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FACULDADE SANTO AGOSTINHO

DIRETORIA DE ENSINO
CURSO: BACHARELADO EM FARMCIA
DISCIPLINA: QUMICA ANALTICA
PROFESSOR: JOELMA ABREU

ESPECTOFOTROMETRIA NA REGIO DE UV E VISVEL

ANTNIO MONTEIRO SOBRINHO JUNIOR

ANTNIA ISMAIANE
CLOVES OLIVEIRA DE HOLANDA
ENIO RODRIGO
ISABELA CSAR DANIEL
LARISSA MARQUES
MNICA TANA SOBRINHO
RANDERSON SANTOS

Trabalho apresentado como requisito parcial

para aprovao na disciplina Biofsica
Aplicada do curso de Farmcia da
Faculdade de Santo Agostinho, sob
da Prof. Hamanda
Soares.
EXTRAO DO LAPACHOLorientao
DA SERRAGEM
DO IP
ANTNIO MONTEIRO SOBRINHO JUNIOR
ANTNIO MONTEIRO SOBRINHO JUNIOR
CLOVES OLIVEIRA
DE HOLANDA
TERESINA
ENIO RODRIGO
2014

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ANTNIO MONTEIRO SOBRINHO JUNIOR
ANTNIA ISMAIANE
CLOVES OLIVEIRA DE HOLANDA
ENIO RODRIGO
ISABELA CSAR DANIEL
LARISSA MARQUES
MNICA TANA SOBRINHO
RANDERSON SANTOS

ESPECTROFOTOMETRIA NA RIGIO DE UV E VISVEL

TERESINA
2014

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RESUMO
A espectrofotometria ou espectroscopia de radiao na regio do ultravioleta e
visvel muito utilizada nos meios laboratoriais no que diz respeito s tcnicas de
anlises (qualitativas ou quantitativas), por sua confiabilidade e preciso, tornando-se
insdispensvel o seu conhecimento, por futuros profissionais farmacuticos.
Palavras chave : Espectroscopia, ultravioleta, anlises.

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SUMRIO
INTRODUO..........................................................................................................
PRNCIPIOS BSICOS ............................................................................................
CONCLUSO ............................................................................................................
REFERENCIA ...........................................................................................................

INTRODUO
A espectrometria um conjunto de recursos que nos permite identificar a
estrutura das partculas que constituem as substncias. Atualmente existem tecnologias
to avanadas que se torna possvel descrever com preciso a estrutura exata de uma
molcula. Os equipamentos modernos permitem detectar os tipos de elementos
presentes no composto, a quantidade de cada um deles, a posio tridimensional de cada
tomo e muito mais. Esses aparelhos funcionam basicamente a partir de feixes de onda
eletromagntica incidentes sobre uma amostra do composto, que ento, absorve energia
em determinados comprimentos de onda (). Os valores da energia e dos comprimentos
de onda absorvidos so detectados no aparelho e transformados em um grfico no
computador. ento pela anlise desse grfico que se determina a estrutura da
molcula.
O espectro eletromagntico o intervalo completo da radiao eletromagntica
que vai da regio das ondas de rdio at os raios gama. Atualmente so conhecidas
radiaes com comprimento de onda que variam desde 10-6 m at cerca de 1011 m.
As radiaes com comprimento de onda superior a 0,74 m so ditas
infravermelhas. Por outro lado, quelas cujo comprimento de onda inferior a 0,36m
chamam-se ultravioletas. Logo, o espectro eletromagntico subdividido em trs faixas:
ultravioleta, visvel e infravermelha.
Dependendo das suas freqncias, as radiaes do espectro so portadoras de
quantidades de energia diferentes. Quanto mais curto o comprimento de onda, mais alta
a energia de um fton.
A radiao eletromagntica de comprimento de onda mais curto que a luz visvel
e mais longo que os raios X camada de luz ou radiao ultravioleta (UV). Esta luz,
invisvel para o olho humano, conhecida tambm como luz negra. A regio UV do
espectro foi descoberta em 1801 por John Ritter no transcurso de experincias
fotoeltricas.

