DESNATURALIZACIN DE PROTENAS Y RECONOCIMIENTO DE AMINOCIDOS

Ammie Julieth Caro Serrato, ammiej.caros@utadeo.edu.co

Shelly Vanessa Gutirrez Vsquez, shellyv.gutierrezv@utadeo.edu.co

RESUMEN:

INTRODUCCIN

La prctica de laboratorio desnaturalizacin de protenas y

reconocimiento de aminocidos consisti en la
identificacin de los diferentes factores que afectan la
estabilidad de estas, es decir, el proceso de
desnaturalizacin al momento de afectarlas con alguna
prueba; verificando experimentalmente con tentativas que
ayudaron al reconocimiento de los aminocidos en las
muestras.

Desnaturalizacin de las protenas

Se llevaron a cabo diez procedimientos en el laboratorio.

Los primeros seis, fueron para observar el proceso de
desnaturalizacin de los prtidos, implementando procesos
trmicos, cambios en su p H, precipitacin por sales y varios
procesos de desnaturalizacin como lo fueron: por
solventes orgnicos, por formacin de sales y por metales
pesados. Los siguientes cuatro, fueron ensayos para el
reconocimiento de aminocidos, implementando algunas
reacciones qumicas.

Un cambio significativo en el pH de la solucin de la

protena.

Cambios de temperatura, fundamentalmente a

temperaturas altas.

Concentraciones altas de compuestos polares

neutros como la urea o la guanidina, ya que estos
compuestos rompen los enlaces de hidrgeno formando
otros enlaces nuevos.

Tratamiento con disolventes orgnicos, etanol,

acetona, entre otros.

Radiacin ultravioleta.

Vibracin ultrasnica, agitacin enrgica de las

soluciones acuosas (Teijn et al, 2006).

Los resultados obtenidos para cada ensayo, fueron

anotados en tablas previamente diseadas, sealando sus
caractersticas y su resultado final.

PALABRAS CLAVE:

Implica la alteracin de sus estructuras secundaria,

terciaria o cuaternaria, dejando intacta la estructura
primaria; obteniendo una protena nativa que pierde su
actividad bilgica. En algunos casos este proceso es
reversible (Arias, 2006).
Las principales causas de desnaturalizacin son:

Desnaturalizacin de protenas, reconocimiento de

aminocidos, estabilidad de las protenas, reaccin de
Hopkins

Estos agentes alteran las fuerzas de dispersin, los

enlaces de hidrgeno y los enlaces inicos. Conlleva
cambios drsticos en las propiedades fsicas de las
protenas, como la solubilidad, el grado de hidratacin, el
ndice de refraccin, entre otros.

ABSTRACT

Clasificacin de las protenas de acuerdo con su

composicin qumica

The practice of laboratory denaturing of proteins and amino

acid recognition consisted in the identification of the
different factors that affect the stability of these, i.e. the
denaturing process at the time of assigning them with some
test; verifying experimentally with attempts that helped the
recognition of the amino acids in the samples.
It iscarried out ten procedures in the laboratory. The first
six, were to observe the denaturing process the prtidos,
implementing thermal processes, changes in its PH,
precipitation by salts and several processes of denaturation
as they were: by organic solvents, by the formation of salts
and heavy metals. The following four, were testing for the
recognition of amino acids, implementing some chemical
reactions.
The results obtained for each trial, were recorded in tables
previously designed, pointing out its features and its final
outcome.

KEY WORDS:
Denaturalization of proteins, recognition of amino acids,
stability of the proteins, Hopkins's reaction

(Arias, 2006)

Clasificacin de las protenas de acuerdo con sus

funciones bilgicas

Las enzimas que catalizan las reacciones qumicas en

todos los seres vivos.
Las protenas estructurales que constituyen el mayor
porcentaje de protenas en los seres vivos; se encuentran
en la piel, los huesos, el cabello y los tejidos conectivos.
Las protenas estructurales mantienen la unidad en los
seres vivos; el colgeno y la queratina son protenas
estructurales.
Las protenas contrctiles que afectan el movimiento en los
seres vivos. Los msculos estn constituidos por estas
protenas.
Las hormonas proteicas son agentes de comunicacin
qumica en los seres vivos.
Las protenas de transporte llevan las sustancias de un
lugar a otro; por ejemplo la hemoglobina transporta el
oxgeno y el dixido de carbono en la corriente sangunea.
Las inmunuglobinas actan en los mecanismos de defensa
que utiliza el organismo para neutralizar y eliminar
sustancias extraas; las inmunoglobinas se sintetizan en
forma especfica como respuesta a cada sustancia ajena
(Arias, 2006).

