Curso

Escuela Profesional

: Bioqumica.
: Medicina Humana.

PRCTICA N 02
DETERMINACIN DE PROTENA TOTALES EN SUERO SANGUNEO
Las protenas son un constituyente muy importante de las clulas y los tejidos del
cuerpo humano. Se componen de aminocidos. Hay diferentes tipos de protenas con
diferentes funciones, son as protenas los enzimas, algunas hormonas, la hemoglobina,
el LDL (transportadora de colesterol), el fibringeno, el colgeno, las
inmunoglobulinas, etc.
Las protenas totales del suero se pueden separar en dos grandes grupos: albmina y
globulinas. La albmina es la protena de mayor concentracin en la sangre. La
albmina transporta muchas molculas pequeas (bilirrubina, progesterona, y
medicamentos) y tiene tambin la funcin de mantener la presin sangunea ya que
favorece la presin osmtica coloidal para mantener lquidos en el torrente sanguneo y
que no pasen a los tejidos, manteniendo un equilibrio.
Las globulinas se pueden dividir en alfa-1, alfa-2, beta y gamma globulinas.
La albmina representa el 60% de las protenas que contiene el suero, el resto son las
globulinas.
La determinacin de protenas totales se realiza para evaluar la posible presencia de
enfermedades nutricionales, estado nutricional tras intervenciones de ciruga,
enfermedades del rin o del hgado, o bien que el cuerpo no absorba bien suficientes
protenas.
OBJETIVO
Determinar la concentracin de protenas totales en suero sanguneo.
MATERIALES
Tubos de ensayo, Pipetas, Micro pipetas, Beakers, Espectrofotmetro, Centrfuga, Bao
mara, Kit de protenas, Suero sanguneo, Jeringa y agujas, Algodn y alcohol yodado
PROCEDIMIENTO
a) DETERMINACIN DE PROTENAS TOTALES
Preparar la siguiente batera de tubos:
Soluciones
Agua destilada

Tubos de ensayo (ml)

Blanco
Estndar Muestra
----50 l

Suero patrn

---

50 l

---

Suero sanguneo

---

---

50l

3.5 ml

3.5 ml

3.5 ml

Reactivo EDTA/Cu

o Mezclar e incubar por 15 minutos a 37 C.

o Leer la absorbancia en el espectrofotmetro a 540 nm.
o Anotar los resultados de absorbancia (Abs. M, Abs. S y Abs. B)

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o Reemplazar en la siguiente frmula, los valores obtenidos:

Prot. Totales (g/dl)
Protenas totales (g/dl) = (Abs. M Abs. B) x ------------------------------(Abs. S Abs. B)
b) DETERMINACIN DE ALBMINA
* Preparar la siguiente batera de tubos:

Soluciones
Suero patrn

Tubos de ensayo (ml)

Blanco
Estndar Muestra
----10 l

Suero sanguneo
Reactivo

---

---

10l

3.5 ml

3.5 ml

3.5 ml

* Mezclar e incubar por 10 minutos a 22 C.

* Leer la absorbancia en el espectrofotmetro a 625 nm.
* Anotar los resultados de absorbancia (Abs. M, Abs. S y Abs. B)
Reemplazar en la siguiente frmula, las absorbancias:
Albmina (g/dl)
Albmina (g/dl) = (Abs. M Abs. B) x ------------------------------(Abs. S Abs. B)
c) DETERMINACIN DE GLOBULINA
Hallar la diferencia de la concentracin de protenas totales menos la
concentracin de albmina.
Globulina (g/dl) = Protenas totales (g/dl) Albmina (g/dl)
d) RELACIN ALBMINA/GLOBULINA
Albmina (g/dl)
Relacin A/G = ------------------------------------------------------------Protenas totales (g/dl) Albmina (g/dl)
VALORES DE REFERENCIA
Se determin el contenido de protenas totales y albmina en suero de personas sanas,
de ambos sexos, con alimentacin mixta normal y edades entre 17 y 40 aos;
obtenindose los siguientes rangos:
Protenas totales:
6.1 a 7.9 g/dl
Albmina:
3.5 a 4.8 g/dl
Globulina:
2.5 a 3.2 g/dl

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Relacin A/G:

1.2 a 2.2

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PRCTICA N 03
DETERMINACIN DE UREA EN SUERO SANGUNEO
La urea es el resultado final del metabolismo de las protenas. Se forma en el
hgado a partir del catabolismo de las protenas. Durante la digestin las protenas son
separadas en aminocidos, estos contiene nitrgeno que se libera como in amonio, y el
resto de la molcula se utiliza para generar energa en las clulas y tejidos. El amonio se
une a pequeas molculas para producir urea, la cual aparece en la sangre y es
eliminada por la orina. Si el rin no funciona bien la urea se acumula en la sangre y se
eleva su concentracin.
El examen se realiza en general como un parmetro que indica la funcin renal,
aunque puede estar alterado en enfermedades del hgado o en la deshidratacin.
Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en:
- Dietas con exceso de protenas
- Enfermedades renales
- Fallo cardiaco
- Hemorragias gastrointestinales
- Hipovolemia (quemaduras, deshidratacin)
- Inanicin
- Obstrucciones renales (piedras, tumores)
Puede aparecer la urea disminuida en:
- Dieta pobre en protenas
- Fallo heptico
- Embarazo
- Exceso de hidratacin.
- Malnutricin
Fundamento del mtodo: la ureasa descompone especficamente la urea produciendo
dixido de carbono y amoniaco, esta reaccin en medio alcalino con salicilato e
hipoclorito para dar indofenol color verde.
OBJETIVO
* Determinar la concentracin de urea en suero sanguneo.
MATERIALES Y EQUIPOS
* Tubos de ensayo.
* Pipetas
* Micro pipetas
* Beakers
* Espectrofotmetro
* Centrfuga
* Bao mara
* Kit de urea
* Suero sanguneo
* Jeringa y agujas
Algodn y alcohol yodado

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PROCEDIMIENTO

Preparar la siguiente batera de tubos:

Soluciones
Suero estndar
Suero sanguneo
Reactivo 1 + Ureasa

Tubos de ensayo (ml)

Blanco
Estndar Muestra
----10 l
----10l
1.0 ml
1.0 ml
ml

* Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 C 10 minutos a temperatura ambiente.

Luego agregar:
Soluciones
Reactivo 2

Tubos de ensayo (ml)

Blanco
Estndar Muestra
1.0 ml
1.0 ml
1.0 ml

* Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 C 10 minutos a temperatura ambiente.

* Leer la absorbancia en el espectrofotmetro a 570 nm.
* Anotar los resultados de absorbancia (Abs. M, Abs. S y Abs. B)
CLCULOS
0.60 g/l
Urea (g/dl) = (Abs. M Abs. B) x ------------------------------(Abs. S Abs. B)
VALORES DE REFERENCIA
Suero o plasma
: 0.10 0.45 g/l 10 45 mg/dl