HYDRAGEL LIPO +Lp(a) K20

Ref. 3007
Ref. 3207*

2013/01

HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 - 2013/01

ESPECIFICACIONES DE USO

El kit HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 est diseado para la determinacin de los perfiles lipoproteicos y para la investigacin de la presencia de Lp(a)
en suero humano. El anlisis se realiza mediante electroforesis en geles de agarosa tamponados a pH 7.5. Las lipoprotenas separadas son teidas
con un colorante negro Sudn especfico de lpidos. El exceso de colorante se elimina con una solucin alcohlica. Las separaciones electroforticas
resultantes pueden ser evaluadas visualmente para la deteccin de anomalas en el patrn o mediante densitometra para obtener una cuantificacin
relativa de las fracciones individuales.
Cada gel de agarosa est pensado para analizar 7 muestras en el kit HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20.
Para Uso Diagnstico In Vitro.

PRINCIPIO DEL TEST

Las lipoprotenas son complejos circulantes formados por lpidos y protenas. La clasificacin de las lipoprotenas est basada en sus propiedades,
que conducen a tcnicas para su separacin:
su densidad (ultracentrifugacin),
su carga (electroforesis de zona),
su tamao (filtracin molecular en la electroforesis en gel de poliacrilamida).

La clasificacin de las hiperlipemias est basada en la electroforesis de zona.

En los geles de agarosa, las lipoprotenas se separan en las fracciones siguientes (en orden de movilidad creciente):
los quilomicrones: son molculas muy grandes con un alto contenido en triglicridos, presentes como partculas pequeas en el plasma y
responsables de la opacidad del suero. Normalmente permanecen en el punto de aplicacin.
las beta lipoprotenas o Lipoprotenas de Baja Densidad (LDL, Low Density Lipoproteins): normalmente migran en la posicin de las beta globulinas.
las pre-beta lipoprotenas o Lipoprotenas de Muy Baja Densidad (VLDL, Very Low Density Lipoproteins): tienen un peso molecular superior y una
densidad inferior que las LDL. Son ms rpidas que las LDL y migran en la posicin de las beta globulinas.
las pre-beta lipoprotenas rpidas (cuando estn presentes): esta fraccin est compuesta por lipoprotena (a) o Lp(a), cuyo tamao y composicin
son similares a los de las LDL. Cuando la Lp(a) est presente a una concentracin suficientemente elevada puede verse migrando entre VLDL y
HDL.
las alfa lipoprotenas o Lipoprotenas de Alta Densidad (HDL, High Density Lipoproteins): son la fraccin ms rpida. Migran en la posicin de las
alfa-2 globulinas.

La electroforesis es una tcnica sencilla y til para la evaluacin de las anomalas lipoproteicas y de los factores de riesgo de enfermedad coronaria
en el suero.
La diferenciacin de las lipoprotenas segn su movilidad electrofortica es la base de la clasificacin de Fredrickson. Esta clasificacin permite la
aplicacin de un tratamiento diettico o teraputico en seguida.

La Lp(a) ha sido documentada como un factor de riesgo para desarrollar la enfermedad coronaria cardiaca. Parece que conlleva un riesgo
significativo, especialmente en presencia de otros factores de riesgo, en particular una LDL elevada. Se han atribuido a la Lp(a) propiedades
aterognicas y antifibrinolticas.
Hay estudios que han mostrado que los individuos con enfermedad cardiovascular aterosclertica normalmente presentan una o ms de las
siguientes anomalas lipoproteicas: (1) colesterol LDL aumentado, (2) colesterol HDL disminuido, (3) IDL aumentadas y quilomicrones remanentes,
(4) niveles elevados de Lp(a). Por consiguiente, la investigacin de la presencia de Lp(a) y niveles reveladores de otras lipoprotenas son esenciales
para la evaluacin de los factores de riesgo aterosclerticos.
La electroforesis usando el procedimiento HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 presenta una ventaja en particular: permite la determinacin simultnea del
perfil lipoproteico y la deteccin de la fraccin pre-beta rpida o Lp(a).

REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN LOS KITS HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20

ATENCIN : Ver las fichas de datos de seguridad.

