PRODUCCION DE METABOLITOS PRIMARIOS Y SECUNDARIOS

TEMA 6. PRODUCCIN DE AMINOCIDOS

Produccin de metabolitos primarios y secundarios

Metabolitos primariosson molculas de bajo peso molecular
que intervienen, bien como productos finales o intermediarios,
en las distintas rutas anablicas y catablicas
aminocidos, vitaminas, nucleotidos,
alcoholes, cidos orgnicos
1) Son necesarios para el crecimiento del microorganismo que
los produce.
2) Se producen como productos nicos
3) Son producidos por todos los microorganismos (son
universales).
4) La produccin no puede perderse fcilmente por
mutacin espontnea

Produccin de metabolitos primarios y secundarios

Metabolitos secundarios.. se producen cundo la velocidad
de crecimiento es baja, no tienen pues una funcin esencial
en el crecimiento
antibiticos, toxinas, alcaloides,
pigmentos
1) Generalmente se producen como mezclas de productos
muy relacionados qumicamente entre s.
2) La produccin puede perderse fcilmente por mutacin
espontnea
3) Cada uno de estos productos es producido por un grupo
muy reducido de organismos

latencia

exponencial

estacionaria

Trofofase
(metabolismo
Primario)
Idiofase
(metabolismo
secundario). Solo
observado en
algunos
microorganismos

muerte

Produccin de metabolitos primarios: AMINOCIDOS

Uso comercial de los aminocidos
en la industria alimentaria ..60%
1) Como aditivos de piensos y de alimentos
2) Potenciadores del sabor
2) Antioxidantes.
3) Edulcorantes
en la industria qumica 25%
1) Manufactura de polmeros
2) Manufactura de pieles sintticas
3) Fabricacin de cosmticos
4) En la fabricacin de herbicidas
en medicina

PRODUCCION DE AMINOACIDOS
Extraccin de aa de hidrolizados de protenas, (L-cistena, L-leucina,
L-tirosina).
Por sntesis qumica. D, L-alanina, D, L-metionina, D, L-triptfano, D,
L-glicina.
Por produccin microbiologica.
1) Biotransformacin directa. (L-glutmico, L-lisina)
2) Por conversin de un producto intermediario barato
va biosntesis. Ej. La glicina es convertida en serina.
3) Enzimas o clulas inmovilizadas producidas por
microorganismos; ejemplo: la amino acilasa especfica de
Aspegillus orizae para separar una mezcla de aa D, L que ha
sido acetilada qumicamente (met, ala, gly).

Regulacin de la biosintesis de aminocidos por retroalimentacin (feedback)

Glutamato (

Prolina (

)
Enzima
activa

Enzima
inactiva

Regulacin de la biosntesis de amino cidos por represin

Represor
argR

Inactivo
Activo

arginina
argC

Promotor

argB
Genes estructurales

argH

()
X

C
A

C
D
A

G
F

P1
P1

P2

REGULACION POR
ISOENZIMAS

P1

P2

P2

REGULACION
CONCERTADA

REGULACIN
ACUMULATIVA

P3

Metabolitos primarios
I- ALTERACION DE LA REGULACION POR
RETROALIMENTACION
1) Alteracin de la acumulacin de productos finales
Ornitina, Lisina, Valina
Mutantes auxtrofos
2) Mutantes resistentes a la regulacin por
retroalimentacin
Lisina y Treonina, Isoleucina
Mutantes resistentes anlogos
II- ALTERACION DE LA PERMEABILIDAD
L-glutmico

Produccin de metabolitos primarios

I- ALTERACION DE LA REGULACION POR
RETROALIMENTACION
1) Alteracin de la acumulacin de productos finales
se acumula un producto intermediario

Enzima a

Enzima b

Enzima a

Enzima c

Enzima c Enzima d

Enzima b

Enzima d

Produccin de metabolitos primarios

I- ALTERACION DE LA REGULACION POR
RETROALIMENTACION
1) Alteracin de la acumulacin de productos finales

Superproduccin de L-ornitina por Corynebacterium glutamicum.

Mutante auxtrofo para Arginina

Glutmico

N-Acetil-Glutamil-P

N-Acetil Ornitina

Citrulina
Mutacin

N-Acetil Glutmico

ARGININA

Semiladehido N-Acetil Glutmico ORNITINA

Arginosuccinato

Obtencin de mutantes auxtrofos

mutagnesis
Etil
metano
sulfonato

Medio mnimo

+ARGININA

MM+ ARGININA
MM+ARGININA
MM+ARGININA

penicilina

-ARGININA

Produccin de metabolitos primarios

I- ALTERACION DE LA REGULACION POR
RETROALIMENTACION
1) Alteracin de la acumulacin de productos finales
se acumula otro producto final

P1
A

B
P2

Superproduccin

I- ALTERACION DE LA REGULACION POR

RETROALIMENTACION
1) Alteracin de la acumulacin de productos finales
Ornitina, Lisina, Valina
Mutantes auxtrofos
2) Mutantes resistentes a la regulacin por
retroalimentacin
Lisina y Treonina, Isoleucina
Mutantes resistentes anlogos

