Hematologia

ROTEIRO DE PRTICA: CONFECO E COLORAO

DE ESFREGAO SANGUNEO
Os elementos celulares do sangue espalhados em uma camada nica sobre a superfcie de uma lmina de
microscopia, quando fixados e tratados com corantes especiais, adquirem morfologia e colorao
adequadas para o estudo microscpico detalhado e preciso.
A confeco do esfregao sanguneo o fator importante para a realizao de um exame microscpico
satisfatrio. O esfregao de boa qualidade deve ser fino, regular, contnuo, livre de falhas e paradas e de
bordas livres, sem falhas na cauda, para haver boa distribuio das clulas, onde possvel fazer uma
contagem do nmero de clulas sanguneas.
Objetivo: realizar as tcnicas de confeco e colorao do esfregao sanguneo para identificao dos
componentes celulares do sangue humano.
Material:

Lminas de vidro
Amostra de sangue
Papel absorvente
Capilar ou pipeta
Corantes

Procedimento:
Confeco do Esfregao:
1. Realizar a limpeza de duas lminas com gaze ou papel absorvente (retirar resqucios de gordura ou
outros materiais);
2. Com um tubo tipo microcapilar ou uma pipeta colocar uma pequena gota de sangue a 2 cm,
aproximadamente, da extremidade de uma das lminas de microscopia limpa e desengordurada;
3. Utilizar a outra lmina como guia (extensora);
4. Encostar a lmina guia na gota de sangue, utilizando um ngulo de 45;
5. Realizar um ligeiro movimento para trs, a fim de que o sangue se difunda uniformemente ao longo da
borda da lmina;
6. Em seguida com um movimento uniforme e contnuo para frente, fazer a lmina guia deslizar sobre a
outra, espalhando o sangue em uma camada delgada e uniforme (figura);
7. Esperar o esfregao secar completamente;
8. Realizar a colorao conforme tcnica abaixo

Colorao do Esfregao:
Corantes hematolgicos so substncias qumicas que apresentam cor definida pela presena de grupos
atmicos ou radicais cromforos na sua molcula. Permitem a colorao tanto de estruturas nucleares como
citoplasmticas das clulas.
Corantes cidos: so sais cujo cido corado e a base incolor - EOSINA
Corantes bsicos: so sais cuja base corada e o cido incolor AZUL DE METILENO
Corantes neutros: apresentam tanto cido como base corados
Diversos corantes podem ser usados em hematologia para evidenciar alteraes celulares importantes
como o Wright, o Giemsa e o May-Grnwald Giemsa, mas em geral exigem um tempo e um custo maior
para colorao.
O PANTICO: um corante muitos utilizado em hematologia e baseia-se no princpio de colorao rpida
estabelecida por Romanowsky onde a extenso hematolgica submetida ao de um FIXADOR e duas
solues CORANTES, por meio de imerses de poucos segundos em cada.
Fixador: Metanol
Corante cido: Eosina que cora estruturas acidfilas como o citoplasma
Corante bsico: Azul de metileno que cora estruturas basfilas como o ncleo
1. Preencher 3 recipientes com as solues n 1, 2 e 3 respectivamente;
2. Submergir as lminas na soluo n 1 mantendo-se um movimento contnuo de cima para baixo ou para
os lados durante 05 segundos (5 imerses de 1 segundo cada) e deixar escorrer bem;
3. Submergir as lminas na soluo n 2 mantendo-se um movimento contnuo de cima para baixo ou para
os lados durante 05 segundos (5 imerses de 1 segundo cada) e deixar escorrer;
4. Submergir as lminas na soluo n 3 mantendo-se um movimento contnuo de cima para baixo ou para
os lados durante 05 segundos (5 imerses de 1 segundo cada) e deixar escorrer bem;
5. Lavar com gua corrente;
6. Secar ao ar na posio vertical e com o final da extenso voltado para cima.

gua Tamponada:
Os corantes so sensveis s variaes de pH.
Resultados satisfatrios so obtidos usando-se gua destilada tamponada com pH entre 6,6 a 7,0.