Curso Preparatorio de Residentado Mdico 2006 UNMSM

Captulo: CIENCIAS BSICAS

Separatas N 11 y 12
Lima Per, Noviembre 2005
ACIDOS NUCLEICOS I
Autor: Mag. Doris Huerta Canales
Prof. Principal D.E. UNMSM.
21/11/2005
Los organismos estn compuestos por una extraordinaria variedad de molculas. Una bacteria
tpica puede contener aproximadamente 2000 protenas, las clulas eucariontes contienen
unas 50000; los organismos multicelulares son muy complejos y estn compuestos de
diferentes tejidos (muscular, nervioso, glandular..) cuyas caractersticas, propiedades,
diferenciacin y desarrollo dependen de las protenas especficas expresadas por sus mismas
clulas y del control que realizan; estas protenas expresadas en forma diferencial pueden
funcionar de diversas maneras: formar parte de estructuras, actuar como protenas
reguladoras, ser molculas con actividad cataltica, constituirse en receptores celulares o
funcionar como protenas intracelulares de seal. La expresin de protenas incorrectas, su
produccin en cantidades anormales, son seal de una patologa.
Qu son los cidos nucleicos?
Son macromolculas complejas de suma importancia biolgica que constituyen los
componentes fundamentales en las clulas de todo ser vivo. Su denominacin es porque fueron
aislados por primera vez del ncleo, no obstante, ciertos cidos nucleicos se encuentran en el
citoplasma de la clula. El desarrollo fsico de un organismo a lo largo de su vida est programado
en estas molculas. Las protenas que expresan sus clulas y las funciones que realizan estn
todas registradas en estas molculas, que son de dos tipos, el DNA y el RNA.
Es el ncleo de la clula la que contiene la informacin necesaria para determinar la gran
variedad de las protenas que se observan en los diferentes tipos celulares de la gran diversidad
biolgica y sta gran cantidad de informacin se encuentra codificada en la macromolcula
denominada ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO o DNA.
En eucariontes esta informacin se almacena dentro de los cromosomas y ser la que
defina el orden de los aminocidos en una cadena polipeptdica, no obstante el
desciframiento del cdigo del DNA en una secuencia de aminocidos no ocurre en el ncleo
sino en el citoplasma en unas organelas especiales, los ribosomas. Las regiones del DNA
que tienen informacin para las protenas y los RNA se llaman genes, los que estn
compuestos por una secuencia lineal de nucletidos en el DNA y se encuentran en regiones
especficas de los cromosomas en el ncleo de la clula. Comprende exones e intrones que
se alternan, los exones que codifican para una protena pueden hallarse interrumpidos por
secuencias interpuestas o intrones, los cuales deben ser eliminados para que el RNA-m
funcional se forme, en un proceso denominado empalme.
El DNA no proporciona directamente ni de inmediato la informacin para el ordenamiento
de los aminocidos y su polimerizacin en polipptidos, por lo tanto debe intervenir alguna
molcula intermedia para transferir la informacin, esto sucede en todos los organismos inclusive
en los procariotes. La informacin codificada en el DNA es copiada, es transcrita en el RNA,
proceso denominado Transcripcin, que luego ser expresada o traducida en molculas de
protenas en un proceso denominado Traduccin o Sntesis de Protenas.
Cmo es la estructura y funcin de los cidos nucleicos?