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A luz UV geralmente dividida em regies denominadas de ultravioleta
prximo (400-300 nm), afastado (300-200 nm) e no vcuo (200-4 nm). Estes ltimos
comprimentos de ondas so particularmente prejudiciais para a vida, por serem
fortemente absorvidos pela atmosfera e pela camada de oznio da Terra.
A luz UV produzida em alguns processos que geram transio da luz visvel
em tomos, no qual, um eltron de um estado energtico de alta energia retorna para um
estado energtico de menor energia.
A absoro molecular na regio do UV e do visvel depende da estrutura
eletrnica da molcula. A absoro de energia quantizada e conduz passagem dos
eltrons de orbitais do estado fundamental para orbitais de maior energia em um estado
excitado. Para muitas das estruturas eletrnicas esta absoro ocorre em uma poro
pouco acessvel do ultravioleta. Na prtica, a espectrometria no UV limitada, na maior
parte, aos sistemas conjugados.
A seletividade da absoro no UV uma vantagem, entretanto, uma vez que se
pode reconhecer grupos caractersticos em molculas de complexidade bastante
varivel.
Como uma grande poro de uma molcula relativamente complexa pode ser
transparente no UV, pode-se obter espectro semelhante ao de molculas muito mais
simples. Assim, por exemplo, o espectro do hormnio masculino testosterona
assemelha-se bastante ao do xido de mesitila. A absoro produzida pela estrutura de
enoma conjugada, que existe em ambos os compostos.
Os efeitos biolgicos da luz UV inclui bronzeados e queimaduras pelo sol.
Exposio excessiva tem sido ligada ao desenvolvimento de cncer na pele e catarata. A
regio da luz ultravioleta afastada tem a capacidade de destruir certas classes de
bactrias. Por este motivo, usada para esterilizar alguns gneros alimentcios e
equipamentos mdicos.

PRINCPIOS BSICOS

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A espectrofotometria visvel e ultravioleta um dos mtodos analticos mais
usados nas determinaes analticas em diversas reas. aplicada para determinaes
de com
postos orgnicos e inorgnicos, como, por exemplo, na identificao do
princpio ativo de frmacos.
A espectroscopia de absoro molecular valiosa para a identificao dos
grupos funcionais na molcula. Mais importante, entretanto, so as aplicaes da
espectroscopia de absoro visvel/ ultravioleta para a determinao quantitativa de
compostos contendo grupos absorventes.
A regio ultravioleta do espectro geralmente considerada na faixa de 200 a
400 nm, e a regio do visvel entre 400 a 800 nm. As energias correspondentes a essas
regies so ao redor de 150 a 72 k.cal.mol -1 na regio ultravioleta, e 72 a 36 k.cal.mol -1
para a regio visvel. Energias dessa magnitude correspondem, muitas vezes, diferena
entre estados eletrnicos de muitas molculas.
A absoro da regio visvel e ultravioleta depende, em primeiro lugar, do
nmero e do arranjo dos eltrons nas molculas ou ons absorventes. Como
conseqncia, o pico de absoro pode ser correlacionado com o tipo de ligao que
existe na espcie que est sendo estudada.
De um ponto de vista prtico, o aspecto mais importante do clculo quntico
a determinao de quanta luz absorvida pela amostra. Isto descrito pela lei de BeerLambert, que d a relao entre a intensidade da luz incidindo na soluo (I0), e a
intensidade da luz saindo da soluo (I).
Log (I0/ I) =A=cl
A= absorbncia
= absorvidade molecular ou coeficiente de extino
c= concentrao do material absorvedor
l= espessura da amostra da amostra atravs da qual a luz passa.
A absoro pelos compostos orgnicos e inorgnicos relacionada com uma
deficincia de eltrons na molcula. Nos inorgnicos, o comprimento de onda de
absoro das transies d-d depende do metal envolvido, do nmero de grupos
coordenados, da basicidade, dos tomos doadores e da geometria dos grupos
coordenados.
Nos compostos orgnicos, os que possuem dupla ligao absorvem fortemente
no ultravioleta remoto. Os compostos que possuem ligaes simples e duplas

