BIOQUIMICA BSICA

ROTEIRO DE AULAS PRTICAS

PROF. Dr. LUIZ FERNANDO ROMANHOLO FERREIRA

ARACAJU-SE
1

SUMRIO

ROTEIRO DE AULAS PRTICAS

1. Normas Bsicas de Segurana no Laboratrio.............................................................................02

2. Vidrarias e Equipamentos do Laboratrio....................................................................................03
3. Noes de Espectofotometria......................................................................................................07
4. Prtica 01 Coleta de sangue, separao e armazenamento do plasma........................................10
5. Prtica 02 Dosagem de Glicose...................................................................................................11
6. Prtica 03 Dosagem de Uria.......................................................................................................13
7. Prtica 04 Dosagem de Amilase .................................................................................................15
8. Prtica 05 Dosagem de Creatinina ..............................................................................................17
9. Prtica 06 Dosagem de Protenas Totais......................................................................................19
10. Prtica 07 Dosagem de cido rico..........................................................................................21
11. Prtica 08 Dosagem de Colestreol HDL..................................................................................23
12. Prtica 09 Dosagem de Colesterol Total ....................................................................................25
13. Prtica 10 Dosagem Triglicerdeos ............................................................................................27

Atualizao em Junho/2014
2

Normas Bsicas de Segurana no Laboratrio de

Bioqumica

1. Permanncia no laboratrio

Coloque os seus objetos pessoais (mochilas, casacos, etc.) no armrio atribudo a

esse fim.

A entrada no laboratrio s permitida mediante uso de jaleco com manga comprida, estando este,
devidamente abotoado.

A permanncia no laboratrio s permitida em uso de sapatos fechados (tnis),cala comprida, estando

PROIBIDO o uso de sandlias abertas ou sapatilhas.

Os cabelos devero estar totalmente presos, de modo a evitar o contato com o material ou com os
reagentes.

Use sempre culos de segurana

Use luvas, sempre que for necessrio. Remova-as antes de tocar em portas, maanetas, livros, cadernos
e outros objetos.

Evite usar anis no laboratrio, porque sob eles podem alojar-se solventes ou reagentes irritantes.

No se recomenda o uso de lentes de contato no laboratrio. As lentes de contato so difceis de

remover quando penetram nos olhos corpos estranhos. No caso de usar lentes de contato deve sempre
usar culos de proteo.

Mantenha a bancada de experimentos limpa e arrumada, bem como todas as passagens

permanentemente desobstrudas.

No deve fumar, beber, comer ou guardar alimentos dentro do laboratrio.

Lave sempre as mos ao sair do laboratrio.

2. Manuseio de Produtos Qumicos

Todo e qualquer tipo de procedimento s dever ser executado mediante orientao da professora.
Nunca pipete lquidos com a boca.
Nunca ingira, inale ou toque com as mos nos produtos qumicos.
Evite a abertura simultnea de vrios frascos do mesmo produto.
Nunca use uma quantidade de reagente superior necessria para a experincia.
Certifique-se do estado de limpeza das pipetas ou esptulas que introduz nos frascos de reagentes para
evitar os perigos de contaminao.
Nunca utilize um equipamento ou um aparelho sem ter compreendido o seu funcionamento.

Fonte: Manual De Segurana Em Laboratrios Do

Departamento De Qumica e Bioqumica, Comisso de Segurana do DQB, 2005.
3

Instrumentao para Uso No Laboratrio em

Atividades de Bioqumica

Vidrarias e Equipamentos utilizados em laboratrio

Balo de fundo chato:
Utilizado como recipiente
para conter lquido ou
solues, ou fazer reaes
com desprendimento de
gases.
Balo
Volumtrico:
Possibilita medidas de
volumes exatos. Possui
volume definido e nele se
preparam as solues.

Bquer: Serve para fazer

reaes entre solues,
dissolver
substncias
slidas, efetuar reaes de
precipitaes e aquecer
lquido. Mede volumes
aproximados.

Erlenmeyer: Utilizado em
titulaes, aquecimento de
lquidos, para dissolver
substncias e proceder a
reaes entre solues.

Proveta: No pode ser

aquecida e serve para
medir e transferir volumes
de lquidos que, embora
no exatos, so mais
precisos do que de um
bquer ou Erlenmeyer.

Funil de Haste longa:

Tambm no pode ser
aquecido. Usado na filtrao
e para a reteno de
partculas slidas.

Tubo de ensaio: Empregado

para fazer reaes em
pequena
escala,
principalmente em testes de
reao em geral. Pode ser
aquecido
cuidadosamente
direto sob a chama do bico
de Busen.
Bureta: Aparelho utilizado
em anlises volumtricas
para dispensar lquidos com
grande exatido. Pode livrarse de quantidades de
volumes variveis, devido s
marcas de graduao e
extenso.

