei. Miscarea capetelor de dineina in directia + catre -, determina ca microtubulul
dintr-un dublet sa alunece spre capatul bazal al microtubulului adiacent. Deoarece dubletele de
microtubuli sunt conectate prin nexina, alunecarea unui dublet in raport cu altul determina inclinarea si
indoirea lor.
Cilii se gasesc in special in mucoasa uterina si in epiteliul olfactiv.
Microvilii sunt extensii permanente, digitiforme, abundente la celulele epiteliale implicate in absorbtie.
Pe suprafata apicala a enterocitelor formeaza marginea in perie, alcauita din aprox. 1000 microvili ce
maresc de 10-20 ori suprafata de absorbtie.
Microvilii contin 20-30 filamente de actina paralele legate transversal si foarte strans prin fimbrina sau
vilina. Extremitatea + este legata de o proteina de acoperire, iar cea - este ancorata intr-o retea terminala
formata din spectrina. Miscarile sunt datorate interactiunii dintre actina si miozina din reteaua terminala.
Stereocilii sunt forme specializate de microvili din celulele auditive, care detecteaza vibratiile sonore.
45.Microtubuli
Sunt formatiuni cilindrice cu diametrul de 25 nm si reprezinta a treia componenta principala a
citoscheletului.
Ca si filamentele de actina, microtubulii sunt structuri dinamice, ce se asambleaza si se dezasambleaza
continuu la nivelul celulei. Au rol in mentinerea formei celulare, in locomotia celulara, in transportul
intracelular de organite si in separarea cromozomilor in mitoza.
Microtubulii sunt alcatuiti dintr-un singur tip de proteina numita tubulina, un dimer alcauit dintr-o
subunitate alfa si una beta. Exista si o gamma tubulina, localizata in special in centrozom, cu rol in
initierea asamblarii microtubulilor.
Dimerii de tubulina vor polimeriza pentru a forma microtubulii, care, in general, sunt alcatuiti din 13
protofilamente asamblate in jurul unui spatiu central. Protofilamentele, alcauite dintr-un aranjament capcoada al dimerilor de tubulina, sunt dispuse paralel la nivelul microtubulilor.
La fel ca filamentele de actina, microtubulii sunt structuri polare cu doua capete distincte: capatul + cu o
crestere rapida si capatul + cu o crestere incetinita. Polaritatea este importanta in determinarea directiei de
miscare de-a lungul microtubulului, exact cum polaritatea filamentului de actina determina directia de
miscare a miozinei. Dimerii de tubulina se pot depolimeriza la fel de repede cum se pot polimeriza, iar
microtubulii pot avea cicluri rapide de asamblare si dezasamblare.
Atat alfa, cat si beta tubulina leaga GTP, care functioneaza analog ATP-ului in cazul actinei. GTP-ul legat
de beta tubulina este hidrolizat la GDP urmand depolimerizarea.
Astfel, se poate vorbi de acelasi comportament de treadmilling (moleculele legate de GTP sunt permanent
pierdute de capetele - si sunt inlocuite prin aditie de molecule de tubulina legate de GTP la capatul + al
aceluiasi microtubul). Turnoverul de reinnoire este rapid, de cateva minute, si este foarte important pentru
remodelarea citoscheletului din timpul mitozei.
41
Din cauza rolului central al microtubulilor in mitoza, drogurile ce afecteaza asamblarea microtubulilor
sunt utilizate in tratamentul cancerului( ex: Colchicina se leaga de tubulina si inhiba polimerizarea
tubulinei, blocand mitoza, deci inhiband diviziunea celulara). La fel si Taxolul, Vincristina, Vinblastina.
Motorul microtubulilor si miscarile
Microtubulii sunt responsabili de diferite tipuri de miscari, incluzand: transportul celular, pozitionarea
membranelor veziculare si a organitelor, separarea cromozomilor in mitoza, bataia cililor si a flagelilor.
Miscarea de-a lungul microtubulilor este bazata pe existenta unei proteine motor ce utilzieaza energia
derivata din hidroliza ATP-ului.
Exista doua familii de astfel de proteine:
kinezinele
dineinele
Kinezinele si dineinele sunt proteine distincte ce se misca de-a lungul microtubulilor in directii opuse:
kinezina de la capatul - la capatul + , si dineina de la capatul + la capatul -.
Am stabilit ca kinezina se misca de la capatul - la capatul +. Capatul + este dispus , la axon, catre butonul
terminal, deci, kinezina are rol in transportul veziculelor si organitelor celulare dinspre corpul axonal.
Prin cristalografie cu raze X s-a stabilit ca atat kinezina, cat si miozina utilieaza mecanisme moleculare
identice pt cuplarea si hidroliza ATP-ului.
Kinezinele si dineinele au structuri pe baza de lanturi grele si usoare. Lanturile grele formeaza domenii
globulare ce leaga ATP-ul si ele sunt responsabile de deplasarea de-a lungul microtubulilor.
42
43
Se gasesc in citoplasma(citosol)
Pot apare singuri sau in grupuri sub forma de poliribozomi sau polisomi(atasi de un ARNm)
Sunt mai numerosi in celulele implicate in sitneza proteinelor solubile in citoplasma sau care
formeaza structuri citoplasmatice importante sau elemente motile
Ribozomii atasati:
30S la PK
40S la EK
Sub mari:
44
50S la PK
60S la EK
Biogeneza ribozomilor
Biogeneza ribozomilor are loc in citoplasma si in nucleol si implica functionarea coordonata a peste 200
de proteine si procesarea celor 4 ARNr cat si asamblarea acestora cu RNP.
RNP sunt sintetizate in citoplasma in vecinatatea nucleului. Componentele proteice ale subunitatilor mare
si mica sunt importate in nuclei prin porii nucleari cu diametru de 120nm. Prin porii nucleari sunt
importate prin transport activ peste 560 000 RNP/minut. ARNr este transcris cu viteza foarte mare in
nucleol aici gasindu-se toate cele 45 de gene care codifica ARNr. Dupa aceea, este asamblat cu
subunitatile ribozomale si este exportat prin porii nucleari in citoplasma.
Sinteza aminoacil-ARNt
Initierea sintezei lantului polipeptidic
Elongarea lantului polipeptidic
Incheierea sintezei lantului polipeptidic
1. Sinteza aminoacil-ARNt
Se realizeaza de catre aminoacil-ARNt sintetaze - 20 de enzime ce recunosc specific cei 20 de AA si
anticodonii asociati lor.
Practic, aminoacil-ARNt realizeaza legatura dintre secventa codonilor din ARNm si structura primara a
proteinelor.
45
1.
2.
3.
http://www.youtube.com/watch?v=Ikq9AcBcohA
46
** In abordarea acestui subiect se va discuta despre lantul respirator( vezi functiile mb mitocondriale
interne , printre ultimele subiecte) , este bine sa mentionezi si de glicoliza anaeroba, metabolizarea
acizilor grasi ( vezi tot la mitocondrie).
***Asistenta de biocel LP a precizat ca mai multe informatii se vor afla la biochimia de sem 2 ( acest
document a fost creat pe sem 1).
Sinteza aminoacil-ARNt
Initierea sintezei lantului polipeptidic
Elongarea lantului polipeptidic
Incheierea sintezei lantului polipeptidic
1. Sinteza aminoacil-ARNt
Se realizeaza de catre aminoacil-ARNt sintetaze - 20 de enzime ce recunosc specific cei 20 de AA si
anticodonii asociati lor.
Practic, aminoacil-ARNt realizeaza legatura dintre secventa codonilor din ARNm si structura primara a
proteinelor.
Situsurile de legare ARN ale ribozomului sunt:
4.
5.
6.
http://www.youtube.com/watch?v=Ikq9AcBcohA
47
Incepe cand ARNt-dipeptidil este transferat din situsul A in situsul P, proces care va continua pe toata
lungimea ARNm.
Intotdeauna in situsul A se va alinia un alt codon care va fi recunoscut de anticodonul corespunzator din
ARNt si care va lega un nou AA la catena polipeptidica.
48
Intrucat lumenul RE este echivalentul spatiului extracelular, inseamna ca aici sunt prezente conditii
oxidante, lucru ce favorizeaza realizarea de punti disulfurice.
Intrucat in structura cuaternara a proteinelor, puntile disulfurice nu se stabilesc neaparat intre doua
Cysteine in succesiunea-n care apar ele in secventa primara, ci dimpotriva, la distanta ( de multe ori chiar
intre regiuni aflate una la capatul N-terminal, alta la cel C-terminal), realizarea acestor legaturi trebuie
foarte bine controlata.
Acest lucru se face prin asistarea prin intermediul enzimei protein disulfura izomeraza, care desface
puntile incorecte din proteinele a caror traducere s-a terminat si ajuta la realizarea puntilor -S-S- corecte.
Necesarul de saperone este asigurat prin mecanisme de semnalizare initiate in lumenul RE , in urma caror
rezulta formarea de ARNm , ce permite la randul sau formarea de proteine de reglare a exprimarii genice.
Acestea, prin activitate endonucleazica, prelucreaza un pre-ARNm deja existent in citoplasma, rezultand
un ARNm functional. Acesta este cel folosit pentru producerea de saperone !!
Noile saperone astfel sintetizate asigura satisfacerea nevoii crescute de molecule de asistare-n lumenul
RE, eficientizand astfel procesele.