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alternadamente,

chamadas

de

ligaes

conjugadas,

produzem

absoro

em

comprimentos de ondas maiores. Quanto mais extenso for o sistema conjugado, mais
longos sero os comprimentos de onda absorvidos, podendo chegar regio do visvel.
DESVIOS DA LEI DE LAMBERT-BEER
Desvios qumicos
Deslocamento do equilbrio: quando um analito dissocia, associa ou reage com
um solvente para formar um produto que tem um espectro de absoro diferente do
analito. Ex: indicador cido-base.
Dissociao de complexos: excesso ou insuficincia de agente complexante.
Desvios instrumentais
Em solues muito concentradas, as molculas de soluto influenciam umas s
outras devido a suas proximidades, pois quando ficam muito perto umas das outras, a
absorvidade pode mudar um pouco.
Espectrofotmetros
Espectrofotmetros so instrumentos capazes de registrar dados de absorvncia
ou transmitncia em funo do comprimento de onda. Este registro chamado de
espectro de absoro ou de espectro de transmisso, segundo o dado registrado for de
absorvncia ou transmitncia, respectivamente. O espectro de absoro caracterstico
para cada espcie qumica, sendo possvel a identificao de uma espcie qumica por
seu espectro de absoro.
A caracterstica mais importante dos espectrofotmetros a seleo de
radiaes monocromticas, o que possibilita inmeras determinaes quantitativas
regidas pela Lei de Beer. Quando a regio espectral usada a ultravioleta/visvel, so
necessrios componentes ticos de quartzo e detectores altamente sensveis capazes de
detectar radiaes nessa extensa faixa espectral em que atua o instrumento. Os
espectrofotmetros, em geral, contm cinco componentes principais: fontes de radiao,
monocromador, recipientes para conter as solues, detectores e indicadores de sinal.

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Fontes de radiao

Monocromador

Compartimento
Amostra/padro

Dispositivo de
processamentos de dados

Sistema detector

Esquema dos componentes principais de um espectrofotmetro

Fontes de radiao
As fontes de radiao mais comuns baseiam-se na incandescncia e so muito
prticas no infravermelho e no visvel, mas devem atuar em temperaturas elevadas na
faixa do ultravioleta. As fontes de radiao so constitudas por filamentos de materiais
que so excitados por descargas eltricas com elevada voltagem ou aquecimento
eltrico.
Para que uma fonte de radiao seja considerada de boa qualidade deve:
- gerar radiao continua, ou seja, emitir todos os comprimentos de onda, dentro
da regio espectral utilizada;
- ter intensidade de potncia radiante suficiente para permitir a sua deteco pelo
sistema detector da mquina;
-ser estvel, isto , a potncia radiante deve ser constante. Alm disso, deve ter
vida longa e preo baixo.
Tipos de fontes de radiao
Lmpada de filamento de tungstnio: incandescente, produz emisso continua na
faixa e 320 a 2500nm. O invlucro de vidro absorve toda radiao abaixo de 320nm,
limitando o uso da lmpada para o visvel e infravermelho.
Lmpada de quartzo-iodo: incandescente, o invlucro de quartzo emite radiao
de 200 a 3000nm. Sua vantagem que pode atuar na regio do ultravioleta.
Lmpada de descarga de hidrognio ou de deutrio: a mais usada para emisso
de radiao ultravioleta. Consiste em um par de eletrodos fechados em um tubo de
quartzo ou vidro, com janela de quartzo, preenchido com gs hidrognio ou deutrio.

