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ASESORES:
AIDA LUZ VILLA
JAIME ANDRÉS CASTRO
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
MEDELLÍN
AGOSTO 2009
A mi familia
TABLA DE CONTENIDO
1. INTRODUCCIÓN 11
2. RESUMEN 13
3. OBJETIVOS 14
3.1. GENERAL 14
3.2. ESPECÍFICOS 14
4. MARCO TEÓRICO 15
4.1. VALIDACIÓN 15
4.1.1. Definición, importancia y necesidad de validación 15
4.1.1.1. Definición general del proceso de validación y el porqué de su
importancia 15
4.1.1.2. Necesidad de una validación 16
4.1.1.3. Cuando realizar una validación 17
4.3. EL AZÚCAR 73
4.3.1. Definición 73
4.3.2. Propiedades fisicoquímicas y composición 74
4.3.3. Usos comerciales y producción 74
4.4. BRIX 76
4.4.1. Generalidades 76
4.4.2. Medición de grados Brix 77
4.4.3. Uso de grados Brix en la industria 78
4.5. INVERSIÓN DEL AZÚCAR 78
4.5.1. Generalidades 78
4.5.2. Química de la inversión del azúcar 80
4.5.3. Cinética de la inversión 81
4.5.4. El por qué de la lectura en Brix invertido 82
6. BIBLIOGRAFÍA 143
ÍNDICES DE TABLAS
Tabla 1.
Parámetros de rendimiento relacionados según el requerimiento analítico
23
Tabla 2.
Parámetros a evaluar según el nivel de normalización del método
24
Tabla 3.
Parámetros a evaluar según la categoría del método
24
Tabla 4.
Procedimiento general para evaluar la robustez
28
Tabla 5.
Procedimiento general para confirmación de identidad: selectividad/especifidad
34
Tabla 6.
Procedimiento general para evaluar LID y MDL
36
Tabla 7.
Procedimiento general para evaluar LDC y LCP
38
Tabla 8.
Ecuaciones para el análisis de varianza en una regresión lineal
44
Tabla 9.
Procedimiento general para evaluar la linealidad y el rango de trabajo
46
Tabla 10.
Procedimiento general para evaluar la sensibilidad
48
Tabla 11.
Factores que inciden en la precisión
49
Tabla 12.
Diseño matricial genérico propuesto
54
Tabla 13.
Procedimiento general para evaluar la precisión
54
Tabla 14.
Procedimiento general para evaluar la exactitud
58
Tabla 15.
Resumen de especificaciones del densímetro
62
Tabla 16.
Condiciones de operación del densímetro
63
Tabla 17.
Composición del aire seco
66
Tabla 18.
Resumen de especificaciones del refractómetro
68
Tabla 19.
Relación entre algunos medios y el índice de refracción
68
Tabla 20.
Coeficientes para regresión polinómica de grados Brix invertido a partir del índice
de refracción
73
Tabla 21.
Tabla Jackson-Gillis
82
Tabla 22.
Resumen de especificaciones del ultrasonido
87
Tabla 23.
Descripción de muestras usadas en el desarrollo del proyecto
92
Tabla 24.
Condiciones ambientales promedio en el laboratorio central
94
Tabla 25.
Variables con influencia apreciable sobre el método analítico
95
Tabla 26.
Niveles de influencia para los distintos factores
96
Tabla 27.
Niveles de concentración evaluados en la robustez
96
Tabla 28.
Componentes seleccionados para el análisis de especifidad
97
Tabla 29.
Diseño de experimentos tipo Plackett-Burman para especifidad
98
Tabla 30.
Soluciones preparadas según el instrumento
99
Tabla 31.
Diseño de experimentos para precisión intermedia
100
Tabla 32.
Descripción del patrón usado en el cálculo de exactitud para el densímetro.
101
Tabla 33.
Estándares usados en el cálculo de la exactitud para el densímetro.
101
Tabla 34.
Descripción de estándares usados para la calibración del refractómetro a distintos
rangos.
102
Tabla 35.
Descripción de patrones usados en el cálculo de exactitud para el refractómetro.
102
Tabla 36.
Resultados prueba de estabilidad para refractómetro
104
Tabla 37.
Resultados prueba de estabilidad para densímetro
105
Tabla 38.
Promedios de porcentaje de agua perdida respecto al día de lectura
106
Tabla 39.
Resultados para el tiempo homogeneización en ultrasonido
108
Tabla 40.
Resultados para prueba de cantidad de HCl para refractómetro
109
Tabla 41.
Resultados para prueba de cantidad de HCl para densímetro
109
Tabla 42.
Resultados del ensayo de volumen de muestra a invertir para refractómetro
112
Tabla 43.
Resultados del ensayo de volumen de muestra a invertir para densímetro
113
Tabla 44.
Resultados del ensayo de tiempo de inversión para refractómetro
113
Tabla 45.
Resultados del ensayo de tiempo de inversión para densímetro
114
Tabla 46.
Resultados del ensayo de temperatura de inversión para refractómetro
115
Tabla 47.
Resultados del ensayo de temperatura de inversión para densímetro
115
Tabla 48.
Resultados del ensayo de agitación para refractómetro y densímetro
116
Tabla 49.
Resultados del ensayo de tiempo de retardo en lectura
117
Tabla 50.
Resultados del ensayo para temperatura de lectura
119
Tabla 51.
Concentraciones reales de las soluciones placebo preparadas para la especifidad
120
Tabla 52.
Respuesta en °B para las soluciones placebo en el análisis de especifidad
120
Tabla 53.
Sensibilidades parciales para los componentes presentes en las soluciones
placebo
121
Tabla 54.
Especifidades calculadas para las soluciones placebo
121
Tabla 55.
Resultados para linealidad por densimetría en Brix invertido
122
Tabla 56.
Resultados para linealidad por densimetría en Brix directo
122
Tabla 57.
Resultados para linealidad por refractometría en Brix invertido
123
Tabla 58.
Resultados para linealidad por refractometría en Brix directo rango bajo
123
Tabla 59.
Resultados para linealidad por refractometría en Brix directo rango alto
124
Tabla 60.
Parámetro de regresión en el análisis de linealidad
124
Tabla 61.
Parámetros de regresión polinómica en el análisis de linealidad por refractometría
en rango alto.
125
Tabla 62.
ANOVA y pruebas de verificación de supuestos para linealidad
129
Tabla 63.
Pruebas de significancia para pendiente e intercepto
130
Tabla 64.
Recuperación (%) para datos de linealidad
131
Tabla 65.
Sesgo (°B) para datos de linealidad
131
Tabla 66.
Recuperación y sesgo (°B) para datos de linealidad por refractometría en rango
alto
132
Tabla 67.
Sensibilidades para respuestas aproximadamente lineales
132
Tabla 68.
Sensibilidades a varias concentraciones para rango alto en refractometría
133
Tabla 69.
Repetitividades para densimetría y refractometría
134
Tabla 70.
Intervalos de confianza para densimetría y refractometría en el análisis de
repetibilidad
135
Tabla 71.
Verificación de varianzas similares entre analistas para precisión intermedia
135
Tabla 72.
Resultados del análisis de precisión intermedia
135
Tabla 73.
Intervalos de confianza para la precisión intermedia
136
Tabla 74.
Resultados de exactitud para calibración con agua destilada en densimetría
136
Tabla 75.
Resultados de exactitud para calibración con patrón de referencia en densimetría
137
Tabla 76.
Resultados de exactitud para refractómetro en un rango de calibración alto y bajo
137
Tabla 77.
Resultados parciales e incertidumbre reportada para el método usando densímetro
138
Tabla 78.
Resultados parciales e incertidumbre reportada para el método usando
refractómetro en un rango de calibración bajo
138
Tabla 79.
Resultados parciales e incertidumbre reportada para el método usando
refractómetro en un rango de calibración alto
139
Tabla 80.
Reporte de validación para método de determinación de grados Brix por
densimetría y refractometría
141
ÍNDICE DE GRÁFICAS
Figura 1.
Ciclo de validación
16
Figura 2.
Diagrama de desarrollo, validación y ajuste de un método analítico
22
Figura 3.
Algoritmo para la evaluación de robustez en un método analítico
26
Figura 4.
Distribución normal y no normal
43
Figura 5.
Jerarquía de los niveles de precisión
48
Figura 6.
Diferencia entre exactitud y precisión
49
Figura 7.
Procesos para cálculo de exactitud
55
Figura 8.
Componentes del sesgo en una medida
56
Figura 9.
Esquema del sistema para medir densidad
63
Figura 10.
Esquema del proceso de medición en un densímetro tipo tubo en U
64
Figura 11.
Esquema del lector para el refractómetro
67
Figura 12.
Geometría de la refracción
69
Figura 13.
Esquema de refracción a distintos ángulos
70
Figura 14.
Esquema de medición en un refractómetro con autobarrido
71
Figura 15.
Efecto de la concentración de azúcar en el índice de refracción
71
Figura 16.
Estructura química de la sacarosa
74
Figura 17.
Representación esquemática de la reacción de inversión
79
Figura 18.
Diagrama King-Jison
82
Figura 19.
Condiciones ambientales en el Laboratorio Central a través del tiempo
94
Figura 20.
Grados Brix respecto al tiempo para estudio de estabilidad en refractometría
105
Figura 21.
Grados Brix en bebidas respecto al tiempo para estudio de estabilidad en
refractometría
106
Figura 22.
Grados Brix en bebidas respecto al tiempo para estudio de estabilidad en
densimetría
106
Figura 23.
Promedio de todos los ensayos de estabilidad en porcentaje de agua perdida
respecto al tiempo
107
Figura 24.
Grados Brix normalizados respecto a la cantidad de HCl adicionada a la muestra
para el refractómetro
110
Figura 25.
Grados Brix normalizados respecto a la cantidad de HCl adicionada a la muestra
para el densímetro
111
Figura 26.
Grados Brix de muestras a varias temperaturas respecto al tiempo de lectura
118
Figura 27.
Grados Brix de muestras a varias temperaturas respecto al tiempo de lectura en
jarabe
118
Figura 28.
Regresión lineal para densidad respecto a °B invertido
125
Figura 29.
Homoscedasticidad de residuos de densidad respecto a la densidad estimada
para Brix invertido
126
Figura 30.
Regresión lineal para densidad respecto a Brix directo
126
Figura 31.
Homoscedasticidad de residuos de densidad respecto a la densidad estimada
para Brix directo
126
Figura 32.
Regresión lineal para índice de refracción respecto a Brix invertido
127
Figura 33.
Homoscedasticidad de residuos de índice de refracción respecto al estimado para
Brix invertido
127
Figura 34.
Regresión lineal para índice de refracción respecto a Brix directo en rango bajo
127
Figura 35.
Homoscedasticidad de residuos de índice de refracción respecto al estimado para
Brix directo en rango bajo
128
Figura 36.
Regresión lineal para índice de refracción respecto a Brix directo en rango alto
128
Figura 37.
Homoscedasticidad de residuos de índice de refracción respecto al estimado para
Brix directo en rango alto
128
ÍNDICE DE ANEXOS
Para una correcta validación se debe tener pleno conocimiento de los fenómenos
llevados a cabo por el método en cuestión, por esto se describen los principios de
funcionamiento de ambos equipos, refractometría y densimetría, la definición de
Brix directo e invertido en el ámbito industrial y las propiedades fisicoquímicas del
azúcar.
3. OBJETIVOS
3.1. GENERAL
3.2. ESPECÍFICOS
4.1. VALIDACIÓN
Existen varias formas de llevar a cabo una validación, de acuerdo a sus objetivos y
alcances, los cuales dependen del analista, del laboratorio y del uso que se haga
del método; además el analista debe conocer los resultados esperados y definir el
nivel de confianza. El laboratorio que desarrolla o aplica el método es el
responsable del proceso de validación.
Estos factores no son excluyentes y por lo tanto pueden efectuarse varios a la vez.
Se recomienda, entonces, cuando sea necesaria una re-validación, realizar la
mayor cantidad de cambios previstos a futuro, y de esta forma no será necesario
ejecutar validaciones de manera seguida; es decir, si por algún motivo se realiza
una corrección en el procedimiento y es necesaria la validación, se debe realizar
una búsqueda bibliográfica de la técnicas actuales para el método en cuestión y
evaluar si en ese momento existen mejores técnicas para dicho análisis y si es
apropiada su aplicación.
En ocasiones cada laboratorio elabora sus propios métodos, esto puede deberse a
que el análisis es muy específico y se evalúa, por ejemplo, cierta matriz especial
que solo interesa al laboratorio; o que debido a restricciones de tipo comercial no
se puede disponer de métodos análogos usados en otras empresas o compañías.
El laboratorio, por consiguiente, debe evaluar la capacidad de los analistas,
equipos y otros recursos relacionados con el método en cuestión. Los métodos
deben estar debidamente validados, documentados y autorizados para su uso.
Para la evaluación de la capacidad del método se sugiere realizar comparaciones
con otros métodos normalizados, preferiblemente que usen otro principio activo.
En lo posible se debe usar materiales de referencia, estándares o muestras
fortificadas.
Métodos no normalizados
Los métodos no normalizados son aquellos que no han sido publicados por
fuentes autorizadas y/o validadas. Es muy probable que los métodos sin
normalización no dispongan de datos de validación o estudios colaborativos
fiables o suficientes, por esto se recomienda realizar una validación cuanto sea
posible. Si el método sufre cambios se requerirá una re-validación del método.