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ARTCULOS
PN 3007
PN 3207*
Geles de Agarosa (listos para usar)
10 geles
100 geles
Tampn HYDRAGEL LIPO + Lp(a) (solucin stock)
3 viales de 75 mL
15 viales de 75 mL
Colorante Negro Sudn (solucin stock)
1 vial, 20 mL
5 viales de 20 mL
Solucin de Lavado (solucin stock)
1 vial, 80 mL
7 viales de 80 mL
Aplicadores de 7 dientes (listos para usar)
1 caja de 10
10 cajas de 10
Papeles de Filtro - Finos
1 paquete de 10
10 paquetes de 10
(*) MAXI-KIT HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20
El volumen de tampn suministrado en el MAXI-KIT es para dos migraciones. Conservar el tampn para utilizarlo en dos geles.

PARA OBTENER RESULTADOS PTIMOS :

Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y segn las instrucciones incluidas.
LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES.

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1. GELES DE AGAROSA

Preparacin

Los geles de agarosa estn listos para usar. Cada gel contiene : agarosa ; tampn pH 7,5 0,5 ; componentes inocuos a las concentraciones usadas,
necesarios para un funcionamiento ptimo.

Uso

Medio de soporte para la electroforesis de lipoprotenas.

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INSTRUCCIONES SEBIA - Espaol

HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 - 2013/01

Almacenamiento, estabilidad y seales de deterioro

Almacene los geles horizontalmente en sus recipientes protectores originales a temperatura ambiente (15 a 30 C) o refrigerados (2 a 8 C). (La flecha
situada en la cara frontal de la caja del kit debe apuntar hacia arriba). Evite fluctuaciones de temperatura evidentes durante el almacenaje (por
ejemplo, no los almacene cerca de una ventana o de una fuente de calor). Los geles son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja
del kit o en las etiquetas de los recipientes protectores.
NO LOS CONGELE.
Deseche el gel cuando:
(i) se formen cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda (consecuencias de la congelacin del gel),
(ii) se observe crecimiento bacteriano o fngico,
(iii) haya una cantidad anormal de lquido en la caja del gel (como resultado de la exudacin del tampn debida a un almacenamiento inadecuado).

2. TAMPN HYDRAGEL LIPO + Lp(a)

Preparacin

Cada vial de tampn concentrado debe completarse hasta 1 litro con agua destilada o desionizada.
Despus de la dilucin, la solucin contiene: tampn pH 8,2 0,5 ; componentes inocuos a las concentraciones usadas, necesarios para un
funcionamiento ptimo.

Uso

Tampn de electroforesis.

Almacenamiento, estabilidad y seales de deterioro

Almacene la solucin stock del tampn a temperatura ambiente o refrigerada. La solucin stock es estable durante varios aos, por lo menos hasta
la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial de tampn. La solucin diluida del tampn es estable durante un ao a
temperatura ambiente en una botella cerrada.
Deseche el tampn diluido si cambia su aspecto, por ejemplo, se vuelve turbio debido a contaminacin microbiana.

3. COLORANTE NEGRO SUDN

Preparacin

Prepare la solucin colorante al menos 30 minutos antes de usarla mezclando en el orden siguiente, bajo agitacin magntica :
1) 80 mL de etanol puro ; 1 mL de negro Sudn concentrado, espere a la homogenizacin completa antes de continuar la preparacin ; 70 mL de
agua destilada o desionizada,

2) 57 mL de isopropanol puro ; 1 mL de negro Sudn concentrado, espere a la homogenizacin completa antes de continuar la preparacin ; 93 mL
de agua destilada o desionizada.
Agite esta solucin durante 30 minutos.
Mantenga estas soluciones protegidas de cualquier fuente de calor. Deschelas despus de cada procedimiento de tincin.
IMPORTANTE: El uso de otro alcohol o de etanol desnaturalizado puede llevar a la obtencin de resultados atpicos. Si el alcohol est menos
concentrado, ajuste en consecuencia los volmenes de alcohol y agua.

Uso

Para teir los geles con separaciones electroforticas de lipoprotenas.