Condensador: Utilizado na
destilao e tem como
finalidade
condensar
vapores
gerados
pelo
aquecimento de lquidos.

Pipeta
Graduada:
Utilizada
para
medir
volumes
pequenos
e
variveis. Possui preciso
superior da proveta. No
pode ser aquecida.
4

Pipeta
Volumtrica:
Utilizada para medir e
transferir volume de
lquidos, no podendo ser
aquecida, pois possui
grande
preciso
de
medida. Mede um nico
volume, o que caracteriza
sua preciso.

Pisseta: Frasco de plstico

usado para lavagens de
materiais ou recipientes
atravs de jatos de gua,
lcool ou outros solventes.

Pipetas Automticas:
volumes em microlitro.

Utilizada

para

medir

Pipetador tipo pra:

Acoplado a uma pipeta
ajuda a puxar e a
expelir
pequenos
volumes de lquidos.

Pipeta Pasteur: Indicada

para
transferncia
de
amostras.

Vidro Relgio: Utilizado

para
pesar
pequenas
quantidades de substncias,
para evaporar pequenas
quantidades de solues,
cristalizar substncias e
cobrir becker e outros
recipientes.

Centrfuga:
Acelera o processo
de
decantao
atravs de alta
velocidade
de
rotao.

Espectrofotmetro:
Realiza leituras de
absorbncias
das
amostras.

Banho- Maria:
Utilizado para
aquecer as amostras
na temperatura
desejada,
favorecendo as
reaes.
Vrtex (Agitador):
Agitar amostras em
tubos de ensaio.

Equipamentos utilizados no Laboratrio

Centrfuga: Serve para acelerar o processo de decantao. So aparelhos que, por meio da fora centrfuga,
foram uma substncia insolvel em uma mistura lquido-slido a se precipitar rapidamente.
Banho-Maria: um aquecedor de gua termostatizado por meio de resistncia eltrica que atinge a tempertura
mxima de 100C.
Estufa: utilizada para secagem de material cujo controle de teperatura se d por meio de termostado, em
geral alcana at 300C.
Mufla: Produz altas temperaturas. utilizada, por exemplo, para calcinao com alcance de at 1.200C.
Agitador magntico: Equipamento destinado a homogeneizar solues que podem ou no possuir aquecimento
prprio.
Capela: uma cmera de exausto na qual so manuseadas substncias ou realizados experimentos que
originam gases txicos ou inflamveis.
Chuveiro e lava olhos: Equipamento de segurana utilizado no caso de acidentes no laboratrio.
Esses so os principais materiais e equipamentos que sero utilizados nas atividades prticas. Uma vez
familiarizado com o ambiente do laboratrio e com os principais materiais e equipamentos, o aluno aprender a
tcnica de pipetagem que utilizada na maior parte das atividades prticas.

Atividade Prtica: Instrumentao para uso do laboratrio

Objetivo:
Aprender a transferir pequenos volumes com preciso: Tcnica de Pipetagem.
Materiais:
Bquer com gua destilada
Ponteiras para pipetas automticas
Recipiente para descarte de ponteiras
Pipetas graduadas de 0,5, 1,0, 2,0, 5,0 e 10,0 ml.
Pipetas volumtricas
Pipetas automticas
Papel absorvente
Pipetador ou pra de suco
Tubos de ensaio
Estante para tubos de ensaio
*Reagente
Soluo de azul metileno a 2%
Mtodo
importante, antes do incio do trabalho, verificar se as pipetas esto limpas e livres de qualquer avaria. Pipetas
com duplo risco so de sopro e as que possuem somente a tarja e um risco no devem ser sopradas. Para pipetas
de sopro manipule o bulbo do pipetador para forar o ar atravs da pipeta, a fim de remover a ltima poro de
lquido da ponta.
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Pipetagem com pipetas graduadas e volumtricas

Colocar gua destilada em um bquer
Acoplar o pipetador ou a pra de suco na pipeta
Introduzir a pipeta na gua destilada
Aplicar suco e encher a pipeta acima da marca de calibrao
Remover a pipeta da gua destilada
Limpar com papel ou gaze. Segurar a pipeta a posio vertical e esvaziar vagarosamente at que o
menisco inferior apenas toque a marca e calibrao.
Trocar a ponta em um receptculo limpo e seco para eliminar qualquer gota pendente.
Levar a pipeta at o tubo de ensaio e na posio vertical esvaziar livremente.