Si un método será desarrollado para tener un gran campo de acción, aunque sea
un procedimiento estándar publicado, se recomienda el estudio colaborativo
involucrando a otros grupos de laboratorio. Sin embargo, éste no es una opción
muy adecuada para laboratorios industriales; en este caso se tiene que,
desafortunadamente, los laboratorios posiblemente interesados en el método de
análisis pueden pertenecer a la competencia.
Aunque el uso de los métodos sea privado, estos deben poseer certificación de
una autoridad reguladora competente, en el caso de POSTOBÓN S.A. sería
ICONTEC, específicamente la Norma Técnica Colombiana 2714 y 17025; con
éstas se busca estandarizar los métodos usados para análisis fisicoquímico y
microbiológico en la industria de bebidas gaseosas, con su respectiva validación y
respaldo metrológico.
Los lineamientos para la validación usados en un método deben ser acordes con
el sector sobre el cual actúa, por ejemplo, la validación de un método de análisis
en alimentos debe ser consistente con la estrategia de validación usada por la
AOAC International. Esto será de gran ayuda ya que así se estarán describiendo
los mismos factores bajo la misma terminología relevante al sector, en este caso,
de alimentos. Además si se desea proyectar a futuro una validación por estudio
colaborativo, resultará más fácil la transferencia del método.
Requerimiento analítico
Característica de
rendimiento relacionada
¿Qué clase de respuesta se requiere, cualitativa o cuantitativa?
Confirmación de identidad
Selectividad/especifidad
Límite de detección
Límite de cuantificación
¿El analito está disperso o localizado?
*
¿El analito está presente en más de una forma, se está interesado
en analito extraíble, libre o total?
Confirmación de identidad
Recuperación
¿Cuáles son los analitos de interés y a qué nivel se presentan (%,
µg, ng, mg u otros)?
Confirmación de identidad
Límite de detección
Límite de cuantificación
Rangos de trabajo y
linealidad
¿Qué tan preciso y reproducible debe ser la respuesta? ¿Qué
grado de incertidumbre es permitido y como se expresará?
Recuperación
Exactitud/fidelidad
Repetibilidad
Reproducibilidad
¿Cuál es la naturaleza química, biológica y física de la matriz?
*
¿Cuáles son las posibles interferencias?
Selectividad/especifidad
¿Se requiere un muestreo y sub-muestreo y será este realizado en
el laboratorio?
*
¿La muestra está sujeta a restricciones de tamaño o
disponibilidad?
*
¿Existen restricciones de recursos humanos, tiempo, dinero,
equipo, reactivos y/o medios del laboratorio?
*
¿Los resultados necesitan ser comparados con otros laboratorios?
Fortaleza/robustez
Reproducibilidad
¿Los resultados necesitan ser comparados con especificaciones
externas?
Exactitud
Reproducibilidad
Tipo de método
A comprobar
Determinar
Control
Método
normalizado
- Exactitud
- Repetibilidad
- Incertidumbre
- Límite de
detección (si la
norma lo indica)
- Rango
- Linealidad
- Recuperación
- Robustez
- Selectividad
- Estabilidad (resistencia)
- Reproducibilidad
- Realizar protocolo de
control de calidad
- Controles
intralaboratorio
- Participar de
interlaboratorios
Modificación de un
método
normalizado
- Exactitud.
- Repetibilidad.
- Reproducibilidad
- Rango
- Linealidad
- Recuperación
- Robustez
- Selectividad
- Estabilidad(resistencia)
- Reproducibilidad
- Realizar protocolo de
control de calidad
- Controles
intralaboratorio
- Participar de
interlaboratorios
Método
desarrollado por el
laboratorio o No
normalizado
- Exactitud.
- Repetibilidad.
- Reproducibilidad
- Selectividad/especifidad
- Linealidad
- Exactitud
- Rango
- Repetibilidad
- Reproducibilidad
- Estabilidad(resistencia)
- Límite de detección
- Límite de cuantificación
- Recuperación
- Robustez
- Sensibilidad
- Incertidumbre
- Realizar protocolo de
control de calidad
- Controles
intralaboratorio
- Participar de
interlaboratorios
Parámetro
Categoría I
Categoría II
Categoría III
Fortaleza
Si
Si
*
Selectividad
Si
Si
Si
Sensibilidad
*
*
*
Linealidad
Si
Si
*
Rango
Si
Si
*
Exactitud
Si
Si
*
Recuperación
Si
Si
*
Precisión
Si
Si
Si
Límite de detección
No
Si
*
Límite de cuantificación
No
Si
*
Estudio comparativo (interlaboratorio)
*
*
*
Robustez
Si
Si
Si
Incertidumbre
Si
Si
Si
* Se deja a criterio del laboratorio, realizar siempre y cuando sea posible su determinació
las restricciones del método.
4.1.4. Parámetros de rendimiento y de caracterización del método
- Robustez
- Selectividad/especifidad
- Linealidad
- Exactitud
- Intervalo de trabajo (rango)
- Límite de detección
- Límite de cuantificación
- Estabilidad (resistencia)
- Sensibilidad
- Incertidumbre
- Exactitud (recuperación o sesgo)
- Precisión:
- Repetibilidad
- Reproducibilidad
- Precisión intermedia
- Incertidumbre
4.1.4.1. Robustez
Una medida de que tan efectivo es un método analítico es saber la fiabilidad de los
resultados obtenidos cuando no es ejecutado de forma ideal. En cualquier método
siempre habrá etapas que no son efectuadas de manera cuidadosa, estas
variaciones podrían traer efectos negativos en su rendimiento y es posible que el
método no cumpla su objetivo. Estas etapas deben ser identificadas, y si es
posible, también se debe evaluar la influencia sobre el rendimiento del método
valorándose a través de pruebas de robustez, también llamado algunas veces
rigidez. Esto conlleva a realizar variaciones de forma deliberada en el método e
investigar los efectos subsecuentes en su rendimiento. Con estos resultados es
posible identificar que variables afectan de manera significativa y por lo tanto,
asegurar que cuando se haga uso de él, estas sean controladas de forma
eficiente.
Existen otros tipos de diseño que son optimizaciones de los anteriores, los más
conocidos y recomendados para validación de métodos analíticos son los
propuestos por Plackett-Burman [8] y Youden-Staider [9].
Ejecución de experimentos
Realizar Análisis de
varianza y/o t contra un
ensayo realizado al
100 % o contra el valor
verdadero.
Se recomienda el
uso de diseño
univariable.
....,..................=....,............+........,............-
..+1-.. ........,..........+..*........,..............
..+1
(1)
Donde,
..=1,2,3 ..: es el número del diseño en el tiempo
....,..................: respuesta corregida
....,............: respuesta en el experimento ..
........,............: el resultado nominal o medición a condiciones nominales al inicio de
experimentos (dadas por el método).
........,..........: resultado nominal antes del experimento ..
........,..............: resultado nominal después del experimento ..
- Cálculo de efectos
....=
..(+)
..(+)
-
..(-)
..(-)
(2)
Donde,
....: el efecto del factor X (variable modificada)
..(+): respuesta de la medición donde se efectuó el cambio en el factor X
..(-): respuesta de las mediciones en las cuales no se efectuó el cambio en el
factor X o el valor de dicho factor es bajo
..(+): es el número de ensayos en los cuales se obtuvo ..(+)
..(+): es el número de ensayos en los cuales se obtuvo ..(-)
.... % =
....
.. *100 (3)
- Interpretación estadística
..=
....
.... ..
.......í........ (4)
..=..-2 (5)
....=
..(+)
2
..(+)
+
..(-)
2
..(-)
= ......
2
..(+)
+
......
2
..(-)
(7)
Donde ......
2 es la varianza asociada a la precisión intermedia. Existen casos en los
cuales la precisión intermedia es mucho menor a la precisión asociada al equipo
de medición, en estos casos se recomienda tomar la precisión mayor.
..=
....
2
....
2 (8)
....
2=
(......-.... )2....
..=1
....
..=1
(....)..-....
....
..=1
(9)
....= (....)..-....
....
..=1 (10)
Donde,
..0=
1
....-1
(....)..
....
..=1-
(....).. 2....
..=1
(....)..
....
..=1
(12)
......
2=
(.... -.. ..)2....
..=1
....-1
(13)
.. ..=
(....)......
....
..=1
(....)..
....
..=1
(14)
....=....-1 (15)
..2=
..-1 ..2
..02 (17)
....=..-1 (18)
....
2 se lee de la distribución chi-cuadrado con grados de libertad .... y un nivel de
significacia dado ..=0,05.
En un método ideal, la respuesta del ensayo debe ser sólo función de la especie a
la cual se le está realizando la cuantificación, esto se puede expresar en forma de
una función de la siguiente manera:
....=..(....) (19)
Donde .... es la señal o respuesta del compuesto A usada para su cuantificación, y
.... es la concentración o cantidad de analito presente en la muestra.
....=....+..........+..........+.+.......... (21)
....=....0+..........+..........+.+..........
....=....0+..........+..........+.+..........
....=....0+..........+..........+.+..........
....=....0+..........+..........+.+..........
(22)
Las sensibilidades parciales se pueden hallar por regresión lineal múltiple (Gauss
Jordan o mínimos cuadrados), analizando la respuesta de varias soluciones con
diferentes cantidades del analito e interferencias, el diseño de experimentos para
esta prueba se puede realizar bajo los lineamientos de descritos en la sección
4.1.4.1.
¿Qué hacer?
Repeticiones
Cálculo/Determinación
Criterio de
aceptación
Analizar las muestras
y materiales de
referencia por el
método seleccionado
y otros métodos
independientes.
1
%Recuperación
Exactitud
Usar los resultados para
confirmar la habilidad de la
técnica en la identificación del
analito.
Suficiente evidencia
que soporta la
fiabilidad del
método
Analizar muestras que
contienen el analito y
posibles interferencias
fortificadas.
1
Especifidad o selectividad
%Recuperación
Selectividades parciales
Examinar el efecto de las
interferencias, que tanto inciden
en la intensidad de la respuesta
del método.
Los componentes
no deben interferir
en la cuantificación
del analito.
........>0.9
En la práctica los límites de detección más importantes son el LID y el LDM. El LDI
generalmente lo reportan los fabricantes de equipos y en ocasiones es tan bajo
que no sirve como criterio estadístico para afirmar la validez de una lectura. El
límite de cuantificación (LDC) formalmente no es un "límite de detección" por lo
tanto se calculará como un parámetro distinto.
El cálculo para hallar el LID y LDM es casi idéntico, se diferencia en que para la
determinación del LDM la muestra que contienen el componente de interés es
procesadas a través de todo el método analítico mientras que para el cálculo del
LDI solo se realizan lecturas a un blanco, el cual puede ser un estándar de baja
concentración. La determinación del LID y LMD se hace de manera iterativa, y
debe repetirse en caso de no cumplir con la condición final. Normalmente el LDM
es mayor al LID.
......=1.645.. (24)
......=3.290.. (25)
LDM=3.14s (36)
Análisis
Repeticiones
Calculo
Comentarios
LID: análisis directo de un blanco
al cual se le añade una cantidad
conocida de analito tal que la
concentración sea menor a 5
veces el valor estimado del LID.
7 mediciones
Calcular la
desviación
estándar y el LID.
A partir del blanco, solo cuando éste tiene una cantidad apreciable de analito, se
procede de la siguiente manera:
Análisis
Repeticiones
Calculo
LDC: blancos sin adición de
analito
10 veces
5 veces el LDM
4.1.4.5. Linealidad
Para los métodos cuantitativos es necesario determinar el rango de concentración
del analito donde el método debe ser aplicado. La linealidad y rango son dos
parámetros muy relacionados, sin embargo el rango se distingue de la linealidad
en que éste toma en cuenta además la precisión y la exactitud de los valores
obtenidos y por lo tanto se trabaja como un parámetro distinto. Sin embargo
ambos se obtienen a partir del mismo grupo de ensayos.
Para análisis de drogas y sustancias en productos que tienen un valor nominal fijo
y único, se recomienda la evaluación de linealidad en un rango de ± 20 ó ± 30 %
del valor lineal tomando al menos 5 concentraciones [6,5]. Sin embargo para
análisis de sustancias que están presentes en concentraciones desconocidas o
que sólo están bajo la reglamentación de un máximo o mínimo requerido, por
ejemplo en análisis de pureza, se debe determinar la linealidad en un rango
determinado. Para este caso el valor más bajo será es el límite de detección o el
50 % del límite de cuantificación práctico [1], y el valor más alto, en cambio,
dependerá de varios factores [1,3]:
- Máxima cantidad de analito en la muestra que puede llegarse a evaluar.
- Máxima señal/respuesta que pueden entregar los equipos o instrumentos
usados en el método.
- 150 % del valor nominal en caso que exista.
Ecuación de la recta:
..=....+.. (27)
.. ..=......+.. (28)
Valor residual:
Término independiente:
..=.. -.. ..=
..-.. ..
..
(30)
.. =
..
..
, .. =
..
..
(31)
Pendiente:
..=
..-.. (..-.. )
..-.. 2 (32)
Coeficiente de correlación:
..=
..-.. (..-.. )
..-.. 2 ..-.. 2 (33)
........=....,..
2=
..-.. 2
..-2
1-..2 = ..2-.. ..-.. ....
..-2=
(.. ..-....)2
..-2= ....
2
..-2
(34)
....
2=
....,..
2
..2-
( ..)2
..
(35)
Cálculo de varianza del término independiente:
....