49
particula miez, formata din 4 inele suprapuse , fiecare alcatuit din sapte proteine protomerice, din
care: doua sunt inele beta centrale cu activitate treonin-proteazica si doua sunt inele alfa, fara
activitate catalitica cunoscuta
doua particule reglatoare identice, cate una la fiecare capat al particulei miez. Fiecare particula
reglatoare are in structura sa 14 proteine diferite de cele din particula miez, sase dintre ele fiind
ATP-aze. Unele dintre subunitatile particulei reglatoare au situsuri ce permit recunoasterea
ubiquitinei
Degradarea proteinelor este esentiala pentru celula doarece asigura aminoacizi pentru o noua sinteza
proteica, indeparteaza enzimele aflate in exces si indeparteaza factorii de transcriptie care nu mai sunt
necesari.
Proteazomii sunt responsabili de digestia proteinelor endogene: factori de transcriere, cicline ale ciclului
celular, proteine codificate de virusuri, proteine incorect pliate sau degradate.
Degradarea proteinelor mediata de ubiquitina
Pentru descrierea caii de degradare proteica mediata de ubiquitina s-a primit premiul Nobel in 2004.
Digestia proteica incepe cand proteinei ce urmeaza a fi digerate i se ataseaza un mic polipeptid numit
ubiquitina (Ub), o proteina globulara de 76 AA. Proteinele destinate procesului de degradare sunt
conjuate cu ubiquitina care se leaga de capatul N-terminal al unui reziduu de lizina, urmand apoi atasarea
altor molecule de Ub, cu formarea unui lant.
Atasarea Ub la proteina este influentata de 3 enzime:
E1 (enzima de activare)- modifica Ub in asa fel incat Gly din capatul C-terminal sa reactioneze cu
Lys de pe proteina destinata degradarii
E2 (enzima de conjuare a Ub, atasand-o la proteina)
E3 - are rol in recunoasterea proteinei substrat
Legarea ubiquitinei reprezinta semnalul care permite proteinei sa intre in complexul proteazomic.
In cazul in care fragmentele de peptide de 8-10 AA nu sunt degradate, ele pot fi transporate in RE de catre
un transportor asociat cu complexul de prezentare a antigenelor, urmand a fi prezentate sistemului imun
ca potentiale antigene.
50
Calea de degradare proteazomica este esentiala pentru numeroase procese celulare, inclusiv raspunsul din
stresul oxidativ, reglarea transcriptiei, rol in elongare.
Blocarea digestiei intracelulare la nivelul proteazomilor poate ajuta la protejarea celulei. Blocarea
degradarii se face cu inhibitori proteazomici , precum Bortezomib, uitilizat in tratamentul mielomului
multiplu, o boala cu niveluri ridicate de proteazomi. Medicamentul blocheaza actiunea proteolitica a
proteazomului si inhiba ciclinele stopand diviziunea haotica a celulelor canceroase.
tranzitoriu (ex: in celula hepatica postprandial, sub forma de picaturi lipidice izolate,
proportionale ca numar cu cantitatea de lipide ingerate, sunt repede metabolizate si dispar din
citoplasma la doar cateva ore dupa ingestie)
temporar(ex: in celulele secretorii din glanda mamara in lactatie, dispar dupa terminarea perioadei
de lactatie)
permanent( in adipocite - albe sau brune)
Adipocitele albe formeaza tesutul adipos alb, au forma rotunjita sau poligonala, cand sunt grupate.
Incluziunea lipidica este unica si ocupa intreaga citoplasma care este impinsa spre periferia celulei,
predominant in jurul nucleului. Aceste celule au rol in metabolismul lipidic, de protectie a principalelor
organe si in termogeneza la nivelul tegumentului.
Adipocitele brune formeaza tesutul adipos brun, bine dezvoltat la nou-nacsut si in copilarie si care apoi
involueaza. La adult persista in regiunea interscapulara si inghinal.
Patologic, se pot observa numeroase incluziuni lipidice in hepatocite la alcoolici.
Aspecte in microscopie
MO prezinta un aspect clar pe preparatele standard (Alb in HE, Rosu in Sudan IV)
ME aspect electronoclar
MET aspect electronodens (nu atat de inchis precum melaninele)
51
Lipofuscina
Hemosiderina
Patologic, pigmenti biliari pot apare sub forme de bilirubina in celulele Kupfer sau chiar in hepatocite.
52
Lizozomii sunt delimitati de o membrana de natura fosfolipidca si contin enzime hidrolitice implicate in
degradarea tuturor tipurilor de polimeri biologici: proteine-proteaze, lipide-lipaze, acizi nucleici-nucleare,
carbohidrati-glicozidaze, toate active in mediu acid.
Membrana lizozomilor detine componenti unici care asigura rezistenta la actiunea hidrolazelor. Cele mai
multe proteine lizozomale membranare implicate in asigurarea functiei lizozomilor sunt inalt
glicozilate(cu cat este mai mare procentul de carbohidrati al unei proteine, cu atat este mai greu digerata).
Lizozomii prezinta deci o membrana lizozomala lipoproteica, mozaicata, asimetrica si asemanatoare cu
plasmalema , precum si o matrice lizozomala fin granulata ( poate fi omogena sau eterogena).
Originea si formarea lizozomilor
Lizozomii se formeaza in aparatul Golgi. Proteinele membranei lizozomale sunt sintetizate in RE si
transportate apoi la aparatul Golgi pentru o glicozilare extensiva.
Complexul Golgi sorteaza in regiunea trans enzimele primite de la RE prin regiunea cis. In aceasta
regiune, precursorului hidrolazelor lizozomale i se ataseaza , sub actiunae unor glicotransferaze, un
radical fosfat la reziduul de manoza. Gruparea manozo-6 fosfat formeaza semnalul de sortare -> enzime e
transportata de ap. Golgi spre regiunea trans unde se leaga de receptori de manozo 6-fosfat, care
diretioneaza enzimele spre lizozomi.
Dupa legare, incepe formarea unei vezicule care se acopera cu clatrina, se desprinde si va fuziona cu
lizozomul in formare. Lizozomul are pe suprafata o pompa protonica cu rol de acidifiere a interiorului,
ducand la indepartarea gruparii fosfat si la disocierea hidrolazei de pe receptor. Receptorul va fi reciclat
inapoi in ap. Golgi .
Intre trans-Golgi si lizozom exista un compartiment intermediar, cu rol in formarea lizozomala.
Tipuri de lizozomi
Lizozomi secretori
Lizozomi conventionali
Lizozomii secretori sunt gasiti in celule ale sistemului imun derivate din linia hematopoietica(ex:
limfocitele T).
Lizozomii secretori sunt o combinatie intre lizozomii conventionali si granulele secretorii. Ei difera de
lizozomii conventionali deoarece contin produsul de secretie specific tipului celular in care se afla.
Evident, lizozomii secretori contin si hidrolazele si proteinele membranare si au aceleasi facilitati in
mentinerea pH-ului, ca si lizozomii conventionali.
Lizozomii secretori maturi se deplaseaza pana in vecinatatea membranei plasmatice, unde raman in
standby cu secretiile pregatite, gata de a fi eliberate. Cand limfocitul T, spre exemplu, este perfect orientat
catre celula tinta, secretiile sunt eliberate, iar factori de mediu activeaza secretiile inainte ca acestea sa
actioneze.
Lizozomii conventionali
Lizozomii sunt considerati ca organite refolosibile si cand celula se divide fiecare celula fiica primeste un
anumit numar de lizozomi.
53
Ipotezele referitoare la modul de actiune al lizozomilor sunt centrate pe studiul endozomilor primari si
secundari. Exista dovezi care arata ca:
1. sediul proteolizei nu este in lizozomi, ci intr-un organit care seamana cu un endozom secundar si
contine 20% hidrolaze
2. lizozomii contin aproximativ 80% din enzimele necesare digestiei intracelulare
3. lizozomii sunt probabil organite care stocheaza hidrolaze, pe care le tin intr-o forma inactiva la un
ph de aprox. 5
4. lizozomii nu actioneaza ca organtie de sine statatoare, ci se intalnesc cu endozomii secundari si
actioneaza ca un sistem endolizozomal
Exista doua modele de interactiune intre lizozomi si endozomi.
Modelul "Kiss and run" : acest model este bazat pe un scurt contact intre endozomul secundar si
lizozom, pentru a schimba intre ei continutul chimic ; dupa separare, lizozomul este liber de a interactiona
cu un alt endozom secundar
Modelul de fuziune: acest model sustine fuziunea completa dintre un endozom secundar si un lizozom,
rezultand un organit hibrid. In timpul fuziunii are loc dezasamblarea moleculara a continutului endocitat,
iar aminoacizii si alte molecule rezultate sunt preluate de transportori si trec din organitul hibrid in
citoplasma. Dupa aceste procese de dezasamblare si reciclare, continutul organitului hibrid se
condenseaza, iar lizozomul se reformeaza, fiind disponibil pentru o noua fuziune.