Pipetagem com pipetas automticas

Ajustar o volume a ser pipetado
Colocar a ponteira indicada para a pipeta
Pressionar o mbolo da pipeta at a primeira trava e aspirar a amostra da ponteira;
Pressionar o boto, ele funcionar com um mbolo.
Pressione at o primeiro estgio para sugar o lquido e
at o segundo para desprez-lo.
Levar a pipeta at o tubo de ensaio e apertar o mbolo at o final para descartar o lquido.
Dispensar a ponteira utilizada em um recipiente;
Proceder a limpeza e organizao da bancada;

Noes de Espectrofotometria
ABSORCIOMETRIA
Consiste num mtodo analtico, baseadona propriedade que tm muitas espcies inicas ou moleculares em
soluo, de absorver radiaes ultravioletas (UV) e visvel.
FAIXAS ESPECTRAIS:
Ultravioleta (UV)
< 400 nm ( )
Violeta
400 450 nm
Azul
450 500 nm
Verde
500 570 nm
Amarelo
570 590 nm
Alaranjado
590 620 nm
Vermelho
620 760 nm
Infravermelho
> 760 nm
CONDIES PARA UMA DETERMINAO ABSORCIOMTRICA
1. A amostra deve possuir propriedade absorventes;
2. Ou se convertida por reaes apropriadas.
TIPOS DE ABSORCIMETROS
Fotmetros (Colormetros) regio do visvel
Espectrofotmetros monocromadores de prisma - regio do visvel ou ultravioleta (UV).

COMPONENTES BSICOS
1. Fonte de energia radiante contnua - Lmpada de tungstnio.
2. Dispositivo para isolar faixas espectrais.
3. Cuba para amostra.
4. Detector (transdutor), para converter a energia radiante em dispositivo para medir a magnitude do sinal
eltrico.

FONTE

SELETOR DA
RADIAO

CUBA

DETECTOR

INDICADOR

FIG. 1 Componentes dos instrumentos usados na medida de Transmitncia

Lente Colinada

Lente de Foco

Fenda de Entrada

Plano Focal

Prisma

Fenda de Sada

FIG 2. Monocromador Prismtico

Quando se faz passar um feixe de radiao monocromtica, atravs de uma soluo contendo uma espcie
absorvente para o comprimento de onda ( ), da radiao, uma parte da energia absorvida, a parte restante
transmitida pelo meio.
TRANSMITNCIA (T):
T = P/P0 ;

P = Potncia radiante transmitida

P0 = Potncia radiante incidente

Potncia Radiante: a quantidade de energia transportada por segundo, atravs da unidade de seo
transversal.
% T = P/P0 X 100 (Representa a frao da energia radiante incidente, que transmitida pela soluo).

1,0

1,0
A
T

0,5

0,5

0,0

0,0
Concentrao

FIG. 3 Absorbncia e Transmitncia de uma soluo para comprimento de onda dado em funo da concentrao.

DENSIDADE PTICA (D.O.) = ABSORBNCIA (A)

D.O. = b. c.
b
b = 1 cm

CUBETA
9

LEI DE BEER
Relaciona a Transmitncia e a Concentrao da espcie absorvente.
Log P0/P == - log T == A == .b.c; onde:

A = Absorbncia
= Absortividade molar
b = Espessura da cubeta
c = Concentrao da substncia absorvente;
Parmetros Importantes:
A (Absorbncia) - Energia absorvida por uma dada amostra.
T (Transmitncia) Energia transmitida para o meio.
C (Concentrao) Quantidade da substncia a ser analisada (mg/dl).
Ex.:

Verde escuro
Energia

Verde claro
E

C>
A>
T<

gua destilada
E

C<
A<
T>

C=0
A=0
T = 100%

Observaes:
A e C so grandezas diretamente proporcionais ( A C )
A e T so inversamente proporcionais.
A= 1
T

C=1 .
T

(Lei de Beer)

10

Prtica
Coleta de sangue, separao e armazenamento do plasma

SANGUE
Lquido vermelho, que corresponde a 7 a 8% do peso do corpo.
Apresenta valor de pH, em torno de 7,4 (7,35 7,45).
Densidade: 1,055 1,065.
Viscosidade: 3,5 5,5.
Contm cerca de 20% de matria slida.
Constitudo por elementos figurados: hemcias, leuccitos e plaquetas. Suspenso num lquido
amarelo est o plasma sanguneo.
FUNES DO SANGUE
* Transporte rpido e eficiente de substncias de um local do organismo para outro;
* Impedir hemorragia devido ao das plaquetas;
* Manuteno do equilbrio cido-base (pH) Tampo Biolgico
OBSERVAES
Quando o sangue removido do leito vascular, normalmente se torna um slido (gel), devido a
coagulao. Logo aps essa formao o mesmo (cogulo) se desprende, ocorrendo o aparecimento de um
lquido normalmente lmpido (soro sanguneo).
O soro sanguneo , portanto, o lquido que se separa da parte slida, resultante da coagulao do
plasma ou do sangue.
PLASMA
5% do peso corporal;
formado de 90% de gua e 10% de substncias slidas;
Densidade: 1,025 1,035;
Viscosidade: 1,5 2,0;
pH entre 7,35 7,45
TCNICA DE SEPARAO
Sobrenadante (Plasma sanguneo)