Almacenamiento, estabilidad y seales de deterioro

La solucin de colorante concentrada debe conservarse a temperatura ambiente. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la
etiqueta del vial de colorante.
La soluciones de trabajo del colorante son estables durante 12 horas como mximo a temperatura ambiente en un contenedor cerrado para evitar la
evaporacin.
NOTA : La solucin concentrada de colorante puede gelificarse. Se vuelve a disolver fcilmente a una temperatura ambiente superior a 15 C, sin
que la calidad del test se vea afectada. Homogenizar mediante agitacin antes de usarlo.

4. SOLUCIN DE LAVADO

Preparacin

El vial de solucin de lavado concentrada debe completarse hasta 5 litros con agua destilada o desionizada. Se aconseja diluir slo 16 mL de solucin
concentrada hasta 1 litro con agua destilada o desionizada.
Despus de la dilucin, la solucin de lavado contiene : tampn pH 8,7 0,5.

Uso

Sirve para lavar el gel despus de la decoloracin.

Almacenamiento, estabilidad y seales de deterioro

Almacene las soluciones de lavado stock y de trabajo a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados. Son estables hasta la fecha
de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial de solucin de lavado.
Deseche la solucin de lavado de trabajo si cambia su aspecto, por ejemplo, se vuelve turbia debido a contaminacin microbiana.

5. APLICADORES

Uso

Aplicadores precortados, de un solo uso, para la aplicacin de la muestra.

Almacenamiento

Almacene los aplicadores en un lugar seco a temperatura ambiente o refrigerados.

6. PAPELES DE FILTRO - FINOS

Uso

Papeles de filtro finos absorbentes, de un solo uso, para absorber el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicacin de la muestra.

Conservacin

Conserve los papeles de filtro finos en un lugar seco a temperatura ambiente o en nevera.
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HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 - 2013/01

REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS

ATENCIN : Ver las fichas de datos de seguridad.

1. SOLUCIN DECOLORANTE

Preparacin

Por lo menos 15 minutos antes de usarla, prepare 150 mL de una solucin que contenga (vol./vol.):
45 % de etanol puro y 55 % de agua destilada o desionizada, o,
30 % de isopropanol puro y 70 % de agua destilada o desionizada.

IMPORTANTE: El uso de otro alcohol o de etanol desnaturalizado puede llevar a la obtencin de resultados atpicos. Si el alcohol est menos
concentrado, ajuste en consecuencia los volmenes de alcohol y agua.

Uso

Para decolorar, esto es, la eliminacin del exceso de tincin y la coloracin de fondo de los geles.

Almacenamiento, estabilidad y seales de deterioro

Almacene la solucin decolorante a temperatura ambiente cerrada hermticamente para evitar la evaporacin. Es estable durante un mes a
temperatura ambiente.
Deseche la solucin decolorante si cambia su aspecto, por ejemplo, se vuelve turbia debido a contaminacin microbiana.

2. FLUIDIL

Preparacin

El Fluidil (SEBIA, PN 4587, 1 vial, 5 mL) est listo para su uso.

Uso

Para diluir las muestras viscosas o turbias, por ejemplo, sueros que contengan crioglobulina o criogel (por ejemplo, la turbidez puede estar inducida
por una crioglobulina pero no por los triglicridos).

Almacenamiento, estabilidad y seales de deterioro

Almacnelo a temperatura ambiente o refrigerado. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial de Fluidil.
El Fluidil debe estar exento de precipitados.
NOTAS :

Las pruebas realizadas durante la validacin de los reactivos muestran que, para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a
reconstituir, una variacin del volumen final de un 5 % no tiene ningn efecto adverso en el anlisis.
El agua destilada o desionizada, usada para la reconstitucin de las soluciones, debe estar exenta de contaminacin bacteriana o fngica (use un
filtro de 0,22 m) y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm.

EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS

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6.
7.
8.

Fuente de alimentacin: MG 300 SEBIA, PN 1302 MG 500 SEBIA, PN 1303.

