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Universidad Autónoma Del Estado De México Facultad De Química Química Legal QFB Practica N°8 Pruebas Cristalográficas

Universidad Autónoma Del Estado De México

Facultad De Química Química Legal QFB

Universidad Autónoma Del Estado De México Facultad De Química Química Legal QFB Practica N°8 Pruebas Cristalográficas

Practica N°8 Pruebas Cristalográficas Para Determinar La Naturaleza Sanguínea De Una Mancha Objetivo

Confirmar la naturaleza sanguínea de una mancha mediante un método microcristralográfico.

Marco Teórico En cualquier caso, y aunque no hubiera ninguna dificultad en reconocer una mancha como sangre simplemente por observación, siempre es necesaria una verificación de su naturaleza sanguínea en el momento de la reconstrucción de una caso o de ser presentadas como pruebas de un procedimiento legal. A grandes rasgos, son cuatro las cuestiones que se plantean en el laboratorio a la hora de identificar manchas, una de ellas es: ¿La mancha que estudiamos es de sangre?, lo cual implica la realización de una serie de procedimientos que reciben el nombre de conjunto diagnostico genérico. Existen dos tipos de pruebas a aplicar:

Pruebas de orientación. Son muy sensibles pero poco específicas, porque además de la sangre, hay otras muchas sustancias que son capaces de dar un resultado

positivo al

ser sometidas a

las mismas,

por

lo

que

solo

se

puede

valorar un

resultado negativo. Pruebas se certeza. Son muy específicas y de menor sensibilidad. Se basan en comprobar la presencia en la muestra de alguno de los componentes de la sangre. Estas pruebas no permiten determinar si la sangre analizada es o no humana. Dentro de las pruebas de certeza se encuentran métodos cristalográficos o microquímicos. En

estas pruebas, se somete a la mancha a la acción de distintos reactivos, para obtener derivados de la hemoglobina. Estos derivados forman cristales de colores y formas característicos que pueden ser identificados por medio de observación al microscopio y permiten asegurar la naturaleza sanguínea de la muestra que se estén analizando. Las dos técnicas más utilizadas son las de Teichmann para obtener cristales de clorhidrato de hematina y el método basado en la obtención de cristales de hemocromógeno es utilizado en el reactivo de Takayama. Cristales De Teichmann O De Hematina

Las proteínas se separan inmediatamente de la hemoglobina y del grupo prostético cuando se trata con ácido acético, con el cual, se crea un medio acido en donde el grupo Hem se oxida más rápidamente que en un medio alcalino; si hay algún halógeno inorgánico como el cloro, se formaran cristales insolubles de cloruro de ferriprotoporfirina o hemática. En caso positivo se observaran unos cristales romboidales de color café oscuro.

Prueba De Takayama O Hemocromógeno

La ferroprotoporfirina y la ferriprotoporfirina se combinan con compuestos nitrogenados que incluyen a otras proteínas, hidróxido de amonio, piridina y nicotina llamados hemocromógenos mediante la hemoglobina creando cristales tanto en medio acido como alcalino, por capilaridad,

se observan cristales romboidales de color rosa al microscopio.

Procedimiento

Teichmann y Takayama

Macerar en solución salina hasta conseguir una solución coloreada al máximo.

Procedimiento Teichmann y Takayama Macerar en solución salina hasta conseguir una solución coloreada al máximo. Depositar

Depositar unas gotas de la solución sobre el extremo de un portaobjetos y hacer un extendido.

Si la muestra no procede de la elucion de una muestra, si no que esde una muestra directa, basta realizar una sola vez la adicion del reactivo.

Disposición de Residuos

Cubrir el extendido con un cubreobjetos y adicionar por capilaridad gotas del reactivo según la prueba

Cubrir el extendido con un cubreobjetos y adicionar por capilaridad gotas del reactivo según la prueba a realizar.

Cubrir el extendido con un cubreobjetos y adicionar por capilaridad gotas del reactivo según la prueba

La preparación se calienta a la llama hasta que se inicie la ebullición, teniendo cuidado de no sobrecalentar para evitar quemar la muestra.

 
Cubrir el extendido con un cubreobjetos y adicionar por capilaridad gotas del reactivo según la prueba
En caso de que no aparezcan los cristales se añade otra gota de reactivo, repitiendo el

En caso de que no aparezcan los cristales se añade otra gota de reactivo, repitiendo el procedimiento. si despues de 4 o 5 ebulliciones no aparecen los cristales, se puede dar la prueba como negativa.

En caso de que no aparezcan los cristales se añade otra gota de reactivo, repitiendo el

La preparación se deja enfríar y se observa al microscópio buscando los cristales.

Colocar las laminillas, cubreobjetos y el residuo de muestra en solución de hipoclorito de sodio por 15 minutos.