Modelul maturarii - un endozom primar este format din vezicule cu originea in membrana
plasmatica, ce fuzionaza intre ele; alte vezicule aduc si preiau substante chimice pana cand
endozomul primar devine endozom secundar si apoi atinge stadiul de lizozom
Modelul transportului vezicular - endozomii primari si secundari sunt organite separate si
stabile legate prin vezicule care transporta substanta de la endozomii primari spre cei secundari ,
care se matureaza pentru a deveni lipozomi
Digestia lizozomala
Materialele cu care intra in contact lizozomii necesita procese de dezasamblare si reciclare ce pot provine
din surse extra si intracelulare :
1. Procesele de endocitoza, inclusiv pinocitoza, prin care sunt introduse lichide si mici particule
datorita formarii unor mici invaginari membranare acoperite de proteine, care vor forma in final
vezicule acoperite de proteine(clatrina, coatomer si caveolina). Fiecare vezicula se dezvolta
formand un endozom primar = early endosome si apoi un endozom secundare = late endosome
2. Tot extracelular, prin fagocitoza se pot introduce particule mari, inclusiv bacterii si detritusuri
celulare. Fagocitoza poate avea loc in orice celula, dar este specifica macrofagelor, care contin
peste 1000 de lizozomi. Structura rezultata in urma fagocitozei se numeste fagozom.
3. Sursele intracelulare sunt reprezentate de autofagozomi responsabili de indepartarea unor organite
degradate precum mitocondriile sau ribozomii. Fiecare organit a carui viata a expirat este
inconjurat de o structura membranara formand un autofagozom care fuzioneaza cu lizozomul
pentru a forma un organit hibrid.
54
Lizozomi secretori
Lizozomi conventionali
Lizozomii secretori sunt gasiti in celule ale sistemului imun derivate din linia hematopoietica(ex:
limfocitele T).
Lizozomii secretori sunt o combinatie intre lizozomii conventionali si granulele secretorii. Ei difera de
lizozomii conventionali deoarece contin produsul de secretie specific tipului celular in care se afla.
Evident, lizozomii secretori contin si hidrolazele si proteinele membranare si au aceleasi facilitati in
mentinerea pH-ului, ca si lizozomii conventionali.
Lizozomii secretori maturi se deplaseaza pana in vecinatatea membranei plasmatice, unde raman in
standby cu secretiile pregatite, gata de a fi eliberate. Cand limfocitul T, spre exemplu, este perfect orientat
catre celula tinta, secretiile sunt eliberate, iar factori de mediu activeaza secretiile inainte ca acestea sa
actioneze.
Lizozomii conventionali
Lizozomii sunt considerati ca organite refolosibile si cand celula se divide fiecare celula fiica primeste un
anumit numar de lizozomi.
Ipotezele referitoare la modul de actiune al lizozomilor sunt centrate pe studiul endozomilor primari si
secundari. Exista dovezi care arata ca:
5. sediul proteolizei nu este in lizozomi, ci intr-un organit care seamana cu un endozom secundar si
contine 20% hidrolaze
6. lizozomii contin aproximativ 80% din enzimele necesare digestiei intracelulare
55
7. lizozomii sunt probabil organite care stocheaza hidrolaze, pe care le tin intr-o forma inactiva la un
ph de aprox. 5
8. lizozomii nu actioneaza ca organtie de sine statatoare, ci se intalnesc cu endozomii secundari si
actioneaza ca un sistem endolizozomal
Exista doua modele de interactiune intre lizozomi si endozomi.
Modelul "Kiss and run" : acest model este bazat pe un scurt contact intre endozomul secundar si
lizozom, pentru a schimba intre ei continutul chimic ; dupa separare, lizozomul este liber de a interactiona
cu un alt endozom secundar
Modelul de fuziune: acest model sustine fuziunea completa dintre un endozom secundar si un lizozom,
rezultand un organit hibrid. In timpul fuziunii are loc dezasamblarea moleculara a continutului endocitat,
iar aminoacizii si alte molecule rezultate sunt preluate de transportori si trec din organitul hibrid in
citoplasma. Dupa aceste procese de dezasamblare si reciclare, continutul organitului hibrid se
condenseaza, iar lizozomul se reformeaza, fiind disponibil pentru o noua fuziune.
Modelul maturarii - un endozom primar este format din vezicule cu originea in membrana
plasmatica, ce fuzionaza intre ele; alte vezicule aduc si preiau substante chimice pana cand
endozomul primar devine endozom secundar si apoi atinge stadiul de lizozom
Modelul transportului vezicular - endozomii primari si secundari sunt organite separate si
stabile legate prin vezicule care transporta substanta de la endozomii primari spre cei secundari ,
care se matureaza pentru a deveni lipozomi
Digestia lizozomala
Materialele cu care intra in contact lizozomii necesita procese de dezasamblare si reciclare ce pot provine
din surse extra si intracelulare :
4. Procesele de endocitoza, inclusiv pinocitoza, prin care sunt introduse lichide si mici particule
datorita formarii unor mici invaginari membranare acoperite de proteine, care vor forma in final
vezicule acoperite de proteine(clatrina, coatomer si caveolina). Fiecare vezicula se dezvolta
formand un endozom primar = early endosome si apoi un endozom secundare = late endosome
5. Tot extracelular, prin fagocitoza se pot introduce particule mari, inclusiv bacterii si detritusuri
celulare. Fagocitoza poate avea loc in orice celula, dar este specifica macrofagelor, care contin
peste 1000 de lizozomi. Structura rezultata in urma fagocitozei se numeste fagozom.
6. Sursele intracelulare sunt reprezentate de autofagozomi responsabili de indepartarea unor organite
degradate precum mitocondriile sau ribozomii. Fiecare organit a carui viata a expirat este
inconjurat de o structura membranara formand un autofagozom care fuzioneaza cu lizozomul
pentru a forma un organit hibrid.
56
57
Proteinele matrice peroxizomale sunt codificate de gene aflate in nucleu si sintetizate pe ribozomii liberi,
apoi importate post-translational in citoplasma. Proteinele specifice peroxizomilor au 2 peptide semnal
care directioneaza aceste proteine spre matricea peroxizomala, numite PTS1 si PTS2 ( peroxisomal
targeting signal).
Importul proteinelor matricei peroxizomale implica legarea ligandului la receptor( receptorii sunt
peroxine, liganzii sunt PTS-uri), apoi urmeaza transportul proteinelor in peroxizom, andocarea
receptorilor in interiorul peroxizomului, iar apoi reciclarea acestor receptori .
Procesul de import al proteinelor matricei peroxizomale este ATP-dependent.
Functii
Peroxizomii sunt sediul principal al utilizarii oxigenului.Sunt organite mici, sferice, delimitate de
endomembrane, gasite in majoritatea celulelor EK . Initial au fost numiti microcorpi, iar numele de
peroxizomi provine de la continutul crescut in oxidaze, care produc peroxidul de hidrogen, toxic pentru
celule.
RH2 + O2 -----> R + H2O2
Catalaza, enzima marker a peroxizomilor, degradeaza peroxidul de hidrogen in oxigen si apa.
Peroxizomii sunt esentiali pentru ca o celula sa functioneze normal, deoarece:
intervin in oxidarea excesului de acizi grasi cu lant lung de atomi de carbon => fragmente cu 2
atomi de carbon care sunt fie convertite la acetil coenzima A, fie sunt exportate si folosite la noi
sinteze de compusi celulari
descompun purinele AMP si GMP la acid uric + aminoacizi
produc si exporta in citoplasma colesterol
contin primele 2 enzime necesare sintezei plasmalogenilor(un grup important de fosfolipide), care
reprezinta 19% din fosfolipidele organismului
Peroxizomii fac parte din categoria organitelor semiautonome, alaturi de mitocondrie si cloroplaste.
Organitele celulare semiautonome sunt definite ca organitele aflate in relatie de simbioza cu celula,
capabile de autoreplicare prin fisiune binara.
Astfel, peroxizomii sunt capabili de a se divide desi nu poseda material genetic. Proliferarea peroxizomala
este practic o adaptare la stimuli de mediu ce semnalizeaza necesitatea unor enzime lizozomale.
Inducerea proliferarii se face in 2 faze:
1. Proliferarea prin inmugurire din peroxizomii preexistenti
2. Cresterea organitului prin importarea de proteine ale matrice peroxizomale
58
functie de baza este aceea de a produce molecule si macromolecule esentiale organizarii si functionarii
celulelor.
RE face parte din grupul organitelor implicate in biogeneza si traficul intracelular al membranelor, alaturi
de ap. Golgi, lizozomi si de sistemul endosomal, fiind cel care initiaza procesele celulare care se
desfasoara in aceste organite.
RE reprezinta cea mai abundenta structura delimitata de endomembrane din celula, continand mai multe
de jumatate din membranele acesteia.
Detalii structurale asupra organizarii RE au fost obtinute prin microscopie electronica. Organitul este
structurat pe baza unor endomembrane sub forma de cisterne ce prezinta numeroase anastomoze si tubuli
legati. Spatiul din interiorul membranelor este denumit lumen. Lumenul RE este continuu intre cisterne si
tubuli, iar la nivelul cisternelor se realizeaza anastomoze si cu anvelopa nucleara. Se realizeaza astfel o
continuitate intre lumenul RE si lumenul anvelopei nucleare.
De regula, zonele structurate sub forma de cisterne prezinta ribozomi atasati pe fata citoplasmatica a
organitului, care dau aspectul rugos acestor arii ; ele structureaza ceea ce a fost denumit RER . Ribozomii
sunt prezenti si pe fata citoplasmatica a membranei externe a anvelopei nucleare.
Zonele structurate sub forma de tubuli, care sunt ca niste prelungiri ale cisternelor RER, nu prezinta
rugozitati si au fost denumite reticul endoplasmic neted (REN).