Produccin de metabolitos primarios

Biosntesis de lisina en Escherichia coli
ASPARTATO
3

aspartokinasa

1
2

ASPARTIL FOSFATO

SEMIALDEHIDO ASPARTICO
ACIDO
DIHIDRODIPICOLINICO

HOMOSERINA
TREONINA

ACIDO
DIAMINOPIMELICO
METIONINA
LISINA

ISOLEUCINA

Produccin de metabolitos primarios

represin
retroalimentacin

Biosntesis de lisina en Escherichia coli

ASPARTATO
3

aspartokinasa

1
2

ASPARTIL FOSFATO

SEMIALDEHIDO ASPARTICO
ACIDO
DIHIDRODIPICOLINICO

HOMOSERINA
TREONINA

ACIDO
DIAMINOPIMELICO
METIONINA
LISINA

ISOLEUCINA

Biosntesis de lisina en Corynebacterium glutamicum

represin
retroalimentacin

ASPARTATO
aspartokinasa

Mutantes resistentes
a AEC

ASPARTIL FOSFATO

SEMIALDEHIDO ASPARTICO
ACIDO
DIHIDRODIPICOLINICO

Homoserina
deshidrogenasa

HOMOSERINA
TREONINA

ACIDO
DIAMINOPIMELICO
METIONINA
LISINA

ISOLEUCINA

Produccin de metabolitos primarios

Biosntesis de lisina en Corynebacterium glutamicum

Caractersticas de los microorganismos

superproductores de lisina:
1.Mutantes con un bloqueo en la homoserina deshidrogenasa
(auxotrofos de treonina, metionina e isoleucina)
2. Mutantes homoserina deshidrogensa hipersensible a la
inhibicin por treonina.
3. Mutantes resistentes a AEC (s--aminoetil-L-cistena).

NH2-(CH2)2-CH2-CH2-CHNH2-COOH Lisina
NH2-(CH2)2-S-CH2-CHNH2-COOH S-aminoetil cisteina AEC

Mutantes
regulatorios,
retrocruzamiento
con la cepa parental
para mejorar su
crecimiento

Metabolitos primarios
II- ALTERACION DE LA PERMEABILIDAD
L-glutmico
Uso: potenciador del sabor
Microorganismo: Corynebacterium glutamicum,
Brevibacterium, Microbacterium y Artrobacter
Caractersticas de los microorganismos
superproductores de glutamato:
1. Deficiencia en la cetoglutarato deshidrogenasa
2. Incremento en la glutamato deshidrogenasa
3. Requerimiento nutricional de biotina

glutamato

Metabolitos primarios
II- ALTERACION DE LA PERMEABILIDAD
L-glutmico

NADPH2
COOH
CH2

NADP
CO2 COOH

NADP

HC-COOH
HC-OH
COOH

isocitrato

CH2

NH3

NADPH2

COOH
CH2
CH2

CH2
Isocitrato
Deshidrogenasa

C=O

Glutamato
Deshidrogenasa

(descarboxilacin
oxidativa)

COOH

(aminacin
reductiva)

-cetoglutarato

HC-NH2
COOH

glutamato

Glucosa

Metabolitos primarios
L-glutmico

CO2

Pirvico
CO2

CO2

Enzima
mlica

Acetil CoA

Piruvato
carboxilasa

Citrato

CICLO
TCA

Oxalacetato
Malato
sintasa

Malato

Acetil CoA

Aconitato

Glioxilato

Fumarato

Isocitrato liasa

Isocitratp
deshidrogenasa
Descarbox.

Succinato
Succinil CoA
-cetoglutarato
deshidrogenasa

Isocitrato

-cetoglutarato
NH4

Glutamato

CO2

Biosntesis de cidos grasos

Metabolitos primarios
L-glutmico

Concentracin de Biotina:
1-5 g/ml: excrecin de glutamato
15 g/ml: (no hay excrecin de
glutamato)

Acetil-CoA carboxilasa

Produccin de metabolitos primarios

Biosntesis de prolina en Serratia marcensens

L-Glutmico

(1)
(2)
(3)
----------- B -------------------- C ---------- D -------------Glutamato
kinasa

No
glutmico
pirrolina-S
enzimatica
semialdehido
carboxilato
deshidrogenasa
reductasa

Prolina

prolina

3,4-dehidroprolina

Acido 4-tiazolidin carboxilico

S
Para superproducir prolina
1) Se aislaron mutantes resistentes a 3,4-dehidroprolina.
2) Se inactiv el gen que codifica la enzima la prolina oxidasa.
3) Serratia marcensens se cultivo en medio con alta concentracin de sales
4) los genes que participan en la biosntesis de prolina se clonaron a partir de
la cepa superproductora, se insertaron en un plsmido multicopia y se
reintrodujeron en Serratia marcensens en cepas defectivas en la
degradacin de prolina

PRODUCCIN DE AMINOCIDO CON ENZIMAS

L-Asprtico

Aspartasa
L-Asprtico
1mM

Acido fumrico + NH3

Keq =20mM

Aspartasa
L-Asprtico
2M cido fumrico + 2M NH3