Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
PROTENAS.
Las protenas son las biomoleculas ms abundantes despus del agua y desempean un gran de
funciones, que las caracterizan como componentes esenciales e indispensables para la vida.
Sus propiedades qumicas y fisiolgicas dependen no solo de su tamao, formas y propiedades de
los aminocidos que las componen. Por la estructura peptdica y la presencia de determinados
grupos las protenas pueden reaccionar con una variedad de agentes originndose productos
coloreados. Estas reacciones son las bases para la determinacin cuantitativa y cualitativa de las
protenas.
Todos los aminocidos que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre, reaccionan
con las diferentes pruebas de caracterizacin.
Identificacin
de
estructura
La determinacin de la estructura de una protena, es un proceso complejo que comprende el
empleo
de
mtodos
instrumentales
y
qumicos.
La hidrlisis de protenas por los diferentes mtodos (cida, bsica o enzimtica) proporciona 20
aminocidos (alanina, prolina, lisina, cido asprtico, cido glutmico, asparagina, glutamina,
histidina, glicina, serina, valina, tirosina, triptfano, fenilalanina, treonina, isoleucina, leucina,
cistena, metionina y arginina) como constituyentes universales de las protenas.
Dependiendo del tipo de aminocidos que contenga una protena se pueden realizar diferentes
anlisis:
1. Reaccin de la ninhidrina. Reaccin de Biuret
3. Reaccin Xantoprotica
4. Reaccin de Milln
5. Reaccin de Sakaguchi
La prueba de Biureth es una buena prueba general para las protenas y la intensidad del color violeta
es una medida del nmero de enlaces peptdicos. Algunas sustancias como la oxamida pueden dar
falsos resultados positivos en ensayos cualitativos de protenas.
Reporte de datos
muestra
cido
glioxilico
-
Rxn
de
sakaguchi
+
Rxn
de
Ehrlich
+
+
-
glicina
tirosina
triptofano
fenillalanin
a
albmina
+
+
+
+
+
+
Sln gelatina +
Hidrolizado proteina
valina
Tabla 1, consignacin de datos obtenidos en el laboratorio, para aminocidos y protenas.
muestra
glicina
tirosina
triptfano
fenilalanina
albmina
Coagulaci
n
por
alcohol
Desnaturalizac
in
Por pH
1_ formacin
de una pasta
granulada
blanca.
2_solucin
amarilla plido
3_solucin
incolora con
formacin de
una
pasta
blanca
Precipitacin
sales metlicas
Tubos
1-2)
NaCl
saturada. Sln.
+
translucida.
+, capa en +/coagul +
3el fondo
4)pb(CH3COO
Sln gelatina +/azul
)2
Hidrolizado Negativa +
Precipitado
protena
amarilla
blanco
valina
5)
CuSO4,
precipitado
blanco
6)CuSO4
precipatado
azul rey
Tabla 1, continuacin. Consignacin de datos obtenidos en el laboratorio, para aminocidos y
protenas.
Pruebas para alcaloides
prueba
Color formado
Mayer
Amarillo (+)
Bouchardat
Amarillo (-)
Mandelin
Amarillo (-)
Dragendorff
Amarillo naranja. (+/-)
Tabla 2. Prueba para alcolides, a partir de lo obtenido con el Borrachero.
Discusin de resultados
Hidrolisis de una protena.
La protena que se utiliz en la prctica fue lana azul, en la cual se decoloro en el reflujo, se realiz
la prueba de Biuret y dio negativa.
con
Ninhidrina
Esta es una reaccin general para cualquier aminocido y es debido a la presencia del grupo
amino (NH2), de manera de que todos los alfa aminocidos y por supuesto las protenas dan
positiva a esta reaccin. No obstante, cualquier sustancia proteica que contenga un grupo
alfa-NH2 tambin de positiva a esta reaccin, la reaccin se efecta en tres etapas.
1.1 .- Reduccin de la ninhidrina oxidada por la accin del alfa aminocido
1.2.- Hidrlisis del Aminocido producido para formar un alfa cetocido, el cual se
carboxila
bajo
las
condiciones
de
la
reaccin.
