INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE

BIOTECNOLOGIA

ACADEMIA DE CIENCIA Y TECNOLOGA FARMACEUTICA

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO

BIOFISICA I

ELABORADO POR:
Mara Esther Bautista Ramrez
Yolanda Gmez y Gmez
Marcela Segura Granados

PRCTICA No. 1
MECANISMOS DE TRANSPORTE A TRAVES DE MEMBRANAS
TEMA
DIFUSIN SIMPLE
DIFUSION FACILITADA
TRASPORTE ACTIVO
OSMOSIS
INTRODUCCIN
A travs de la membrana la clula realiza un continuo intercambio de molculas y energa
entre el medio intracelular y
el extracelular, ste recambio se realiza por varios
mecanismos:
difusin pasiva, facilitada, transporte activo y osmosis.
La membrana celular es selectivamente permeable, permite que algunas sustancias pasen
a travs de ella, pero otras no. Los materiales se mueven a travs de las membranas por
dos procesos; trasporte pasivo llamado comnmente difusin y transporte activo.
Difusin simple.- Es el movimiento cintico de molculas o iones a travs de las
aberturas de la membrana celular, sin necesidad de fijacin de protenas portadoras. La
magnitud de la difusin depende de la cantidad de sustancia disponible, la velocidad del
movimiento y el nmero de canales de la membrana celular por los cuales pueden pasar
las molculas o iones.
Las caractersticas de la difusin simple son:
a) Siempre ocurre a favor de un gradiente de concentracin electroqumico.
b) independiente de la energa metablica de la clula.
c) Es bidireccional, dependiendo de la concentracin externa e interna de la clula.
Difusin facilitada es un transporte dependiente de la concentracin e involucra el
transporte de molculas hidroflicas de mayor tamao como la glucosa y los aminocidos.
El proceso es estrictamente pasivo pero requiere de molculas transportadoras las cuales
son especificas.
Las caractersticas de la difusin facilitada son:
a) Ocurre a favor de un gradiente de concentracin.
b) Depende parcialmente de energa.
c) Depende de un transportador de naturaleza proteica.
Transporte activo.- es el paso de iones a travs de la membrana en combinacin con una
protena portadora, pero contra un gradiente de concentracin.
El ejemplo clsico de transporte activo es el del sodio que de manera continua se realiza
por medio de la "bomba de sodio". Est proceso depende de energa, como el ATP o
algunos otros nucletidos trifosforilados.
Trasporte activo
a) Requiere de la energa de la clula (el trasporte cesa sin ATP del metabolismo y tiende
a un equilibrio).
b) Ocurre contra un gradiente de concentracin.

c) Es unidireccional. El flujo del soluto siempre es en la misma direccin.

OBJETIVO GENERAL
Describir los procesos involucrados en el transporte de iones a travs de las membranas
celulares, analizando las fuerzas fisicoqumicas responsables.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Analizar y describir el fenmeno de difusin simple, facilitada, transporte activo y osmosis.
METODOLOGA
EXPERIMENTO # 1 Difusin y temperatura
Materiales
Parrillas
Vaso 250 ml
Pinzas
Termmetro
Azul de metileno
Permanganato de potasio
Agua destilada
Hielo
En un vaso de precipitados calentar 200 ml de agua a 50 C, en otro vaso poner la
misma cantidad de agua con hielo y registrar la temperatura.
Observar que el agua tienen movimiento en ambos vasos, aadir 1 g. de permanganato
de potasio a cada vaso. Registrar el tiempo de difusin.
Hacer lo mismo con azul de metileno.
CUESTIONARIO # 1
Conteste con las bases tericas adquiridas las siguientes preguntas:
1. Es uniforme el descenso del colorante en el agua?
2. Qu sucede cuando se calienta el agua?
3. Defina qu es disolucin y difusin.
4. Mencione los factores que afectan la difusin, en los lquidos, en los slidos y en los
gases.
Difusin, tamao de la molcula y permeabilidad de la membrana.
Las molculas pueden difundir a travs de la membrana celular si son suficientemente
pequeas, mientras que las molculas grandes tienen dificultad para su paso.
La selectividad de las molculas por la membrana celular puede estudiarse
experimentalmente usando una membrana de celulosa. La membrana de celulosa tiene
poros microscpicos sobre su superficie y las molculas pequeas pueden atravesar la
membrana.
Usando la prueba de yodo y de Benedict para determinar azcares reducidos podemos
realizar el experimento.
EXPERIMENTO # 2 Difusin y Peso Molecular
Pinzas
Cajas de petri con agar
Granos de azul de metileno
Granos de permanganato de potasio