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Aplicando alta voltagem, produz-se uma descarga de eltrons que excitam outros
eltrons gasosos a altos nveis energticos. Quando os eltrons voltam a seus estados
fundamentais, emitem radiao contnua de 180 a 370nm.
Lmpada de catodo oco: tipo especial de fonte de linha. preenchida com um
gs nobre, a fim de manter uma descarga de arco. O ctodo tem a forma de um cilindro
oco, fechado em uma extremidade, revestido com o metal cujas linhas espectrais se
desejam obter. O nodo um fio reto ao lado do ctodo. A energia do arco causa ejeo
dos tomos metlicos do revestimento do ctodo os quais, excitados, emitem os seus
espectros caractersticos.
Laser: pelo processo de emisso estimulada, os lasers produzem uma enxurrada
de feixes muito estreitos e intensos de radiao. Todas as ondas procedentes ao material
emissor esto em fase entre si, e, por isso, praticamente no apresenta disperso quando
se propaga.
Isso permite uma concentrao de energia num ponto muito pequeno, mesmo
que esteja numa distncia considervel.
Monocromadores
So dispositivos essenciais dos espectrofotmetros e tem como funo a seleo
do comprimento de onda e que se tem interesse para a anlise. constitudo de uma
fenda de entrada de um elemento de disperso de radiao e de uma fenda de sada. O
elemento de disperso pode ser um prisma ou uma rede de difrao.
1) Monocromador prismtico: a radiao policromtica procedente da fonte de
radiao passa pela fenda de entrada e incide sobre a face de um prisma, sofrendo
desvio. Os prismas de quartzo so indicados para trabalhar na regio ultravioleta,
embora tenham mais disperso que o vidro. Na regio do visvel so empregados primas
de vidro. Os prismas de quartzo apresentam desvantagem de serem altamente
refringentes e oticamente ativos.
2) Monocromador reticular: o principal elemento de disperso dos
monocromadores reticulares a rede de difrao, que consiste em uma placa
transparente com inmeras ranhuras paralelas e de mesma distncia. As redes de
difrao dispersam a radiao policromtica baseadas no fenmeno da interferncia, e a
disperso resultante desta rede linear. As redes de difrao possuem resoluo melhor
que os prismas e podem ser utilizadas em todas as regies espectrais.

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Recipientes
So usados como recipientes cubas ou cubetas retangulares de vidro ou quartzo.
As cubetas de vidro so usadas quando se trabalha na regio do visvel. Para a
regio do ultravioleta, devem-se usar as cubetas de quartzo, que so transparentes
radiao ultravioleta, pois o vidro absorve a mesma.
Uma cubeta ideal deve ser de 1 cm, para simplificar os clculos da expresso da
Lei de Beer. As cubetas tambm podem ter dimenses diferentes, e esse dado deve ser
considerado na hora do clculo.
1 cm

Cubeta convencional

Para aplicaes industriais, como, por exemplo, no controle de qualidade de

lotes de produo, utiliza-se um sistema automatizado em que as amostras circulam em
srie em cubetas adequadas. Esse sistema chamado de anlise por injeo de fluxo ou
FIA (do ingls Flow Injection Analysis)
Tipos de espectrofotmetros para regio visvel e ultravioleta
Os espectrofotmetros variam em sua complexidade e desempenho. Existem
modelos simples e mais sofisticados, equipados com softwares especiais de acordo com
a necessidade industrial.
Os componentes dos espectrofotmetros esto relacionados com a faixa do
comprimento de onda, a exatido e a preciso requeridos para as anlises. Podem ser de
dois tipos:
- espectrofotmetros mono-feixe;
- espectrofotmetros duplo-feixe.
1)

Espectrofotmetros mono-feixe: ajusta-se a transmitncia em 0%,

fechando o obturador entre a fonte de radiao e o detector. Aps ocorre o ajuste

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de transmitncia em 100%. Coloca-se o solvente (branco) no caminho tico,
abre-se o obturador e varia-se a intensidade da radiao at que o sinal seja de
100% de transmitncia. Ento substitui- se o recipiente com solvente pelo
recipiente com a amostra e o percentual de transmitncia da mesma lido no
indicador de sinal.
1)