APLICADOR HYDRAGEL K20 SEBIA, PN 1409, que contiene el soporte del aplicador HYDRAGEL K20.
Cmara de Almacenamiento Hmeda, PN 1270.
Cubeta de electroforesis: K20 SEBIA, PN 1400.
Tanques y Soportes de Gel para el procesamiento de los geles: Kit de Accesorios HYDRAGEL K20 SEBIA, PN 1420.
Pipetas: 10 L, 200 L y 1000 L.
Estufa-Secador: IS 80 SEBIA, PN 1430.
Densitmetro / escner capaz de leer geles de 82 x 51 mm : HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA o escner equipado con el programa PHORESIS
SEBIA. Consultar las instrucciones de cada aparato para obtener los procedimientos de utilizacin y calibracin.

MUESTRAS PARA EL ANLISIS

Extraccin y almacenamiento de muestras

Se recomienda analizar muestras frescas de suero. Se recomienda obener las muestras en pacientes que hayan ayunado durante 12 horas como
mnimo. Deben obtenerse de acuerdo con los procedimientos establecidos de uso en el laboratorio clnico. Almacene las muestras refrigeradas (2 a
8 C) tan pronto como sea posible despus de su obtencin y durante 3 das como mximo.
No congele las muestras.
No use muestras recogidas en heparina.
El almacenaje causa una disminucin de la movilidad de la lipoprotena pre-beta, y, por lo tanto, infravaloracin de la fraccin correspondiente. La
movilidad de la lipoprotena pre-beta rpida (o Lp(a)) no ser afectada por el almacenaje.

Preparacin de las muestras

Use muestras de suero sin diluir.

Al almacenarlas entre 2 y 8 C, algunas muestras (especialmente aquellas que contengan crioglobulina o criogel) pueden volverse viscosas o
desarrollar turbidez. Tales muestras pueden presentar problemas de aplicacin debidos a la difusin dificultada a travs de los dientes del aplicador
de muestra. En tal caso, aada 25 L de Fluidil a 75 L de suero y agtelo en el vrtex durante 15 segundos. Siga entonces con el procedimiento
estndar.

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HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 - 2013/01

PROCEDIMIENTO

I. MIGRACIN

1. Coloque el soporte del aplicador HYDRAGEL K20 en una superficie plana (Fig. 1) y eleve la parte del soporte del aplicador con las muescas
numeradas.
2. Dispense 120 L de agua destilada o desionizada en el tercio inferior del marco impreso en el soporte del aplicador HYDRAGEL K20.
3. Saque el gel de agarosa HYDRAGEL de su envoltorio.
4. Extienda un papel de filtro fino de manera rpida y uniforme sobre la superficie del gel para absorber el exceso de lquido. Retire el papel
inmediatamente.
ADVERTENCIA: Para evitar que se deshidrate, no deje que el papel de filtro contacte con el gel durante mucho tiempo.

5. Ponga el gel (con el lado de agarosa hacia arriba) con su borde inferior contra el tope situado debajo del marco impreso (Fig. 2).
6. Doble el gel y haga que contacte con el agua (Fig. 2). Asegrese de que no se formen burbujas de aire, de que el agua est extendida bajo
toda la superficie del gel y de que ste est alineado con el marco impreso.
7. Baje el soporte del aplicador con las muescas numeradas hasta la posicin intermedia con la rueda giratoria en posicin elevada.
8. Coloque un aplicador en una superficie plana con los nmeros de los pocillos hacia arriba (Fig. 3).
9. Aplique 10 L de muestra de suero en los pocillos del aplicador. Cargue el aplicador en menos de 2 minutos.
- Use el aplicador sin demora.
- Para un uso posterior (hasta 8 horas despus), coloque el aplicador en la cmara de almacenaje hmeda con los dientes hacia arriba
[cjalo por el marco protector de plstico de los dientes], guarde la cmara entera refrigerada y prepara el gel en el soporte del aplicador
HYDRAGEL K20 justo antes de usarlo.
Consulte la hoja de instrucciones de la cmara hmeda para ms detalles.
10. Rompa el marco protector de los dientes del aplicador.
11. Coloque el aplicador de muestra en la posicin No. 4 del soporte del aplicador.
IMPORTANTE: Los nmeros impresos en el aplicador de muestra deben quedar de cara al operario (Fig. 4).