2=....
2 ..2
..
(36)
La pendiente .., como se verá más adelante, está asociada a la sensibilidad del
método, mayor pendiente significa mayor sensibilidad, por otro lado el término
independiente .. está relacionado con el error sistemático del método, su
significancia debe ser evaluada para determinar si el error sistemático es
representativo.
........=
........
2
....
2 (37)
..=..(..,..,..) (38)
Si, ........<.. ..,..,.. significa que las varianzas de las concentraciones son
homogéneas, es decir, que el factor concentración no influye estadísticamente en
la variabilidad de los resultados.
- Si la mayor variabilidad está ubicada en uno de los extremos, este punto debe
excluirse y por lo tango reducir el rango lineal.
- Puede plantearse el análisis a otro nivel de concentraciones tal que las
variaciones no sean significativas.
- Introducir datos
- Seleccionar columna(s)
- Statistics/Descriptive Statistics/Normality Test/Open Dialog
- Seleccionar las pruebas Shapiro-Wilk y Kolmogorov-Smirnov con parámetros
estimados.
Suma de cuadrados
Grados de
libertad
Varianza
Estadístico
Regresión
..........= ....(.. ..-.. )2
1
........=
..........
1
..1=
........
........
Residual
..........= (.. ..-....)2
..-2
........=
..........
..-2
Falta de ajuste
........= ....(.. ..-.. ..)2
..-2
......=
........
..-2
..2=
......
........
Error
Experimental
..........= (......-.. ..)2
....-..
........=
..........
....-..
Total
......= (......-.. )2
....-1
....=
......
....-1
Donde
..: número del grupo
..: número de la serie
.. : media de y
.. : media de x
..: número total de lecturas
....: número de réplicas en un grupo
..: número de grupos o concentraciones
(......-.. )2= (......-.. ..)2+ ....(.. ..-.. ..)2+ ....(.. ..-.. )2 (39)
......=..........+........+.......... (40)
..........=..........+........ (41)
..........: suma de cuadrados debido a la regresión
........: varianza de la regresión
..........: variación residual debida al error experimental dentro de los grupos más la
variación debida a la falta de ajuste.
........: variación residual
..........: cálculo del error experimental (suma de cuadrados debido a las réplicas
dentro de las mismas series).
........: varianza del error experimental
........: cálculo del error de regresión o de falta de ajuste (se debe a la dispersión de
resultados entre los valores de la recta de regresión y las medias de cada grupo)
......: suma de los cuadrados total
Una vez comprobados los supuestos y calculados los estadísticos ..1 y ..2 se
procede a verificar las siguientes hipótesis:
..±..*.... (42)
Análisis
¿Cuántas
veces?
¿Qué calcular?
Comentarios
Blanco y
materiales de
referencia, ó
blancos
fortificados a
varias
concentraciones
Se necesita al
menos 6 puntos
distintos
3 cada
punto
Graficar medida de respuesta
(y) contra la medida de
concentración (x)
Calcular coeficiente de
regresión apropiado. Calcular y
graficar los valores residuales
(diferencia entre el valor actual y
el valor predicho por la ecuación
de la recta para cada valor de
x). Distribución aleatoria
alrededor de la línea confirma
linealidad. Tendencias
sistemáticas indica no
linealidad.
En este paso es necesario
confirmar la linealidad del
rango de trabajo tanto visual
como estadísticamente.
En ciertas circunstancias
puede ser necesario usar
una regresión a una curva no
lineal. No se recomienda el
uso de polinomios mayores
al orden cuadrático.
4.1.4.6. Rango
Proceder de igual forma que en el análisis de linealidad, a diferencia de este,
calcular además la precisión y la recuperación en cada nivel de concentración.
Para el cálculo de rango de trabajo se recomienda usar el definido por el mínimo
valor y el máximo valor aportados por los análisis usuales que se realicen dentro
del laboratorio. Restringir entonces el rango donde los valores de precisión y
exactitud están dentro de lo especificado en los criterios de aceptación [3].
4.1.4.7. Sensibilidad
Cálculo de la sensibilidad
..=
....
....
(44)
Análisis
Repeticiones
Calculo
Comentarios
Analizar estándares a
diferentes
concentraciones (mínimo
3 para respuestas
lineales, mínimo 5 para
respuestas polinómicas)
Tres mediciones
por estándar
Promedio de cada
respuesta
Gráfica Respuesta vs
concentración
Regresión lineal o
polinómica
Pendiente (lineal) o
derivada evaluada en
cada concentración
(polinómica)
No es recomendable
realizar
aproximaciones
polinómicas mayores
a grado 2.
4.1.4.8. Precisión
Factor
Repetibilidad
Precisión intermedia
Reproducibilidad
Instrumento
Igual
Diferente
Diferente
Tiempo entre análisis
Igual
Diferente
Diferente
Analista
Igual
Diferente
Diferente
Laboratorio
Igual
Diferente
Diferente
Otros factores (reactivos,
condiciones ambientales, etc.)
Igual
Igual
Diferente
Otros factores que influyen son los siguientes:
El factor "R" al igual que su homólogo "r", permita al analista saber si la diferencia
entre análisis duplicados es significante bajo condiciones de reproducibilidad [3].
..=..+..+..
En donde,
..: promedio general
..: variación entre laboratorios
..: error aleatorio presente en cada ensayo o intra-laboratorio
En este caso el valor .. no es necesariamente igual al valor real y en caso que sea
distinto se denomina su diferencia como el sesgo del método de ensayo y no
aporta significancia en el estudio de precisión.
Cálculo
..: número de laboratorios
....: número de replicas para el laboratorio ..
.. ..: promedio de la medición para el laboratorio ..
....: desviación estándar para el laboratorio ..
....: desviación estándar de repetibilidad
....: desviación estándar que incluye variabilidades entre-operarios y entre-equipos
....: desviación estándar de reproducibilidad
..2= ...... ..
2 (46)
..4= ....
2 (48)
..5= (....-1)....
2 (49)
....
2=
..5
..3-..
(50)
....
2=
..2..3-..12
..3(..-1)
-....
2
..3(..-1)
..32-..4
(51)
....
2=....
2-....
2 (52)
..=
..1
..3
(53)
..=2 2 ....
2 (54)
..=2 2 ....
2 (55)
Procedimiento para cálculo de repetibilidad y precisión intermedia usando el
coeficiente de variación
- Repetibilidad
....(%)=
..
..
*100 (56)
Donde,
..: es la desviación estándar
..: media aritmética de los resultados
.. ±..*
..
..
(57)
Donde,
.. : promedio se la serie de resultados
..: desviación estándar
..: número de mediciones
..: estadístico t de Student con ..-1 grados de libertad y ..=0.05
Repetibilidad del método: a diferencia del ensayo anterior, en este caso se parte
de alícuotas de una misma muestra homogénea y se les realiza todo el
procedimiento indicado de forma individual, se analizan de forma independiente
como si fueran réplicas de una misma muestra y con un mismo analista. Tal como
lo propone la ICH se recomiendan mínimo 9 mediciones para un total 3 niveles de
concentración (3 mediciones por nivel).
- Precisión intermedia
..=
..12
..22 (60)
Instrumento A
Analista X
Día 1
Día 2
Día 3
Analista Y
Día 1
Día 2
Día 3
Instrumento B
Analista X
Día 1
Día 2
Día 3
Analista Y
Día 1
Día 2
Día 3
Análisis
Repeticiones
Calculo
Comentarios
"r y R" usando una
muestra preparada,
estándar o muestra típica
de análisis.
9 repeticiones como
mínimo en un mínimo de 3
laboratorios
R, r y m
Se recomienda
realizarlo en mínimo 2
niveles de
concentración.
Repetibilidad (método e
instrumento) usar
estándares o muestras
preparadas con
concentración conocida.
9 repeticiones en 3 niveles
de concentración
CV e intervalo
de confianza
Precisión intermedia
3 por analista por día y por
cada instrumento. Un total
mínimo de 9
determinaciones.
CV de
instrumento, y
analista.
Se recomienda
realizarlo en mínimo 2
niveles de
concentración.
4.1.4.9. Exactitud
Cálculo de la exactitud
La línea resultante ideal es una recta de 45°, o en otras palabras una ecuación de
recta ..=... La regresión se realiza en los puntos dados y se obtiene una ecuación
de la forma ..=....+..
Porcentaje de recuperación
%..=
.. ..
..
(62)
Diferencia o sesgo
Donde,
Si hay suficientes
datos realizar una
prueba de
hipótesis para la
media.
Comparación por
recuperación y
diferencia.
El criterio de aceptación
depende mucho del tipo de
análisis y uso que se le dé,
en general se acepta una
recuperación de 100 ± 3 %
cuando se realizan con
materiales de referencia y
100 ± 5 % con estándares.
Analizar la
muestra/referencia por
el método a validar y un
método independiente
preferiblemente validado
o primario.
Un mínimo de 10
veces por nivel.
Promedio y
desviación
estándar por nivel
de concentración.
Comparación por
recuperación y
diferencia. Y
análisis de
regresión si hay
suficientes datos
4.1.4.10. Incertidumbre
La incertidumbre se define como un "parámetro asociado al resultado de una
medición, que caracteriza la dispersión de los valores que pueden ser atribuidos
razonablemente a lo que se mide" [20]
Existen ciertos requisitos que deben cumplirse para el uso de las muestras control
en el cálculo de la incertidumbre:
- Las MCL deben pasar por todos los pasos del método, entonces el
laboratorio puede usar la desviación estándar (......) como una
precisión intermedia en el estimado de la incertidumbre estándar
combinada.
- Cuando las MCL no han sido corridas bajo todos los pasos del
método, el laboratorio debe incorporar los componentes adicionales
o consideraciones apropiadas en el cálculo de la incertidumbre
usando el método de sumas cuadradas y combinándola con el .......
- Cuando se conoce que el método tiene un sesgo consistente y que
es inherente a este (por ejemplo, bajas recuperaciones en analitos
difíciles), el sesgo no debe añadirse a los cálculos de incertidumbre,
sin embargo debe quedar claramente establecido y reportado.
..=..*...... (64)
....=
......
....-..
=
(......-.. ..)2
....-..
(65)
......= .... (66)
Donde,
......= ......
2-......
2 (67)
El laboratorio se considera competente si:
Si el estudio de validación no incluye todos los pasos del método, entonces las
incertidumbres estándares de estos pasos deben añadirse al ...... usando el
método de sumas cuadradas.
..=..*...... (68)
Propiedad
Valor
Comentario
Fabricante
Anton Paar
Modelo
DMA 58
Exactitud (Densidad)
± 0.00001 g/cm3
Exactitud (°B)
0.01 °B
Rango de exactitud
(densidad)
0.5 - 1.5 g/cm3
Precisión
± 0.000005 g/cm3
Tamaño de muestra
0.7 cm3
Rango de temperatura
-10 a 70 °C
Precisión sensor de
temperatura
± 0.01 °C
Rango de presión
0 - 10 bars
Dígitos display
7 dígitos
Automuestreador
24 viales
SP3 Anton Paar
Tabla 16. Condiciones de operación del densímetro:
Temperatura ambiente
15 a 35 °C
Humedad relativa
10 a 90 %RH
..=
12..
..
..+....
(69)
Y el periodo sería
..=2.. ..+....
..
(70)
Despejando obtenemos
..=..2..
4..2..
-
..
..
(71)
Usando la abreviación
..=
..
4..2..
(72)
..=
..
..
(73)
Se llega a
..=....2-.. (74)
Debido a que este instrumento no diferencia entre los tipos de sólido disueltos se
debe asegurar que la matriz no posea otras sustancias en proporciones relevantes
que aporten a la densidad de la muestra. Es por esto que en el densímetro sólo se
realiza medición a jarabes terminados de baja concentración o producto terminado
libre de CO2 y en ausencia de sólidos no disueltos. Otra característica derivada de
esta propiedad es que la escala para Brix es única tanto para directo como para
invertido.
4.2.1.3. Calibración
.=
0.00129301+0.00367tp760
= g/cm3 (75)
N2
O2
Ar
CO2
Ne
He
Kr
X
H2
%Volumen
78.09
20.95
0.93
0.03
0.0018
0.0005
0.0001
8 x 10-7
5 x 10-5
%Masa
75.52
23.15
1.28
0.05
0.0013
7 x 10-5
0.0003
4 x 10-5
4 x 10-4
..=
(..1-..2)
(..12-..22)
(78)
..=
(..22..1-..12..2)
(..12-..22)
(79)
..: densidad
..: periodo
Los densímetros dan la respuesta en valores de densidad. Los grados de Brix son
entonces derivados de tablas de sacarosa estándar, tales como las reportadas por
National Bureau of Standards (NBS) o actualmente National Institute of Standards
and Technology (NIST) [23]; y de ecuaciones de conversión desarrolladas a partir
de estas tablas, o para nuestro caso las disponibles en la normatividad interna de
POSTOBÓN S.A. [24]. El equipo posee un software interno que realiza esta
conversión.
