Prctica No. 7 IDENTIFICACION DE SHIGELLA SPP.

MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS

EQUIPO No.4
INTEGRANTES:
BRAYAN BIVIANO YEVALES
GONZALEZ CASTRO GABRIEL
REBOLLEDO ALARCON MIGUEL ANGEL
SANTIAGO RUEDA CELENE
VALENTE RODRGUEZ JESS ALBERTO

CARRERA:

INGENIERA BIOQUMICA

OCTAVO SEMESTRE
PROFESOR:
M.C. Miguel ngel Daz Alday.
FECHA DE ENTREGA: 24 DE MARZO DEL 2015

INDICE
Problema..3
Hiptesis ..3
Objetivos .3
Introduccin 4
Marco terico..5
Material.7
Reactivos.7
Procedimiento.7
Resultados10
Conclusin10
Glosario..11
ANEXOS12
Bibliografa13

PROBLEMA.
La menudencia de pollo es un alimento consumido por la poblacin en general por
su bajo costo, tradicin o cultura, pero la falta de higiene al manejar este alimento
puede permitir que este llegue provocando infecciones en los consumidores.

HIPOTESIS.
Hiptesis de trabajo: las pruebas bioqumicas arrojaran resultados positivos de
presencia de shigella spp.
Hiptesis nula: las pruebas biquimicas arrojaran resultados negativos de
presencia de shigella spp, pero positivos en presencia de otras bacterias.
Hiptesis alternativa: no se encontraran resultados positivos en pruebas de
screning.

OBJETIVOS.
Objetivo general.
Aislar e identificar la presencia de shigella spp a travs de alimentos.
Objetivos especficos.

Aislar shigella spp de la menudencia de pollo.

Llevar acabo adecuadamente el procedimiento para el aislamiento de
shigella spp.
Identificar las caractersticas principales que muestran la presencia de
shigella spp.

INTRODUCCIN.
3

Las bacterias del gnero Shigella, de la familia Enterobacteriaceae, son bastones

Gram negativos, de 0.3 a 1 m de dimetro y de 1 a 6 m de longitud, que pueden
estar solos, en cadenas o de a pares. Son no mviles, no esporulados, anaerobios
facultativos, oxidasa negativo, fermentan la glucosa y otros azcares sin
produccin de gas, Voges-Proskauer negativo y rojo de metilo positivo. No utilizan
citrato de Simmons, no producen SH2 y son lisina descarboxilasa, arginina
dehidrolasa y ureasa negativos (Tabla 1). La temperatura de crecimiento ptima es
37 C.
El gnero est formado por Shigelladysenteriae (serogrupo A); Shigellaflexneri
(serogrupo
B); Shigellaboydii (serogrupo C); Shigellasonnei (serogrupo D).
La shigellosis, infeccin causada por Shigellaspp., est distribuida en todo el
mundo, pero es endmica en pases tropicales y de clima templado con mayor
incidencia en verano. Es causa de infeccin intestinal aguda en nios pequeos.
Las 2/3 partes de los casos y la mayora de las defunciones ocurren en nios de 6
meses a 10 aos. Representan tambin un riesgo para viajeros que se trasladan
hacia reas endmicas y son frecuentes los brotes en condiciones de
hacinamiento y falta de saneamiento como crceles, hospitales psiquitricos,
geritricos, campamentos y a bordo de embarcaciones.
Shigella tiene como nicos huspedes al ser humano y a los primates. La
enfermedad se transmite de persona a persona por la va fecal-oral, por alimentos
contaminados donde el vector de transmisin son las moscas, o por el uso de
aguas contaminadas para la preparacin de los mismos.
La bacteria es altamente infecciosa por la ruta oral, la ingestin de tan slo 10 a
100 organismos produce infeccin en voluntarios. La gravedad y la letalidad de la
infeccin dependen de la edad de la persona, del estado nutricional, de la
magnitud de la dosis infectante y del serotipo del microorganismo.
Shigelladysenteriae produce la forma ms severa de la enfermedad, con una tasa
de letalidad del 20%. En cambio las infecciones por otras especies de Shigella se
autolimitan y rara vez son fatales, excepto en huspedes inmunocomprometidos,
ancianos y nios pequeos.
Shigellaflexneri tambin puede producir disentera. Shigellasonnei puede producir
brotes 6espordicos por alimentos semi-cocidos o mal cocidos y aguas
contaminadas. Shigellaboydii se asla con menor frecuencia que las otras tres (1).