Deci, RER si REN nu sunt doua organite independente ci zone diferit organizate la nivel ultrastructural al
aceluiasi organit: RE .
62. Mecanismul prin care lantul polipeptidic este transferat din citosol in RE
Biosinteza tuturor proteinelor intr-o celula se initiaza in citosol, exceptie facand proteinele codificate de
ADN-ul mitocondrial.
Se pune problema care dintre complexele de biosinteza proteica(polisomi) trebuie sa fie preluate la
nivelul membranei sale. Informatia prin care se face selectia se afla in insusi lantul polipeptidic in
formare. Ea este o secventa compacta de 15-30 AA preponderent hidrofobi denumita secventa semnal.
De regula, secventa semnal este asociata capatului amino-terminal al proteinelor in cauza.
Desi necesara prezenta secventei semnal, aceasta nu este suficienta, intrucat nu are un receptor
corespunzator in membrana RE. In procesul de recrutare a polisomilor care au produs peptida esmnal in
proteina a carei sinteza o desfasoara, intervine un alt complex macromolecular ribonucleoproteic, denumit
particula de recunoastere a semnalului (SRP - Signal Recognition Particle). Aceasta contine o
molecula mica de ARN, complexata polipeptidic, rezultand o forma de bastonas.
Acest complex structureaza la un capat un sit de interactiune cu peptida semnal din lantul polipeptidic si
la celalalt capat un domeniu de legare la situl A al ribosomului. Dupa legarea la ribosom, adiacent
situsului de interactiune cu peptida semnal, SRP expune situsul de legare la receptorul specific din
membrana RE , si anumte receptorul la SRP ( SRPR = SRP receptor).
In aceasta conjunctura, poliribosomul este recrutat de membrana RE.
59
Dupa legarea complexului ribosom operational - lant polipeptidic in sinteza cu particula de recunoastele
semnal, receptorul din membrana RE preda intreaga masinarie unui alt complex macromolecular, de
aceasta data, transmembranar din membrana RE, complex denumit translocon.
Transloconul este astfel organizat incat structureaza pe de o parte un sit de acomodare a peptidei semnal
hidrofobe, iar pe de alta parte, un por hidrofil, prin care este translocat lantul peptidic in lumenul RE, pe
masura alungirii sale.
Din momentul in care transloconul preia ribosomul, SRP este eliberata in citosol, iar sinteza poate
continua.
Pe scurt, etapele descrise ar fi:
1. Initierea sintezei proteice in citosol
2. Aparitia peptidei semnal
3. Recunoasterea peptidei semnal de SRP, interactiunea dintre ele, blocarea sintezei prin ocuparea
sitului A
4. Legarea complexului macromolecular astfel format la SRPR din membrana RE
5. Interactiunea dintre SRPR si translocon cu transferul complexului, legarea ribosomului si
deblocarea sintezei proteice prin eliberarea SRP in citosol
6. Translocarea lantului polipeptidic, pe masura ce se alungeste, prin membrana RE
60
61
calnexina
protein disulfura izomeraza (leaga tranzitoriu cisteinele din proteina sintetizata, sau desface
puntile incorecte din proteinele a caror traducere s-a terminal si ajuta la realizarea puntilor -S-Scorecte)
BiP ( Binding Protein) - saperona cu cea mai larga sfera de actiune care se pare ca ar fi
responsabla si pentru controlul deschiderii si inchdierii porului transloconului, ea complexeaza
noile proteine translocate si nu le elibereaza decat atunci cand impachetarea lor este corect
definitivata; mai mult, daca proteina esuaza in adoptarea conformatiei corecte, BiP o conduce la
translocon, care expulzeaza lantul polipeptidic "gresit" in citosol, unde este poliubiquitinilat si
intra in proces de degradare proteolitica in protasom, organitul de degradare a proteinelor
citosolice
62
Componenta lipida membranara este formata insa in principal din glicerofosfatide(70%). Spre exemplu,
fosfatidilcolinele sunt biositnetizate in foita interna a membranei RE( lucru valabil si pentru celelelate
glicerofosfatide) din acil-CoA si glicerol-3-fosfat, printr-o secventa de 3 reactii:
1. Obtinerea acidului fosfatidic din acil-CoA si glicerol-3-fosfat( la niv. foitei interne)
2. Eliminarea fosfatului din acidul fosfatidic sub actiunea fosfatidil-fosfatazei => DAG(tot la niv.
foitei interne)
3. Adaugarea fosfo-colinei la hidroxilul DAG
Atat CoA, cat si fosfatul transforma moleculele atat acizii grasi, cat si glicerina, in in compusi pentru care
membrana celulara nu este permeabila, astfel reticulul neputandu-le pierde prin membrana, prin difuzie.
Se mai pune si intrebarea este de ce este sintetizata fosfatidilcolina la nivelul foitei interne, daca ea trebuie
sa ajunga la foita externa? Redistribuirea ei se face prin complexe macromoleculare de translocare
numite generic flipaze, care maresc de 100 000 de ori frecventa miscarii de flip-flop la nivelul membranei
RE ( exceptia de la flip-flop ). Exista 3 categorii de flipaze:
Deci, pentru PC exista in mb RE o flopaza care o translocheaza preferential din foia interna in cea
externa.
Un alt aspect interesant este faptul ca celula nu este nevoita sa sintetizeze fosfolipide de novo, atunci cand
proportia dintre diferitele tipuri trebuie sa se schimbe la nivelul bistratului. Fosfolipidele pot suferi reactii
de disproportionare, adica acele reactii prin care ele pot trece dintr-una in alta. Posibilitatile de
disproportionare nu sunt nici universale, nici intotdeauna bidirectionale.
Sunt cunoscute urmatoarele posibilitati de disproportionare:
La nivelul RE:
1. PE - PC ( prin reactie de metilare - fosfatidiletanolamin-N-metil-transferaza)
2. posibilitati de conversie in ambele sensuri intre PC, PE si PS prin reactii de schimb la nivelul
capului hidrofil
La nivelul mitocondriei: PS - PE (prin decarboxilare, sub actiunea fosfatidilserin-decarboxilazei)
Distribuirea lipidelor nou sintetizate catre celelalte membrane din celule este considerate a se face prin
difuzie laterala pentru anvelopa nucleara, sau constitutiv(adica de la sine) pentur organitele implicate in
traficul intracelular al membranelor ( aparat Golgi, lizosomi, endosomi, membrana celulara).
Pentru organitele dinafara acestui trafic, asa-numitele organite autonome(mitocondrie, peroxisomi), exista
parerea ca distributia se face prin transportori de schimb fosfolipidic. Acesti transportori ar avea
specificitate pentru structura capului hidrofil si ar extrage fosfolipidele din membrana RE, le-ar transporta
prin citosol, ascunzand coada hidrofoba a acestora si cedandu-le membranelor tinta.
In ceea ce priveste peroxisomul insa, studii recente legate de biosinteza organitului, dovedesc prezenta
unor structuri microveziculare care fac transport de la RE catre acesta - prin peroxine.
63
producerea trigliceridelor
desaturarea acizilor grasi prin citocromul b5 si acid gras desaturaze
Deci, traficul dintre RE si complexul Golgi este o parte a procesului de biogeneza a membranelor.
Dar membranele trebuie sa ajunga si acolo unde sunt menite sa functioneze( adica la diversele organite,
sau in membrana celulara). Pentru acest lucru, este nevoie de continuarea traseului noilor membrane intrun mod directionat si riguros controlat de celula. Numai dupa ce membranele produse de novo ajung la
destinatie, procesul biogenezei lor se poate considera incheiat, incepand un altul, acela de reciclare.
Asadar, prin biogeneza membranelor trebuie sa intelegem totalitatea proceselor de biosinteza si maturarea
a componentelor acestora, de asamblare corecta a lor in noua structura si de transportare a lor in locurile
corespunzatoare din celula. Aceste procese nu se petrec neaparat secvential ci amalgamat, astfel incat
ultimele "retusuri" se pot petrece chiar la ajungerea noilor structuri la destinatie.
Deci, RE este un organit ubicuitar. Rolul sau in biogeneza membranelor in face indispensabil organizarii
si functionarii celulelor. Chiar si in cazul eritrocitului(lipsit de organite), RE a fost prezent si a activat in
timpul diferentierii precursorilor, pana in momentul maturarii elementului circulant.
Daca, de regula, RE contine cel putin jumatate din membranele dintr-o celula, raportul dintre componenta
rugoasa si cea neteda variaza in functie de tipul de celula. Exista celule in care RER este preponderent (
celule specializate in sinteza si secretia de proteine, ex: celulele acinare pancreatice), sau celule in care
REN este preponderent( celule specializate in sinteza si secretia de hormoni steroidici , ex: celulele
Leydig din testicul).
Un alt caz ar fi cel in care raportul RER/REN este echilibrat ( la hepatocite).
64
Distributia intracelulara a RE acesta poate fi difuza ( hepatocite), sau polarizata, cum este in cazul
celulelor acinare pancreatice, unde RER este localizat in jumatatea bazala a celulelor, popul apical al
acestora fiind ocupat de vacuolele de secretie.
Ultrastructura
Complexul Golgi este structurat ca o stiva de cisterne recurbate. Numar cisternelor este variabil, diferind
de la un tip de celula la altul.
Dispozitia si numarul cisternelor aparatului Golgi diferita in functie de tipul celular si, implicit, de
activitatea de sinteza a proteinelor destinate ciclului secretor.