C:\AF2D8F05\8E04CDDE-7CA2-4417-BC53-3AC63AE619B7_archivos\image008.png
4.2.1.5. Posibles causas de error del instrumento
Propiedad
Valor
Comentario
Fabricante
Bellingham Stanley
Modelo
RFM 340
°B para azúcar
0 - 95
Resolución IR
0.00001
Resolución °B
0.01
Precisión IR
± 0.00003
Precisión °B
± 0.03
Exactitud °B
± 0.03
Tipo de prensador
Poliacetilo
Tiempo de lectura
Mínimo 4 segundos
Estabilidad de temperatura
± 0.05 °C
Material Prisma
Zafiro artificial
IR Prisma
1.7686
Compensación automática de
temperatura
5 - 70 °C
Activa
Comprobación de estabilidad de
temperatura
Ninguna
Tiempo de retardo
Repetibilidad
inteligente
Ninguna para análisis en laboratorio
central
Tiempo de retardo para análisis en
línea
Intervalo de humedad ambiente
< 80 %RH
Sonda de temperatura
Prisma
Prensador
Se activa la medición de temperatura
por el prisma.
La luz viaja en el vacío a casi 300 000 km/s, sin embargo, esta baja su velocidad
en medios transparentes tales como aire, agua y vidrio. La proporción por la cual
disminuye su velocidad se conoce como el índice de refracción del medio, y es
siempre mayor que la unidad. El índice de refracción se denota como n.
n = (Velocidad de la luz en el vacío) / (Velocidad de la luz en la sustancia) (80)
Medio
Índice de refracción
Velocidad de la luz
en el medio
Vacío
1.0000
299792 km/s
Aire
1.0003
299703 km/s
Hielo
1.31
228849 km/s
Agua
1.33
225408 km/s
Vidrio
1.50
199862 km/s
C:\AF2D8F05\8E04CDDE-7CA2-4417-BC53-3AC63AE619B7_archivos\image009.png
Primero se debe visualizar la luz como rayos. Cuando estos rayos al emerger del
agua alcanzan el aire, cambiará su dirección, o en otras palabras son refractados.
Los rayos de luz también serán parcialmente reflejados.
Este cambio de dirección también puede ser observado de manera inversa cuando
la luz ingresa al agua viniendo de aire, en este caso los rayos son refractados
desde el "lado del aire".
Como se observa en la figura 12, la luz incidente corta este círculo a una distancia
b de la luz normal reflejada a una distancia a.
Si el ángulo bajo el cual la luz alcanza la superficie del agua cambia, b cambiará,
así como también a, pero su razón no lo hará:
En esta figura se pueden ver nueve rayos. Cinco de estos son parcialmente
reflejados y parcialmente refractados, los otros son totalmente reflejados. Debido a
esto existe una línea de frontera (línea roja) entre lo brillante, área totalmente
reflejada, y lo no tan brillante, área parcialmente reflejada. Esta línea de frontera
describe un ángulo específico, que se conoce como ángulo crítico de reflexión
total. El valor de este ángulo crítico depende de los índices de refracción de los
dos materiales.
Matemáticamente esta relación es descrita por la ley de Snell que, en vez de las
líneas a y b, usa los ángulos ..1 y ..2 con respecto a la normal respectivamente. En
ésta ley los índices de refracción en los dos medios ..1 y ..2 son incluidos:
....=......-1(..1/..2) (83)
El índice de refracción aumenta con los sólidos disueltos totales, por lo tanto
cualquier sustancia disuelta (azúcar, sal, ácido) contribuirá en el índice de
refracción. Los sólidos insolubles, tales como pulpas o polvo de té no contribuirán
significativamente al índice de refracción. En la figura 15 se aprecia claramente el
fenómeno en un caso muy común.
Existen tablas reportadas por ICUMSA que muestran la corrección que se debe
realizar al efectuar la lectura a una temperatura distinta de 20 °C, en un rango de
15 °C a 40 °C [29]. Por extrapolación se pueden obtener una corrección incluso
para 10 °C. Los materiales de referencia usualmente vienen con certificados que
reportan valores para el índice de refracción y grados Brix a varias temperaturas,
como ejemplo se pueden observar las tablas de los patrones usados en este
estudio (anexo B)
4.2.2.3. Calibración
Donde
..: lectura en unidades definidas por el usuario
..: índice de refracción 1.33
A, B, C, D, E, F: constantes polinómicas
- Grados Brix directo a partir de un índice de refracción a 20 °C
Tabla 20. Coeficientes para regresión polinómica de grados Brix invertido a partir del índi
refracción
Constante
Valor
A
-2.12283
B
715.89
C
-1813.93
D
5412.71
E
-12959.5
F
20235.6
4.3. EL AZÚCAR
4.3.1. Definición
Glucosa Fructosa
- Azúcar rubio: es más claro que el azúcar moreno, y tiene un porcentaje mayor
de sacarosa.
4.4. BRIX
4.4.1. Generalidades
La escala de Brix fue establecida en el siglo XIX por el químico alemán A.F.W.
Brix. Él encontró que al sumergir un hidrómetro en un jugo de fruta, se podía
conocer, a partir de su densidad, el porcentaje de azúcar presente en el jugo.
Es de aclarar, que en una bebida gaseosa o refresco, hay, además del azúcar,
otros sólidos disueltos. Sin embargo, estos se encuentran en pequeñas cantidades
si la comparamos con el contenido de azúcar, aunque contribuyen ligeramente en
la medición de grados Brix. Por conveniencia se considera que esta contribución
también es debida al azúcar, el error asociado individualmente a los otros
componentes disueltos para las distintas formulaciones se acepta sobre una base
universal y es ignorado en la mayoría de los casos, además los parámetros
definidos para los productos como tal se reportan incluyendo esta desviación
causada por otros componentes disueltos. En conclusión, para el análisis como tal
de grados Brix, en el ámbito industrial, se asume que la bebida es una solución
pura de sacarosa en agua [32].
Las bebidas gaseosas tienen un rango de Brix típico entre 8 y 14 °B, sin embargo
para su preparación es necesario el uso de soluciones concentradas denominadas
jarabes. En el proceso se hace distinción entre jarabe simple y jarabe terminado.
El jarabe simple es aquella solución madre que posee solo azúcar y agua, y tiene
aproximadamente 61 °B; esta es usada, por medio de una dilución para obtener el
jarabe terminado el cual tiene además de azúcar el resto de componentes propios
de un producto, excepto gas carbónico. Este tipo de jarabe, aún concentrado,
tiene un Brix que depende de la huella técnica del producto y su rango típico es
entre 35 y 60 °B.
4.4.2. Medición de grados Brix
Es por esto que los grados Brix deben ser constantemente monitoreados y
controlados en la línea de producción, que en ocasiones involucra un gran flujo de
solución de sacarosa envasada usando llenadores a alta velocidad en cientos de
botellas por minuto. El control de los grados Brix tiene que ser por lo tanto de gran
precisión y la desviación de la concentración objetivo debe ser mínima. Tales
desviaciones afectan tanto la calidad del producto como el rendimiento en la
producción, y ambas, a la vez, afectan negativamente los costos totales.
4.5.1. Generalidades
..12..22..11+..2..
..........+.
..6..12..6+..6..12..6 (85)
................+........
..........+.
..............+................
342,3 18,0 180,6 180,6
..
......
Figura 17. Representación esquemática de la reacción de inversión
................+........
..........+.
.............. + ................ (86)
..=66.5° ..=52.7° ..=-92.4°
....
....
=.... (87)
..=
1
..
ln
..0-..8
....-..8
(88)
Donde ..0 y ..8 son, la rotación inicial y final respectivamente, y .... es la rotación
en el tiempo dado. Algunos experimentos muestran que la constante de velocidad
no es independiente de la concentración de sacarosa, ésta incrementa levemente
cuando la concentración aumenta.
.. ......(..)
....
=
..
....2 (89)
Temperatura (°C)
Constante de velocidad .. a
pH=2
Tiempo para el 99,99 % de inversión
(horas)
20
0.000 018 99
3511
40
0.000 318 6
209
60
0.003 806
17.5
80
0.033 03
2.02
90
0.089 82
0.74
5.2. HOMOLOGACIÓN
El objetivo primordial de esta etapa preliminar es establecer las diferencias
existentes entre los métodos aprobados y/o validados aportados por asociaciones,
normas estándar o manuales de calidad, y los existentes en la normativa
POSTOBÓN S.A.
Este análisis comparativo se realizó para los métodos analíticos de mayor uso,
que se pueden clasificar en cuatro tipos de análisis:
- Food Chemicals Codex 5th Edition [36]: métodos usados para el análisis de
pureza o trazas en materias primas. Contiene métodos muy similares a los
encontrados en la USP.
Propiedad
Valor
Capacidad
1 galón
Output
100 watts
Dimensión tanque
9 x 5 x 6 (in)
Dimensión equipo
10.5 x 6 x 11 (in)
Para su uso se llena con 3.2 litro de agua destilada, o lo necesario según lo
requerido con un mínimo de 5 cm de nivel de agua.
Baño maría
Baño de maría Memmert AUM-500PD con control de temperatura en un rango de
25 a 100 °C.
Estación de desgasificación
Todos los puestos de desgasificación deben ser usados. Para desgasificar menos
de 10 muestras, completar los puestos con recipientes llenos de agua.
Presión: 7.5 psi
Flujo de aire: 5.5 LPM O2
Volumen de muestra: 250 mL
Balanza analítica
Marca: Mettler-Toledo
Modelo: AB204
Clase de exactitud: clase 1
Precisión: 0.002 g
Rango: 0 120 g
Balanza
Marca: Mettler-Toledo
Modelo: PM4800
Clase de exactitud: clase 2
Precisión: 0.2 g
Rango: 0 4000 g
5.3.1.3. Reactivos
Lectura en refractómetro:
Lectura en el densímetro
- Realizar una verificación de la calibración, aceptar para una diferencia 0.00005
g/cm3 respecto al valor teórico y usando agua destilada, si no es aceptable
calibrar.
- Servir la muestra en un vial, previamente purgado con la muestra y proceder a
su lectura.
El método para determinación de grados Brix por lo tanto es del tipo normalizado
con modificaciones y entra en la categoría I ya que cuantifica un componente
mayoritario: sólidos disueltos (sacarosa).
- Robustez
- Selectividad/especifidad
- Linealidad
- Intervalo de trabajo (rango)
- Sensibilidad
- Precisión:
- Repetibilidad
- Precisión intermedia
- Exactitud
- Incertidumbre
Como se puede observar, los límites de cuantificación y detección no se evalúan,
porque el compuesto a medir es el componente mayoritario en las soluciones y por
tanto no se espera que esté a bajas concentraciones.
El estudio comparativo o interlaboratorio, también necesario para el cálculo de la
reproducibilidad, se realizará en posteriores estudios ya que su ejecución excede
el alcance del presente proyecto.
Criterios de aceptación
- Precisión
o Repetibilidad: esta debe ser menor a 0.02 °B en todas las
concentraciones, este criterio fue estimado a partir de la experiencia en el
laboratorio, ya que el fabricante no reporta esta variable en la
especificación técnica del equipo.
o Precisión intermedia: se establece un máximo de 0.03 °B para la
precisión intermedia o reproducibilidad, este criterio se basa en la mayor
precisión reportada para los instrumentos. Además se debe verificar que
la precisión intermedia es menor a dos veces la repetibilidad de método
en términos del coeficiente de variación.
- Exactitud: en el Laboratorio Central se acepta un sesgo de 0.03 °B o menor.
5.3.5.1. Muestras
Como se indicó anteriormente el rango real de trabajo está determinado por las
muestras típicas que se analizan de forma rutinaria en los laboratorios, que
generalmente son de tipo jarabe, 40 a 60 °B, o producto terminado, 8 a 14 °B.
Como los jarabes no poseen ningún otro componente se asumirán como
estándares.
Producto
Presentación
Codificación
Fecha de producción
Pepsi
500 ml
25JUN09 07:43
LB0001107584
05 FEB 09
Colombiana Nacional
500 ml
25JUN09 05:07
LB0001107392
05 FEB 09
Manzana Interior
500 ml
25SEP09 00:59
LB0001145113
08 MAY 09
Muestra control
Dentro del proceso de validación se hace uso de dos tipos de muestras control:
aquellas usadas en todo el proceso de validación o muestra control general y
aquellas usadas en el ensayo de robustez o muestra control de robustez, ambas
tienen objetivos distintos.
5.3.5.2. Estándares
Refractómetro:
- AG12.50 ....
20=1.35186, °..=12.5 (ver anexo B1)
- OIL BSLP23 ....
20=1.46990 (ver anexo B4)
- Solución sacarosa 25.00 °B, ....
20=1.37233
- Solución sacarosa 60.00 °B, ....
20=1.44193
Densímetro:
- Agua ultra pura, Serial No. 1022 Certificado 18691 SH Calibration Service
GmbH. 0.99820 ± 0.000011 g/cm3 (95 %) a 20 °C (certificado en el anexo B6 y
B7)
0102030405060708015202530354007/05/0917/05/0927/05/0906/06/0916/06/0926/06/0906/07/0916/07/
Temperatura (°C)
Tiempo (Fecha)
TemperaturaHR
5.3.6. Condiciones ambientales y tiempo de experimentación
Parámetro
Intervalo (95 % de confianza)
Temperatura (°C)
22.41 ± 1.65
HR (%)
56.74 ± 12.49
5.3.7. Metodología
5.3.7.1. Robustez
Equipo
Tipo
Etapa
Variable
Densímetro
Bebida
Inversión
- Cantidad de HCl adicionado
- Volumen de muestra
- Tiempo de inversión
- Temperatura de Inversión
Lectura en
equipo
- Estabilidad de la muestra
- Homogenización previa a la lectura
Refractómetro
Bebida
Inversión
- Cantidad de HCl adicionado
- Volumen de muestra
- Tiempo de inversión
- Temperatura de Inversión
Lectura en
equipo
- Estabilidad de la muestra
- Tiempo de retardo en lectura
- Temperatura
- Homogeneización previa a la lectura
Jarabe
Desgasificación
- Tiempo de ultrasonido
Lectura en
equipo
- Estabilidad de la muestra
- Tiempo de retardo en la lectura
- Temperatura
- Homogeneización previa a la lectura
Resumen de factores
Niveles de influencia
Los niveles de influencia, ver tabla 26, especifican los valores en los cuales puede
variar un factor determinado.