Espectrofotmetros de duplo-feixe: dois feixes de radiao so

formados no espao. Um feixe passa pela soluo de referncia (branco) at o

transdutor e o segundo feixe, ao mesmo tempo, passa atravs da amostra at o
segundo transdutor. Nos espectrofotmetros deste tipo o ajuste do 0% feito
com a interrupo de radiao nos dois feixes e o 100% de transmitncia
ajustado com o solvente (branco) colocado no caminho tico dos dois feixes.
Procedimentos analticos em espectrofotometria visvel e ultravioleta
Anlise qualitativa: pela analise da absorvncia possvel determinar qual
espcie qumica esta presente na amostra. Tambm possvel detectar contaminaes
ou processos de decomposio de matrias-primas pela comparao dos espectros de
absoro da matria e do padro da mesma.
Anlise quantitativa: a condio essencial para qualquer determinao por
espectrofotometria no visvel e ultravioleta a observao da lei de Beer.
Outras condies como pH, tcnicas de extrao por solventes, ajuste do estado
de oxidao, remoo prvia dos interferentes, controle da fora inica do meio, e as
variaes das temperaturas tambm so observadas.

Espectro de protenas
- possuem espectro bem caracterstico;
-so influenciadas pelo meio local: dependem de fenmenos eltricos;
-mostra a quantidade de hlice e folha ;
-caso a protena seja desnaturada, a espectroscopia ser diferente.
Espectro de cidos nuclicos

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-tem a absorbncia menor que a soma das absorbncias dos nucleotdeos
individuais (hipocromicidade) e ocorre devido ao empilhamento ou alinhamento dos
planos paralelos das bases;
-se ocorrer um acrscimo na absoro hipercromicidade
-serve para determinar se esto estruturados.
Fluorescncia e fosforescncia
Fluorescncia a emisso de luz associada com eltrons que se movem de
um estado excitado para o estado fundamental.
Fosforescncia a capacidade que uma espcie qumica tem de emitir luz.
As duas so freqentemente usadas para se estudar processos biolgicos e
so muito mais teis que a absorbncia, por serem consideravelmente mais
sensveis, podendo, ento, detectar concentraes bastante baixas.
Automao nos mtodos espectrofotomtricos
Os principais motivos para o desenvolvimento de um sistema que viabilizasse
vrias determinaes simultneas com o mnimo de trabalho humano foram:
- preencher as necessidades dos laboratrios de analises clnicas, devido
crescente nmero de analises;
- o aumento do nmero de espcies qumicas a serem determinadas no sangue e
na urina como anlise de rotina.
O uso desses instrumentos em laboratrios de anlises clnicas foi logo estendido
a laboratrios de controle de qualidade de processos industriais num variado tipo de
amostras como ar, gua solo, produtos agrcolas e farmacuticos.
As vantagens dos mtodos automatizados so:
- maior velocidade no processamento das anlises;
- maior confiabilidade nos resultados;
- minimizao de contaminaes;
- diminuio na gerao de resduos;
- menor consumo de amostras e reagentes.

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CONCLUSO
O desenvolvimento de um instrumental preciso e adequado para uma
determinada anlise uma questo de grande relevncia no cenrio atual, sendo esta
uma das principais ocupaes de pesquisadores que esto engajados na tarefa de isolar
pequenas quantidades de compostos orgnicos e inorgnicos a partir de misturas
complexas e fazer sua identificao espectrofotomtrica.
Com base nisso, a espectroscopia na regio do UV/VIS constitui um dos mais
amplos caminhos usados pelos qumicos analticos para determinao de espcies
moleculares em soluo.
Apesar do espectro ultravioleta e visvel nos fornecer informaes limitadas
sobre as estruturas qumicas de uma substncia, esta tcnica muito utilizada por
possuir uma alta da sensibilidade de anlise e do alto grau de preciso e exatido em
suas medidas, logo ela empregada extensivamente em determinaes quantitativas.

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BIBLIOGRAFIA

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Interciencias, 2000.
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outubro de 2010.
http://reocities.com/Vienna/choir/9201/espectrometria.htm, acessado em 29 de
outubro de 2010.
http://www.ufrgs.br/leosite_especindex.html, acessado em 29 de outubro de 2010
PIMENTEL, M. F. e NETO, B. B.; Calibrao: uma reviso para qumicos
analticos, Qum. Nova, 19 (1996), 268.
SKOOG, D. A.; HOLLER, F.; NIEMAN, T. A.; Princpios de Anlise
Instrumental, 5o ed., Ed. Bookman, Porto Alegre, 2002.
SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; Fundamentals of Analytical