MARCO TERICO.
Shigella es un gnero de bacterias con forma de bacilo Gram negativas, inmviles,
no formadoras de esporas e incapaces de fermentar la lactosa, que pueden
4

ocasionar diarrea en los seres humanos. Fue descubierto hace 115 aos por el
cientfico japons Kiyoshi Shiga, de quien tom su nombre.
Hay varias especies diferentes de bacterias Shigella, clasificados en cuatro
subgrupos:
Serogrupo A: S. dysenteriae (12 serotipos), es un tipo que se encuentra en los
pases del mundo en desarrollo donde ocasiona epidemias mortferas.
Serogrupo B: S. flexneri (6 serotipos), causante de cerca de una tercera parte de
los casos de shigelosis en los Estados Unidos.
Serogrupo C: S. boydii (23 serotipos).
Serogrupo D: S. sonnei (1 serotipo), conocida tambin como Shigella del grupo D,
que ocasiona shigelosis en pases desarrollados y se est aislando en pases en
vias de desarrollo por factores como el turismo etc.
Los grupos AC son fisiolgicamente similares, S. sonnei (grupo D) puede ser
distinguida del resto en base de pruebas de metabolismo bioqumico (2).
Patogenia
La infeccin por Shigella, tpicamente comienza por contaminacin fecal-oral.
Dependiendo de la edad y la condicin del hospedador, puede que solo sea
suficiente alrededor de 200 organismos para causar una infeccin. La Shigella
causa disentera, resultando en destruccin de las clulas epiteliales de la mucosa
intestinal a nivel del ciego y el recto. Algunas cepas producen una endotoxina y la
toxina Shiga, similar a la verotoxina de la E. coli O157:H7.2 Tanto la Shiga toxina,
como la verotoxina estn involucradas en el sndrome urmico hemoltico.
La Shigella invaden su hospedador penetrando las clulas epiteliales del intestino
delgado. Usando un sistema de secrecin especfico, la bacteria inyecta una
protena llamada Ipa, en la clula intestinal, lo que subsecuentemente causa lisis
de las membranas vacuolares. Utiliza un mecanismo que le provee de motilidad en
la que se dispara una polimerizacin de actina en la clula intestinal, como un
chorro de propulsin lo hara en un cohete, contagiando una clula despus de la
otra.

Sntomas
Los sntomas ms comunes son diarrea, fiebre, nusea, vmitos, calambres
estomacales y otras manifestaciones intestinales. Las heces pueden tener sangre,
moco, o pus: clsico de la disentera. En casos menos frecuentes, los nios ms
jvenes pueden tener convulsiones. Los sntomas pueden tomar hasta una
5

semana, pero por lo general duran entre 2 y 4 das en aparecer despus de la

indigestin. Los sntomas pueden permanecer varios das hasta semanas. La
Shigella est implicada en uno de los casos patognicos de artritis reactiva a nivel
mundial.3 La disentera severa puede ser tratada con ampicilina, TMP-SMX o
quinolonas, como la ciprofloxacina. Pertenece al genero de las enterobacterias.(3)

MATERIAL.
Matraz Erlenmeyer
Pipetas
Cajas de Petri
Tubos de ensaye de 13x 100
Mechero
Hisopos
6

Asa de platino

REACTIVOS

Caldo lactosado
Caldo GN.
Agar salmonella shigela
Agar lisina de hierro
Agar TSI
Agar sulfito de bismuto
Agar verde brillante
Caldo urea

PROCEDIMIENTO.
Dia 1:

Se esterilizaron todos los materiales y el caldo GN.

Despus se pesaron 25 gr de menudencia de pollo para cada caldo.
Se licuaron los 25gr de muestra con los 225 ml de cada caldo preparado.
Se coloc en el matraz una vez ya licuado todo.
Se incubo por 24 hr a una temperatura de 37 C.

Da 2: asilamiento en cajas de Petri.

Se prepararon los agares sulfito de bismuto, entrico hektoen, salmonella
shigella.
Se procedi a vaciar los agares en cajas de Petri.
Una vez ya solidificados los agares en las cajas de Petri se procedi a
sembrar con la tcnica de estra cruzada.
Se incubaron las cajas durante 24 hr.

Dia 3: seleccion en medios.

Se prepararon los medio TSI, LIA Y UREA.

