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Contagem de Plaquetas: conceitos e inovaes

Durante muitos anos o mtodo manual desenvolvido por Brecher e Cronkite (1953) foi
considerado como padro de contagem de plaquetas. Com a evoluo tecnolgica que
ocorreu nos ltimos 30 anos, a contagem manual de plaquetas foi substituda pela contagem
automatizada em amostras de sangue colhidas com o anticoagulante EDTA. Nos dias atuais,
a tcnica manual usada em laboratrios pequenos sem recursos tecnolgicos ou em casos
extraordinrios de confirmao da contagem automatizada. Na tcnica manual o sangue
colhido com o anticoagulante EDTA diludo em uma soluo de oxalato de amnia para lise
dos eritrcitos, favorecendo a contagem de plaquetas pela microscopia com contraste de
fase [8]. Trata-se de uma tcnica demorada, subjetiva e com elevados nveis de impreciso,
determinados pelo coeficiente de variao (CV: 10 - 25%) entre observadores [19]. Com a
introduo das automaes para contagem de clulas do sangue usando o mtodo de
impedncia eltrica, tornou-se possvel quantificar as plaquetas de forma mais precisa (CVs <
3.0%) devido ao grande nmero de clulas que so avaliados pelos canais de contagem dos
analisadores hematolgicos de rotina [20]. A aplicao da impedncia eltrica permite
diferenciar as clulas sanguneas atravs dos seus respectivos volumes. Tal tecnologia vem
sendo usada pelos analisadores hematolgicos para discriminar as plaquetas dos eritrcitos
[8]. Entretanto, o mtodo de impedncia eltrica para contagem de plaquetas possui
significativas limitaes, como: a interferncia da contagem pela presena de partculas com
volumes semelhantes s plaquetas. Assim, fragmentos de eritrcitos, micrcitos e
complexos imunolgicos podem exceder o nmero real de plaquetas em casos de
trombocitopenia [21]. Ao contrrio, algumas macroplaquetas e plaquetas gigantes so
discriminadas como eritrcitos devido ao aumento do volume [8].
Atualmente, alguns analisadores hematolgicos possuem um mtodo adicional para
contagem de plaquetas. Trata-se do mtodo ptico com uso do laser para discriminar as
plaquetas dos eritrcitos, fragmentos de clulas, macroplaquetas, plaquetas imaturas (PRs),
complexos imunolgicos e restos celulares, atravs da disperso da luz (scatter) e
fluorescncia ou somente scatter. A aplicao do mtodo ptico permite a avaliao do
volume e contedo das clulas, melhorando a exatido da contagem de plaquetas [8].
Ademais, este mtodo pode ser denominado como Citometria de Fluxo (CF) com ou sem
fluorocromo (marcador fluorescente de RNA/DNA). J a CF com o uso de anticorpos
monoclonais (MoAb) anti-protenas especficas (CD41 ou CD61) expressas na superfcie da
membrana citoplasmtica das plaquetas, tambm uma outra tcnica aplicada para a
determinao do nmero e avaliao das caractersticas especficas das clulas trombocticas.
Aps a marcao com MoAb, as clulas suspendidas so analisadas no Citmetro de Fluxo
(automao) atravs de um canal que permite o fluxo de 1000 a 10000 clulas por minuto,
sob emisso de um laser [22]. Apesar da significativa acurcia para avaliao das plaquetas,
trata-se de uma tcnica de alto custo que requer profissionais habilitados para o preparo
pr-analtico e anlise dos resultados [23]. Recentemente, a tcnica da CF com uso de MoAb
anti-protenas de plaquetas foi introduzida em alguns analisadores hematolgicos de rotina.
Com uso de sangue colhido com anticoagulante EDTA, estes analisadores realizam a
contagem de plaquetas atravs do uso de um marcador celular (anti - CD61) [8].
Entretanto, quando da aplicao da CF com MoAb para a avaliao de plaquetas, vrios
estudos padronizaram o uso de plasma rico em plaquetas (PRP) obtido de amostras de
sangue colhidas com Citrato de Sdio 3,2%. Tal procedimento garantiu uma melhor
qualidade na preparao das clulas, proporcionando uma anlise mais segura dos eventos
relacionados s plaquetas [11, 24, 25].

Contagem de Plaquetas pelos Analisadores SYSMEX - Sempre proporcionando solues

para a melhoria da rotina de laboratrios clnicos e bancos de sangue, os analisadores
hematolgicos da marca Sysmex (Kobe, Japo) apresentam parmetros adicionais ao
hemograma, decorrentes dos mtodos aplicados. Para contagem de plaquetas, todos
analisadores hematolgicos Sysmex (Ex: XS-800, XS-1000, XT e XE) aplicam o mtodo da
impedncia eltrica (corrente direta, DC), atravs do qual as clulas so classificadas pelo
volume. Assim, os analisadores realizam a contagem total de plaquetas (PLT) e os
respectivos clculos do volume plaquetrio mdio (VPM), distribuio da populao de
plaquetas (PDW) e da porcentagem de macroplaquetas (platelet large cell ratio (PLCR (%)).
O valor de P-LCR% determinado pela freqncia de eventos localizados no histograma de
PLT, em uma rea correspondente clulas com volume maior que 12fL (Figura 1). Alm da
corrente direta, os analisadores XE-2100 e XE-5000 apresentam um segundo mtodo para
anlise de plaquetas, denominado plaqueta ptica (PLT-O). Para determinao dos valores de
PLT-O, os analisadores citados aplicam a tcnica da citometria de fluxo (CF) com o uso de
fluorocromo (polimetina). Com isso, em caso de dvida ou interferncia na contagem de PLT
por corrente direta, torna-se possvel realizar uma segunda anlise com melhor acurcia
atravs da PLT-O [8]. Como inovao, os analisadores XE-2100 e XE-5000 apresentam
ainda um novo parmetro denominado Frao de plaquetas imaturas (IPF). O IPF representa
as plaquetas jovens, tambm conhecidas como plaquetas reticuladas (PRs) (Figura 2). Para a
quantificao das plaquetas imaturas, o analisador necessita de um software especfico, onde
so editadas as informaes geradas pela CF com uso da polimetina (marcador de RNA).

Figura 1: Histograma de distribuio das plaquetas para a determinao do parmetro PLCR pelos analisadores hematolgicos Sysmex. P-LCR (%): porcentagem de
macroplaquetas; PDW: distribuio do volume da populao de plaquetas; LD: regio de
baixa distribuio; UD: regio de alta distribuio.

Figura 2: Citograma da contagem ptica de plaquetas (PLT-O) pelo analisador hematolgico

Sysmex XE 2100. IPF: Frao de plaquetas imaturas; PLTs maduras: plaquetas maduras.
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