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DETERMINACION DE CAFEINA EN UNA BEBIDA ENERGIZANTE POR EL

METODO DE CROMATOGRAFIA DE ALTA EFICIENCIA (HPLC)


IBAEZ ARISTIZABAL, Jhon Alejandro (jhon.800913607@ucaldas.edu.co).
QUINTERO HENAO, Diana Lorena (diana.800920313@ucaldas.edu.co)
Universidad de caldas, Facultad de Ingenieras, Programa Ingeniera de Alimentos
Mayo 2015

RESUMEN

En la prctica se aplic la tcnica de cromatografa para la determinacin de


cafena y utilizando el ultravioleta visible para medir la concentracin de dicho
compuesto en la bebida energizante Peak, En la parte experimental, se realizaron
diferentes ensayos hasta obtener las condiciones ptimas en cada una de las
tcnicas para la determinacin tanto cualitativa como cuantitativa de la cafena,
ayudndonos de la interpolacin en una recta de calibrado confeccionada con
soluciones patrn de cafena de concentracin conocida. Tambin se ensayaron
distintos mtodos de extraccin de la cafena de las diferentes bebidas
energizantes. Despus de poner a punto tanto el mtodo de separacin de la
cafena de la bebida energizante como los dos mtodos analticos utilizados:
HPLC y espectrofotomtrico, se procedi a la determinacin cuantitativa de la
cafena en distintos energizantes comerciales de distinto origen y caractersticas.
Una vez efectuadas todas las determinaciones de cafena en los distintos
energizantes, trabajando siempre con varias repeticiones para poder realizar un
pequeo estudio estadstico de los valores obtenidos y asegurar la fiabilidad de
ellos, se intenta sacar conclusiones analizando los valores de cafena obtenidos y
una de ellas es la demostracin, tal y como preveamos, de que la cantidad de
cafena depende tanto del tipo de muestra, como del pas de origen y de su
procesado, los resultados arrojados para el analisis de cafena en las diferentes
muestras de bebidas energizantes dieron como resultado valores diferentes entre
replicas como lo fue en el caso de nuestra muestra de bebida energizante Peak
que en la rplica 1 dio un valor de 10,423 mg/100ml para la rplica 2 dio un valor
de 6,6139 mg/100ml y por ltimo para la rplica de 5.582 mg/100ml llevando
estos resultados a analizar a los investigadores que hubieron una serie de errores
sistemticos tanto en la preparacin como en el mtodo de obtencin de la
concentracin de la muestra.

ABSTRACT
In practice chromatography technique applies for determination of caffeine and
using the ultraviolet visible for measuring the concentration of said compound in
Peak energy drink, In the experimental part, various tests were conducted to obtain
optimum conditions in each of techniques for qualitative and quantitative
determination of caffeine, helping interpolation on a calibration curve made from
standard solutions of known concentration caffeine. Various methods of extracting
caffeine from the various energy drinks were also tested. After fine-tune both the
method of separation of caffeine energy drink as the two analytical methods: HPLC
and spectrophotometric, we proceeded to the determination of caffeine in various
commercial energizing of different origins and characteristics. After making all
determinations of caffeine at different energizing, always working with several
repetitions to make a small statistical study of the values obtained and ensure the
reliability of them, we try to draw conclusions analyzing the values of caffeine
obtained and one of them It is proof, as we foresaw, that the amount of caffeine
depends on the type of sample, and the country of origin and processing.
INTRODUCCION
La cromatografa engloba a un
conjunto de tcnicas de anlisis
basadas en la separacin de
componentes de una mezcla y su
posterior deteccin. Las tcnicas
cromatogrficas son muy variadas,
pero en todas ellas hay una fase
mvil que consiste en un fluido (gas,
lquido, o fluido supercrtico) que
arrastra a la muestra con un flujo
constante de presin proporcionado
por una bomba, hasta llegar al punto
donde es introducida la muestra.
Siguiendo el flujo de presin la lleva a
una columna donde se encuentra la
fase estacionaria que se trata de un
slido o un lquido fijado en un slido.
Los componentes de la mezcla
interaccionan de distinta forma con la
fase estacionaria y con la fase mvil.
De este modo, los componentes

atraviesan la fase estacionaria a


distintas velocidades y se van
separando. Despus de haber
pasado los componentes por la fase
estacionaria y haberse separado,
pasan por un detector que genera
una seal que puede depender de la
concentracin y del tipo del
compuesto.
La cafena es una sustancia que se
encuentra de forma natural en las
hojas, las semillas o los frutos de ms
de 60 plantas, se usa como producto
para dar sabor a gran variedad de
bebidas El consumo de cafena no
est relacionado con el riesgo
de enfermedades
coronarias ni
cardiovasculares,
no
causa hipertensin crnica
ni
aumento persistente de la presin
arterial.
Se define a la cafena como una
droga porque estimula el sistema
nervioso central, lo que aumenta el

