Neurotrophic factors

Neurotrophin family
Nerve growth factor
Brain-derived neurotrophic factor
Neurotrophin 3
Neurotrophin 4/5

Cytokines
Ciliary neurotrophic factor
Leukemia inhibitory factor
Cardiotrophin 1

GDNF family
Glial-derived neurotrophic factor
Neurturin
Persephin
Artemin

Other: FGF, BMP, HGF, ...

Kandel et al., 2000, Principles of Neural Science (from Reichardt & Farias, 1997 and Rosenthal, 1999)

Eliminacin de un gran nmero de neuronas

(alrededor del 50%) por un proceso de muerte
neuronal natural (apoptosis)
En algunos ncleos cerebrales hasta el 80%
de las neuronas inicialmente generadas son
eliminadas

DRG

extremidad
amputada

simptico

Hiptesis neurotrfica
Victor Hamburger & Rita Levi-Montalcini

Identificacin del NGF (Factor de crecimiento nervioso o Nerve Growth Factor)

el tamao de las poblaciones neuronales

sensibles a NGF depende de la cantidad de NGF presente

NGF: factor de crecimiento nervioso

- la inyeccin de anticuerpos reduce el tamao de las poblaciones neuronales
sensibles
- la inyeccin del factor reduce la prdida natural en poblaciones sensibles
- el factor es producido en tejidos inervados por poblaciones sensibles
- el factor es transportado retrgradamente

Poblaciones sensibles a NGF:

- algunos tipos de neuronas sensoriales
- neuronas del sistema simptico
- neuronas colinrgicas del sistema nervioso central

Familia del NGF

NGF
BDNF
NT-3
NT-4/5

DRG

nodoso

simptico

control

NGF

BDNF

NT-3
-Selectivos aunque con solapamiento
-Son secretados en forma de precursores con un propptido que es hidrolizado extracelularmente
ESTUDIOS IN VIVO?. RECEPTORES?

NGF

Receptores tirosina quinasa

Autofosforilacin cruzada por dimerizacin de dos subunidades
Ligandos actan en forma de dmeros

Dominio quinasa:
- diversas tirosinas fosforilables
- sititos de unin para molculas adaptadoras
- activacin de rutas de sealizacin

Y490: Shc Grb2

SOS
Gab1/2
PI3K

ras

ERK
Akt

FRS2/SNT
Y785: PLC

IP3 + DAG

Ca+2

Purificado a partir del sobrenadante de una lnea de glioma de

rata (B49): Glial cell line-Derived Neurotrophic Factor.
Synergen: Frank Collins, 1993

Potente factor trfico de neuronas dopaminrgicas del

mesencfalo embrionario: bioensayo

Nuevo factor trfico

GFLs: familia del GDNF (GDNF-family ligands)

Superfamilia del TGF-beta: baja homologa de secuencia pero

conformacin similar. Todos tienen el llamado cysteine-knot en su
estructura cuaternaria (7 residuos de cistena espaciados ms 3
puentes disulfuro)
preproGDNF: 211 aminocidos
forma madura: 134 aminocidos
forma activa: homodmeros
Prediccin: posible receptor serina-treonina quinasa

Proteccin in vivo?
Otras poblaciones? Muy potente en motoneuronas
Synergen
Genentech
Amgen
Poblaciones sensibles a GDNF

dopaminrgicas
motoneuronas espinales
neuronas simpticas y parasimpticas
neuronas sensoriales perifricas
noradrenrgicas del locus coeruleus

Respuesta in vitro y respuesta in vivo en modelos de lesin

Expresin en tejidos inervados por estas neuronas en momentos
apropiados
Science. 1993 May 21;260(5111):1130-2.
Science. 1994 Nov 11;266(5187):1062-4.
Nature. 1995 Jan 26;373(6512):344-6.
Nature. 1995 Jan 26;373(6512):341-4.
Nature. 1995 Jan 26;373(6512):339-41.
Nature. 1995 Jan 26;373(6512):335-9.
Nature. 1996 Mar 21;380(6571):252-5.