Tabla 26. Niveles de influencia para los distintos factores
Factor
Nivel de influencia
Total
Niveles
1
2
3
4
5
6
7
Estabilidad (días)
0
1
3
6
4
Tiempo de ultrasonido (min)
0
2
4
8
4
Cantidad de HCl adicionado (gotas)
0
1
2
4
8
5
Volumen de muestra a invertir (ml)
20
25
30
3
Tiempo de inversión (min)
15
30
40
50
60
70
6
Temperatura de inversión (°C)
50
90
95
100
4
Agitación de la muestra
Si
No
2
Tiempo de retardo en lectura (s)
0
12
24
36
48
60
72
7
Temperatura de lectura (°C)
10
22
30
3
Niveles de concentración
Factor
Muestra
Estándar
Pepsi
Colombiana
Manzana
8 °B
14 °B
40 °B
60 °B
Estabilidad
X
X
X
X
Tiempo de ultrasonido
X
X
Cantidad de HCl adicionado
X
X
X
X
X
X
Tiempo de inversión
X
X
Temperatura de inversión
X
X
Agitación de la muestra
X
X
X
X
En éstas pruebas se evaluarán dos o más niveles en cada factor y cada uno a
distintas concentraciones, por consiguiente el número de variables asciende a una
cantidad considerable; en este caso un diseño factorial resultaría difícil de llevar a
cabo, se elige, entonces, un diseño univariable donde cada factor es estudiado por
separado asumiendo interacciones nulas entre estos. Se realizarán 10 réplicas por
cada ensayo permitiendo el cálculo de un promedio más exacto y con unos grados
de libertad mayores.
Componentes
Estado
Variable
Rango (g/ 100 g)
Azúcar
Sólido
....
8
14
Ácido débil
Sólido
....
0
0.4
Ácido fuerte (Sol. 85 %)
Líquido
....
0
0.05
Benzoato de Potasio
Sólido
....
0
0.043
Emulsión Naranja
Emulsión
....
0
0.12
Enturbiante
Emulsión
....
0
0.42
A cada componente se le asigna una variable .... que corresponde a la
concentración dada en gramos presentes en cada 100 gramos de muestra.
Diseño de experimentos
Solución
....
....
....
....
....
....
g Agua
g totales
1
14.0000
0.0000
0.0500
0.0000
0.0000
0.0000
85.9500
100
2
14.0000
0.4000
0.0500
0.0000
0.1200
0.4200
85.0100
100
3
8.0000
0.0000
0.0000
0.0430
0.1200
0.0000
91.8370
100
4
14.0000
0.0000
0.0500
0.0430
0.0000
0.4200
85.4870
100
5
8.0000
0.0000
0.0500
0.0430
0.1200
0.0000
91.7870
100
6
14.0000
0.4000
0.0000
0.0430
0.0000
0.4200
85.1370
100
7
14.0000
0.4000
0.0000
0.0430
0.1200
0.0000
85.4370
100
8
14.0000
0.0000
0.0000
0.0000
0.1200
0.4200
85.4600
100
9
8.0000
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
0.4200
91.5800
100
10
8.0000
0.4000
0.0500
0.0000
0.1200
0.0000
91.4300
100
11
8.0000
0.4000
0.0000
0.0000
0.0000
0.4200
91.1800
100
12
8.0000
0.4000
0.0500
0.0430
0.0000
0.0000
91.5070
100
Total
132
2.400
0.300
0.258
0.720
2.520
5.3.7.3. Linealidad
Densímetro:
- Rango invertido: 7 - 15 °B (10 concentraciones)
- Rango directo: 7 - 15 °B (10 concentraciones)
Refractómetro:
- Rango invertido: 7 - 15 °B (10 concentraciones)
- Rango bajo directo: 7 - 15 °B (10 concentraciones)
- Rango alto directo: 7 - 65 °B (18 concentraciones)
Las soluciones preparadas se detallan en la tabla 30.
Densímetro
Refractómetro
Invertido
Directo
Invertido
Directo Bajo
Directo Alto
7.37
7.00
7.37
7.00
7.00
8.42
8.00
8.42
8.00
8.00
9.47
9.00
9.47
9.00
9.00
10.53
10.00
10.53
10.00
10.00
11.58
11.00
11.58
11.00
11.00
12.10
11.50
12.10
11.50
11.50
12.63
12.00
12.63
12.00
12.00
13.68
13.00
13.68
13.00
13.00
14.74
14.00
14.74
14.00
14.00
15.79
15.00
15.79
15.00
15.00
30.00
35.00
40.00
45.00
50.00
55.00
60.00
5.3.7.4. Rango
El rango propiamente lo dan las especificaciones de los productos, sin embargo se
debe emitir un juicio que corrobore la exactitud y/o precisión en la lectura para
estos intervalos de concentración, se usan los mismos datos aportados en el
análisis de linealidad.
5.3.7.5. Sensibilidad
5.3.7.6. Precisión
Se harán mediciones a 10 alícuotas de una misma solución que han pasado todos
los pasos del método por separado y a tres niveles de concentración: 8, 11 y 14
°B. Es de anotar que los datos para 8 y 14 °B se extrajeron de las lecturas para el
análisis de robustez, experimentos que se realizaron bajo las mismas condiciones.
Precisión intermedia
Densímetro
Refractómetro
Día 1
Día 2
Día 3
Día 1
Día 2
Día 3
Total analista
Analista X
3
3
3
3
3
3
18
Analista Y
3
3
3
3
3
3
18
Total por
instrumento
18
18
5.3.7.7. Exactitud
Este parámetro se evalúa con respecto a dos valores de referencia: estándares y
patrones.
Densímetro
Tabla 32. Descripción del patrón usado en el cálculo de exactitud para el densímetro.
Patrón
T (°C)
Densidad teórica
(g/cm3)
Agua pura
20
0.99820 ± 0.000011
- Calibración con patrón de referencia
Se calibra bajo la misma metodología, sólo que en lugar de usar el agua destilada
se usa el patrón de referencia, y se analizan estándares distintos preparados en el
laboratorio según la tabla 33. Este procedimiento nos permite evaluar el sesgo en
densidad y grados Brix.
Estándar
Valor teórico (°B)
Agua destilada
0.000
8 °B
8.000
11 °B
11.000
14 °B
14.000
Refractómetro
Tabla 34. Descripción de estándares usados para la calibración del refractómetro a distinto
rangos.
Rango
Zero (Agua destilada)
Span
Bajo
0.00 °B
12.00 °B
Alto
0.00 °B
60.00 °B
Rango
Patrones
Valor teórico
(20 °C)
Bajo
AG12.50 ....
20=1.35186, °..=12,5
12.50 °B
Solución sacarosa 25.00 °B, ....
20=1.37233
25.00 °B
Alto
Solución sacarosa 25.00 °B, ....
20=1.37233
25.00 °B
Solución sacarosa 60.00 °B, ....
20=1.44193
60.00 °B
OIL BSLP23 ....
20=1.46990
71.81 °B
5.3.7.8. Incertidumbre
En el refractómetro (rango bajo) las muestras control de robustez usadas son las
correspondientes a las pruebas de:
- Estabilidad
- Tiempo ultrasonido
- Temperatura de lectura
5.3.8.1. Robustez
Estabilidad de la muestra
Estándar
40 °B
60 °B
Día
0
1
3
6
0
1
3
6
Promedio
40.012
40.070
40.230
40.486
59.979
60.062
60.231
60.498
Desv. estándar
0.008
0.008
0.007
0.008
0.009
0.018
0.009
0.012
Teórico
39.998
39.998
39.998
39.998
59.999
59.999
59.999
59.999
n
10
10
10
10
10
10
10
10
Ex
0.0000
0.0580
0.2180
0.4740
0.0000
0.0830
0.2520
0.5190
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
4.3231
16.2488
35.3299
6.1865
18.7830
38.6840
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto
significativo?
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Muestra
Pepsi
Colombiana
Día
0
1
3
6
0
1
3
7
Promedio
11.204
11.236
11.325
11.426
10.518
10.556
10.619
10.725
Desv. estándar
0.007
0.019
0.011
0.010
0.010
0.007
0.006
0.007
n
10
10
10
10
10
10
10
10
Ex
0.0000
0.0320
0.1210
0.2220
0.0000
0.0380
0.1010
0.2070
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
2.3851
9.0188
16.5469
2.8324
7.5281
15.4289
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto
significativo?
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Tabla 37. Resultados prueba de estabilidad para densímetro
Muestra
Pepsi
Colombiana
Día
0
1
3
6
0
1
3
7
Promedio
11.225
11.265
11.336
11.428
10.504
10.549
10.623
10.732
Desv. estándar
0.010
0.005
0.009
0.010
0.011
0.007
0.004
0.011
n
10
9
10
10
10
10
10
10
Ex
0.0000
0.0402
0.1108
0.2026
0.0000
0.0444
0.1185
0.2279
SE (s=0.03)
0.0134
0.0138
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
2.9196
8.2585
15.1009
3.3094
8.8325
16.9867
t (crítico)
2.1098
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto
significativo?
Si
Si
Si
Si
Si
Si
En las figuras 20, 21 y 22 se presentan las medidas de Brix contra el tiempo para
ambos equipos:
Figura 20. Grados Brix en jarabes respecto al tiempo para estudio de estabilidad en refract
Figura 21. Grados Brix en bebidas respecto al tiempo para estudio de estabilidad en refract
Figura 22. Grados Brix en bebidas respecto al tiempo para estudio de estabilidad en densime
Día
% Agua perdida
0.00
0
1.00
0.3637
3.00
1.0937
6.00
2.1350
Figura 23. Promedio de todos los ensayos de estabilidad en porcentaje de agua perdida respe
al tiempo
Tiempo de ultrasonido
Estándar
40 °B
60 °B
Tiempo (min)
0
2
4
8
0
2
4
8
Promedio
40.023
40.020
40.026
40.027
59.998
59.980
59.980
59.973
Desv. estándar
0.008
0.012
0.010
0.008
0.013
0.015
0.017
0.008
n
10
10
10
10
10
10
10
10
Teórico
39.994
39.994
39.994
39.994
59.993
59.993
59.993
59.993
Ex
0.000
-0.003
0.003
0.004
0.0000
-0.0180
-0.0180
-0.0250
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
0.2236
0.2236
0.2981
1.3416
1.3416
1.8634
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto
significativo?
No
No
No
No
No
No
Estándar
8 °B
14 °B
Gotas HCl
0
1
2
4
8
0
1
2
4
8
Promedio (°B)
8.002
8.424
8.434
8.462
8.493
13.974
14.702
14.700
14.696
14.682
Desv. estándar
0.004
0.007
0.005
0.008
0.009
0.012
0.004
0.005
0.008
0.008
Teórico (inv)
8.421
8.421
8.421
8.421
8.421
14.736
14.736
14.736
14.736
14.736
pH
6.78
2.36
2.11
1.92
1.59
6.78
2.36
2.11
1.92
1.59
n
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Ex
-0.432
-0.010
0.0000
0.0280
0.0590
-0.726
0.0020
0.0000
-0.004
-0.018
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
32.199
0.7454
2.0870
4.3976
54.112
0.1491
0.2981
1.3416
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto
significativo?
Si
No
No
Si
Si
No
No
No
Muestra
Pepsi
Manzana
Gotas HCl
0
1
2
4
8
0
1
2
4
8
Promedio
11.228
11.228
11.231
11.234
11.244
10.840
10.907
10.914
10.916
10.929
Desv. estándar
0.006
0.009
0.010
0.007
0.007
0.009
0.005
0.011
0.005
0.006
pH
2.43
2.08
1.92
1.68
1.38
3.00
2.51
2.21
1.85
1.58
n
10
10
10
10
10
10
10
10
10
9
Ex
-0.003
-0.003
0.0000
0.0030
0.0130
-0.074
-0.007
0.0000
0.0020
0.0149
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0138
t
0.2236
0.2236
0.2236
0.9690
5.5156
0.5217
0.1491
1.0802
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1098
¿Efecto
significativo?
No
No
No
No
Si
No
No
No
Tabla 41. Resultados prueba de cantidad de HCl para densímetro
Estándar
8 °B
14 °B
Gotas HCl
0
1
2
4
8
0
1
2
4
8
Promedio
7.999
8.418
8.424
8.432
8.441
14.010
14.701
14.688
14.674
14.632
Desv. estándar
0.003
0.009
0.004
0.004
0.006
0.012
0.007
0.008
0.005
0.011
Teórico (inv)
8.421
8.421
8.421
8.421
8.421
14.736
14.736
14.736
14.736
14.736
pH
6.78
2.36
2.11
1.92
1.59
6.78
2.36
2.11
1.92
1.59
n
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Ex
-0.425
-0.006
0.0000
0.0080
0.0169
-0.678
0.0136
0.0000
-0.013
-0.056
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
31.655
0.4398
0.5963
1.2597
50.490
1.0137
0.9988
4.1814
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto
significativo?