ESTRUCTURA DEL DNA

Fue dada a conocer por los cientficos James Watson y Francis Crick en el ao 1953, a
partir de una fotografa obtenida por Rosalind Franklin y Wilkinson utilizando difraccin por rayos X.
Es una molcula polimrica formada por nucletidos de A,G,C y T, unidos mediante enlaces
fosfodiester, luego de sintetizada la molcula del DNA algunas bases se modifican como por
ejemplo las citocinas (C) se metilan a 5-metil-citosina existiendo evidencias de que el grado de
metilacin en eucariotes servira para la regulacin de la expresin gentica.
Los detalles de la estructura molecular del DNA pueden variar, sin embargo, todas son
polmeros de cuatro unidades monomricas denominadas nucletidos que contienen las purinas
A,G y las pirimidinas C,T unidas a una desoxiribosa-fosfato, formando una estructura bsica de
doble hlice regular. La secuencia de bases constituye la informacin gentica y las variaciones en
la secuencia entre los diferentes individuos,
da lugar a la asombrosa complejidad de los
organismos. Las bases se enlazan por puentes de hidrgeno en pares complementarios, de modo
que la separacin de la doble cadena permite que la secuencia de bases se copie formando dos
hlices hijas, esencialmente idnticas al DNA progenitor; sta es la base de la sntesis de nuevas
cadenas de DNA o Replicacin en los sistemas biolgicos. Las enzimas que catalizan este
proceso son las DNA polimerasas participando otras protenas tambin.
Durante el tiempo de vida de un organismo su DNA est sujeto a daos provocados por
diversos agentes: fsicos (radiaciones ionizantes, ultravioleta...), qumicos (derivados hidrocarburos
policclicos...), biolgicos (virus) y a mutaciones espontneas, stas lesiones pueden repararse
mediante sistemas a base de enzimas o provocar la muerte de la clula o causar un cambio en el
genoma que puede transferirse a la siguiente generacin como una mutacin.
El DNA eucariote est formando complejos con protenas (Histonas) formando cromatina y
esta se condensa para formar cromosomas.
Fue Richard Dickerson quien demostr que el DNA es molcula dinmica, que puede
adoptar diversas formas: DNA-A, DNA-B y DNA-Z.
Existen diferentes tipos de DNA, que los podemos dividir en:
DNA de copia nica (57% del total) formado por segmentos de 100 pares de bases, una
pequea parte de este contiene los genes.
DNA repetitivo (20%) unidades de aproximadamente 300 pares de nucletidos que se
repiten en el genoma una 150 veces, se intercalan con DNA de copia nica.
DNA satlite (altamente repetitivo, 28%) son unidades cortas de pares de nucletidos que
se repiten en el genomio. Son caractersticos en cada especie y pueden ser separados por
centrifugacin. Constituyen la heterocromatina y no se le conoce funcin.
ESTRUCTURA DEL RNA
Molcula polimrica de nucletidos de A,G,C y U, unidos mediante enlaces fosfodiester.
En clulas eucariotes se conocen 5 tipos, los 3 presentes en procariotes ( RNAm, RNA-t, RNAr) y 2
ms en eucariotes, el RNAhn y el RNApn (heterogneo nuclear y pequeo del ncleo,
respectivamente). El RNA es diez veces ms abundante que el DNA, 80% es RNA-r. 15% es RNAt y 5% es RNA-m.
Hay al menos tres tipos de ARN:
ARN mensajero: cido nucleico que contiene la informacin para dirigir la sntesis de una o ms
protenas especficas. La informacin se encuentra contenida en grupos de tres nucletidos
llamados codones, los cuales determinan el aminocido que debe incorporarse en la protena que
se va a sintetizar. El nombre mensajero deriva de su papel de intermediario, acta como vehculo
de transporte de informacin gentica entre el ADN y las protenas.

ARN de transferencia: son molculas relativamente pequeas que intervienen en la sntesis de

protenas, complementando la funcin del ARN mensajero. Contienen entre 75 y 90 nucletidos
dispuestos en forma de una hoja de trbol. Cada ARN tiene una secuencia de tres nucletidos
llamada anticodn. La cual resulta clave para la sntesis de protenas.
ARN ribosomal: es el ARN ms abundante en las clulas; desempea una funcin estructural
como componente de un importante complejo supramolecular llamado ribosoma. Los ribosomas,
formados por protenas y ARN ribosomal participan activamente en la lectura de la molcula de
ARN mensajero para sintetizar las protenas contenidas en la secuencia de codones del ARN
mensajero.
Por qu fue importante conocer la estructura de los cidos nucleicos?
El conocimiento de la estructura de los cidos nucleicos permiti:
.
Conocer el mecanismo de transmisin de la informacin gentica de la clula madre a las
clulas hijas.
La elucidacin del cdigo gentico
La determinacin del mecanismo y control de la sntesis de las protenas.
Qu funciones cumplen los cidos nucleicos?
Se han identificado bien las FUNCIONES fundamentales del DNA:
Almacenamiento de la informacin gentica.
Transmitir las caractersticas hereditarias de una generacin a la siguiente (Replicacin).
Dirigir la sntesis de protenas especficas, o expresar la informacin gentica.
La molcula de DNA es capaz de autorreplicarse, es autnoma de tal manera que la informacin
que se encuentra codificada en su estructura primaria se transmita de forma fidedigna a la
descendencia y esta informacin tiene que ser expresada de modo tal que resulte til, para lo cual
utiliza otra molcula intermediaria sintetizadas a partir de ella, el RNAm.
Las relaciones entre el DNA, RNA y protenas se suelen expresar mediante un silogismo grfico
denominado el dogma central de la Biologa Molecular.
La expresin gnica consiste en convertir la informacin codificada en la secuencia del DNA en una
secuencia anloga de cido ribonucleico (RNA), que a continuacin dirige la sntesis de una
protena determinada. El primero de estos pasos se denomina Transcripcin y el segundo
Traduccin. Una unidad de transcripcin es el fragmento de DNA que codifica la sntesis de un
RNA. El RNA obtenido a partir de la unidad de transcripcin se llama transcrito primario.
La expresin de los genes en una clula implica la transferencia de informacin mediante los
procesos de transcripcin y traduccin, determina la estructura y funcin de esa clula y por tanto
es decisiva para el normal crecimiento y desarrollo de los organismos vivos. Todas las
enfermedades de base gentica son el resultado de la expresin incorrecta de genes especficos.
Una mutacin en la regin codificadora de un gen, da como resultado la expresin de una protena
no funcional, mientras que una mutacin en una regin reguladora altera el control transcripcional
o traduccional de la expresin de dicha protena.
Es obvio que para tener un buen conocimiento de la enfermedad es necesario comprender bien a
fondo la estructura y funcin de los genes especficos y la manera que es controlada su expresin.

