Control del Ciclo Celular y

Reparacin del ADN

Depto. Biofsica
Facultad de Medicina
ESFUNO ESCUELAS, UTI BCyT 2015

Control del Ciclo Celular

La transicin de una fase del ciclo a la siguiente requiere que
se completen una serie de eventos:

bioqumicos

morfolgicos y

genticos

Son genes que controlan la induccin y activacin de

complejos ciclina-cdk.

 A travs de la citometra de flujo se puede estudiar la

respuesta a diversos agentes en poblaciones celulares
normales y mutantes.

 Las clulas tumorales descienden de un ancestro comn por

el inicio indebido de un programa de divisin celular.
La transformacin maligna de una clula acontece por
acumulacin de mutaciones en genes especficos agrupados
en 2 familias:

Protooncogenes: dirigen la produccin de protenas

como ciclinas y factores de crecimiento, que estimulan la
proliferacin celular. Cuando mutan se transforman en
oncogenes, orquestando la multiplicacin anrquica de
las clulas.

 Supresores tumorales: que en el organismo sano

controlan la proliferacin celular.
Cuando no estn presentes o se encuentran inactivos por
mutaciones, las clulas dejan de crecer normalmente y
adquieren propiedades proliferativas anormales.
Los supresores tumorales frenan la progresin del ciclo en
forma reversible o irreversible, a travs de la inhibicin directa
o indirecta de los complejos ciclina-cdk.
Gen p53 (control G1/S): desempea un papel importante en
apoptosis y control del ciclo celular. Su mutante luego de
irradiada no detiene su progresin en el ciclo (mutacin,
amplificacin gnica y transformacin maligna).

 Una vez activado p53:

o bien podr inducir un

paro en el cc para
permitir la reparacin
o inducir apoptosis
para eliminar el dao
en la clula.

Sndrome de Li-Fraumeni: los individuos con este sndrome

tienen un mayor riesgo para desarrollar cnceres primarios
mltiples, donde un 50% de los pacientes muestran una
mutacin del genTP53.

 Las lesiones producidas en el ADN por distintos agentes

pueden repararse con cierta probabilidad, dependiendo de
factores:
genticos
metablicos
ambientales
Involucran sistemas enzimticos y se encuentran presentes
desde virus hasta mamferos, incluso clulas tumorales.
Importancia de la reparacin:
estabilidad del genoma
mutagnesis biodiversidad
envejecimiento (acumulacin de errores)
transformacin maligna
muerte celular

Reparacin del ADN

Mecanismos simples de reparacin (reversin directa del
dao). Dentro de este se encuentra:
Reparacin por foto-reactivacin.
Reparacin de bases alquiladas.
Mecanismos complejos de reparacin:
Reparacin escisional (de nucletido, de base, de base
mal apareadas).

Reparacin recombinacional.
Reparacin post-replicativa.

Reparacin por Foto-reactivacin

Repara dmeros de bases
producidos por UV, a
travs de la absorcin de luz
visible para romper los
enlaces covalentes.
Las enzimas asociadas son
fotoliasas que reconocen la
lesin.
Conservada en la escala
biolgica desde virus a
mamferos (no presente en
humanos).

Reparacin de Bases Alquiladas

La metilacin de la guanina, cuyo producto O6-metilguanina,
forma pares de bases complementarias con la timina, en lugar
de citosina.
La reparacin se lleva a cabo por una enzima suicida.

Escisin de Nucletido
Repara lesiones producidas por
radiacin UV, roturas simples
y de doble cadena.

Implica:

Reconocimiento y
demarcacin de la lesin
Separacin del segmento
marcado
Corte del segmento
Sntesis de nueva porcin
por polimerasas
Unin a la cadena por
ligasas

 En humanos, el trastorno conocido como Xeroderma

pigmentosum se caracteriza por la incapacidad de reparar los
dmeros de timina producto de la exposicin a UV.

Mutacin autosmica
recesiva.
Se caracteriza por:
Hipersensibilidad a
radiaciones UV.
Alta incidencia de
cncer de piel.

 El Sndrome de Cockayne puede servir como elemento de

conexin entre dos modelos actuales que explican el
envejecimiento:
deficiencia en la reparacin (con baja probabilidad de error)
acumulacin de lesiones por radicales libres (principalmente en
genoma e interfases: membranas mitocondrial y nuclear).

Reparacin de Bases Mal Apareadas

El reconocimiento de los desapareamientos se basa en la
distorsin de la doble hlice.
Se reconoce la hebra recin sintetizada y se elimina la base mal
apareada.

Reparacin Recombinacional
Involucrada en la reparacin de roturas dobles de cadena
(DSBs) en el ADN producidas por radiaciones ionizantes y
radiomimticos.
El modelo actual implica el reconocimiento de las DSBs por
complejo enzimtico ATP-dependiente, catalizando el
intercambio entre secuencias homlogas.
En las clulas eucariotas es necesaria la presencia de las
protenas Ku que permiten el intercambio con secuencias no
homlogas (lo que llevara a la mutacin).

Replicacin Post-replicativa
Reconoce errores en la hebra de ADN recientemente
sintetizada y sin metilar.

En procariotas este tipo de reparacin se llama respuesta

SOS y se pone en marcha para resolver un dao tan grave
que la muerte celular es la nica alternativa.

Mtodos de Estudio de Reparacin

Entre los ms importantes a nivel poblacional:
Anlisis de sobrevida y rendimiento mutagnico en funcin
de la dosis
Distintos tipos de lesiones pueden detectarse con
electroforesis de distintos tipos y cromatografa

EPR: reparacin con error, EFR: reparacin sin error. Los

signos (-) indican deficiencias de reparacin (mutantes).

 La comparacin de cepas salvajes con mutantes sensibles

a nivel de sobrevida y mutagnesis permite sacar
conclusiones sobre:
los sistemas de reparacin involucrados y su magnitud
as como de las relaciones entre vas de reparacin

 La tcnica de electroforesis por campos pulsados

transversales y alternados (TAFE) permite detectar dobles
roturas de cadena en el ADN.

se hace migrar el ADN de

clulas tratadas y no tratadas
sobre una matriz en respuesta a
un campo elctrico
el nmero de DSBs depender
de la relacin entre los picos
(tratados
vs
controles)
asumiendo la distribucin de
Poisson).

control (wt, mutantes)

wt +[BLM] = 0.5 g/ml

chk1/chk1 +[BLM] = 0.5 g/ml

rad17/rad17 +[BLM] = 0.5 g/ml

Densitogramas de ADN y corrida correspondiente, t = 0h.

Preguntas
1. Cules es la funcin de los supresores tumorales?
2. Cmo incide la mutacin de p53 en la cintica celular
luego de la exposicin a radiaciones?
3. Qu deficiencias presentan los pacientes portadores
de Xeroderma pigmentosum?
4. Describa brevemente que sistemas de reparacin del
ADN conoce.
5. Qu mtodos de estudio utilizara para evaluar los
mecanismos de reparacin?