Si
No
No
No
Si
No
No
Si
Muestra
Pepsi
Manzana
Gotas HCl
0
1
2
4
8
0
1
2
4
8
Promedio
11.246
11.240
11.232
11.229
11.218
10.804
10.889
10.894
10.876
10.872
Desv. estándar
0.007
0.005
0.008
0.009
0.006
0.008
0.006
0.011
0.006
0.005
pH
2.43
2.08
1.92
1.68
1.38
3.00
2.51
2.21
1.85
1.58
n
10
10
10
10
10
10
10
10
10
9
Ex
0.0135
0.0073
0.0000
-0.003
-0.014
-0.089
-0.005
0.0000
-0.018
-0.022
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0138
t
1.0062
0.5441
0.2385
1.0659
6.6784
0.3578
1.3118
1.6065
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1098
¿Efecto
significativo?
No
No
No
No
Si
No
No
No
Para el caso de bebidas (Pepsi y Manzana) se sabe que Pepsi tiene entre sus
componentes un ácido fuerte que disminuye lo suficiente el pH como para no
necesitar adición de ácido, teoría que se confirma en los dos instrumentos. En la
producción de Manzana se usa un ácido débil, este baja el pH significativamente
pero no lo suficiente como para invertir la muestra totalmente en 50 minutos de
calentamiento, se comprobó entonces que se requiere al menos una gota de ácido
para este propósito.
Tabla 42. Resultados del ensayo de volumen de muestra a invertir para refractómetro
Concentración
8 °B
14 °B
Volumen (ml)
20
25
30
20
25
30
Promedio
8.448
8.448
8.440
14.70
14.71
14.70
Desv. estándar
0.006
0.008
0.007
0.012
0.008
0.011
Teórico
8.421
8.421
8.421
14.736
14.736
14.736
n
10
10
10
9
10
10
Ex
0.0000
0.0000
-0.0080
-0.0016
0.0000
-0.0040
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0138
0.0134
0.0134
t
0.0000
0.5963
0.1129
0.2981
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1199
2.1098
¿Efecto
significativo?
No
No
No
No
Tabla 43. Resultados del ensayo de volumen de muestra a invertir para densímetro
Concentración
8 °B
14 °B
Volumen (ml)
20
25
30
20
25
30
Promedio
8.414
8.421
8.413
14.681
14.679
14.697
Desv. estándar
0.009
0.007
0.005
0.009
0.013
0.004
Teórico
8.421
8.421
8.421
14.736
14.736
14.736
n
10
10
10
9
10
10
Ex
-0.0067
0.0000
-0.0076
0.0015
0.0000
0.0173
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0138
0.0134
0.0134
t
0.4994
0.5665
0.1072
1.2895
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1199
2.1098
¿Efecto
significativo?
No
No
No
No
Tiempo de inversión
0.3727
0.6708
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto significativo?
Si
No
No
No
No
Concentración
14 °B
Tiempo (min)
15
30
40
50
60
70
Promedio
14.670
14.694
14.696
14.695
14.692
14.696
Desv. estándar
0.011
0.005
0.007
0.010
0.004
0.013
Teórico (inv)
14.736
14.736
14.736
14.736
14.736
14.736
n
10
10
10
10
10
10
Ex
-0.025
-0.001
0.0010
0.0000
-0.003
0.0010
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
1.8634
0.0745
0.0745
0.2236
0.0745
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto significativo?
No
No
No
No
No
Concentración
8 °B
Tiempo (min)
15
30
40
50
60
70
Promedio
8.400
8.410
8.412
8.413
8.412
8.403
Desv. estándar
0.009
0.008
0.006
0.007
0.004
0.008
Teórico (inv)
8.421
8.421
8.421
8.421
8.421
8.421
n
10
10
10
10
10
10
Ex
-0.0130
-0.0030
-0.0010
0.0000
-0.0003
-0.0101
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
0.9690
0.2236
0.0745
0.0224
0.7528
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto significativo?
No
No
No
No
No
Concentración
14 °B
Tiempo (min)
15
30
40
50
70
Promedio
14.655
14.687
14.683
14.681
14.684
Desv. estándar
0.011
0.005
0.008
0.011
0.014
Teórico (inv)
14.736
14.736
14.736
14.736
14.736
n
10
10
10
10
10
Ex
-0.0260
0.0057
0.0019
0.0000
0.0025
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
1.9379
0.4249
0.1416
0.1863
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto significativo?
No
No
No
No
Temperatura de inversión
Concentración
8 °B
14 °B
Temperatura (°C)
50
90
95
100
50
90
95
100
Promedio
8.136
8.422
8.433
8.444
14.204
14.691
14.695
14.703
Desv. estándar
0.005
0.006
0.005
0.005
0.018
0.003
0.005
0.0067
Teórico (inv)
8.421
8.421
8.421
8.421
14.736
14.736
14.736
14.736
n
10
10
10
10
10
10
10
10
Ex
-0.3080
-0.0220
-0.0110
0.0000
-0.4990
-0.0120
-0.0080
0.0000
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
22.9570
1.6398
0.8199
37.1933
0.8944
0.5963
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto
significativo?
Si
No
No
Si
No
No
Concentración
8 °B
14 °B
Temperatura (°C)
50
90
95
100
50
90
95
100
Promedio
8.068
8.413
8.407
8.409
14.100
14.682
14.680
14.678
Desv. estándar
0.005
0.005
0.003
0.006
0.011
0.009
0.006
0.011
Teórico (inv)
8.421
8.421
8.421
8.421
14.736
14.736
14.736
14.736
n
10
10
10
10
10
10
10
10
Ex
-0.3412
0.0041
-0.0018
0.0000
-0.5780
0.0032
0.0015
0.0000
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
25.4315
0.3056
0.1342
43.0816
0.2385
0.1118
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto
significativo?
Si
No
No
Si
No
No
Como se esperaba, solo el nivel más bajo de temperatura (50 °C) fue insuficiente
para lograr una inversión completa en 50 minutos. Una temperatura de 90 °C
resulta ser apta para tener una desviación no significativa respecto a los ensayos
realizados a 100 °C.
Instrumento
Refractómetro
Densímetro
Muestra
Pepsi
Colombiana
Pepsi
Colombiana
¿Agitación?
Si
No
Si
No
Si
No
Si
No
Promedio
11.204
11.159
10.518
10.488
11.225
11.229
10.504
10.511
Desv. estándar
0.007
0.011
0.010
0.024
0.010
0.011
0.011
0.009
n
10
10
10
10
10
10
10
10
Ex
-0.0450
-0.0300
0.0037
0.0064
SE (s=0.03)
0.0134
0.0134
0.0134
0.0134
t
3.3541
2.2361
0.2758
0.4770
t (crítico)
2.1009
2.1009
2.1009
2.1009
¿Efecto
significativo?
Si
Si
No
No
Muestra
Colombiana
Pepsi
Tiempo (s)
10 °C
22.5 °C
30 °C
10 °C
22.5 °C
30 °C
0
10.57
10.51
10.47
11.30
11.22
11.17
12
10.54
10.51
10.48
11.27
11.23
11.18
24
10.52
10.51
10.49
11.24
11.23
11.19
36
10.52
10.51
10.49
11.23
11.22
11.19
48
10.51
10.51
10.49
11.22
11.22
11.19
60
10.51
10.51
10.49
11.22
11.22
11.20
72
10.50
10.51
10.50
11.22
11.22
11.20
Estándar
40 °B
60 °B
Tiempo (s)
10 °C
24 °C
30 °C
10 °C
24 °C
30 °C
0
40.05
40.00
39.99
60.02
59.96
59.92
12
40.03
40.00
40.00
59.99
59.96
59.93
24
40.02
40.00
40.00
59.98
59.96
59.94
36
40.01
40.00
40.01
59.97
59.96
59.95
48
40.00
40.00
40.01
59.96
59.96
59.95
60
40.00
40.00
40.01
59.96
59.96
59.95
72
40.00
40.00
40.01
59.96
59.96
59.95
Figura 26. Grados Brix de muestras a varias temperaturas respecto al tiempo de lectura en b
gaseosa.
Figura 27. Grados Brix de muestras a varias temperaturas respecto al tiempo de lectura en j
Muestra
Colombiana
Pepsi
Temperatura (°C)
10 ± 1
23 ± 2
30 ± 1
10 ± 1
23 ± 1
30 ± 1
Temp. Promedio Muestra (°C)
10.7
22.5
29.8
10.3
22.5
30.0
Temp. Promedio Equipo (°C)
23.8
23.9
24.0
23.9
23.8
24.1
Tiempo de retardo (s)
50
3
50
50
3
50
Promedio Lectura (°B)
10.523
10.517
10.499
11.224
11.217
11.204
Desv. estándar (°B)
0.005
0.007
0.008
0.014
0.012
0.008
n
9
9
9
10
10
10
Ex
0.007
-0.018
0.007
-0.013
SE (s=0.03)
0.014
0.014
0.013
0.013
t
0.471
1.257
0.522
0.969
t (crítico)
2.120
2.120
2.101
2.101
¿Efecto significativo?
No
No
No
No
Muestra
40 °B
60 °B
Temperatura (°C)
10 ± 1
23 ± 2
30 ± 1
10 ± 1
23 ± 1
30 ± 1
Temp. Promedio Muestra (°C)
10.0
24.5
30.0
9.8
24.5
30.2
Temp. Promedio Equipo (°C)
24.71
24.68
25.08
24.79
24.79
24.89
Tiempo de retardo (s)
50
3
50
50
3
50
Promedio Lectura (°B)
40.019
40.008
40.040
59.978
59.985
59.992
Desv. estándar (°B)
0.009
0.004
0.016
0.015
0.014
0.029
Teórico (°B)
40.00
40.00
40.00
60.00
60.00
60.00
n
10
10
4
10
10
10
Ex
0.011
0.032
-0.007
0.007
SE (s=0.03)
0.013
0.018
0.013
0.013
t
0.820
1.803
0.522
0.522
t (crítico)
2.101
2.179
2.101
2.101
¿Efecto significativo?
No
No
No
No
Bajo las condiciones dadas se establece que la temperatura inicial de la muestra
no afecta significativamente los resultados.
5.3.8.2. Especifidad
Tabla 51. Concentraciones reales de las soluciones placebo preparadas para la especifidad
Solución
....
....
....
....
....
....
g agua
g totales
1
13.9972
0.0000
0.0520
0.0000
0.0000
0.0000
85.9508
100.0000
2
13.9971
0.4006
0.0677
0.0000
0.1228
0.4254
84.9865
100.0000
3
8.0005
0.0000
0.0000
0.0458
0.1368
0.0000
91.8169
100.0000
4
13.9965
0.0000
0.0660
0.0458
0.0000
0.4235
85.4682
100.0000
5
8.0002
0.0000
0.0497
0.0447
0.1889
0.0000
91.7165
100.0000
6
13.9999
0.4004
0.0000
0.0433
0.0000
0.4205
85.1360
100.0000
7
14.0003
0.4019
0.0000
0.0435
0.1216
0.0000
85.4327
100.0000
8
13.9962
0.0000
0.0000
0.0000
0.1480
0.4319
85.4239
100.0000
9
8.0001
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
0.4255
91.5744
100.0000
10
8.0000
0.4026
0.0574
0.0000
0.1295
0.0000
91.4105
100.0000
11
8.0001
0.3996
0.0000
0.0000
0.0000
0.4500
91.1503
100.0000
12
7.9988
0.4009
0.0847
0.0434
0.0000
0.0000
91.4722
100.0000
Las respuestas como °B de cada una de las soluciones son las siguientes:
Tabla 53. Sensibilidades parciales para los componentes presentes en las soluciones placebo
Equipo
......
......
......
......
......
......
....
....
Refractómetro
Directo
0.9963
0.9323
0.8214
1.0480
0.3232
0.3684
0.0551
1.000
Invertido
1.0551
0.7772
0.6970
-0.1425
-0.3075
0.1882
0.1270
1.000
Densímetro
Directo
1.0011
1.0863
1.4028
0.7212
0.1278
0.3836
-0.0033
1.000
Invertido
1.0462
1.0408
1.1905
0.7259
-0.0279
0.3614
0.0798
1.000
Instrumento
Refractómetro
Densímetro
Solución
........(........)
........(........)
........(........)
........(........)
1
0.9969
0.9976
0.9948
0.9958
2
0.9571
0.9688
0.9518
0.9572
3
0.9886
0.9943
0.9937
0.9956
4
0.9818
0.9911
0.9799
0.9822
5
0.9817
0.9884
0.9845
0.9886
6
0.9605
0.9739
0.9571
0.9606
7
0.9681
0.9765
0.9667
0.9700
8
0.9854
0.9915
0.9870
0.9892
9
0.9807
0.9906
0.9800
0.9820
10
0.9449
0.9555
0.9374
0.9446
11
0.9367
0.9553
0.9296
0.9353
12
0.9422
0.9573
0.9318
0.9384
Como se puede corroborar en la tabla 54, las especifidades calculadas para todas
las soluciones fueron mayores a 0.90. Se verifica entonces la adecuada
especifidad del método en la matriz de bebida gaseosa. Como conclusión
adicional, esta prueba confirma la hipótesis del factor de inversión; se puede
apreciar que para las soluciones invertidas la sensibilidad parcial de la sacarosa
es de 1.0551 y 1.0462, para el refractómetro y densímetro respectivamente,
valores muy cercanos al factor de inversión teórico 1.0526.