Coleta
Sangu
e
+
EDTA

Centrifugao
por 5 minutos
a 3500 rpm

Sangue

Elementos Figurados: Hemcias,

Leuccitos e plaquetas.

# NO ESQUECER
EDTA: Etileno Diamino Tetractico (Anticoagulante);
Se houver a coleta de sangue sem o EDTA o sangue formaria cogulo, e logo aps, se centrifugado
haveria a separao do soro dos elementos figurados do sangue.

11

Prtica
Dosagem de glicose

FINALIDADE
Sistema enzimtico para determinao da glicose no sangue, lquor e lquidos asctico, pleural e
sinovial por mtodo cintico ou de ponto final.
PRINCPIO
Ao adicionar-se glicose em uma soluo tampo de fosfato em pH 7,4 contendo Glicose Oxidase,
Peroxidase, 4-Aminoantipirina (4-AAP) e p-Hidroxibenzoato, processam-se as seguintes reaes:
Glicose + O2 + GOD Acido Glucnico + H2O
2H2O2 + 4AAP POD 4-Antipirilquinomina + 4H2O
O produto formado pela oxidao do 4- AAP (4-Antipirilquinomina) de colorao avermelhada e
sua intensidade diretamente proporcional concentrao de glicose na soluo. A cor medida em
espectrofotmetro 500 nm.
METODOLOGIA
Glicose Oxidase
Cor: Rosa
REAGENTES
Reagente 1(Reagente de cor): Contendo soluo tampo/enzimas
Soluo Padro de glicose.
AMOSTRA
Plasma (em jejum).
EQUIPAMENTOS
Agitador (Vortex);
Banho-Maria mantido 37C.
Espectrofotmetro (calibrado em 500 nm).
MATERIAL
3 tubos de ensaio
Galcria para tubos
Pipeta automtica de 20 L e 1000 L

12

 PROCEDIMENTO
Identificar trs tubos de ensaio com B (Branco), T (Teste) e P (Padro)

Reagente 1 (Rgt)
Padro
Amostra

Branco
2000L
---

Padro
2000 L
20 L
--

Teste
2000 L
-20 L

Homogeneizar e deixar por 5 min em Banho-Maria 37C. Retirar do banho e fazer a leitura da
absorbncia a 500 nm.
CLCULO
Glicose mg/dL: Absorbncia do Teste
Absorbncia do Padro

100

VALORES DE REFERNCIA:
70 A 99 mg/dL
INTERPRETAO
Condies para o desenvolvimento de HIPERGLICEMIA:
Diabetes;
Asfixia;
Hipertireoidismo;
Traumatismos Cerebrais;
Tratamentos com Adrenocorticides e ACTH;
Pancreatite;
HIPOGLICEMIA
Aps exagerado esforo fsico;
Hipotireoidismo;
Distrbios da absoro intestinal;
Trato desordenado com insulina ou hipoglicemiantes orais;
Anorexia nervosa;

13

Prtica
Dosagem de UREIA

FINALIDADES
Utilizado para a determinao quantitativa da uria presente no soro e plasma.

PRINCPIO
Em meio alcalino na presena de salicilato, nitroprussinato de sdio e hipoclorito, os ons amnios
reagem dando origem a um composto cromgeno de cor azul esverdeado. A intensidade da cor formada
diretamente proporcional concentrao de uria na amostra analisada.