Figura 3. Reaccin con la Ninhidrina, para el triptfano negativa (1, izquierda), tirosina,
positiva(tubo 2), la glicina, positiva(tubo 3). Fuente: los autores, laboratorio UTP.
Figura 6. Reaccin general de la Ninhidrina con un aminocido alfa y su reduccin. Fuente, google
imgenes.
2. Reaccin Xantoprotica
Con esta reaccin podemos identificar la presencia de los aminocidos aromticos (tirosina,
triptfano).
La reaccin se basa en la nitracin del anillo bencnico con cido ntrico, produciendo derivados del
nitrobenceno de color amarillo. Estos derivados amarillos se tornan anaranjados a la alcalinidad de
la solucin con NH4OH o NaOH.
Para la gelatina la muestra sometida a la reaccin xantoprotica dio negativo, por lo cual no existen
aminocidos con restos aromticos.
Esta prueba sire para identificar aquellos aminocidos que sean aromticos como lo son la tirosina,
triptfano, fenilalanina.
Fenilalanina
triptfano
tirosina
Glicina
3. Reaccin de Millon
ALBMINA:
Al agregarle 5 gotas de reactivo de milln la solucin obtuvo un precipitado con una coloracin de
amarillo claro.
Al calentar la solucin se obtuvo un cambio a simple vista, se observ que el reactivo de Millon
actu sobre la albmina esto demuestra que es prueba positiva.
Figura 8. Reaccin entre la albmina de la clara con el reactivo de Millon. Fuente: google
imgenes.
Figura 9. Prueba de Millon para la fenilamina negativa (1, izquierda), tirosina, positiva
(2, izquierda a derecha),la albmina de huevo positiva(tubo 3) y glicina
negativa(derecha). Fuente: los autores, laboratorio UTP.
Figura 10.prueba positiva para la albmina de huevo, para la glicina, tirosina y triptfano.
Reaccin del cido glioxlico para triptfano: El grupo indlico del triptfano reacciona con cido
glioxlico en presencia de cido sulfrico concentrado dando un complejo de color prpura. El
cido actico glacial que ha sido expuesto a la luz contiene cido glioxlico.
4. Reaccin de Biuret
Esta reaccin es caracterstica para aquellos compuestos que poseen dos o ms enlaces
peptdicos.
La denominacin Biuret se debe a que el compuesto orgnico Biuret tambin da
positiva a esta reaccin. La reaccin de Biuret se basa en las formaciones en medio
alcalinas, de un complejo de coordinacin de color violeta entre el in cprico (Cu 2+) y
4 tomos de nitrgeno, provenientes de las cadenas peptdicas.
Es la formacin de compuestos coloreados de violeta de las protenas en medio fuerte
alcalino de las sales de Cu la reaccin empleada mediante ROONH 2, R CS NH2.
El ensayo de Biuret dio positivo por lo cual entendemos que hay por lo menos ms de
dos enlaces peptdicos.
Figura 13. Formacin de una capa en el fondo, separada por una lnea de color
naranja.
# DEL TUBO
SOLUCIN SALINA
RESULTADO
Precipitado blanco
No hay Formacin
precipitado
CuSO4 al 5% (4gotas)
No reacciona
CuSO4 al 5% (4gotas)
Formacin de precipitado
AgNO3 al 2% (4gotas)
AgNO3 al 2% (4gotas)
de
No hubo reactivo
de
precipitado
Color formado
Amarillo (+)
Amarillo (-)
Amarillo (-)
Amarillo naranja. (+/-)
Reaccin Xantoproteica:
Reaccin de Millon:
Reaccin de Ehrlich:
aminocidos
Los aminocidos ms
frecuentes y de mayor
inters son aquellos
que forman parte de
las protenas.
Dos
aminocidos
se
combinan en una
reaccin
de
condensacin entre el
grupo amino de uno y
el carboxilo del otro,
liberndose
una
molcula
deagua y
formando un enlace
amida
que
se
denomina enlace
peptdico;
La unin de varios
aminocidos da lugar
a cadenas llamadas
pptidos
o
polipptidos, que se
denominan protenas
cuando la cadena
polipeptdica supera
una cierta longitud
(entre 50 y 100
residuos
aminocidos)
aminocidos
Los aminocidos se
encuentran
mayoritariamente en su
forma catinica (con
carga
positiva),
Semejanzas
pptido
Son un tipo de molculas formadas por
la
unin
de
varios aminocidos mediante enlaces
peptdicos.