Para uno de los medios se prepararon 4 tubos uno por cada caja contando
el testigo.
Se inoculan las colonias sospechosas de la caja Petri con sufito de bismuto
a un tubo de TSI, LIA y UREA.
Se inoculan las colonias sospechosas de la caja Petri con agar sallmonella
shigella a un tubo de TSI, LIA y UREA.
Se inoculan las colonias sospechosas de la caja Petri con agar entrico
hektoen a un tubo de TSI, LIA y UREA.
Se incuban por 24 hr.

RESULTADOS.
Seleccin de medios:
Agar salmonella shigella.

Los tubos inoculados apartir de las

colonias sospechosas de la caja Petri
con agar s.s. nos dieron:
TSI: el medio se viro a color amarillo lo
cual indica que el medio se acidifico
completamente.
UREA: nos dio negativo los cual indica
que no hubo utilizacin de la urea.
LIA: se torn un color morado en el
pico y un color caf, lo cual indica que
el medio dio un pico alcalino (por la
degradacin de la lisina en la parte
aerobia) y un fondo acido.

Agar entrico hektoen.

TSI: el medio se acidifico completamente

virando asi a color amarillo, tambin
hubo produccin de gas.
UREA: no hubo un cambio de coloracin
a rosa mexicano lo cual hace que esta
prueba saliera negativa por que no hubo
utilizacin de la urea.
LIA: en la parte aerobia hubo
degradacin de la lisina por lo cual el
pico se torn de un color morado y en la
parte anaerobia no hubo degradacin de
la lisina lo cual el medio esta de color
caf esto indica que el fondo es acido.

Agar sulfito de bismuto.

LIA: en la parte aerobia el medio es alcalino, vir a color morado y en la

parte anaerobia el medio es acido se nota el fondo de color caf.

TSI: en la parte aerobia el medio es

alcalino y el fondo acido pero con
produccin de H2S.
UREA: esta prueba sali negativa lo
cual nos dice que no hubo un
cambio de coloracin debido a que
no se utiliz la urea.

CONCLUSIN.
Observando los resultados que nos dieron los agares LIA, TSI Y UREA, se
descarta que hay presencia de shigella, debido a que en los resultados que nos
dio el agar TSI en los tres tubos en dos de ellos el fondo y el pico del medio se
acidificaron y en el ltimo tubo si nos dio un pico alcalino y un fondo acido pero
hubo produccin de H2S por lo cual se descarta este ltimo tubo ya que la shigella
spp no produce H2S.

GLOSARIO
Shigella : Es un gnero de bacterias con forma de bacilo Gram negativas,
inmviles, no formadoras de esporas e incapaces de fermentar la lactosa, que
pueden ocasionar diarrea en los seres humanos. Fue descubierto hace 115 aos
por el cientfico japons Kiyoshi Shiga, de quien tom su nombre.
10

Simmons Citrato Agar: Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias,

en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa
MIO Medio: Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a
su movilidad, actividad de ornitina decarboxilasa y produccin de indol.
Medio de cultivo: consta de un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes
necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el
crecimiento
de virus, microorganismos, clulas, tejidos
vegetales o
incluso
pequeas plantas.
Christensen Medio (Urea Agar Base): Medio utilizado para diferenciar
microorganismos en base a la actividad uresica. Se utiliza para identificar
bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y
estafilococos.
SIM Medio:
Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de
sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.
Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Caldo con malonato. : El caldo con malonato se emplea para diferenciar
enterobacterias del grupo de Enterobacter de bacterias del grupo de Escherichia;
los primeros son capaces de utilizar malonato como nica fuente de carbono,
produciendo una reaccin alcalina y cambio de color del medio al azul. Si no se
aprecia viraje de color la reaccin es negativa.

ANEXOS

11

12

BIBLIOGRAFA
1.-Centers
forDisease
Control
and
Prevention
(CDC).
NationalShigellaSurveillanceOverview. Atlanta, Georgia: US Department of
Health and Human Services, CDC, 2011
2.https://www.google.com.mx/search?q=shigella
%7D&es_sm=93&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=OCxsVK3QK43yQSmtIGYBg&ved=0CAgQ_AUoAQ&biw=1093&bih=534&dpr=1.25#facrc=_&i
mgdii=_&imgrc=Ctrf-uWRXUBs8M%253A%3B100XTPtgQnp4GM%3Bhttp
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%3Bhttp%253A%252F%252Ftextbookofbacteriology.net%252FShigella.html
%3B580%3B772
3.- http://es.wikipedia.org/wiki/Shigella

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