Usando dos sustancias con diferente peso molecular, por ejemplo azul de metileno P.M.
320 y permanganato de potasio P.M. 158, estudiaremos su difusin. Ambas sustancias
son solubles en agua y difunden rpidamente en un agar con 98 % de agua.
En una caja petri con agar colocar grnulos de un mismo tamao a una distancia de 4 cm
cada uno de permanganato de potasio en la caja #1 y azul de metileno en la caja #2.
Presionar ligeramente los grnulo dentro del agar. Registrar el dimetro de difusin a los
15, 30 y 60 min.

RESULTADOS
Sustancia

Tiempo
15 min

30 min

60 min

Permanganato de potasio
Azul de metileno

EXPERIMENTO # 3 Permeabilidad de la membrana.

Humedezca una membrana de celulosa de aproximadamente 15 cm de largo por 2.5 cm de
dimetro en agua destilada, cierre un extremo atndolo con hilo. Aada 5 ml de glucosa al
5% y 5 ml de almidn al 1%. Cierre el extremo superior y suspndalo en un vaso con agua
destilada.
-Determine la concentracin de azcares con la prueba de Benedict en el lquido del vaso
de precipitados a tiempo cero, 15, 30, 60 y 120 min.
-Despus de este tiempo, repita las dos pruebas con el lquido que se encuentra dentro de
la membrana .
Reactivo de Benedict: disolver 100 g de carbonato de sodio y 173 g de citrato de sodio
(Na2C6H5O7 .H2O) en 700 ml de agua. Disolver 17.3 g de Sulfato de cobre (CuSO 4.5H2O) en
100 ml de agua destilada y se vierte en la solucin de carbonato citrato con agitacin
constante aforar a 1 lt de solucin.
Reactivo de Yodo (Lugol) : Disolver cristales de yodo 1 g ,Yoduro de Potasio 2g y agua
destilada 100 ml.
Prueba de Benedict
Tomar 1 ml de la muestra y aadir 1 gota del reactivo de Benedict y hervir en bao Mara
durante 5 min. La prueba es positiva cuando se desarrolla una coloracin roja o amarilla.
Prueba de lugol
Tomar un 1 de la muestra y aadir 1 gota del reactivo de lugol y observar, una prueba
positiva da una coloracin azul intensa.
Osmosis y presin osmtica
El agua es esencial para la vida. Los organismos necesitan un medio acuoso para llevar a
cabo sus reacciones. El agua es la sustancia ms abundante en las clulas, sta es una
molcula que difunde libremente dentro y fuera de la clula.
Osmosis es simplemente la difusin del agua a travs de una membrana semipermeable o
selectivamente permeable. Cuando se colocan dos sustancias de diferente concentracin
separadas por una membrana semipermeable, se lleva a cabo la difusin del solvente de
la solucin de menor concentracin a la de mayor concentracin. De no existir una fuerza

que se oponga al paso del solvente, se alcanzar el equilibrio de la concentracin por

dilucin de la sustancia ms concentrada a la ms diluida. La smosis desarrolla una
presin, la presin osmtica, que es una de las propiedades de mayor importancia
fisiolgica.
Se define presin osmtica como la fuerza ejercida para impedir
hacia la solucin concentrada.

el paso del solvente

EXPERIMENTO #4 Osmosis
Preparar una solucin de sacarosa, cloruro de potasio y cloruro de sodio al 2% y realizar las
siguientes diluciones:
No.Tubo
1
2
3
4

ml NaCl 2%, KCl o

sacarosa
0.25
1.25
2.25
5.0

ml de agua
Destilada
4.75
3.75
2.75
0

Conc de la solucin (%)

0.1
0.5
0.9
2.0

-Obtener la sangre de un paciente limpiando la yema del dedo con alcohol etilico al 70 % y
pinchando la piel con una lanceta estril.
-En un portaobjetos mezclar 1 gotas de sangre con 1 gota de solucin salina de cada una
de las diluciones preparadas anteriormente ,colocar un cubreobjetos y observar.
-Observar al microscopio y anotar las observaciones.
De Robertis, Robertis. Biologa Celular y Molecular.
Ed. El Ateneo, 1992

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Alberts, Bray, Lewis, Raff, Roberts, Watson. Molecular biology of the cells. 3er ed. Garland
Publishing Inc. 1995.