In celulele EK, ap Golgi este format din mai multe astfel de stive, unite prin tubuli inretelati care
formeaza o panglica in vecinatea nucleului, in zona pericentrozomala . Aparatul Golgi este o structura
caracterizata ultrasturctural prin polaritate morfologica, dar si prin polaritate biochimica.
Se definesc in cazul RE urmatoarele caracteristici ultrastructurale:
65
o fata convexa, numita si fata cis , orientata catre cisterne ale RE , din care inmuguresc vezicule
o fata concava, numita si fata trans
retea trans-Golgi, un sistem de vezicule/vacuole , tubuli inretelati si fragmente de cisterne din
care rezulta macrovezicule ce for fi trimise catre destinatiile lor finale; aceasta retea este in
continuarea fetei trans
Intre reteaua trans-Golgi si sistemul endosomal se descrie de asemenea un sistem de recirculare a unor
vezicule de transport, denumit compartiment de reciclare endosomal.
In ceea ce priveste stiva de cisterne, se opereaza cu notiunile : cisterne cis, cisterne mediene si cisterne
trans, dupa cum acestea sunt orientate catre fata cis-Golgi , catre fata trans-Golgi, sau sunt asezate in zona
din mijloc a stivei.
Morfologic, polaritatea se poate evidentia atat intre cisterne(cisternele cis au lumenul mai subtire, cele
trans mai gros) , cat si in cadrul cisternelor( mai efilate central si mai ingrosate limitrof).
Pentru a ne completa imaginea in spatiu a morfologiei complexului Golgi, este bine sa specificam faptul
ca cisternele trebuie vazute ca imbracand un sector de sfera. Desi corespondenta dintre polaritatea
morfologica si cea biochimia a fost dovedita intre cisterne, nu acelasi lucru s-a intamplat si in ceea ce
priveste polaritatea din cadrul aceleiasi cisterne. Nu exista, in momentul de fata, dovezi cum ca intre
zonele mediene ale cisternelor , mai subtiri, si cele limitrofe, mai gonflate, ar exista diferente de
molecularitate.
Dimpotriva, s-a evidentiat ca moleculele si/sau macromoleculele din cisternele golgiene difuzeaza fara
restrictii in planul membranelor fiecarei cisterne.
Din punct de vedere al structurii biochimice, la nivelul aparatului Golgi se descriu doua tipuri de proteine:
66
o fata convexa, numita si fata cis , orientata catre cisterne ale RE , din care inmuguresc vezicule
Intre reteaua trans-Golgi si sistemul endosomal se descrie de asemenea un sistem de recirculare a unor
vezicule de transport, denumit compartiment de reciclare endosomal.
In ceea ce priveste stiva de cisterne, se opereaza cu notiunile : cisterne cis, cisterne mediene si cisterne
trans, dupa cum acestea sunt orientate catre fata cis-Golgi , catre fata trans-Golgi, sau sunt asezate in zona
din mijloc a stivei.
Morfologic, polaritatea se poate evidentia atat intre cisterne(cisternele cis au lumenul mai subtire, cele
trans mai gros) , cat si in cadrul cisternelor( mai efilate central si mai ingrosate limitrof).
Pentru a ne completa imaginea in spatiu a morfologiei complexului Golgi, este bine sa specificam faptul
ca cisternele trebuie vazute ca imbracand un sector de sfera. Desi corespondenta dintre polaritatea
morfologica si cea biochimia a fost dovedita intre cisterne, nu acelasi lucru s-a intamplat si in ceea ce
priveste polaritatea din cadrul aceleiasi cisterne. Nu exista, in momentul de fata, dovezi cum ca intre
zonele mediene ale cisternelor , mai subtiri, si cele limitrofe, mai gonflate, ar exista diferente de
molecularitate.
Dimpotriva, s-a evidentiat ca moleculele si/sau macromoleculele din cisternele golgiene difuzeaza fara
restrictii in planul membranelor fiecarei cisterne.
Din punct de vedere al structurii biochimice, la nivelul aparatului Golgi se descriu doua tipuri de proteine:
67
68
glucozamine impreuna cu un fosfat. Se formeaza in acest fel un precursor al etichetei finale M6P.
Specificitatea interactiunii dintre viitoarea enzima lizosomala si N-acetil-glucozaminil-fosfotransferaza
este asigurata de un semnal conformational.
Legat de a doua etapa a marcarii, nu este clar unde are loc, dar consta in prelucrarea ulterioara a etichetei
la forma ei finala. Cert este insa faptul ca in reteaua trans-Golgi capacul de N-acetil-glucozamina nu mai
mascheaza eticheta M6P, care devina functionala si este folosita in procesele de sortare, segregare si
producere a lizosomilor primari.
Dovedirea importantei M6P in biogeneza lizosomilor s-a facut prin folosirea culturilor de celule ce
prezentau boala incluziilor celulare. Aceste celule prezentau un defect structural necunoscut, prin care
enzimele in loc sa fie directionate la lizosomi, ajungeau sa fie exocitate, iar defectul era de fapt la nivelul
etichetarii cu M6P.
2. Sortarea are la baza interactiunae M6P cu un receptor specific transmembranar ( receptorul la M6P).
Acesta din urma este, la randul sau, folosit pentru segregarea si aglomerarea componentelor lizosomale la
nivelul unor structuri cu invelis de clatrina din reteaua trans-Golgi. Acestea evagineaza din structurile
trans-Golgiene si se desprind, pierzandu-si invelisul de clatrina si devenind lizosomi primari.
In etapa urmatoare, lizosomii primari fuzioneaza fie cu endosomi tarzii, preducand lizosomi secundari, fie
cu lizosomi secundari preexistenti, pentru a le spori bagajul de enzime cu componente proaspete.
Biogeneza lizosomilor se sfarseste cu procesele de reciclare a componentelor membranare implicate in
sortare, segreare, veziculare si transport directionat al lizosomilor primari.
O ultima nota: in ciuda faptului ca enzimele lizosomale sunt functionale deja in reteaua trans-Golgi,
enzimele lizosomale nu pot activa aici deoarece pH-ul in lumenul structurii , este cu cel putin o unitate
mai ridicat decat in lizosom ( desi tot acid, este putin mai acid).
Toate aceste procese nu se intampla neaparat in aceasta ordine, ci, de regula, ele se intrepatrund, astfel ca
este nevoie de un bine elaborat, controlat si reglat trafic de membrane.
Traficul RE-Golgi
69
De exemplu, in cazul insulinei, maturarea presupune eliminarea mai multor fragmente din lantul
polipeptidic initial, unic.
Pre pro-insulina inseamna lantul ce contine peptida semnal necesara translocarii prin membrane RE.
Pro- insulina reprezinta lantul proteic fara peptida semnal, eliminata de semnal-peptidaza.
Asadar, pre-pro-insulina ar fi precursorul inserat in membrana RE, iar pro-insulina (forma cu existenta
reala) este proteina solubila, libera in lumenul RE, respectiv in lumenul cisternelor golgiene.
Insulina matura se produce in granula de secretie prin eliminarea proteolitica a unei secvente din centrul
lantului polipeptidic, astfel incat cele doua subunitati ale moleculei de insulina raman solidarizate, dar
prin doua punti disulfurice.
Asadar, continutul vacuolelor de secretie sufera un proces de condensare, ce consta in eliminarea apei din
lumen catre citosol.
70
Fenomenele par a se desfasura de la sine prin transport si fuziuni constitutive de membrane, desi in
momentul de fata se acumuleaza date ce indica faptul ca in situatiile patologice, fenomenele care in
situatii normale corespund secretiei constitutive, necesita amplificari care par a fi rezultator unor
fenomene de semnalizare in care capacitatea integrinelor de a semnaliza bidirectional devina activa.
Calea de secretie semnalizataeste, de regula, specifica celulelor specializate in secretie ( spre ex: celule
glandulare). Ea presupune exocitatea componentelor acumulate in vacuole de secretie, pe care celulele le
stocheaza pana la primirea unui semnal=stimul. Acest stimul instiinteaza ca organismul are nevoie de
substantele stocate in vederea secretiei ulterioare. Molecula mesager se leaga de un receptor specific din
membrana celulei secretoare si declanseaza mecanisme de semnalizare, al caror efect este inducerea
fuziunii membranei vacuolelor de secretie cu membrana celulara si exocitatea continutului. In multe
cazuri, fuziunea semnalizata a membranelor se datoreaza cresterii concentratiei de Ca2+ in citosol.
De mentionat ca, in unele situatii, completa maturarea a moleculelor secretate se petrece exact in
momentul exocitozei. Acesta este, de exemplu, cazul colagenului tip I a carui maturare finala inseamna
eliminarea, prin proteoliza, a unor fragmente din capetele pro-proteinei, eliminare care permite fibrilarea
moleculei. Daca maturarea s-ar produce in celula, colagenul ar forma fibre in structurile intracelulare,
afectand functionarea acesteia si inducand situatii patologice.
In concluzie, ciclul secretor(numit mai frecvent cale secretorie) implica atat cooperarea dintre RE ( la
nivelul caruia se sintetizeaza componentele moleculare destinate exportului) si aparatul Golgi (
raspunzator, de regula, de finalizarea maturari moleculelor de secretat, de sortarea, condensarea, si
formarea vacuolelor de secretie), cat si traficul membranar aferent acestor procese.