Los pptidos, al igual que las protenas,
estn presentes en la naturaleza y son
responsables de un gran nmero de
funciones, muchas de las cuales todava
no se conocen.
Diferencias
pptido
Es de destacar este comportamiento en
los enzimas, pptidos que funcionan
como catalizadores biolgicos de las
reacciones metablicas, ya que tienen
una capacidad de funcionamiento
Protena
Son molculas formadas por
cadenas lineales de aminocidos.
Protena
Las protenas se sintetizan
dependiendo
de
cmo
se
encuentren
regulados
los genes que las codifican. Por lo
tanto, son susceptibles a seales o
Las reacciones catalizadas por enzimas ocurren a velocidades 10 10 a 1014 veces ms rpidas que las
no catalizadas. Por ejemplo, la ureasa acelera la hidrlisis de la urea en la orina por un factor de
1014. Este factor significa que una reaccin catalizada que toma I segundo en producirse podra
tomar un tiempo de 3 millones de aos sin estar catalizada.
En toda reaccin qumica se produce la transformacin de una sustancia inicial, denominada
sustrato (S), en una sustancia final o producto (P), segn la siguiente notacin:
Esta transformacin ocurre a travs de varias etapas. En primer lugar, la enzima atrae el sustrato
hacia su superficie; despus lo fija en una posicin determinada, y en este paso intermedio se
forma un complejo enzima-sustrato (ES). Enseguida, el sustrato se activa, de modo que sus enlaces
se debilitan, dando paso a su transformacin. Una vez que la enzima ha realizado la transformacin,
libera rpidamente el producto de reaccin para seguir su labor con otras molculas de sustrato.
PURIFICACIN Y AISLAMIENTO DE ENZIMAS.
1. Sin perjuicio que un preparado enzimtico puede consistir en el mismo extracto o caldo
fermentado que slo se somete a una clarificacin y concentracin (preparado lquido) o desecacin
(preparado slido) se recurre tambin a mtodos de aislamiento y purificacin de enzimas en gran
escala, lo cual se logra principalmente por los siguientes procesos:
2. Adsorcin selectiva con hidrxidos de hierro o aluminio coloidales, a cierto pH, pues no todas las
protenas son adsorbidas en iguales condiciones. Una vez adsorbida se lava con agua o solucin
salina y luego s eluye a pH diferente, generalmente alcalino mediante otra solucin salina, por
ejemplo, de fosfato.
3. Por precipitacin, en que las enzimas son fraccionadas al reducirse su solubilidad hasta el punto
en que precipitan. Esto se logra por adicin de sales a cierto pH y a elevada concentracin inica o
por solventes orgnicos (alcohol, acetona, isopropanol) a baja temperatura. La sal ms usada es el
sulfato de amonio por su alta solubilidad, bajo costo, alta toxicidad para la enzima y por no afectar
mayormente la viscosidad de la solucin.
4. Dilisis por gradientes de concentracin a travs de membranas semipermeables.
5. Ultrafiltracin por aspiracin o presin a travs de membranas de porosidad fina como tamiz
molecular. Presenta una alternativa interesante para separar enzimas, pues no hay cambio de fases,
ni altos gradientes de temperatura (15).
6. Electroforesis sobre soportes de papel, gel de almidn, agar o dextrano.
7. Fraccionamiento cromatografico Pico de tipo preparativo, tanto en cada fina, como en columna
con intercambiadores inicos, geles o tamices moleculares.
Combinando estos procedimientos con otros a base de electroforesis de alta tensin, cataforesis y
electrodilisis se logran actualmente separaciones de mezclas complejas de enzimas.
El control de todas estas etapas en su forma ms rigurosa, es necesario para asegurar el mximo de
rendimiento y reproducibilidad, seguridad y calidad de los productos enzimticos obtenidos.
La importancia de las enzimas para la ciencia de los alimentos est determinada por las condiciones
que prevalecen en el interior y en el exterior del producto. Para regular la actividad enzimtica
durante la conservacin y procesado, es necesario controlar tales condiciones.