formacin de sales, en el cual se us la clara de huevo y la

casena, utilizando el cido pcrico, el cido ntrico, y el
cido tricloroactico. Finalmente se realiz el proceso de
desnaturalizar protenas por medio de metales pesados, en
el cual se utiliz la casena y la clara de huevo, y de
metales pesados se utilizaron el nitrato de mercurio, el
acetato de plomo y el sulfato cprico.
En los ensayos para reconocer aminocidos el primer
proceso fue por la reaccin con acetato de plomo alcalino,
se utiliz la gelatina y la casena. Con la reaccin
xantoproteca se reconoci con la casena y la albumina
srica bovina. Con el mtodo de Hopkins Cole se us la
casena como muestra. Finalmente se reconocieron los
aminocidos presentes en la albumina srica bovina y en la
clara de huevo mediante la reaccin de Ehrlich.
TABLAS DE DATOS
Desnaturalizacin
1. Trmica
TUBO 1

BSA

TUBO 2 CLARA DE
HUEVO

2.

Coagulacin con calor

Coagulacin con calor

pH extremo
HCL / bsico

Mtodos de separacin de protenas

Para separar las protenas de los solutos moleculares o

inicos puede recurrirse a la dilisis, que separa las de
menor tamao. Otra tcnica es la que aplica la
precipitacin fraccionada utilizando sales, disolventes
orgnicos, metales pesados, entre otros. Una tcnica
opuesta a la dilisis es la filtracin por gel, que consiste en
llenar una columna con un soporte hidrofilico hidratado,
haciendo que las partculas de mayor tamao pasen
rpidamente, mientras que las pequeas lentamente. Entre
otras esta la electroforesis que permite separar mezclas de
protenas que difieren por su velocidad de desplazamiento,
siendo mayor cuando la protena tenga ms cargas
elctricas; adems de la ultra centrifugacin que separa
mezclas de protenas segn la velocidad de sedimentacin
en un capo gravitacional artificialmente potenciado con la
ultracentrfuga, esta velocidad depende fundamentalmente
de la masa molecular, de la densidad y de su forma
geomtrica (Macarulla & Goi, 1994).

TUBO 1 GELATINA

Precipitacin

TUBO 2 CASEINA

Precipitacin

TUBO 2 CLARA DE
HUEVO

Precipitacin

NaCl
TUBO
MgC2 1 CLARA DE HUEVO

No afect

TUBO
TUBO 21 CASEINA
CLARA DE
HUEVO

No afect
No afect

TUBO 2 CASEINA

Precipitacin

(NH4)2SO4

El laboratorio se parti en dos partes, primero se realizaron

algunos procesos para distinguir la desnaturalizacin, en la
segunda parte se reconocieron diferentes aminocidos
mediante cuatro procesos.

Mezcla etanol- cetona

precipitacin

3. precipitacin por sales

METODOLOGA

En el proceso de desnaturalizacin se hicieron 6 pruebas

con diferentes procedimientos. El primero consisti en
desnaturalizar las protenas contenidas en la clara de
huevo, y la albumina srica bovina por medio de calor. El
proceso de pH extremos fue realizado con casena y clara
de huevo, sometindolas primero a solucin de HCl, y
luego solucin de NaOH. En la precipitacin por sales se
desnaturaliz la clara de huevo y la casena por medio de
tres reactivos: NaCl, MgC2 y (NH4)2SO4. Para el proceso
con solventes orgnicos, se usaron como muestras la
gelatina y la casena, haciendo tres repeticiones del
proceso con diferentes solventes: Etanol, Cetona y mezcla
etanol-cetona. Seguidamente se comenz el proceso de

TUBO 1 CASEINA

4.