METODOLOGIA
Urease Modificada.
Cor: Verde
Laboratrio: Laborclin
REAGENTES
Reagente (RGT) 1: Mistura de salicilato de sdio, nitroprussinato de sdio.
Reagente (RGT) 2: Hipoclorito de sdio e hidrxido de sdio.
Padro (STD): Soluo de uria 80mg/dL.
AMOSTRA
Soro ou plasma.
EQUIPAMENTOS
Vrtex;
Banho-Maria 37C
Espectrofotmetro (Calibrado em 600 nm)
MATERIAL
3 Tubos de ensaio;
2 pipetas graduadas
Pipetas automticas de 1000L e de 20L
Galeria para tubos

14

 PROCEDIMENTO
Identificar trs tubos de ensaio B (Branco), T (Teste) e P (Padro).
Branco
Padro
Teste
1000L
1000L
1000L
Reagente 1 (Rgt)
-10L
-Padro
--10L
Amostra
Homogeneizar e incubar por 5min. Em banho-maria a 37C.
Branco
Padro
Teste
1000L
1000L
1000L
Reagente 2 (Rgt)
Homogeneizar e incubar a 37C, por 5 minutos. Acertar o zero do aparelho com o branco ,
em 600 nm e ler as absorbncias do Teste e Padro.
CLCULO:
Uria mg/dL= Absorbncia doTeste
x 60
Absorbncia do Padro
VALORES DE REFERNCIA
10 a 52mg
INTERPRETAO
Costuma-se classificar a elevao da azotemia (excesso de uria no sangue) em pr-renal, renal e
ps-renal.
AZOTEMIA PRE-RENAL:
- Traumatismo craniano
- Distrbios renais
- Tratamento com Sulfonamida.
- Transfuso de sangue incompatvel.
AZOTEMIA RENAL:
- Distrbios renais
AZOTEMIA PS-RENAL:
- Obstruo uretral por clculo
- Tumores compressivos da bexiga.
- Obstruo prosttica
TAXA DE UREIA DIMINUDA
- Insuficincia heptica aguda.

15

Prtica
Dosagem de Amilase

FINALIDADE
Reagente para a determinao da atividade enzimtica da amilase em amostras de soro, plasma,
urina, suco pancretico e lquido duodenal.
PRINCPIO
O soro indicado com soluo de amido tamponado em pH=7,0.
O amido solvel em contato como iodo forma um componente azul. medida que a molcula de
amido hidrolisada pela amilase srica, a cor produzida muda progressivamente de azul at incolor. Dentro
de certos limites, a alterao produzida na cor pelo amido degredado com o iodo proporcional
concentrao de amilase no soro.
METODOLOGIA
Caraway modificado
REAGENTES
Substrato (SUB): Soluo estrio de amido tamponado pH=7,0.
Tampo (TAM): cido benzico 0,20%; Fosfato monocido de sdio 90g/L.
Reagente de cor (RGT): Soluo de iodo.
AMOSTRA
Soro, plasma, lquido duodenal, asctico, pleural ou urina. A enzima estvel por 48h a
temperatura de 15 25 C e por vrios meses temperatura de 2 8C.
EQUIPAMENTOS
Banho-maria a 37C.
Espectrofotmetro (calibrado em 660nm)
MATERIAL
2 tubos de ensaio
Galeria para tubos
Pipeta graduada de 5mL.
Pipeta automtica de 250L
Pipeta automtica de 500L
Pipeta automtica de 10L

16

 PROCEDIMENTO
Reagentes
Controle
Amostra (T)
SUB
250L
250L
TAM
250L
250L
Homogeneizar e colocar em Banho-Maria 37C por 2minutos
-10L
Plasma
Homogeneizar e colocar em Banho-Maria por 37C por 7 minutos e 30 segundos.
RGT (Iodo)
500L
500L
gua Destilada
4 mL
4 mL
Homogeneizar e efetuar as leituras fotomtricas (660nm), acertando o
zero com gua destilada.
CLCULO:
Amilase (U%) = (Ac At)
Ac

x 800
Ac: Absorbncia do controle
At: Absorbncia do teste

VALOR DE REFERNCIA
60 A 160 U%
INTERPRETAO
A amilasemia (presena e quantidade de amilase no plasma sanguneo) se acha elevada
especialmente na pancreatite aguda, podendo atingir 500 U%.
Outros distrbios associados amilasemia so:
- lcera pptica
- parotidite
- litase salivar
- infeces (febre tifide, malria, pneumonia, sarampo, meningite meningoccica, tifo)
- gravidez ectpica rota
- aps administrao de opiceos
- Obstruo Intestinal.
A hipoamilasemia (Diminuio excessiva da produo da amilase) ocorre em:
- Hepatopatias graves;
- Grandes queimados;
- Diabetes;
- Insuficincia Cardaca Congestiva (ICC);
- Pneumonia (as vezes)

17

Prtica
Dosagem de creatinina

FINALIDADE
Reagentes para a determinao da creatinina presente no soro, plasma e urina humana.
PRINCPIO
A creatinina, em meio alcalino, reage com cido prico formando um complemento de cor amareloalaranjada (reagente Jaffe).
As protenas so precipitadas com reagente tngstico. O sobrenadante decantado para outro tubo
e adicionado reagentes prico. A adio de soluo alcalina ao prprio tubo gera picrato alcalino que
reage com a creatinina.
Creatina
Creatinina + ATP -------------> Fosfocreatina (Rico em energia) --- > Msculo em Repouso
Quinase