REPLICACIN
Antes de que una clula se divida replica su material gentico; la capacidad del DNA de
copiarse a s mismo en forma fidedigna es importante como material hereditario, la existencia de
dos cadenas complementarias sirvi a Watson y Crick para inferir el mecanismo de Replicacin
del DNA
La replicacin comienza en una sitio especfico u origen de replicacin y las cadenas
deben separarse (en clulas eucariotes participan helicasas y topoisomerasas) y mantenerse
separadas para que enzimas especficas llamadas DNA polimerasas incorporen nucletidos
(sustratos de la enzima en forma de dNTP) y formen cadenas complementarias usando como
plantilla o molde las cadenas originales. Como el DNA replicado contiene una cadena original y una
complementaria nueva el proceso ha sido llamado semiconservativo.
La enzima DNA polimerasa tiene ciertas restricciones, la direccionalidad y agrega
desoxirribonucletidos a una cadena preexistente con el extremo 3OH libre conocido como primer
o cebador que es un fragmento pequeo de RNA sintetizado por una enzima denominada primasa.
Una cadena (gua) se replica en forma contnua en direccin 5-3 y la otra (retrasada) en
forma discontnua que necesita mltiples eventos de iniciacin y una enzima DNA ligasa para unir
los fragmentos (Okasaki) y formar una sola cadena hija contnua.
TRANSCRIPCION
Proceso catalizado por la enzima RNA polimerasa en la cual usando una cadena del DNA
o un fragmento como plantilla se sintetiza una copia del DNA en forma de un cido ribonucleico o
RNA, la sntesis se realiza en sentido 53 y se inicia reconociendo una secuencia de consenso o
promotor. Utiliza como sustratos a los 4 ribonucletidos tri fosfatos. Participan en eucariotes
factores de transcripcin, que son protenas que se unen a los promotores y estimulan la actividad
de RNA polimerasa.
Hay tres tipos de RNA polimerasas (I, II y III), la I transcribe genes para los preRNAr , la II
transcribe genes para los precursores de RNAm y la III transcribe los precursores de los RNA de
transferencia el RNA 5S. Slo los transcritos de la polimerasa de RNA II son modificados en el
extremo 5 adicionando una caperuza formada por una 7-metil-G y el extremo 3 sufre una
poliadenilacin(poli A) para hacerse funcional y para aumentar la eficacia de la traduccin y
estabilidad del RNA-m, respectivamente.
Todos los transcritos I, II y III tienen intrones que varan de tamao de 10-20 hasta cientos
de miles de pares de bases de longitud. Son comunes a la mayor parte de intrones una secuencia
de DNA especficas localizadas en los mrgenes 5 y 3 llamadas uniones de empalme 5 y 3, en el
RNAm las uniones de empalme se hallan bien conservadas y son necesarias para el empalme,
durante este proceso el transcrito se asocia a RNApn y ribonucleoprotenas nucleares que
permiten la eliminacin de intrones y unin de exones para que el RNA maduro (funcional) salga
del ncleo y participe en la sntesis de protenas.
TRADUCCION
Tiene lugar en los ribosomas y se necesita adems el RNAm que porta los tripletes o
codones, el RNA-t que se activa a aminoacil-t-RNA al unir el aminocido correspondiente. El
proceso se da en tres pasos: Iniciacin, Elongacin y Terminacin donde participan factores
proteicos especficos para cada paso.
El codn de inicio AUG es el que codifica para el aminocido metionina que en el caso de
los procariotes se encuentra metilada, los t-RNA activados incorporan aminocidos segn la
secuencia de codones del RNAm hasta que encuentra un triplete que no codifica para aminocido
alguno pero es una seal de terminacin de sntesis de protena (UAA, UAG UGA). Luego de
liberarse la cadena polipeptdica sufre modificaciones que van desde plegamiento para adquirir
estructura tridimensional para hacerse funcional hasta la prdida de segmentos o modificaciones
qumicas.
REGULACIN
Existen regiones o genes reguladores que actan a diferentes niveles; se han identificado
compuestos que inhibe la replicacin, transcripcin y traduccin, pero es a nivel de transcripcin
donde se dan los principales eventos de regulacin de la expresin gentica.