5.3.8.3. Linealidad
Las respuestas entregadas por ambos equipos este estudio se reportan en las
tablas 55, 56, 57, 58 y 59.
Resultados para lectura en densímetro
- Brix invertido
°B
Teórico
°B Inv.
Teórico
Lectura densidad (g/cm3)
Promedio
(g/cm3)
Lectura °B Inv.
Promedio
(°B inv.)
1
2
3
1
2
3
7.000
7.369
1.02734
1.02734
1.02737
1.02735
7.367
7.367
7.373
7.369
8.000
8.421
1.03163
1.03163
1.03161
1.03162
8.421
8.422
8.417
8.420
9.001
9.474
1.03592
1.03592
1.03591
1.03592
9.468
9.469
9.466
9.468
10.000
10.526
1.04020
1.04023
1.04024
1.04022
10.504
10.512
10.514
10.510
11.000
11.579
1.04459
1.04457
1.04458
1.04458
11.559
11.554
11.556
11.556
11.499
12.104
1.04678
1.04678
1.04676
1.04677
12.069
12.082
12.078
12.076
12.000
12.631
1.04896
1.04898
1.04893
1.04896
12.601
12.607
12.594
12.601
13.000
13.684
1.05339
1.05330
1.05335
1.05335
13.651
13.628
13.642
13.640
14.000
14.737
1.05782
1.05780
1.05776
1.05779
14.691
14.687
14.678
14.685
14.999
15.788
1.06225
1.06225
1.06229
1.06226
15.725
15.725
15.733
15.728
- Brix directo
°B
Teórico
Lectura densidad (g/cm3)
Promedio
Lectura °B directo
Promedio
1
2
3
1
2
3
7.000
1.02583
1.02585
1.02585
1.02584
6.996
6.999
6.999
6.998
8.000
1.02991
1.02991
1.02993
1.02992
8.000
8.001
8.004
8.002
9.000
1.03401
1.03401
1.03401
1.03401
9.004
9.002
9.004
9.003
10.000
1.03813
1.03813
1.03813
1.03813
10.002
10.003
10.004
10.003
11.000
1.04228
1.04228
1.04228
1.04228
11.004
11.005
11.006
11.005
11.500
1.04436
1.04437
1.04437
1.04437
11.505
11.505
11.504
11.505
12.000
1.04639
1.04647
1.04641
1.04642
11.989
12.010
11.993
11.997
13.000
1.05062
1.05070
1.05066
1.05066
12.994
13.014
13.004
13.004
13.997
1.05480
1.05485
1.05487
1.05484
13.983
13.994
14.000
13.992
15.000
1.05917
1.05915
1.05916
1.05916
15.008
15.003
15.004
15.005
Resultados para lectura en refractómetro
- Brix invertido
°B
Teórico
°B Inv.
Teórico
Lectura índice de
refracción
Promedio
(IR)
Lectura °B Inv.
Promedio
(°B inv.)
1
2
3
1
2
3
7.000
7.369
1.34372
1.34372
1.34372
1.34372
7.37
7.37
7.37
7.37
8.000
8.421
1.34531
1.34531
1.34531
1.34531
8.43
8.43
8.43
8.43
9.001
9.474
1.34692
1.34692
1.34693
1.34692
9.50
9.50
9.51
9.50
10.000
10.526
1.34849
1.34849
1.34849
1.34849
10.53
10.53
10.53
10.53
11.000
11.579
1.35010
1.35010
1.35009
1.35010
11.57
11.58
11.57
11.57
11.499
12.104
1.35090
1.35090
1.35091
1.35090
12.11
12.09
12.10
12.10
12.000
12.631
1.35172
1.35171
1.35171
1.35171
12.62
12.61
12.62
12.62
13.000
13.684
1.35332
1.35332
1.35332
1.35332
13.65
13.65
13.65
13.65
14.000
14.737
1.35498
1.35497
1.35496
1.35497
14.71
14.69
14.69
14.70
14.999
15.788
1.35664
1.35664
1.35664
1.35664
15.76
15.76
15.76
15.76
Tabla 58. Resultados para linealidad por refractometría en Brix directo rango bajo
°B
Teórico
Lectura índice de refracción
Promedio
(IR)
Lectura °B directo
Promedio
(°B)
1
2
3
1
2
3
7.000
1.34325
1.34326
1.34325
1.34325
7.00
7.01
7.00
7.00
8.000
1.34477
1.34476
1.34477
1.34477
8.00
8.00
8.00
8.00
9.000
1.34630
1.34630
1.34633
1.34631
9.01
9.01
9.02
9.01
10.000
1.34785
1.34786
1.34786
1.34786
10.02
10.03
10.02
10.02
11.000
1.34936
1.34936
1.34936
1.34936
11.00
11.00
11.00
11.00
11.500
1.35014
1.35014
1.35014
1.35014
11.50
11.50
11.50
11.50
12.000
1.35093
1.35093
1.35092
1.35093
12.00
12.01
12.00
12.00
13.000
1.35247
1.35250
1.35248
1.35248
12.99
13.01
12.99
13.00
13.997
1.35401
1.35401
1.35402
1.35401
13.96
13.96
13.96
13.96
15.000
1.35566
1.35566
1.35567
1.35566
14.99
14.99
15.00
14.99
- Brix directo (rango alto)
Tabla 59. Resultados para linealidad por refractometría en Brix directo rango alto
°B
Teórico
Lectura índice de refracción
Promedio
(IR)
Lectura °B directo
Promedio
(°B)
1
2
3
1
2
3
7.000
1.34326
1.34326
1.34327
1.34326
7.01
7.01
7.01
7.01
8.000
1.34477
1.34477
1.34477
1.34477
8.00
8.01
8.01
8.01
9.000
1.34632
1.34633
1.34632
1.34632
9.03
9.03
9.03
9.03
10.000
1.34787
1.34787
1.34787
1.34787
10.03
10.03
10.03
10.03
11.000
1.34936
1.34937
1.34936
1.34936
11.00
11.00
11.00
11.00
11.500
1.35015
1.35016
1.35016
1.35016
11.51
11.51
11.51
11.51
12.000
1.35094
1.35093
1.35094
1.35094
12.01
12.01
12.01
12.01
13.000
1.35249
1.35251
1.35248
1.35249
13.00
13.01
12.99
13.00
13.997
1.35405
1.35403
1.35405
1.35404
13.98
13.97
13.98
13.98
15.000
1.35567
1.35569
1.35568
1.35568
15.00
15.01
15.00
15.00
30.000
1.38109
1.38109
1.38110
1.38109
29.98
29.98
29.98
29.98
34.998
1.39032
1.39032
1.39032
1.39032
35.01
35.01
35.01
35.01
39.998
1.39986
1.39987
1.39987
1.39987
40.01
40.01
40.01
40.01
45.000
1.40974
1.40976
1.40975
1.40975
44.99
45.00
45.00
45.00
50.000
1.42009
1.42008
1.42006
1.42008
50.01
50.01
50.00
50.01
55.000
1.43082
1.43082
1.43082
1.43082
55.02
55.02
55.02
55.02
60.000
1.44187
1.44184
1.44187
1.44186
59.98
60.00
59.99
59.99
64.999
1.45348
1.45346
1.45345
1.45346
65.01
65.00
65.00
65.00
Equipo
Densímetro
Refractómetro
Invertido
Directo
Invertido
Directo
(rango bajo)
Directo
(rango alto)
..(pendiente)
0.00414
0.00416
0.00153
0.00155
0.00186
..(intersecto)
0.99668
0.99659
1.33240
1.33239
1.32843
..
0.99997
0.99997
0.99997
0.99996
0.99866
..2
0.99994
0.99993
0.99993
0.99992
0.99732
....
2
3.967E-11
4.309E-11
5.832E-12
6.970E-12
1.781E-10
....
2
5.631E-09
5.521E-09
8.279E-10
8.930E-10
2.016E-07
La linealidad en ambos instrumentos teóricamente es polinómica, incluso los
polinomios usados para convertir IR o densidad a grados Brix tienen en la
literatura un orden de 4 ó 5. Sin embargo cuando se evalúan rangos estrechos en
este caso 7 y 15 °B, se puede ver claramente una linealidad alta confirmada en las
gráficas y en los coeficientes de correlación (mayores a 0.999). En el caso de
lecturas por refractometría para un rango de 7 a 65 °B no cumple este último
criterio, y por esta razón podemos asumir la no linealidad. La regresión en este
rango más amplio se recalculó usando un polinomio de grado 2, que arrojó los
siguientes parámetros ajustados a una ecuación del tipo:
Directo
(rango alto)
..
7.3600E-06
..
1.3661E-03
..
1.3334
..
1.0000
..2
1.0000
- Brix Invertido
Figura 28. Regresión lineal para densidad respecto a °B invertido
Figura 29. Homoscedasticidad de residuos de densidad respecto a la densidad estimada para B
invertido
- Brix directo
- Brix Invertido
Figura 32. Regresión lineal para índice de refracción respecto a Brix invertido
Figura 34. Regresión lineal para índice de refracción respecto a Brix directo en rango bajo
Figura 35. Homoscedasticidad de residuos de índice de refracción respecto al estimado para
directo en rango bajo
Figura 36. Regresión lineal para índice de refracción respecto a Brix directo en rango alto
Equipo
Densímetro
Refractómetro
Invertido
Directo
Invertido
Directo
(rango bajo)
Directo
(rango alto)
Verificación de supuestos (homogeneidad y normalidad de residuos)
........
0.386
0.344
0.429
0.425
0.191
..(..,..,..)
0.445
0.445
0.445
0.445
0.296
¿Homogénea?
..=0.05
Si
Si
Si
Si
Si
¿Normal?
..=0.05
(Kolmogorov-Smirnov)
Si
Si
Si
Si
Si
ANOVA
..........
3.438E-03
3.127E-03
4.689E-04
4.320E-04
7.251E-02
..........
2.223E-07
2.179E-07
3.268E-08
3.525E-08
1.949E-04
........
2.118E-07
2.079E-07
3.221E-08
3.374E-08
1.949E-04
..........
1.053E-08
1.007E-08
4.667E-10
1.507E-09
3.133E-09
......
3.438E-03
3.127E-03
4.690E-04
4.321E-04
7.271E-02
..........
1
1
1
1
1
..........
28
28
28
28
52
........
8
8
8
8
16
..........
20
20
20
20
36
......
29
29
29
29
53
........
3.438E-03
3.127E-03
4.689E-04
4.320E-04
7.251E-02
........
7.939E-09
7.784E-09
1.167E-09
1.259E-09
3.748E-06
......
2.647E-08
2.598E-08
4.027E-09
4.218E-09
1.218E-05
........
5.267E-10
5.033E-10
2.333E-11
7.537E-11
8.704E-11
..1
432999.89
401693.34
401762.6
343169.509
19348.32496
..1.............
4.196
4.196
4.196
4.196
4.027
¿Pendiente . 0?
Si
Si
Si
Si
Si
..2
50.261
51.624
172.575
55.963
139935.401
..2.............
2.447
2.447
2.447
2.447
1.934
¿Linealidad?
No
No
No
No
No
Significancia de la pendiente e intercepto
Equipo
Densímetro
Refractómetro
Invertido
Directo
Invertido
Directo
(rango bajo)
Directo
(rango alto)
..
0.00414
0.00416
0.00153
0,00155
0,00186
....
2.048
2.048
2.048
2,048
2,048
Intervalo (..)
Mayor
0.004157
0.004174
0,001536
0,001552
0,001883
Menor
0.004132
0.004147
0,001526
0,001541
0,001829
¿...0 ?
Si
Si
Si
Si
Si
..
0.99668
0.99659
1.33240
1,33239
1,32843
....
2.048
2.048
2.048
2,048
2,048
Intervalo (..)
Mayor
0.99683
0.99674
1,33246
1,33245
1,32933
Menor
0.99652
0.99644
1,33235
1,33233
1,32753
¿..=0?
No
No
No
No
No
Concentración/Equipo
Densímetro
Refractómetro
Invertido
Directo
Invertido
Directo
(rango bajo)
7.00
100.00
99.96
100.02
100.04
8.00
99.99
100.02
100.11
100.00
9.00
99.93
100.04
100.31
100.15
10.00
99.85
100.03
100.04
100.23
11.00
99.81
100.04
99.95
100.00
11.50
99.77
100.04
99.97
100.00
12.00
99.76
99.98
99.89
100.03
13.00
99.68
100.03
99.75
99.98
14.00
99.65
99.96
99.73
99.73
15.00
99.62
100.03
99.82
99.95
Concentración/Equipo
Densímetro
Refractómetro
Invertido
Directo
Invertido
Directo
(rango bajo)
7.00
0.000
-0.002
0.001
0.003
8.00
-0.001
0.002
0.009
0.000
9.00
-0.006
0.003
0.029
0.013
10.00
-0.016
0.003
0.004
0.023
11.00
-0.023
0.005
-0.006
0.000
11.50
-0.027
0.004
-0.004
0.000
12.00
-0.030
-0.003
-0.014
0.003
13.00
-0.043
0.004
-0.034
-0.003
14.00
-0.051
-0.005
-0.040
-0.037
15.00
-0.060
0.005
-0.028
-0.007
Los dos equipos tanto en Brix invertido como directo presentan una excelente
recuperación en las concentraciones evaluadas; sin embargo, el sesgo en las
lecturas invertidas son claramente altas. Esto puede tener varias causas: la
muestra no fue totalmente invertida, aunque ya se ha verificado que la inversión si
es total, o la sacarosa pesada tenía trazas de otros componentes, en esto último
afecta principalmente la humedad.