Creatinina

Msculo em Contrao

Urina
METODOLOGIA
Jaffe modificado
Laboratrio: In Vitro
REAGENTES
cido Actico (AC): acidificante
cido pcrico (AP): sol 0,054M
Soluo alcalina (RGT): sol Na OH 6M
Soluo padro (PAD): creatinina 50mg/100mL
AMOSTRA
Soro, plasma, urina ou lquido amnitico.
EQUIPAMENTOS
Vrtex
Espectrofotmetro calibrado a 510 nm.
Pipetas
MATERIAL
Tubos de ensaio
Galeria para tubos
Pipeta automtica de 1000L, 500L , 250L , 100L
18

 PROCEDIMENTO
Identificar os tubos de ensaio com B (branco) , P (padro) e T (teste)

Reagente (RGT)
Amostra
gua Destilada
Padro
AP (cido pcrico)

Branco
2000L
-250L
-500L

Padro
2000L
--250L
500L

Teste
2000L
250L
--500L

Agita de coloca em banho-maria por 5min;

Fazer a leitura da absorbncia a 510 nm;
AC (cido actico)

100L

--

100L

Agita e aguarda 5 minutos, zera o espectrofotmetro com gua destilada

e faz a leitura de T2.
Obs.: NO COLOCAR EM BANHO-MARIA
CALCULO
Creatinina mg/dL: (AT1 AT2) x 3
AP
VALORES DE REFERNCIA
Soro ou plasma: 0,4 a 1,4 mg/dL
INTERPRETAO
A creatinina o elemento nitrogenado do sangue menos varivel. Ele o anidrido da creatinina
que se forma pela perda do cido fosfrico da fosfocreatina muscular. eliminada pelos rins em
quantidade singularmente constante, atravs da filtrao glomerular e excreo tubular ativa.
Valores acima de 5mg/dL so indcios de:
Insuficincia renal, quando a taxa de uria se encontra elevada;
Nefrite incipiente;
Glomerulonefrite crnica, com uremia;
Obstruo urinria, por afeces da prstata, bexiga ou ureter;
Oligria reflexiva provocada pela nefrolitase

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Prtica
Dosagem de PROTENAS TOTAIS

FINALIDADE
Reagente para determinao de protenas em soro e outros lquidos biolgicos.
PRINCPIO
As protenas reagem com o reativo de biureto e formam um complexo de colorao azul-violcea,
cuja intensidade proporcional concentrao de protenas presentes na amostra.
METODOLOGIA
Biureto modificado
Laboratrio: In Vitro
Cor: Azul
REAGENTES
RGT Reagente de cor concentrado: Tartarato de sdio e potssio 45g/L; Hidroxido de sdio
PAD Padro: Albumina bivina 4,0 g/dL; Azida sdica 0,5g/L.
AMOSTRA
Soro, plasma, lquido pleural ou sinovial
MATERIAL
3 Tubos de ensaio
1 estante para tubos
Pipetas automticas de 1000L e 40L
EQUIPAMENTOS
Espectrofotmetro calibrado em 550nm.
PROCEDIMENTO
Identificar os tubos de ensaio com B (branco) , P (padro) e T (teste)
Branco
Padro
Teste
2000L
2000L
2000L
Reagente (RGT)
--40L
Amostra
-40L
-Padro
Homogeneizar e aguardar 10 min. Acertar o zero com o Branco. Efetuar a
leitura fotomtrica em 550 nm.
Obs: NO VAI PARA BANHO-MARIA

20

CLCULO:
Protenas Totais g/100mL = Absorbncia do Teste x 4
Absorbncia do Padro
VALORES DE REFERNCIA
6,0 a 8,0g/100mL
INTERPRETAO
As protenas contendo aminocidos na estrutura participa da formao de Acetilcoa, indispensvel
para energia.
Os ndices de normalidade variam com o mtodo de dosagem empregado. Os valores podem
aumentar de 1 g se o paciente permanece de p por meia hora ou mais, antes da colheita do sangue, em
virtude da hemoconcentrao pela transduo capilar aumentada (aumenta a presso venosa).
Na restrio alimentar, embora tenha sido demonstrado que a pequena ou nula ingesto de
alimentos proticos, por perodos limitados, no afeta o nvel normal de proteinemia, a privao de
peptdeos por longo espao de tempo (guerra, pobreza, ignorncia) conduz a franca hipoproteinemia e
suas conseqncias, entre elas o chamado edema de nutrio (hipoalbuminemia).