12. Baje el soporte del aplicador con la rueda giratoria para que el aplicador contacte con la superficie del gel. NO FUERCE LOS SOPORTES
HACIA ABAJO.
13. Despus de 7 minutos y 30 segundos, gire la rueda giratoria para elevar el aplicador, saque el aplicador y deschelo.
14. Ponga el gel en una cubeta de electroforesis apropiada, de acuerdo con la polaridad indicada en el gel, poniendo la parte inferior del gel en
el lado catdico. Al usar la cubeta SEBIA K20, coloque el HYDRAGEL en el puente con el lado de agarosa hacia abajo ; el gel debe sumergirse
en el tampn alrededor de 1 cm por cada lado.
Consulte la hoja de instrucciones de la cubeta K20 para ms detalles.
15. Conecte la cubeta a la fuente de alimentacin.

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CONDICIONES DE MIGRACIN
Volumen de tampn por compartimento
Volumen total de tampn
Tiempo de migracin
Voltaje constante
Corriente inicial (por gel)

SEBIA K20
150 mL
300 mL
90 minutos
50 V
11 2 mA

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16. Despus de la migracin, desconecte la cubeta y saque el gel.

NOTA: Durante la electroforesis, puede observarse un leve depsito de sal en el electrodo andico. Es necesario limpiar los electrodos
cuidadosamente despus de cada migracin.

17. Seque el gel con aire caliente a 80 C, por ejemplo en la IS 80, durante 45 minutos por lo menos.
IMPORTANTE: El gel debe estar perfectamente seco.

II. TINCIN - DECOLORACIN

1. Coloque el gel en un soporte de gel (suministrado con el Kit de Accesorios SEBIA HYDRAGEL K20).
2. Sumerja el gel seco y enfriado en la solucin de tincin durante 15 minutos exactamente.
3. Decolore durante 5 minutos exactamente con solucin decolorante.

III. LAVADO - SECADO

1.
2.
3.
4.

Coloque el gel en un soporte de gel (suministrado con el Kit de Accesorios SEBIA HYDRAGEL K20).
Sumerja el gel en la solucin de lavado durante 1 minuto exactamente.
Lave el gel rpidamente con agua destilada o desionizada.
Escurra verticalmente el exceso de lquido de la superficie del gel y seque el gel con aire caliente a 80 C. Si es necesario, limpie el reverso
(el lado de soporte de plstico) del gel seco con un pauelo de papel empapado en una solucin alcohlica al 70 %.

IV. LECTURA

Lea el gel con un densitmetro / escner seleccionando el programa de lectura apropiado.

CONTROL DE CALIDAD

Se aconseja incluir un suero valorado con niveles normales de triglicridos y colesterol en cada anlisis de muestras (Suero Control de Protenas,
SEBIA PN 4785).

RESULTADOS
Valores

La lectura del gel mediante densitometra permite definir las concentraciones relativas (porcentajes) de cada fraccin.
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HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 - 2013/01

Los valores normales (media 2 SD) de las fracciones individuales con el procedimiento HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 han sido establecidos a partir
de una poblacin sana de 200 adultos (hombres y mujeres):
Beta lipoprotenas (LDL)
Pre-beta lipoprotenas (VLDL)
Alfa lipoprotenas (HDL)

:
:
:

38.6 - 69.4 %
4.4 - 23.1 %
22.3 - 53.3 %

Las lipoprotenas pre-beta rpidas, Lp(a), generalmente no aparecen en los lipidogramas de individuos normales.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de normalidad.

Patrn de migracin

Dependiendo de la composicin de la muestra se puede observar uno de los siguientes patrones:

HDL

HDL

VLDL

VLDL

LDL

Lp(a)

LDL

Punto de aplicacin

Punto de aplicacin

Interpretacin de los patrones lipoproteicos

El patrn lipoproteico de una muestra clnica puede ser interpretado visualmente comparndolo con un control, el patrn de un suero normal. La
densitometra proporciona los porcentajes relativos exactos de las fracciones individuales de lipoprotena. Las anomalas cualitativas (presencia de
fracciones anormales o ausencia de fracciones normales) o semicuantitativas (aumento o disminucin relativo de las fracciones) requieren anlisis
de lipoprotenas posteriores. La clasificacin de las lipoprotenas de Fredrickson es una ayuda adicional para interpretar los patrones lipoproteicos.