Totusi, termenul de ciclu secretor este oarecum impropriu, intrucat un ciclu implica reciclari ale unor
componente, lucru nu tocmai valabil in acest caz. Mai corect ar fi sa folosim notiunea de cale secretorie,
intrucat nu exista dovezi asupra reciclarii unor compomente implicate in mecanismele celulare ce
realizeaza procesul. Mai mult, pentru secretia constitutiva exista dovezi ca dinamica procesului implica
ajungerea veziculelor in imediata apropiere a membranei, unde, dupa o asteptare de 15-30 secunde,
fuzioneaza rapid.
In sfarsit, merita sa evidentiem aici ca pionierul deslusirii caii secretorii este G.E Palade, care, prin tehnici
de autoradiografie, adaptate ME, a aratat ca AA tritiati se regasesc la nivelul RE imediat dupa
administrarea lor celulelor pancreatice acinare, apar la nivelul ap. Golgi 20 minute mai tarziu si
marcheaza vacuolele secretorii=materialele exocitate, dupa 90 de minute de la administrare.
exocitoza constitutiva
exocitoza semnalizata (dependenta de cresterea concentratiei de Ca2+ din citoplasma in zona de
stocare a veziculelor de secretie)
Deci, unele produse destinate secretiei sunt eliminate din celula pe masura ce se formeaza veziculele
secretorii , iar acestea ajung la membrana celulara, unde are loc fuzionarea membranelor si secretia, prin
procese constitutive, care se desfasoara de la sine.Pe de alta parte, anumite componente produse in celula
sunt acumulate si stocate in zone juxtamembranare pana cand celula primeste un semnal care comanda
secretia lor= exocitoza semnalizata.
Mecanismul exocitozei presupune urmatoarele etape:
1. Transportul veziculelor de secretie din locul de formare in locul de stocare din apropierea
membranei la nivelul careia se face secretia, proces efectuat de asa-numitele motoare moleculare
2. Ancorarea veziculelor , prin factori de ancorare de natura proteica la o distanta de 25 nm de
membrana celulara
3. Acostarea veziculelor la mb celulara= aducerea lor la o distanta de 5-10 nm intre cele doua
membrane
4. Initierea veziculelor , care presupune o serie de evenimente legata de rearanjari dependente de
ATP si de Ca2+ ale proteinelor si lipidelor mb veziculare ( in exociotza constitutiva aceasta etapa
nu exista)
5. Fuzionarea veziculelor cu membrana celulara si expulzarea produsilor de secretie .
Fuzionarea este realizata de niste proteine numite abreviat SNARE , care sunt v-SNARE (in
membrana veziculelor), respectiv t-SNARE (in membrana tinta) . Se pare ca fuzionarea se face la
nivelul unor structuri preexistente in membrana tinta, care favorizeaza deschiderea veziculelor si
care au fost denumite porosomi.
73
In ambele situatii de dezechilibru alimentar amintite, celula incearca sa-si satisfaca, pe cai alternative,
nevoile energetice. Daca in conditii normale de metabolism energetic, fenomenele se desfasoara in
sensuri fiziologice, in situatiile extreme fenomenele pot devia catre patologic.
Ultrastructura
Organitului i se definesc patru elemente ultrastructurale, usor de evidentiat in preparatele standard de
microscopie electronica.
Pe preparatele electronomicroscopice, mitocondria se prezinta ca un organit invelit intr-o membrana
relativ bine intinsa, cu aspect trilaminat, denumita membrana mitocondriala externa. In interiorul
acesteia si separata de ea, se evidentiaza o a doua membrana, tot cu aspect trilaminat, care insa este
puternic faldurata, denumita membrana mitocondriala interna.
Faldurile membranei mitocondriale interne sunt denumite criste mitocondriale. Abundenta si forma
cristelor pot diferi de la un tip de celula la altul, insa forma lor, de regula, este aceea de falduri, orientate
perpendicular pe axxul lung al organitului. Cristele pot avea si aspect tubular(cu sectiune circulara sau
triunghiulara), cum este cazul celulelor secretoare de hormoni steroidici. Pot exista si creste orientate
paralel cu axul lung al organitului.
Indiferent de abundenta, forma sau orientarea lor, cristele sunt o caracteristica ultrastructurala specifica
membranei mitocondriale interne.
Matricea mitocondriala reprezinta cel mai complex compartiment, la nivelul sau gasindu-se un ADN
propriu, fara capete libere, numit si ADN circular. Matricea mitocondriala prezinta de asemenea ribosomi
mitocondriali.
Examinarea preparatelor in ME de inalt voltaj(tehnica ce permite analiza unor sectiune mai groase ale
preparatelor biologice) a evidentiat aspectul prelung, adesea ramificat al mitocondriilor, lucru ce
inseamna ca numarul mitocondriilor intr-o celula este mult mai mic decat am fi tentati sa credem din
examniarea preparatelor standard de microscopie electronica. Mitocondrii care se evidentiau independent
in unele sectiuni se dovedesc a se uni la nivelul altor sectiuni, care se dovedesc de fapt a fi parti
constitutive ale aceluiasi element celular.
74
F0 ATPaza
Aceste complexe proteice preiau electroni de la NADH, respectiv, FADH2 , si ii poarta printr-o
succesiune de centre oxido-reducatoare, saracindu-i trepat de energie, cedandu-i la sfarsit oigenului.
Acest intreg proces de transport si saracire in energie a electronilor este insotit de pomparea de protoni
din matrice catre compartimentul mitocondrial extern. Au capacitatea de a pompa protoni prin folosirea
energiei preluate de la electronii transportati doar 3 dintre cele 4 complexe proteice: I,III, IV .Complexele
lantului respirator capabile sa pompeze protoni se numesc complexe de conservare a energiei. Energia
este conservata sub forma unui gradient electrochimic generat la nivelul membranei mitocondriale
interne, prin aceasta pompare directionata de protoni.
Lantul respirator
In lantul respirator opereaza complexele I-IV, precum si doua componente de legatura: ubiquinona, care
face legatura intre complexele I-II-II, precum si citocromul c , care leaga complexele III-IV.
Deci: complex 1- ubiquinona-complex2 -ubiquinona-complex 3 - citocrom c- complex IV
Complexul I = complexul NADH- dehidrogenazei, este cel care introduce in sistem electronii preluati de
pe NADH. Este format din peste 40 de subunitati proteice, dintre care 7 sunt tipuri autonome <=> sunt
proteine codificate de ADN-ul mitocondrial propriu si sintetizate in matricea organitului, prin ribosomi
proprii.
Complexul 1 prezinta un centru flavinic si 7-8 centre fier-sulf, care prezinta cofactorii unor asa-numite
proteine fier-sulf, cu raport stoechiometric intre ionii de fier si cei de sulf unitar.
Complexul 1 preia deci electronii de pe NADH, ii saraceste in energie in mai multi pasi, prin trecerea lor
de la un centru oxido-reducator la altul, sfarsind prin a-i preda ubiquinonei, numita si coenzima Q( CoQ).
Energia preluata de la electronii transportati e folosita pentru pomparea de protoni din matricea
mitocondriala in spatiul intermembranar.
Complexul 2 = complexul succinat-dehidrogenazei, este singurul complex al lantului respirator ce nu
pompeaza protoni, desi prezinta un domeniu transmembranar. Contine 1 centru flavinig, si trei centre fiersulf(din care unul atipic 3Fe-4S), precum si un centru hemic.
Complexul 2 introduce in sistemul lantului respirator electronii preluati de la FADH2, a caror energie este
prea mare pentru a fi preluati la nivelul 1. Complexul 2 preda apoi electronii CoQ.
Complexul 3 = complexul citocromilor b-c1, este cel ma bine cunoscut. Contine mai multe subunitati
proteice, dintre care una autonoma, contine un centru fier-sulf, pe protene fier-sulf Rieske , 3 centre
hemice. Complexul 3 preia electronii de la ubiquinona, le reduce energia inc ateva trepte si ii transfera pe
citocromul c. Ca si in cazul complexului 1, energia preluata de la electronii transferati este folosita pentru
pomparea de protoni din matrice in compartimentul extern.
Complexul 3 opereaza ca dimer.
Complexul 4= complexul citocromilor a-a3 = complexul citocrom-oxidazei, este ultimul complex al
centrului respirator. Prezinta:
76
Complexul 4 preia deci electronii de la citocromul c(prin unul din centrii cuprici), ii saraceste de
energie(pompand pe baza energiei acumulate protoni), si ii insera pe oxigen , cu formare de apa.
Complexul 4 structureaza doua canale transmembranare prin care sunt pompati acesti protoni(cate un
proton pompat pentru fiecare electron transportat), canale denumite D, respectiv K, intrucat la nivelul lor
sunt conservati un rest aspartat, respectiv de lizina. In zona mediana transmembranara a canalului D se
afla un rest glumatat, cu rol esential in pomparea protonilor.
Evident, toate cele 3 complexe ale lantului transportor de electroni si care conserva energia preluata de la
electroni prin pomparea de protoni( este vorba de complexele I, III, IV) sunt transmembranare. Altfel, nu
ar fi posibila operarea lor ca pompe protonice.
ATP sintaza
Procesul fosforilarii oxidative se incheie cu producerea de ATP, lucru realizat de complexul V, denumit si
ATP sintaza. Acest complex are tot o pozitionare transmembranara si foloseste gradientul protonic creat
de lantul respirator, disipandu-l pentru a lega o grupare fosfat la ADP.