TUBO 1 CLARA DE
HUEVO

Precipitacin

TUBO 2 CASEINA

Precipitacin

Desnaturalizacin por solventes orgnicos

Etanol
TUBO 1 GELATINA

Precipitacin

TUBO 2 CASEINA

No afect

TUBO 2 CASEINA

No afect

8. Reaccin xantoproteca
5. Desnaturalizacin por formacin de sales
cido pcrico
TUBO 1 CLARA DE
HUEVO

Precipitacin- amarillo
transparente

TUBO 2 CASEINA

Precipitacin blancasoluble amarillo

TUBO 1 BSA

Presencia color
naranja

TUBO 2 CASEINA

Presencia color
naranja

9. Reaccin de Hopkins Cole

TUBO 1 CASEINA

cido ntrico concentrado

TUBO 1 CLARA DE
HUEVO

Precipitacin blanca /
amarillo

TUBO 2 CASEINA

Precipitacin blanca /
amarillo

cido tricloroactico
TUBO 1 CLARA DE
HUEVO

Precipitacin transparente /
blanca

TUBO 2 CASEINA

Precipitacin blanca /
transparente

6. Desnaturalizacin por metales pesados

Nitrato de mercurio
TUBO 1 CLARA DE
HUEVO

Precipitacin
irreversible

TUBO 2 CASEINA

Precipitacin
irreversible

Anillo violeta en la
mitad
de
la
precipitacin

10. Reaccin de Ehrlich

TUBO 1 BSA

Presencia color amarillo

transparente

TUBO 2 CLARA DE
HUEVO

Presencia color amarillo

intenso

ANALISIS DE RESULTADOS
En el ensayo de desnaturalizacin trmica se tomaron
como pruebas BSA y clara de huevo, las dos muestras se
coagularon al someterlas a temperatura, esto es debido a
que cuando hay un aumento de temperatura se rompen
muy fcilmente los puentes dbiles de hidrgeno y las
interacciones hidrofbicas a causa del aumento en la
energa cintica de las molculas con lo que se
desorganiza la envoltura acuosa de las protenas, y se
desnaturalizan; se desorganiza la estructura de la protena,
de forma que el interior hidrofbico interacciona con el
medio acuoso y se produce la agregacin y precipitacin
de la protena desnaturalizada (Cogua, 2012).

Acetato de plomo
TUBO 1 CLARA DE
HUEVO

Precipitacin
irreversible

TUBO 2 CASEINA

Precipitacin
irreversible

Sulfato cprico
TUBO 1 CLARA DE
HUEVO

Precipitacin
irreversible

TUBO 2 CASEINA

Precipitacin
irreversible

Ensayos para el reconocimiento de aminocidos

7. Reaccin con acetato de plomo alcalino
TUBO 1 GELATINA

Precipitacin

La alteracin del PH puede alterar el patrn de ionizacin

de los grupos carboxilo y amino en las cadenas laterales
de los aminocidos desorganizando el patrn de
atracciones y repulsiones de los iones H+ y OH que
contribuyen a la estructura terciaria normal de los prtidos;
afectando su envoltura acuosa, su carga elctrica de los
grupos cidos y bsicos de las cadenas laterales de los
aminocidos. Esta alteracin de la carga superficial de las
protenas elimina las interacciones electrostticas que
estabilizan la estructura terciaria y a menudo provoca su
precipitacin. La solubilidad de una protena es mnima en
su punto isoelctrico, ya que su carga neta es cero y
desaparece cualquier fuerza de repulsin electrosttica que
pudiera dificultar la formacin de agregados (Gonzalez,
2014).

En la prueba de precipitacion por sales, al agregar en la

muestra un agente precipitante las proteinas con mayor
hidrofobicidad superficial precipitan primero, el mecanismo
que se da en esta prueba es que la adicion de sales
elimina el agua que hay en la proteina hidratada, dejando
las regiones hidrofobicas en libertad de combinarse
intermolecularmente (Voet, 2004).
En el ensayo de desnaturalizacion por solventes organicos
se tom el etanol y la cetona, esta tecnica se basa en la
disminucion de la solubilidad mediante la adicion de
solventes organicos ligeramente polares. Al adicionarlos
producen agregados de moleculas proteicas que tienden a
precipitar, esto es devido a que el solvente presenta una
constante dielectrica menor que la del agua, lo cual
produce un incremento en las fuerzas de atraccion entre
cargas opuestas y un descenso en el grado de ionizacion
de los radicales de las proteinas, y su consecuencia es la
disminucion de la solubilidad en esta (Voet, 2004).
En la prueba realizada con metales pesados se observ
una desnaturalizacion de todas las proteinas, es
irreversible y esto se debe a que la desnaturalizacion
conduce a la perdida total de la solubilidad, con lo que la
proteina precipita. La formacion de agregados fuertemente
hidrofobicos implide su renaturalizacion y hacen que le
proceso sea irreversible. Las sales de metales pesados
precipitan las protenas porque el ion del metal pesado muy
probablemente se combina con la forma aninica de la
protena. La protena en el lado alcalino de su punto
isoelctrico existe como in negativo y as al combinarse
con el in del metal o catin, formar protenatos tales
como proteinato de mercurio, de plomo etc (Brumovsky,
2012).
Reaccin con acetato de plomo alcalino se tomaron dos
pruebas: gelatina y casena; dando una precipitacin negra
en la primera que indica que se ha formado sulfuro de
plomo, esta reaccin se basa en la separacin mediante un
lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar
con una solucin de acetato de plomo forma el sulfuro de
plomo (Obando, 2014).
Para la reaccion xantoproteica se tomaron como muestras
BSA y caseina, apareciendo una colracion naranja/
amarilla, Para esta prueba se produce la nitracin del anillo
aromatico presente en los aminocidos obtenindose
nitrocompuestos de color amarillo, detectando as la
cantidad de proteina soluble en las soluciones, dando
positivo en los protidos con aminoacidos portadores de
grupos aromaticos (Linstromberg, 1979).