Observaciones

Takayama, muestra directa Teichmann, muestra directa Takayama, muestra indirecta 40X 40X 40X
Takayama, muestra directa Teichmann, muestra directa Takayama, muestra indirecta 40X 40X 40X
Takayama, muestra directa Teichmann, muestra directa Takayama, muestra indirecta 40X 40X 40X

Takayama, muestra directa

Teichmann, muestra directa

Takayama, muestra indirecta

40X

40X

40X

Resultados

En las muestras para Teichmann y Takayama en muestra fresca resultan positivas a cada prueba identificando de forma inmediata los cristales en Takayama, y con un poco de dificultad se encontraron los de Teichmann. En las muestras diluidas fue difícil encontrarlos sólo en el de Takayama fueron más perceptibles, pero estaba muy concentrada la dilución, por lo que al diluirlo más, ya no pudieron encontrarse. La apariencia de los cristales en las reacciones de Takayama eran de color rosado transparente, algunos en forma de aguja o formas semiromboidales, uno encima de otro. En el caso de los cristales de Teichmann tenían definidamente una forma romboidal y era de un color café.

Conclusiones

Las pruebas que se realizan con las técnicas de Takayama y Teichmann son relativamente sencillas y rápidas para la determinación de muestras de sangre, con pequeños inconvenientes en las preparaciones de estos, ya que en el caso de la de Teichmann si el Ác. Acético no ebulle en su totalidad queda líquido que impide su visualización y la totalidad de la reacción. Pero en la reacción de Takayama si se expone demasiado tiempo a la llama el portaobjetos, se puede caramelizar el reactivo lo que provocaría que no se lograra ver nada en el microscopio y de igual forma la reacción con la sangre no se llevaría a cabo. Es posible que en la muestra diluida no se lograra encontrar los cristales, porque, en todas las pruebas que se realizaron no se realizaron en su totalidad las reacciones correspondientes o de igual forma con el reactivo de Takayama hubo muchas partes caramelizadas. No se puede decir que había poca cantidad de sangre y que por esto no se vio nada, ya que este tipo de pruebas pueden realizarse con una concentración baja de sangre, por lo que no es un factor que pueda impedir su visualización.

Cuestionario 1. Explique el fundamento de la reacción del ácido acético con la sangre.

La hemoglobina, cuando es tratada con ácido acético, se separa inmediatamente de las

proteínas y del grupo prostético. Durante la hidrólisis la globulina se desnaturaliza.

2. Explique el fundamento de la reacción de la sangre con el reactivo de Takayama.

El hidróxido de sodio efectúa una hidrólisis alcalina, liberando el grupo prostético de la globina; el

fierro del Hem en este momento se encuentra como ión férrico (+3) debido a la formación de la metahemoglobina en el proceso de desecación de la mancha de sangre. La carga (+3) del fierro se neutraliza por el ión OH. Calentando la glucosa (a azúcar reducida), se reduce el ión férrico a ferroso (+2) y la piridina se combina con éste para formar un producto cristalino insoluble: el hemocromógeno o piridinferroprotoporfirina.

3. ¿Cuáles son las características cristalográficas de los cristales de hemocromógeno?

Cristales romboidales de color rosa alrededor de la muestra.

Las pruebas que se realizan con las técnicas de Takayama y Teichmann son relativamente sencillas y

4. ¿A qué se le llama rastreo hematológico?

El rastreo de sangre en el sitio de suceso tiene por objeto detectar, mediante una búsqueda metódica, toda clase de vestigio de sangre, tanto en el sitio de suceso mismo, como en el cadáver, en vestimentas y también en el sospechoso. Una vez detectada la imagen sanguínea se

aplica el procedimiento criminalística normal, que es proteger el vestigio para evitar que sea alterado o borrado; fijar mediante la fotografía, planimetría y descripción escrita; transportar vestigio al laboratorio de criminalística ( Cuando sea procedente); la imagen sanguínea, es decir, reconstruir su origen y mecanismo.

Referencias

Técnicas Utilizadas En Hematología Forense.

http://www.uv.es/acastell/1-Introduccion.pdf

http://criminalistica.mx/descargas/documentos/pdf/TecnicasHematologiaForense.pdf Consultado 08/04/2015. Introducción, Hematología Forense.

Consultado 05/04/2015.

Análisis Forense de la sangre.

http:// www.criminalistica.com.mx/areas-forenses/hematologia-y-serologia/1347-varios Consultado 05/04/2015. Hematología forense.

http://www.mexicoforense.org/biblioteca/criminalistica/hemotologia_forense.pdf Consultado 05/204/2015. Hematología forense.

http: //invesjudiciala.blogspot.mx/ Consultado 08/04/2015. Manchas hemáticas. http: //es.slideshare.net/adnestelamartin/captulo-10-anlisis-de-manchas-de-sangre Consultado 08/05/2015.