Interpretacin de la electroforesis de lipoprotenas Clasificacin de Fredrickson

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TIPO DE HIPERLIPEMIA
COLESTEROL TOTAL
g/L
mM/L
TRIGLICRIDOS
g/L
mM/L
APARIENCIA DEL SUERO
QUILOMICRONES
LDL
VLDL
HDL

Investigacin de la Lp(a)

| TIPO I |
| 2-4 |
| 5.2 - 10.4 |
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| 30 - 70 |
| 34 - 79 |
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| lechoso |
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++++
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| --- |
|de normal a - - - |
| --- |

TIPO II a
3 - 10
7.8 - 26
< 1.6
<2
claro

0
+++
normal
de normal a -

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TIPO II b
2.8 - 3.5
7.3 - 9.1

2-5
2.3 - 5.6
de claro a
ligeramente
turbio
0
++
++
de normal a -

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TIPO III
3-5
7.8 - 13

2-9
2.3 - 10.2
de claro a
ligeramente
turbio
0
++ unido
++
-

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TIPO IV
< 2.7
<7

2 - 10
2.3 - 11.3
turbio
0
+++
-

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TIPO V
5
13

30
34
lechoso
++++
-++
-

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Una fraccin adicional situada entre las fracciones alfa y pre-beta corresponde a la Lp(a). Su movilidad puede variar ligeramente segn los fenotipos
de Lp(a).
El nivel mnimo de deteccin est alrededor de 0.03 g/dL. Cuando esta fraccin aparece en el lipidograma, se recomienda cuantificar la Lp(a)
mediante un mtodo adecuado, como el procedimiento de electroinmunodifusin (HYDRAGEL Lp(a), SEBIA PN 4057) o la nefelometra.

Casos especiales

Cuando la fraccin pre-beta (VLDL) es especialmente elevada y andica (es el caso del tipo IV o V), puede esconder la fraccin de Lp(a). En este
caso, deje reposar el suero durante 24 a 48 horas a temperatura ambiente (lo que disminuye la movilidad de las VLDL) y repita la electroforesis.
En caso de duda, cuantifique la Lp(a) mediante cualquier medio adecuado.
En ausencia de quilomicrones, una fraccin con movilidad catdica indica la presencia de una lipoprotena especial denominada LP X. Se encuentra
en los sueros ictricos, en casos de colestasis o en la enfermedad biliar.

Interferencias y limitaciones

No use muestras recogidas en heparina o que hayan sido congeladas.

El almacenaje causa una disminucin de la movilidad pre-beta, y, por lo tanto, infravaloracin de la fraccin correspondiente (VLDL). La movilidad
de la Lp(a) no se ve afectada por el almacenaje.
La albmina migra 4 mm por delante de la banda de alfa lipoprotena. Esta fraccin puede ser teida muy ligeramente con el negro Sudn. No debe
ser incluida en el anlisis de lipoprotenas.
En algunos sueros puede aparecer un rastro ms o menos difuso delante de la fraccin de alfa lipoprotena (HDL). Esta zona corresponde a la
HDL parcialmente delipidada y tiene que ser incluida en el porcentaje de HDL.
El procedimiento es semicuantitativo ; los cambios detectados requieren anlisis adicionales.
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HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 - 2013/01

Resolucin de problemas

Llame al Servicio de Atencin Tcnica del distribuidor cuando la prueba no funcione, pese a haber seguido cuidadosamente las instrucciones para la
preparacin y el almacenaje de los materiales y para realizar el procedimiento.
Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit, as como las informaciones relativas a la eliminacin de los desechos, estn disponibles
en el Servicio de Asistencia Tcnica de su distribuidor.