Complexul 5 actioneaza ca o turbina , actiunea sa fiind reversibila, el putand hidroliza ATP si pompa
protoni, in cazul in care gradientul se inverseaza(de unde si denumirea alternativa a complexului 5 de
F1F0ATP-aza).
ATP sintaza are arhitectura asemanatoare unui bat de toba, cu 3 parti componente: cap, gat trunchi. Capul
este sferic, voluminos, orientat spre matricea mitocondriala, iar trunchiul este constituit din portiunea
transmembranara a complexului, gatul facand legatura intre cele doua parti.
Componenta transmembranara= componenta F0
Cap si gat= componenta F1, componenta catalitica.
Complexul ATP are 16 proteine, din care 2 autonome. Capul si gatul ATP sintazei sunt formate din 5
subunitati notate simbolic alfa,beta, gama, sigma, epsilon in raport stoechiometric 3:3:1:1:1 . Capul e
alcatuit din 3 dimeri alfa-beta.
Componenta transmembranara, F0, structureaza un canal protonic prin care este disipat gradientul realizat
de lantul respirator. Fluxul protonic prin acest canal reprezinta forta motrice pentru producerea ATP din
ADP si fosfat.
Structura globulara a capului se roteste in raport cu portiunea transmembranara, rotirea implicand 3 pasi a
cate 120 de grade. In timpul acestei rotiri, cei trei heterodimeri alfabeta, care formeaza trei situri active ale
componentei catalitice, trec succesiv prin trei stari diferite: deschisa, laxa si stransa, corespunzand astfel:
1. Starea deschisa = lipsa nucleotidului si fosfatului in siturile de legare
2. Starea laxa: legarea ADP-ului si fosfatului
3. Starea stransa: legarea ATP-ului
Se pare ca , in aceste stari, se consuma energie doar pentru ocuparea siturilor cu ADP si fosfat respectiv
pentru eliberarea de ATP, nu si pentru formarea implicita a acestuia <=> legarea fosfatului la ADP.
Transportul metabolitilor
77
78
Prin actiunea monoamin-oxidazei sunt inactivate epinefrina, norepinefrina, dopamina, serotonina etc.
Produsii de dezaminare sunt apoi metabolizati la compusi care sunt excretati prin urina.
Spatiul intermembranar
Compartimentul mitocondrial extern poate fi considerat ca un compartiment tampon intre citosol si
mitoplast. La nivelul acestuia se creeaza practic un microclimat adecvat functionarii optime a
mitoplastului.
Intuim, rememorand cele mentionate asupra permeabilitatii membranei mitocondriale externe, ca la
nivelul compartimentului intermembranar nu exista diferente de concentratie fata de citosol in privinta
moleculelor de pana la 5000 de daltoni ( datorita porinelor, ce permit traficul lor practic nerestrictionat),
respectiv pentru ionii anorganici aflati liberi in citosol.
La nivelul acestui compartiment mitocodnrial se gasesc enzime care pregatesc o serie de metaboliti
energetici esentiali functionarii mitocondriei. Importanta sub acest aspect este prezenta adenilat-kinazei,
care transfera un rest fosfat de pe ATP pe AMP , conform reactiei:
ATP+AMP=2ADP
Semnificatia functionala este: se consuma o molecula de produs finit al functiei mitocodnriale = ATP,
pentru crearea a doua molecule de substrat, adica, se creeaza premizele obtinerii a doua molecule de ATP,
prin consumul uneia singure.
La nivelul acestui compartiment gasim si nucleozid-fosfokinaze : transforma nucleozidele in nucleotide,
creand premizele obtinerii unei diversitati de compusi macroergici.
79
respectiv, FADH2, care vor reprezenta donorii de electroni pentru lantul transportor de electroni, parte
integranta a procesului de fosforilare oxidativa ce are loc la nivelul membranei mitocondriale interne.
Desi este stabilita implicarea mitocondriei in procesele apoptotice, mecanismele prin care aceasta
controleaza apoptoza nu sunt inca pe deplin elucidate. Ceea ce se cunoaste cu certitudine sunt fapte care
evidentiaza participarea mitocondriei la procesele apoptotice prin participarea pe calea cascadei
caspazelor.Denumirea de caspaze vine de la : cysteinyl aspartate-specific proteases. Caspazele sunt
principalii efectori in moartea celulara programata.
Initial, s-a considerat ca mitocondriile raman neschimbate in timpul apoptozei. Acum, simt ca
mitocondria suferia modificari morfologice in apoptoza, iar cele mai frecvente anomalii constau in :
80
reducerea dimensiunilor
sporirea densitatii matricei = picnoza mitocondriala
Aceste condensari sunt confirmate ca evenimente timpurii in apoptoza. Mai mult , in apoptoza indusa prin
deprivarea de factor de creste neurala NGF, de la Nerve-Growth Factor , la neuornii simpatici, picnoza
mitocondriala este reversibila.
Daca in celulele normale mitocondriile sunt dispersate in toata celula, in celulele apoptotice ele se
redistribuie, aglomerandu-se perinuclear. Se pare ca acest lucru se datoreaza defectelor din relatia lor cu
kinezinele, ce le permite dispersarea in citoplasma pe baza unui transport dependent de organizarea
microtubulilor.
Totusi, faptul ca mitocondria se defineste tot mai pregnant ca punct de control al apoptozei se datoreaza
modificarilor mitocondriale de la nivel molecular si biochimic. Rezultatul: dezorganizarea membranelor
mitocondriale cu eliberarea in citosol de componente intramitocondriale(citocrom c, endonucleaze G, AIF
- Apoptosis-Inducing-Factor) .
In general, prezenta citocromului c in citosol este un semnal de evolutie apoptotica a celulei.
81
Prin reducerea tensiunii planare a bistratului lipidic, factorii pro-apoptotici ar putea induce formarea de
intreruperi in continuitatea bistratului lipidic, sub forma unor pori, sau, ar putea organiza complexe lipideproteine cu deschideri suficient de largi in structura membranei, care sa permita proteinelor din
compartimentul mitocondrial extern sa difuzeze in citosol, intr-o gama foarte mare de gabarite
moleculare.
Este cel mai voluminos organit al celulei EK , ocupand intre 6-10% din volumul celulei. Indeplineste
functii fundamentale pentru viata celulei precum stocarea si transmiterea informatiei genetice de la o
celula la alta, pe parcursul diviziunilor celulare succesive, si precum controlul activitatii celulare: nucleul
controleaza functiile metabolice ale celulei prin reglarea expresiei genice.
Aspect la MO
82
Nucleul , datorita continutului abundent in acizi nucleici, este bazofil. Cea mai folosita coloratie in acelasi
sens este coloratia hemalaun-eozinica astfel: colorantul bazic (hemalaunul) leaga substrat acid(acizii
nucleici din nucleu) , colorandu-l in albastru-inchis/violet.
Uneori , la MO, nucleul poate avea delimitat un oarecare contur , insa acesta NU este reprezentat de
membrana nucleara. NU EXISTA MEMBRANA CARE SA SE VADA IN MICROSCOPIA OPTICA,
MEMBRANELE FIIND ULTRASTRUCTURI !!! . Astfel, se poate observa heterocromatina atasata
periferic de lamina densa si de membrana nucleara interna.
In nuclei inchisi la culoare se pot distinge nucleoli.
Nucleii eucromatici au aspect veziculos, prezentand granulatii fine si aspect granular.
Nucleii tahicromatici sunt intens bazofili.
Eucromatina contine ADN care poate fi pus in evidenta prin urmatoarele metode:
reactia Feulgen => ADN rosu-violet
reactia Branchet => ADN verde, ARN rosu
Aspect la ME
1. Invelis nuclear
Este prezent doar in interfaza si este alcatuit din membrana invelisului nuclear, ce prezinta membrana
nucleara interna si membrana nucleara externa, si din cisterna perinucleara.
Membrana externa se continua cu cisterne RER si poate prezenta ribozomi atasati. Enzime: G6P-aza
Membrana interna este in raport cu o structura fibrilara densa=lamina nucleara.
Por nuclear, unde eucromatina sparge heterocromatina periferica, atingand mb nucleara
2. Cromatina
Poate fi eucromatina, electronoclara, functional activa sau heterocromatina, electronodensa, inactiva
functional.
3. Matrice nucleara
4. Nucleolul
ME: zona electronodensa, neregulata, cu structura fibrilogranulara (stanga)
83
Forma: De obicei, forma nucleului urmareste forma celulei. Cu toate acestea, nucleul poate prezenta o
mare varietate de forme:
o
o
o
o
o
Localizare: De obicei, nucleul ocupa o pozitie centrala in nucleu, pozitie ce poate fi socotita strategic dpv
al rolului sau.
Exceptii:
nucleu excentric in celule ce acumuleaza material in citoplasma(celule adipoase, secretoare de
mucus)
nucleu plasat la unirea treimii bazale cu cea mijlocie in celulele secretoare seroase din pancreasul
exocrin, precum si din glandele parotide
Evident, plasarea nucleului in cele mai multe situatii in centrul celulei, nu este intamplatoare. Astfel, este
plasat in locul cel mai ferit de agresiunile din mediul extern, si de asemenea, este situat la aceeasi distanta
de toate "colturile" celulei, putand controla astfel cel mai eficient metabolismul celular.