En la prueba de Hopkins Cole es positiva solo para

protenas que contienen triptfano.se tom como muestra
la casena dando un anillo violeta el cido concentrado
hidroliza las protenas en la interfase liberando el triptfano
para dar el producto violeta. Este ensayo es especfico del
grupo indol caracterstico del triptfano. El anillo indol
reacciona con el cido glicoxlico en presencia de cido
sulfrico concentrado para formar un compuesto violeta
que se forma en la interfase entre la solucin de protena y
el cido sulfrico. La estructura exacta del compuesto
violeta no es conocida, pero parece estar relacionado con
el producto de condensacin del aldehdo del cido
glicoxlico con los nitrgenos de dos anillos indolicos,
tambin puede formar complejos con otros aldehdos:

(Monroy, 2013)

Para la prueba de Ehrlich se tomaron como pruebas BSA y

clara de huevo, dando una tonalidad amarilla en su
reaccin, este aminocido se condensa fcilmente con
varios aldehdos en presencia de cidos fuertes para dar
compuestos coloreados. En la reaccin se utiliza el
reactivo de Ehrlich (p-dimetilaminobenzaldehdo al 10% en
Hcl conc.) que reacciona con un buen nmero de
compuestos orgnicos tales como indoles, aminas
aromticas y compuestos ureicos para dar complejos
coloreados (Strasinger, 2010).
CONCLUSIONES:

Las proteinas pierden su estructura nativa al sufrir un

cambio en su interaccion con el disolvente y se pierden
sus estructuras secundaria, terciaria y cuaternaria,
quedando la cadena polipeptidica reducida a un
polimero sin estructuras tridimensionales fijas.

Los agentes fsicos y qumicos desnaturalizantes de las

protenas son el calor, detergentes, solventes
organicos, ph y fuerza inica.

Cualquier factor que modifique la interaccin de la

protena con el solvente disminuye su estabilidad en la
disolucin y provoca una precipitacin.

En cualquier protena, la estructura nativa y la

desnaturalizada tienen en comun la estructura primaria.

Bibliografa
Brumovsky, L. A. (2012). PROPIEDADES FUNCIONALES
DE LAS PROTENAS . Recuperado el 30 de AGOSTO de
2014, de UNIVERSIDAD NACIONAL DE MISIONES:
http://www.aulavirtualexactas.dyndns.org/claroline/backends/download.php?
url=L1RyYWJham9zX1By4WN0aWNvcy9UUF9Oul81X0Rl
c25hdHVyYWxpemFjafNuX2VfSGlkcmF0YWNp824ucGRm
&cidReset=true&cidReq=IA818
Cogua, J. (septiembre de 2012). Biologia virtual.
Recuperado el 01 de septiembre de 2014, de
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecc
iones/cap01/01_01_15.htm
Gonzalez, j. m. (12 de febrero de 2014). desnaturalizacion
de las proteinas. Recuperado el 30 de agosto de 2014, de
http://www.ehu.es/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacion
.htm#33
Linstromberg, W. W. (1979). propiedades de las proteinas.
En W. W. Linstromberg, curso breve de quimica organica
(pg. 416). Barcelona: revert.
Monroy, M. d. (agosto de 2013). bioquimica. Obtenido de
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Teoria/archivos/Unidad
30.pdf
Obando, O. A. (31 de agosto de 2014). reconocimiento de
proteinas.
Obtenido
de
http://www.uniquindio.edu.co/uniquindio/ntic/trabajos/10/da
vidyoscar/paginas/recprot.htm
Strasinger, S. K. (2010). prueba de ehrlich en tubo. En S. K.
Strasinger, analisis de orina y de lso liquidos corporales
(5ta edicion ed., pg. 71). china: panamericana.

Voet, D. (2004). efectos de la concentracion salina. En D.

Voet, BIOQUIMICA 3RA EDICION (pg. 139). URUGUAY:
PANAMERICANA.
Voet, D. (2004). efectos de los oslventes organicos. En D.
Voet, BIOQUIMICA 3RA ED. (pg. 140). uruguay:
panamericana.