Temperatura
En general las enzimas operan muy lentamente a temperaturas de coagulacin y su actividad
aumenta
cuando
lo
hace
la
temperatura.
La mayor parte de las enzimas presentan su actividad mxima en el intervalo de 30 a 40 C y por
encima
de
45C
comienzan
a
desnaturalizarse.
La inactivacin de las enzimas por el calor est relacionada con la qumica de las protenas y su
desnaturalizacin
trmica.
La
desnaturalizacin
de
una
protena
se
ha
definido
como:
Un cambio de importancia en la estructura original, sin rotura de ninguno de los enlaces qumicos
primarios
que
unen
entre
s
a
los
aminocidos
aqu
que
se
conserven
mejor
los
alimentos
cocinados
que
los
crudos.
La
estabilizacin
enzimtica
de
los
alimentos
(inactivacin
enzimtica).
Sin embargo se dan casos en que las enzimas despus del calentamiento se regeneran.
La in activacin trmica se basa a la prdida de la estructura y por tanto de los sitios activos.
La regeneracin se debera, entonces a un proceso de reorganizacin de la molcula de protena que
conduce
a
la
restauracin
de
los
sitios
activos
La estabilidad de los alimentos frente a la accin enzimtica depende de la temperatura, pH, del
estado
fsico
de
la
enzima.
Conservacin por fro
La principal razn por la que los alimentos se exponen a bajas temperaturas, especialmente los
productos congelados, es la de evitar el crecimiento de microorganismos manteniendo en lo posible
atributos de calidad del alimento as como una prdida parcial de la actividad enzimtica.
Algunas enzimas se desnaturalizan en un grado significativo durante la congelacin y
descongelacin
muchas
otras
no
se
ven
afectadas.
Un mayor descenso en la temperatura da como resultado una reduccin de la actividad enzimtica.
Efecto
del
pH
Los pH extremos suelen inactivar a las enzimas por lo general, las enzimas presentan una mxima
actividad a un valor determinado de pH, al que se le denomina pH ptimo.
A pH extremos, la actividad enzimtica suele decaer irreversiblemente debido a procesos de
desnaturalizacin
proteica.
En un proceso industrial, el pH puede ser controlado para evitar inhibir o potenciar al
mximo una reaccin enzimtica. Por ejemplo puede impedirse la actividad de la fenolasa
reduciendo el pH del sistema por debajo de tres. En los frutos suele conseguirse esto por el
efecto de acidificantes naturales, como el cido ctrico, mlico o fosfrico
PREGUNTA DE ALCALOIDES
No son necesarios para el crecimiento del microorganismo que los produce. En estado natural, sus
funciones se hallan ordenadas a la supervivencia de la especie, pero cuando los microorganismos
que los producen se desarrollan en cultivo puro los metabolitos secundarios no desempean esa
misin.
Generalmente se producen como mezclas de productos muy relacionados qumicamente entre s.
Por ejemplo, una nica cepa de una especie del gnero Streptomyces produce 32 antraciclinas
diferentes.
Cada uno de estos productos es producido por un grupo muy reducido de organismos.
La produccin puede perderse fcilmente por mutacin espontnea (degeneracin de la raza), por lo
que son muy importantes las tcnicas de conservacin de estos microorganismos.
De todos los productos tradicionales obtenidos por fermentacin, los ms importantes para la salud
humana son los metabolitos secundarios. Donde se incluyen, adems de los antibiticos, ciertas
toxinas (micotoxinas), alcaloides (cido lisrgico), factores de crecimiento vegetal (giberelinas) y
pigmentos.
Bibliografa
1. Pea A (2004), Bioqumica.Segunda edicin. Mxico: EditorialLIMUSA, Pg. 66-67[2]
2. Mancilla,
C;
Blanco
E;
Prez,
S;Rosas, T y Castrejn, C. (2009)Propiedades qumicas yfisicoqumicas de las protenas.M
xico. Consultado el 30 de Octubrede 2009 en:
3. http://www.scribd.com/doc/15958125/1-PROPIEDADES-QUIMICAS-Y-FISICOQUIMICASDE-LAS-PROTEINAS