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Prtica
Dosagem de CIDO RICO

FINALIDADE
Teste enzimtico e colorimtrico para determinao do cido rico em fluidos utilizando
reagente lquido pronto para uso.
PRINCIPIO
O acido rico o produto final do metabolismo das purinas no homem. A presente metodologia
destina-se ao doseamento do cido rico em fluidos biolgicos (soro ou rina) atravs de uma tcnica
enzimtica e colorimtrica.
IMPORTANCIA CLNICA
A principal utilidade clinica da determinao da uricemia est no diagnstico e controle da gota,
doena que caracterizada pela hiperuricemia. Putras doenas como anemia perniciosa, insuficincia
renal, insuficincia cardaca, mieloma mltiplo e policitemia podem apresentar uma hiperuricemia.
REAGENTES
RGT - Reagente de cor
PAD - Padro de cido rico com 6mg/dL em soluo tamponada
AMOSTRA
Soro, plasma e urina.
MATERIAL E EQUIPAMENTOS
Espectrofotmetro calibrado em 520 nm
Banho-maria
Pipetas automticas de 1000L e 40L
Laboratrio: Bioquid
Cor: Rosa
PROCEDIMENTO
Identificar os tubos de ensaio com B (branco) , P (padro) e T (teste)
Branco
Padro
Teste
2000L
2000L
2000L
Reagente (RGT)
--40L
Amostra
-40L
-Padro
Agitar e colocar em banho-maria 37C por 5 min. Ler as absorbncias em 520 nm.
CLCULO:
cido rico (mg/dL/ = Absorbncia do Teste
Absorbncia do Padro

X6

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 VALORES DE REFERNCIAS
3,6 7,0 mg/dL
INTERPRETAO
A gota uma patologia caracterizada pela inflamao das articulaes devido a fixao de cristais
do cido rico nas articulaes. Para ser diagnosticado o valor do cido rico dever estar acima de
10mg/dL.
A tcnica de dosagem do cido rico utilizado como indicador da funo renal;
O cido tem origem nas bases nitrogenadas;
encontrado nas vsceras, carnes e protenas.
Geralmente cria feridas entre os dedos dos ps.

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Prtica
Dosagem de colesterol HDL

FINALIDADE
Sistema para determinao do Colesterol HDL atravs da precipitao seletiva das lipoprotenas de
baixa e muito baixa densidade (LDL e VLDL), por reao de ponto final.
PRINCIPIO
Lipoprotenas e baixa densidade (LDL) e de muito baixa densidade (VLDL) so precipitadas
seletivamente por polietilenoglicol tamponado. No sobrenadante, resta apenas a frao de alta densidade
(HDL). O teor de colesterol da frao HDL determinada pelo sistema enzimtico colesterol 250.
As tcnicas para dosagens do colesterol HDL baseiam-se na precipitao seletiva das fraes LDL
e VLDL.
METODOLOGIA
PEG: 6.000 modificado
REAGENTES
Precipitante;
PAD Padro
AMOSTRA
Soro, plasma heparinizado ou EDTA
EQUIPAMENTOS
Centrifuga de bancada
Agitador para tubos tipo Vortex
Banho-Maria a 37C
Espectrofotmetro (calibrado em 500nm)
MATERIAL
Tubo de ensaio
Pipetas automticas de 200L e 1000L
PROCEDIMENTO
1 ESTAPA: EXTRAO DO COLESTEROL HDL (Precipitado)
Adicionar 500L de soro e 500L de reagente precipitante.
Homogeneizar e repousar por 10 min temperatura ambiente.
Centrifugar durante 15 min a 3500 rpm.
Pipetar o sobrenadante lmpido imediatamente aps a centrifugao, tomando cuidado para no
suspender o precipitado, a fim de evitar resultados falsamente elevados.

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2 ETAPA: COLORIMETRIA
Utilizar com o reagente 1- Colesterol Liquiform
Identificar os tubos de ensaio com B (branco) , P (padro) e T (teste)
Branco
Padro
Teste
--200L
Sobrenadante
-200L
-Padro
2000L
2000L
2000L
RGT 1
Misturar e incubar em banho-maria 37C por 10min. Ler as absorbncias do teste e
padro em 500 nm acertando o zero com o branco.
CLCULO:
HDL (mg/dL) = Absorbncia do Teste
Absorbncia do Padro

x 40

VALOR DE REFERNCIA
< 40 (Baixo)
60 (Elevado desejvel)
INTERPRETAO
HDL Baixo: Risco de incidncia de coronariopatias. A lipoprotena HDL mobiliza o colesterol
depositado ao nvel da ntima das artrias, transportando-o para o fgado, onde ser metabolizado.