Curso Preparatorio de Residentado Mdico 2006 UNMSM

Captulo: CIENCIAS BSICAS
Separatas N 11 y 12
Lima Per, Noviembre 2005
ACIDOS NUCLEICOS II
Autor: Mag. Doris Huerta Canales
Prof. Principal D.E. UNMSM.
21/11/2005

De que manera los estudios bsicos sobre los cidos nucleicos han contribuido a
entender el aspecto molecular de algunas enfermedades?
Qu sucede si los mecanismos normales de reparacin del DNA fallan?
Cmo surge la llamada Ingeniera gentica?
Puede la ingeniera gentica mejorar la calidad de vida de los pacientes?

El avance de la Biologa Molecular y la aparicin de nuevas tcnicas en los ltimos 20

aos han ayudado enormemente a comprender los aspectos biomoleculares de la enfermedad en
el hombre. El conocimiento de la estructura y funcin del material gentico, el descubrimiento de
las enzimas de restriccin y de vectores de clonacin como plsmidos (se utilizan para obtener
fragmentos de DNA de hasta 3Kb), fueron los pilares para el desarrollo de las tcnicas de Biologa
Molecular.
Otros vectores.
Fago , que pueden acomodar hasta 23 Kb de DNA extrao.
Los csmidos, que pueden transportar hasta 40 Kb de DNA recombinante, son vectores que
suelen clonar genes de gran tamao.
Los vectores son diseados de manera que contengan un origen de replicacin, para que el DNA
pueda ser amplificado y un gen de resistencia a antibiticos para que puedan ser seleccionados
con facilidad.
En la actualidad es posible secuenciar de manera rutinaria una protena purificada utilizando un
secuenciador automtico, as se determina la secuencia de aminocidos, se deduce su RNA y a
partir de sta ltima se deduce la secuencia del DNA. Una secuencia de DNA corta
(oligonucletidos) se puede sintetizar con facilidad para producir 100 pares de bases. Un
oligonucletido solo o un coctel de ellos pueden etiquetarse con marcadores y entonces usarse
como sondas para aislar el gen que contiene estas secuencias de DNA, mediante la bsqueda en
bibliotecas de DNA complementario (DNAc) recombinante.
En forma alternativa, la disponibilidad de anticuerpos, que reconocen especficamente una
protena de inters puede contribuir de manera directa a la clonacin del DNAc que expresa esa
protena.
Una de las ms importantes tcnicas disponibles para el anlisis de genes, es la
determinacin del rden preciso de los nucletidos dentro de un gen mediante la secuenciacin de
DNA, este es el primer paso en el estudio de un gen de inters.
Para localizar un gen en el cromosoma y estimar la cantidad de copias en el genoma por lo
general se usa tcnicas de hibridizacin. La estructura del gen es decir si tiene o no intrones y su

localizacin, puede determinarse utilizando el microscopio electrnico y haciendo estudios con

nucleasas.
Muchas enfermedades son una consecuencia de la expresin inadecuada o incorrecta de
genes especficos, por ello un conocimiento del sitio y grado de expresin exactos de un gen de
inters suele ser importante para comprender las bases moleculares de la enfermedad. En muchos
casos, una vez clonado el gen es indispensable el anlisis de las regiones de control para
comprender su funcin.
La Reaccin en cadena de la Polimerasa (PCR) permite la amplificacin masiva de
secuencias de DNA especficas y se ha convertido en una poderosa herramienta del Bilogo
Molecular. Esta capacidad de amplificar una secuencia de DNA objetivo tiene muchas aplicaciones
en clnica, por ejm. Detectar DNA o RNA infrecuentes, como los cidos nucleicos virales o
bacterianos, para detectar mutaciones en transtornos genticos conocidos, se usan en pruebas de
diagnstico, para estudios de polimorfismo gentico que tiene que ver con enfermedades de todo
tipo, con predisposicin gentica.