estado de alerta. En la mayora de las


personas, la cafena produce un
aumento temporal de la energa y una
mejora del estado de nimo. En
estado natural la cafena tiene un
sabor amargo, hoy en da los
adolescentes obtienen la mayor parte
de la cafena de las bebidas
gaseosas y energizantes. La cafena
no se almacena en el cuerpo pero
puede sentirse sus efectos por
mximo 6 horas
La determinacin de cafena ha
adquirido mucha importancia, debido
a su uso en la industria farmacutica
y en la industria de alimentos; ya sea
como ingrediente en la elaboracin
de refrescos y bebidas energticas o
por su presencia en productos como
el t, el mate, el cacao y el caf. En
todos estos casos, el control de
calidad del parmetro cafena es
necesario en los productos que la
contienen. Por esta razn, se han
desarrollado
nuevos
mtodos
instrumentales para su determinacin
en diversas matrices, especialmente
en alimentos.
La cromatografa no solo permite la
separacin de los componentes de
una mezcla, sino tambin su
identificacin y cuantificacin. El
anlisis cualitativo est basado en la
medida
de
parmetros
cromatogrficos
(tiempos
y
volmenes de retencin) mientras
que el anlisis cuantitativo est
basado en la medida de alturas o
reas de picos cromatogrficos que
se relacionan con la concentracin.
La columna cromatogrfica y la forma
con la que se disea, constituye el
corazn de la separacin. El detector,

situado al final de la columna es el


que garantiza la respuesta de los
componentes que se separan. La
determinacin de la cafena se suele
llevar a cabo mediante tcnicas de
separacin
como
HPLC
(Cromatografa
lquida
de
alta
eficiencia),
CE
(Electroforesis
capilar), TLC (Cromatografa de capa
fina) o GC (Cromatografa de gases).
Estos mtodos realizan la deteccin
mediante tcnicas electroqumicas
(potenciomtricas, conductimtricas,
amperomtricas,
etc.),
pticas
(espectrofotomtricas, fluorimtricas,
etc.) y otras (termoqumicas). La
eleccin de una u otra tcnica
depende del problema a resolver, del
volumen de muestra y de su
concentracin.
METODOLOGIA
RESULTADOS
Tabla 1. reas de los estndares de calibracin
Patrn
conc
AREA
entra
cin
1
10
75,7518
868456
2
20
102,8683 109,9757
3
40
179,2652 183,0969
4
60
249,7633 256,0501
5
80
310,9967 318,0290 312,1739
6
100
357,045
381,8068 364,6477

Promedio

81,2985
106,422
181,18105
252,9067
313,7332
367,83316

Tabla 2.areas de las bebidas energizantes

solucion
es
Gold
Monster
Red Bull

reas
Replica 1
Replica 2
Replica 3
442,7260 475,88
249,555
42
1
515,6627 534,20
274,311
09
9
280,9749 497,46
194,801
32
8

Peak

389,0422

Rodeo

279,1829

Shark

266,1132

Shin

10,8145

Vive 100

264,45
59
272,66
81
265,66
14
12,427
9
319,28
55

326,7819

229,069
276,430
3
496,420
9
7,7717
322,143
1

Grafica 1: Curva de Calibracin de la cafena

X=

264,455948,181
=66,139 PPM
3,27
REPLICA 3

X=

229,06948,181
=55.82 PPM
3,27

*As se calcula para todas las replicas

Tabla 3. Concentraciones de las


CURVA DE CALIBRACION
muestras
muestr
a

400
300
AREA DEL PICO

200

f(x) = 3.27x + 48.18


CURVA DE
Gold
R = 1
CALIBRACION

100
0

Linear (CURVA Monst


DE CALIBRACION)
er

100
0 200

CONCENTRACION PPM

Y =3,27 x +48,181

R2=0,997

Muestra de clculo para hallar la


concentracin
PEAK

X=

X=

REPLICA 1 ( muestra propia)


Y 48,181
3,27
389,042248,181
=104,23 PPM
3,27
REPLICA 2

Red
Bull
Peak

en ppm

Concentraciones
Replica 1 replica 2 replica 3

120.6
5
142.9
6
71.19
0
104.2
3

130.7
9
148.6
2
137.3
9
66.13
9

61.58
61.15
44.83
55.82

Rodeo
Shark
Shin
Vive
100
Tabla 4. Concentraciones de la
muestra en mg/100ml
muestr
a

Concentraciones
Replica 1 replica 2 replica 3

Gold

12.06
5
14.29
6
7.119

Monst
er
Red
Bull
Peak
Rodeo
Shark
Shin

10.42
3

13.07
9
14.86
2
13.73
9
6.613
9

6.158
6.115
4.483
5.582

Vive
100
ANALISIS DE RESULTADOS
Para la muestra Gold se puede analizar
que las concentraciones varan un poco
una de la otra lo cual puede conllevar a
que hubo errores en la preparacin de la
muestra, ya sea por no haberla dejado el
tiempo suficiente en calentamiento y que
no se hayan eliminado por completo las
burbujas de oxigeno que estaban
presentes en la muestra.
Segn la resolucin 4150 de 2009 el
contenido mximo de cafena por cada
100 ml de bebida es de 32 mg lo que nos
conlleva a analizar que la muestra Gold
cumple con los requisitos establecidos en
la normativa colombiana.
Para la muestra de Monster se puede
analizar
que
dos
de
las
3
concentraciones son muy similares y
difieren solo en nmeros decimales,

dando solo por diferente a la rplica


numero 3 ya que esta est muy por
debajo de los valores que se obtuvieron
para las rplicas 1 y 2 llevndonos a
analizar que la rplica nmero tres tenia
errores de preparacin o de lectura.
Para la muestra de Red Bull los 3 valores
discrepan mucho el uno del otro dando
como resultado una lectura no uniforme y
esto conlleva a pensar que los
encargados
al
momento
de
la
preparacin de la muestra no se
percataron bien de llevar a cabo todos
los pasos para poder prepararla
exitosamente y esto pudo conllevar al
error.
Segn la resolucin 4150 de 2009 el
contenido mximo de cafena por cada
100 ml de bebida es de 32 mg