Nu este intamplatoare nici plasarea materialului genetic, si anume a acidului dezoxiribonucleic in
interioul nucleului, fiind astfel ferit, si protejat de urmatoarele membrane: membrana celulara, cu
straturile sale, dar si membrana nucleara, dubla.
Raport nucleo-citoplasmatic
84
pori nucleari
lamina nucleara(lamina densa interna)
Membrana externa este in contact cu direct cu citoplasma, pe ea putandu-se atasa ribozomi. De
asemenea, membrana externa se continua cu cisterne RER. Enzima atasata: G6P-aza
Membrana interna este cea ce delimiteaza continutul nuclear.
Ambele membrane par sa aiba o ultrastructura asemanatoare altor citomembrane in sensul ca apar
trilaminate la ME.Ambele membrane au o grosime de cca 70-80 A.
Spatiul perinuclear este spatiul ce separa cele doua membrane ale invelisului nuclear. Grosimea sa este
de 200-300 A. Intrucat membrana externa nucleara se continua cu cisterne RER, spatiul perinuclear
comunica cu lumenul RE . NU este vid, aici putandu-se stoca imunoglobuline si Ca2+.
Porii nucleari sunt discontinuitati ale spatiului perinuclear dat de fuzionarea celor doua membrane. Deci,
la nivelul porilor, membrana nucleara externa are continuitate cu membrana nucleara interna.Rolul lor
este esential in realizarea schimburilor nucleu-citoplasma, in primul rand permitand trecerea ARNm din
nucleu catre aceasta.
Forma porilor variaza intre circular si poligonal. Numarul porilor este proportional cu activitatea celulei:
cu cat sinteza de ARN este mai mare, cu atat celula respectiva va avea mai multi pori. In medie, porii
ocupa 10-20% din invelisul nuclear. Diametrul porilor este de 10 in repaus si 25 mm in transport.
In ME, porii nucleari au caracteristic faptul ca se gasesc in zonele unde eucromatina pare sa sparga
heterocromatina periferica, atingand membrana nucleara.
Lamina densa nucleara se gaseste in raport cu membrana nucleara interna. Poate fi definita ca un strat
electronodens anexat fetei nucleoplasmice a membranei nucleare interne.
Lamina nucleara este o retea de natura proteica cu aspect fibros situata sub membrana nucleara interna, ce
formeaza suportul structural al nucleului. Atasarea laminei de invelisul nuclear se realizeaza prin
intermediul unor proteine integrale din MNI si prin atasare de complexele porilor nucleari.
Lamina nucleara interactioneaza direct si cu cromatina, functionand astfel ca punte de legatura intre ADN
si invelisul nuclear. Reteaua de filamente este alcatuita din proteine numite lamine nucleare, ce reprezinta
o clasa speciala de proteine apartinand filamentelor intermediare.
Lamina densa apare clar pe imaginile de ME dupa fixarea cu GLUTARALDEHIDA.
Sunt 3 tipuri de lamine nucleare: A,B,C.
Lamina densa are atat rol de suport pt membrana nucleara interna, cat si rol in cadrul diviziunii celulare
si anume in dezintegrarea membranei celulare: in diviziune, laminele se fosforileaza si se dezasambleaza,
doar cele de tip B ramanand atasate de MNI, urmand ca, la sfarsitul telofazei, sa se desfosforileze =>
reasamblarea laminei densa nucleare.
Laminopatiile sunt asociate cu sindromul Progeriei, si cu distrofia musculara Emery- Dreifuss.
85
86
87
88
Toate aceste 4 componente nucleolare pot fi distinse in acelasi nucleol DOAR in cazuri FOARTE RARE.
Raporturile cantitative si topografice dintre aceste componente variaza in raport cu tipul celular si in
special cu momentul functional.
89
~ 5 micrometri
90
Fiecare miez histonic de nucleozomal este infasurat de 1,75 ori de catre dublul helix al ADN. ADN liber
dintre 2 nucleozomi adiacenti se leaga de histona H1 , ce leaga nucleozomii intre ei, protejandu-i si de
actiunea nucleazelor.
ADN liber dintre 2 nucleozomi adiacenti, cel legat de histona H1, se numeste ADN de legatura.
Etapa nucleozomala de impachetare a ADN <=> aspect de margele insirate pe o ata.
Aceasta ata se condenseaza si ea => solenoid, iar apoi, prin cresterea in continuare a gradului de
condensare => cromozomul.
Histonele sunt deci proteine cu masa moleculara mica, puternic bazice datorita continutului bogat in AA
bazici precum Lys si Arg, purtatori de sarcini pozitive, lucru ce explica legarea histonelor de anionii
fosfat din structura ADN-ului .Functia majora a histonelor consta in impachetarea ADN-ului in nucleu,
adica organizarea supramoleculara a ADN-ului sub forma de nucleozomi. Protaminele sunt echivalentul
histonelor dar numai in cazul spermatoidului. Protaminele sunt proteine cu greutate moleculara foarte
mica , cu o lungime medie de numai 33 aminoacizi si foarte bazice, bogate in arginina, care reprezinta
circa 60% din reziduurile aminoacidice. In cadrul secventei celulare care duce la formarea
spermatozoidului (spermatogeneza), la trecerea din spermatida in spermatozoid, protaminele inlocuiesc
histonele. Datorita protaminelor, cromatina din nucleul spermatozoidului este extrem de condensata si
virtual inactiva. Compactarea cromatinei din nucleul spermatozoidului este un fenomen esential pentru
acomodarea ADN-ului intr-un volum foarte mic, cum este cel al capului spermatozoidului.
Histonele H2A, H2B, H3, H4 nu au specificitate de specie, si prezinta rol structural , alcatuind
nucleozomii.
Histona H1 prezinta specificitate de specie si are rol in organizarea si in functionarea cromatinei, in
mentinerea structurii sale, in inhibarea transcrierii genice si in spiralizarea cromozomilor.
Histonele sunt sintetizate in citoplasma si importate activ in nucleu prin porii nucleari.
Proteinele nehistone sunt proteine acide, sintetizate in citoplasma si deci importate si ele activ in nucleu
prin porii nucleari.
Sunt prezente in nucleoplasma, nucleol si cromatina , avand o mare variabilitate in functie de specie. Au
rol in reglarea activitatii genice si in diferentierea activitatii genice.
85. Eucromatina
Este purtatoare de gene structurale, este portiunea functional activa a cromatinei, este cromatina pe care
se face transcriptie.
Cromatina fin dispersata in mod uniform in nucleu se numeste eucromatina. Este mai putin bazofila, iar
dpdv functional distingem doua feluri de eucromatina:
91
eucromatica activa = reprezinta acele fractii de cromatina unde au loc in mod continuu procese de
transcriptie
eucromatina permisiva= reprezinta fractiunea din eucromatina potential activa , ce va deveni
imediat activa ca urmare a unor semnale specifice modulatoare( de ex hormonale) -practic, este in
standby
Spre exemplu, procesul autoreplicarii semiconservative a ADN-ului din faza S a ciclului celuar incepe la
nivelul eucromatinei.
Un nucleu eucromatic este deci unul foarte activ in procese de transcriptie.
Diferentierea eucromatina/heterocromatina poate fi exemplificata si prin faptul ca eucromatina, ca stare
de existenta a cromatinei, este accesibila ARN polimerazei II, in timp ce starea heterocromatinica , nu
permite acces acestei enzime.
92
Inactivarea cz. X are loc timpuriu in viata embrionara(ziua 16-21), fiind inactivat un cz. X sub influenta
genei XIST( X inactivation specific transcript), de la nivelul Xq 13.2 .
Astfel, din cei doi cz. X, pe unul zona XIST este metilata permanent => acest cz ramane activ.
Pe celalalt(ales aleatoriu in functie de originea materna/paterna, cu exceptia cazului in care prezinta
anomalii si in care acesta va fi cel inactivat), zona XIST ramane activa, sintetizand o molecula de ARN
special: long non-coding ARN, care se va acumula in jurul acestui cz. X, ducand la inactivarea sutelor de
gene.
Totusi, inactivarea cz. X nu este completa, zonele PAR(pseudo-autozomal region) ramanand active.
Postulatele lui Mary Lyon adaptate cunostintelor de azi:
1. Inactivarea cromozomului X are loc timpuriu, in viata embrionara [ziua 16-21]; este inactivat un
cromozom X, sub influenta genei XIST de la nivel Xq13.2 [Xinactivated specific transcript].
2. Inactivarea cromozomului X este aleatorie, privind X-ul matern sau X-ul patern. Daca exista
anomalii in structura cz X, inactivarea devine preferentiala [catre cel cu anomalii]
3. Inactivarea cromozomului X este completa <-> astazi tim c, este partiala, caci zonele PAR isi
pastreaza capacitatea de transcriere si exprimare fenotipica
4. Inactivarea cromozomului X este permanenta si definitiva, privind originea X-ului inactivat intr-o
celula. ( deoarece XIST-ARN-ul nu se poate deplasa prin nucleu , deci neputand ajunge la celalalt
cromozom X)
Cromatina sexuala poate fi analizata in celule din mucoasa bucala, in celule polimorfonucleare neutrofile,
sau in celulele din lichidul amniotic.
Exista si heterocromatina intercalara.
Genele care codifica proteine sunt 97% din totalul genelor, ele fiind transcrise in ARNm.
93
Genele care nu codifica proteine sunt cele ce servesc pentru sinteza ARNt, ARN r . Reprezinta restul de
3%.
94