Reparacin del DNA

Como la mayora de las mutaciones son muy nocivas, incluso los organismos ms sencillos
poseen sofisticados sistemas enzimtiicos para la reparacin del DNA. Estos sistemas normales
son importantes porque ciertos defectos genticos de los mismos son la causa de varias
enfermedades hereditarias humanas. Por ejemplo, los pacientes con Xeroderma pigmentosa (XP)
son sensibles a la radiacin ultravioleta y desarrollan cncer a la piel. Los fibroblastos cutneos
cultivados a partir de estos pacientes muestran defectos en la reparacin del DNA.
CASO CLINICO
En su humilde vivienda, Isabela Delgado Juan, de 14 aos, se protege de los rayos del sol. Slo
percibe nuestra presencia a travs de sus odos porque perdi la vista hace unos meses.
Su piel reseca llena de escamas no regenera las clulas que filtran los rayos ultravioleta, lo cual le
produce tumores en la piel y hasta cncer, es la descripcin literal de su cuadro clnico.
Cerca de all, Mara Anel Juan, de 2 aos y medio ya resiente los tibios rayos del sol matinal. Quiz
no imagina que el mismo sol que hace posible la vida, a ella podra quitrsela.
De los casos conocidos hasta ahora, la mayora de nios no ha vivido ms de 12 aos de vida.
Isabela es la nica que ha llegado a los 14.
As como Isabela y Mara, otros 15 nios padecen la xeroderma pigmentosa, una enfermedad
gentica que fue descubierta, en la aldea Yulmacap, distante 25 kilmetros de la cabecera
municipal de Barillas, Huehuetenango, Guatemala, a principios del 2001.
Sntomas
La xeroderma pigmentosa es una enfermedad cutnea hereditaria que se transmite con carcter
autonmico recesivo, en la que intervienen 8 diferentes genes. Puede ser causada por la falta de
una enzima endonucleasa que es necesaria para la eliminacin de los dmeros de pirimidina
(frecuentemente Timinas) en el DNA. Los dmeros de pirimidina se producen continuamente por
accin de la luz ultravioleta (UV) sobre el DNA de las clulas de la piel. En las clulas normales
estos dmeros de timina (T) se escinden y el DNA se repara. Quienes la padecen sufren diferentes
sntomas.
Envejecimiento prematuro de la piel los ojos, y los labios.

 Resequedad de la piel al exponerse a la luz solar y artificial.

El dao en los prpados y la conjuntiva, debido a sensibilidad a la luz solar, produce ceguera.
Eventuales complicaciones neurolgicas provocan retraso mental.
Prdida del odo en alta frecuencia.
Afecta a una de cada 250,000 individuos en la poblacin general, generalmente a hijos de padres
consanguneos y aparece en todas las razas y en todo lugar del mundo.
No se conoce tratamiento curativo, hay que reducir al mnimo la exposicin al sol y extirpar los
tumores en el momento que aparecen.
Defectos moleculares

Relacionados con la reparacin por escisin del DNA daado por exposicin a la luz UV.

Entre las protenas afectadas se encuentran varias protenas de unin de DNA y helicasas.

La Ingenieria Gentica

La idea bsica de la ingeniera gentica surge ante la posibilidad de cortar fragmentos de DNA
mediante una enzima de restriccin que forma extremos cohesivos; los trozos de DNA tendern a
reunirse nuevamente porque los extremos cohesivos tienen secuencias complementarias y
pueden aparear sus bases y con una DNA ligasa puede unirse el esqueleto de fosfato.
La ingeniera gentica tiene el potencial de revolucionar la medicina, la agricultura, la industria
farmacetica, haciendo posible la obtencin de productos que son de fabricacin difcil y costosa,
de una manera ms fcil y por tanto menos cara.

La aplicacin de la tecnologa del DNA recombinante o ingeniera gentica, a la producin

de protenas de importancia mdica puede ejemplificarse con la insulina y la hormona de
crecimiento humano, que han mejorado la calidad de vida de muchos pacientes.