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Prtica
Dosagem de colesterol livre e esterificado (total)

FINALIDADE
Reagentes para a determinao quantitativa do colesterol presente no soro e plasma humano.
PRINCIPIO
O colesterol no soro quantificado atravs das seguintes reaes enzimticas. A cor resultante
medida fotometricamente.
Colesterol esterase

1. steres de colesterol ------------------- > colesterol livre + cidos graxos

Colesterol oxidase

2. Colesterol livre + O2 ---------------------- > colesterona + H2O2

Peroxidase

3. 2H2O2 + 4AAP + p-Hidroxibenzoato --------------------- > 4 Antipirilquinomina + 4 H20

METODOLOGIA
Enzimtica
Cor: Rosa
MATERIAL
Tubos de ensaio
Pipeta automtica de 1000L e 20L
EQUIPAMENTOS
Banho-Maria a 37 C
Espectrofotmetro calibrado em 500 nm
REAGENTES
RGT Reagente enzimtico
STD Padro
AMOSTRA
Soro, plasma heparinizado ou EDTA.
PROCEDIMENTO
Identificar os tubos de ensaio com B (branco) , P (padro) e T (teste)
Branco
Padro
Teste
2000L
2000L
2000L
RGT
--20L
Amostra
-20L
-Padro
Homogeneizar e incubar por 5 min em banho-maria a 37C.
Medir as absorbncias de T e P em 500 nm, acertando o zero com o branco.
CLCULO:
Colesterol mg/dL = Absorbncia do Teste
Absorbncia do Padro

x 200

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 VALORES DE REFERNCIA
< 200 mg/dL
timo
200 239 mg/dL
Limtrofe
240
Alto
INTERPRETAO
O risco cardiovascular uma funo contnua da concentrao de colesterol, mais precisamente do
colesterol HDL e LDL, pois ele um dos fatores que contribuem para a formao de ateromas (placas
de gorduras).
HIPERCOLESTEROLEMIA: Diabetes Mellitus
Sndrome Nefrtica
Ictercia
Aterosclerose
Acidente Vascular (quando acompanhado de hiperlipidemia)
Hipertensos e fumantes
HIPOCOLESTEROLEMIA: Hipertireoidismo
Crise tireidea
Anemia perniciosa e hemoltica
Doenas infecciosas agudas (pneumonia, febre tifide)
Doena de Addison
Tuberculose pulmonar grave
Obstruo Intestinal e prosttica

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10

Prtica
Dosagem de TRIGLICERDEOS

FINALIDADE
Mtodo enzimtico para a determinao de triglicrides no soro e plasma.
PRINCPIO
Os triglicrides so determinados aps hidrolise enzimtica com lpases. O indicador a
quinoneimina formada a partir do perxido de hidrognio, 4-aminoantipirina e a 4-clorofenol sob
influencia cataltica da peroxidase.
Lipase

1. Triglicrides --------------------- > Glicerol + cidos graxos

Glicerol quinase

2. Glicerol + ATP ------------------ > glicerol 3 fosfato + ADP

Glicerol-fosfato-oxidase

3. Glicerol- 3- fosfato -------------------- > dihidroxiacetona + H2O2

peroxidase

4. H2O2 + 4-clorofenol + 4 aminoantipirina ---------------- > 4-antipiriquinomina + 4H2O

METODOLOGIA
Enzimtica
Laboratrio: Labtest
Cor: Rosa
REAGENTES
Reagente de cor
Soluo padro 200 mg/dL
AMOSTRA
Soro ou plasma (paciente em jejum completo por 12 horas, absteno de lcool por 12 horas e
qualquer medicamento, principalmente anticoncepcionais usados por via oral).
EQUIPAMENTOS
Vrtex
Banho-Maria
Espectrofotmetro (calibrado em 505 nm)
MATERIAL
Tubos de ensaio
Galeria para tubos
Pipetas automticas de 1000l e 20L
PROCEDIMENTO
Identificar os tubos de ensaio com B (branco) , P (padro) e T (teste)
Branco
Padro
Teste
2000L
2000L
2000L
RGT
--20L
Amostra
-20L
-Padro
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Homogeneizar e incubar por 5min a 37C;

Determinar a absorbncia de T e P a 505nm, zerando o aparelho com o branco
CLCULO:
Triglicerdeos (mg/dL) = Absorbncia do Teste x 200
Absorbncia do Padro
VALORES DE REFERNCIA
< 150 mg/dL
INTERPRETAO
Taxa elevada de triglicerdeos: Diabetes
Aterosclerose
Pancreatite
Doenas coronariana
Sndrome nefrtica

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