1995: Receptor desconocido

Predicciones:

- debera unir GDNF

- expresarse en neuronas sensibles
- activar vas intracelulares de transduccin de seal

Expression cloning con cDNAs

de neuronas dopaminrgicas

alta afinidad por GDNF

expresin en neuronas sensibles

GDNFR

protena extracelular asociada a membrana por GPI

no cataltica

COMPLEJO RECEPTOR MULTICOMPONENTE

- PIPLC: elimina la respuesta a GDNF
- adicin de GDNFR soluble: recupera la respuesta
CMO PESCAR UN RECEPTOR QUE NO UNE LIGANDO DIRECTAMENTE?

CMO PESCAR UN RECEPTOR QUE NO UNE LIGANDO DIRECTAMENTE?

COMPLEJO RECEPTOR MULTICOMPONENTE

- posiblemente receptor muy distinto a los de factores TGF

- posiblemente no serina-treonina quinasa
- posiblemente no tirosina-quinasa

COMPLEJO RECEPTOR MULTICOMPONENTE DE CITOQUINAS

- el nico receptor de factor trfico conocido unido por GPI: CNTFR
- CNTFR une ligando, pero no es activo
- dos componentes activos: gp130 y LIFR
SIN RELACIN ESTRUCTURAL CON GDNF

Generacin de un mutante deficiente para GDNF

- reduccin en el nmero de neuronas en diversas estructuras del sistema nervioso

- neuronas sensoriales viscerales
- motoneuronas
- neuronas simpticas
- ausencia de riones
- ausencia de sistema nervioso entrico

Desarrollo normal de las neuronas dopaminrgicas de la sustancia nigra

Nature. 1996 Jul 4;382(6586):76-9.
Nature. 1996 Jul 4;382(6586):73-6.
Nature. 1996 Jul 4;382(6586):70-3.
Proc Natl Acad Sci U S A. 1996 Oct 1;93(20):10657-61.

metanephric blastema

ureteric bud

Generacin de un mutante deficiente para GDNF

- reduccin en el nmero de neuronas en diversas estructuras del sistema nervioso

- neuronas sensoriales viscerales
- motoneuronas
- neuronas simpticas
- ausencia de riones
- ausencia de sistema nervioso entrico

IDNTICO AL FENOTIPO DEL MUTANTE DE C-RET

Mutaciones en el proto-oncogen RET en humanos se relacionan con

dos tipos de enfermedades debidas a alteraciones en las clulas de la
cresta neural

- mutaciones activadoras: diversos tipos de cncer:

- MEN (multiple endocrine neoplasia) 2A. Carcinoma tiroideo medular
(MTC), feocromocitoma, hiperplasia paratiroidea. Mutaciones en el
dominio extracelular de ret.
- MEN 2B. MTC, feocromocitoma y otras complicaciones (p.ej.
neurogangliomatosis en el tracto gastrointestinal). Mutaciones en el
dominio quinasa.
-FMTC. Mutaciones en dominio intra- y extracelulares.

- mutaciones inactivantes: enfermedad de Hirschprung (megacolon aganglionar)

- tratamiento de lneas celulares que expresan c-ret con GDNF produce

la fosforilacin del receptor
- el tratamiento previo con PIPLC elimina la activacin
- la readicin de GDNFR soluble y GDNF recupera la activacin

Cell. 1996 Jun 28;85(7):1113-24.

Nature. 1996 Jun 27;381(6585):789-93.
Nature. 1996 Jun 27;381(6585):785-9.
Nature. 1996 Jul 4;382(6586):80-3.

Especificidades
Modelos posibles de interaccin

- Target-dependent neuronal survival

- Survival, proliferation and/or
differentiation of neural precursors
- Neuronal differentiation
- Axon growth and direction
and terminal patterns of innervation
- Collateral branching and sprouting
- Synaptic plasticity