Tabla 66. Recuperación y sesgo (°B) para datos de linealidad por refractometría en rango al
Concentración/Equipo
Refractómetro (Rango alto)
% R
Sesgo (°B)
7.00
100.14
0.010
8.00
100.08
0.007
9.00
100.33
0.030
10.00
100.30
0.030
11.00
100.00
0.000
11.50
100.08
0.010
12.00
100.08
0.010
13.00
100.00
0.000
14.00
99.85
-0.021
15.00
100.02
0.003
30.00
99.93
-0.020
35.00
100.03
0.012
40.00
100.03
0.012
45.00
99.99
-0.003
50.00
100.01
0.006
55.00
100.04
0.020
60.00
99.98
-0.010
65.00
100.01
0.007
Para el caso específico de análisis de grados Brix en jarabes (rango alto), el sesgo
es aceptable en todo el rango evaluado (7 a 65 °B), sin embargo las lecturas de
Brix a concentraciones bajas (9 y 10 °B) tienen un sesgo alto. Por lo tanto se
recomienda no hacer mediciones a soluciones con similares concentraciones
cuando se tiene calibrado el refractómetro para lecturas en rango alto.
5.3.8.5. Sensibilidad
Para las respuestas aproximadamente lineales la sensibilidad se expresa como la
pendiente de la ecuación de calibración, según la tabla 67.
Concentración/Equipo
Densímetro
Refractómetro
Invertido
../......
°..
Directo
../......
°..
Invertido
....
°..
Sensibilidad
0.004145
0.004161
0.001531
0.001547
En el caso de respuestas no lineales (rango alto), se puede usar la siguiente
ecuación, que corresponde a la derivada del polinomio y así calcular la
sensibilidad a distintas concentraciones:
7.00
0.00147
8.00
0.00148
9.00
0.00150
10.00
0.00151
11.00
0.00153
11.50
0.00154
12.00
0.00154
13.00
0.00156
14.00
0.00157
15.00
0.00159
30.00
0.00181
35.00
0.00188
40.00
0.00195
45.00
0.00203
50.00
0.00210
55.00
0.00218
60.00
0.00225
65.00
0.00232
Repetibilidad
Densímetro
Refractómetro
Concentración
(°B inv.)
8.421
11.579
14.736
8.421
11.579
14.736
40.00
60.00
n
10
10
10
10
10
10
10
10
Promedio (°B)
Instrumento
N/A
N/A
N/A
8.411
11.567
14.673
40.008
59.985
Método
8.424
11.546
14.688
8.434
11.556
14.700
Desviación estándar (°B)
Instrumento
N/A
N/A
N/A
0.0032
0.0048
0.0048
0.0042
0.0135
Método
0.0035
0.0033
0.0080
0.0051
0.0070
0.0047
Coeficiente de variación CV (%)
Instrumento
N/A
N/A
N/A
0.0376
0.0418
0.0329
0.0105
0.0225
Método
0.0416
0.0289
0.0548
0.0612
0.0605
0.0321
Concentración
Teórica (°B inv.)
Densímetro (°B)
Refractómetro (°B)
Instrumento
Método
Instrumento
Método
8.421
N/A
8.424±0.00251
8.411±0.00226
8.434±0.00369
11.579
N/A
11.546±0.00238
11.567±0.00346
11.556±0.00500
14.736
N/A
14.688±0.00575
14.673±0.00346
14.700±0.00337
40.00
N/A
N/A
40.008±0.00302
60.00
N/A
N/A
59.985±0.00969
Precisión intermedia
Tabla 71. Verificación de varianzas similares entre analistas para precisión intermedia
Equipo
Densímetro
Refractómetro
Concentración (°B inv.)
8.421
14.736
8.421
14.736
n (por analista)
9
9
9
9
..
0.860
1.109
1.688
1.000
..1=..2
8
8
8
8
..1-./2
0.226
0.226
0.226
0.226
.../2
4.433
4.433
4.433
4.433
¿Varianzas iguales?
(..=0.05)
Si
Si
Si
Si
Equipo
Densímetro
Refractómetro
Concentración (°B inv.)
8.421
14.736
8.421
14.736
n (por analista)
9
9
9
9
n (total)
18
18
18
18
Promedio (°B)
Analista 1
8.412
14.676
8.427
14.683
Analista 2
8.416
14.679
8.432
14.683
Total
8.414
14.677
8.429
14.683
Desviación estándar (°B)
Analista 1
0.00592
0.00985
0.00866
0.00500
Analista 2
0.00638
0.00935
0.00667
0.00500
Total
0.00628
0.00949
0.00802
0.00485
Coeficiente de variación CV (%)
Analista 1
0.0703
0.0671
0.1028
0.0341
Analista 2
0.0758
0.0637
0.0791
0.0341
Total
0.0746
0.0646
0.0952
0.0330
Los intervalos de confianza de los promedios se calculan para cada analista a
partir de un ..=2,306, calculado para ..=8 y ..=0,05, en el caso del intervalo de
confianza global un ..=2,1098, calculado para ..=17 y ..=0,05
Intervalos de confianza
Equipo
Densímetro
Refractómetro
Concentración
(°B inv.)
8.421
14.736
8.421
14.736
Analista 1
8.412±0.00455
14.676±0.00757
8.427±0.00666
14.683±0.00384
Analista 2
8.416±0.00490
14.679±0.00719
8.432±0.00512
14.683±0.00384
Total
8.414±0.00312
14.677±0.00472
8.429±0.00399
14.683±0.00241
El método pasa los criterios de aceptación para la repetibilidad y precisión
intermedia en las concentraciones evaluadas, las desviaciones estándar son
menores a 0.02 y 0.03 °B respectivamente, y la precisión intermedia es menor a
dos veces la repetibilidad del método en términos del coeficiente de variación
coeficiente de variación.
Cabe anotar que a los jarabes no se les hace ningún pre-tratamiento, la lectura se
realiza directamente en el refractómetro y prácticamente en ausencia de pasos
intermedios, por esto se puede asumir que la repetibilidad del método y precisión
intermedia son similares.
5.3.8.7. Exactitud
Tabla 74. Resultados de exactitud para calibración con agua destilada en densimetría
Patrón
T (°C)
Densidad Teórica
(g/cm3)
n
Densidad Promedio
(g/cm3)
Sesgo
(g/cm3)
Agua ultra-pura
20
0.99820
5
0.998204
0.000004
Estándar
T
(°C)
Densidad Teórica
(g/cm3)
n
Densidad Promedio
(g/cm3)
Sesgo
(g/cm3)
Agua
20.00
0.99820
3
0.99817
-0.00003
8 °B
20.00
1.02995
3
1.02989
-0.00006
11 °B
20.00
1.04230
3
1.04227
-0.00003
14 °B
20.00
1.05495
3
1.05490
-0.00005
Estándar
T
(°C)
°B Teórico
n
°B Promedio
%R
Sesgo (°B)
Agua
20.00
0.000
3
-
-
-
8 °B
20.00
8.000
3
7.994
99.921
-0.006
11 °B
20.00
11.000
3
11.003
100.030
0.003
14 °B
20.00
14.000
3
14.007
100.052
0.007
Tabla 76. Resultados de exactitud para refractómetro en un rango de calibración alto y bajo
Rango
Patrón
T (°C)
°B
Teórico
n
°B
Promedio
%R
Sesgo
Bajo
AG12.50
23.9
12.17
3
12.183
100.11
0.013
Solución sacarosa
25.00 °B
23.9
25.00
3
24.987
99.95
-0.013
Alto
Solución sacarosa
25.00 °B
23.3
25.00
3
25.020
100.08
0.020
Solución sacarosa
60.00 °B
23.2
60.00
3
60.020
100.03
0.020
OIL BSLP23
23.1
71.35
1
71.380
100.04
0.030
5.3.8.8. Incertidumbre
Tabla 77. Resultados parciales e incertidumbre reportada para el método usando densímetro
Ensayo
1
2
3
4
5
6
Promedio (°B)
11.23
10.50
11.23
10.89
11.23
10.50
Desv. estándar
(°B)
0.010
0.011
0.008
0.011
0.010
0.011
ni
10
10
10
10
10
10
SCi (°B2)
0.0008656
0.0011641
0.0005401
0.0010081
0.0008656
0.0011641
Parámetro
Valor
Observación
SCP (°B2)
0.0056076
VP (°B2)
0.0001038
SDP (°B)
0.0101904
SDr (°B)
0.00804
Corresponde a la mayor desviación estándar en el estudio de
repetibilidad del método para el densímetro (tabla 69)
SDL (°B)
0.00626
2*SDL (°B)
0.01251
Sesgo (°B)
0.007
Corresponde al mayor sesgo encontrado en el densímetro (tabla
75)
U (°B)
0.02038
Nivel de confianza de 95 % y asumiendo distribución normal de
los datos.
Tabla 78. Resultados parciales e incertidumbre reportada para el método usando refractómetr
un rango de calibración bajo
Ensayo
1
2
3
4
5
6
Promedio (°B)
11.20
10.52
11.23
10.91
11.20
10.52
Desv. estándar
(°B)
0.007
0.010
0.010
0.011
0.007
0.010
ni
10
10
10
10
10
10
SCi (°B2)
0.00044
0.00096
0.00089
0.00104
0.00044
0.00096
Parámetro
Valor
Observación
SCP (°B2)
0.0059400
VP (°B2)
0.0000943
SDP (°B)
0.0097101
SDr (°B)
0.00699
Corresponde a la mayor desviación estándar en el estudio de
repetibilidad del método para el refractómetro en el rango bajo
(tabla 69)
SDL (°B)
0.00674
2*SDL (°B)
0.01348
Sesgo (°B)
0.013
Corresponde al mayor sesgo encontrado en el refractómetro
para el rango bajo (tabla 76)
U (°B)
0.01942
Nivel de confianza de 95 % y asumiendo distribución normal de
los datos.
Método por refractometría (rango alto)
Tabla 79. Resultados parciales e incertidumbre reportada para el método usando refractómetr
un rango de calibración alto
Parámetro
Muestra Control
60 °B
Promedio (°B)
59.987
Desv. estándar (°B)
0.0141
ni
30
SCi (°B2)
0.00579
Parámetro
Valor
Observación
VP (°B2)
0.0001995
SDP (°B)
0.0141259
SDr (°B)
0.0135
Corresponde a la desviación estándar en el estudio de
repetibilidad para el refractómetro a 60 °B (tabla 69)
SDL (°B)
0.00416
2*SDL (°B)
0.00832
Sesgo (°B)
0.030
Corresponde al mayor sesgo encontrado en el refractómetro
para rango alto (tabla 76)
U (°B)
0.02825
Nivel de confianza de 95 % y asumiendo distribución normal
de los datos.
- Las muestras no deben dejarse por ningún motivo más de 24 horas sin
debido almacenamiento.
- No se requiere eliminación de burbujas por ultrasonido para jarabes.
- La cantidad de HCl 2.5 normal necesario para una inversión total está entre 1
gota (0.05 ml) y 4 gotas (0.2 ml), cantidades menores o mayores pueden
afectar los resultados, aunque esto depende de la matriz analizada.
- En el rango evaluado de 20 a 30 ml el volumen a invertir no es significativo.
- La temperatura de inversión debe ser mayor a 90 °C.
- La agitación de las muestras antes de la lectura es relevante para el
refractómetro mas no para el densímetro.
- El tiempo mínimo de retardo en la lectura para muestras entre 10 y 30 °C es
de 50 segundos, cuando estas estén a temperatura ambiente el análisis
puede realizarse a 3 segundos o menos.
Tabla 80. Reporte de validación para método de determinación de grados Brix por densimetría
refractometría.
Parámetro
Densimetría
Refractometría
(rango bajo)
Refractometría
(rango alto)
Criterio de
aceptación
Especifidad
........ (........)
0.9553 *
0.9352 *
N/A
> 0.9
........ (........)
0.9367 *
0.9262 *
N/A
> 0.9
Linealidad
..
0.99997
0.99996
0.99866
> 0.999
ANOVA
No cumple
No cumple
No cumple
Rango
Invertido
7 - 12 °B
7 - 12 °B
N/A
Directo
7 - 15 °B
7 - 13 °B
7 65 °B
Sensibilidad
Invertido
0.004145
g/cm3°B
0.001531IR°B
N/A
Directo
0.004161
g/cm3°B
0.001547IR°B
..= 1.472*10-5..
+ 1.3661*10-3
Repetibilidad
Desviación
estándar
0.0080 °B *
0.0070 °B *
0.0135 °B *
< 0.02 °B
Precisión
intermedia
Desviación
estándar
0.00949 °B *
0.00802 °B *
0.0135 °B *
< 0.03 °B
Exactitud
Sesgo
(Patrón)
0.007 °B *
0.013 °B *
0.030 °B *
< 0.03 °B
Incertidumbre
U (95 %)
0.02038 °B
0.01942 °B
0.02825 °B
< 0.06 °B
* Corresponde a la concentración/solución con el valor del parámetro más cercano al criteri
aceptación (el peor de los casos).
5.5. RECOMENDACIONES Y TRABAJOS FUTUROS
[1] CHUNG CHOW CHAN, HERMAN LAM, Y. C. LEE, XUE-MING ZHANG. Analytical Method
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