CARACTERSTICAS TCNICAS

Se us el densitmetro HYRYS de SEBIA para todas las evaluaciones densitomtricas. Todas las separaciones electroforticas fueron tambin
interpretadas visualmente.

Reproducibilidad

En todos los estudios de reproducibilidad, las separaciones electroforticas fueron ledas y la concentracin relativa en tanto por ciento de cada
fraccin de lipoprotena se anot. Las medias, SD y CV se calcularon respecto a los parmetros examinados. No se observaron diferencias entre las
rplicas al examinar visualmente las separaciones electroforticas. Se obtuvo una buena reproducibilidad (precisin) en todas las circunstancias. Las
tablas muestran ejemplos representativos.

Reproducibilidad intraserial

Se analizaron tres muestras patolgicas con la fraccin Lp(a) usando el procedimiento HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20. Cada muestra se aplic en los
7 carriles de un nico gel de dos lotes diferentes. La tabla muestra los datos intraseriales de las tres muestras (ejemplo un gel/lote).

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FRACCIN
MEDIA
SD
CV%

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FRACCIN
MEDIA
SD
CV%

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HDL (%)
22.6 - 24.2 - 28.3
0.5 - 0.8 - 0.4
2.4 - 3.5 - 1.3

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HDL (%)
32.1
0.6
1.8

Reproducibilidad interserial

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Lp(a) (%)
2.2 - 4.7 - 8.6
0.1 - 0.2 - 0.2
6.1 - 4.1 - 2.2

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Lp(a) (%)
4.1
0.2
4.0

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VLDL (%)
17.8 - 22.1 - 6.5
0.6 - 0.5 - 0.1
3.3 - 2.5 - 2.0

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VLDL (%)
11.8
0.4
3.7

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LDL (%)
57.4 - 49.0 - 56.6
1.0 - 1.1 - 0.6
1.8 - 2.3 - 1.0

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LDL (%)
52.0
0.4
0.9

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Se analizaron siete muestras de suero diferentes usando el procedimiento HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20. Cada muestra se aplic en un carril en
cada uno de los 10 geles usados, procedentes de dos lotes diferentes. Se muestran los resultados obtenidos con una muestra representativa.

Linealidad y Sensibilidad

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Se determinaron las concentraciones relativas de las fracciones de lipoprotena en diluciones seriales de una muestra de suero. Las concentraciones
densitomtricas eran independientes del factor de dilucin. La mayor dilucin que proporcionaba un patrn legible (esto es, esencialmente el mismo
que el obtenido con la muestra de suero neta) fue la 1 : 4.
La concentracin de Lp(a) se determin en las muestras de suero mediante electroinmunodifusin. El lmite de deteccin estaba alrededor de
30 mg/dL.

Exactitud

Se midieron las concentraciones densitomtricas o relativas de las fracciones de lipoprotena individuales en muestras de suero normales y
anormales (n = 56) ; 16 muestras tenan Lp(a). Todas las muestras fueron analizadas usando la prueba HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 y una prueba
electrofortica equivalente. No se observaron diferencias en la interpretacin visual de las separaciones electroforticas. Los datos densitomtricos
fueron analizados usando un procedimiento estadstico de regresin lineal:

|
|
|
|
|

FRACCIN
HDL
Lp(a)
VLDL
LDL

DE CORRELACIN |
|COEFICIENTE 0.982
|
|
0.976
|
|
0.994
|
|
0.984
|
|

Identificacin de la fraccin pre-beta rpida como Lp(a)

PUNTO DE CORTE EN Y
0.255
-0.269
-0.477
2.804

|
|
|
|
|

PENDIENTE
0.979
0.939
0.997
0.966

|
|
|
|
|

Se usaron tcnicas de inmunofijacin e inmunosustraccin para demostrar que la Lp(a) migra en la fraccin pre-beta rpida como nico componente
detectable y que est ausente en las fracciones de LDL, VLDL y HDL.

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HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 - 2013/01

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SCHMAS / FIGURES

Figure 1

HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 - 2013/01

Figure 2

1 2
3 4
5 6
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Figure 3

Figure 4

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3 4
5 6
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7
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