INGENIERA QUMICA

PRACTICA N1
CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

OBJETIVO:
Separacin de componentes de tintes mediante resolucin cromatografica sobre placas con
silica gel.
Conocer y aplicar la tcnica de cromatografa en capa fina, c.c.f., sus caractersticas y los
factores que en ella intervienen.
Calcular valores de Rf de varias sustancias.
Deducir, a travs del Rf la relacin que existe entre la polaridad de las sustancias
que se analizan y la de loseluyentes utilizados.

FUNDAMENTO TEORICO:
La cromatografa de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar molculas
relativamente pequeas. En la biologa celular se utiliza frecuentemente para separar
azcares simples, lpidos, aminocidos, nucletidos, metabolitos, y ocacionalmente para
separar cadenas cortas de polipptidos y cidos nucleicos. Al igual que otras
cromatografas, consiste de una fase estacionaria y una fase mvil y el principio es el
mismo: la sustancia de inters se adherir a la fase estacionaria o se mover con la fase
mvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase
estacionaria.
La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de
silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie slida (una placa de vidrio,
aluminio, plstico o papel). Esta superficie slida puede ser rgida o flexible. El tipo de fase
estacionaria que se utilice en un experimento depender del tipo de molculas que se
quieran separar. Incluso vienen algunas placas con indicadores fluorescentes. La fase
estacionaria consiste de un solvente que puede ser agua, un solvente orgnico o una mezcla
de ambos.
El procedimiento es sencillo: Se colocan las muestras a un centmetro del borde en uno de
los extremos de la placa, se deja secar, se coloca la placa en un envase (tanque de
desarrollo) que ya contiene una pequea cantidad del solvente, se tapa y se deja correr por
un rato. El solvente subir por capilaridad e ir arrastrando las molculas, las cuales se
movern segn la afinidad que muestren por la fase estacionaria. Si la mezcla de muestras
que se est analizando presenta color, se vern los distintos colores migrando a distintas
velocidades. Si son incoloras hay que someter la placa a algn tratamiento con una

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sustancia desarrolladora (developer) para poder determinar la presencia de sustancias sobre

el silicato. El tipo de desarrollador depender del tipo de molculas que se analizan.
MATERIALES Y REACTIVOS:

Mechero de alcohol
Tubos capilares
Placas de silica gel
Tinta de lapicero
Acido acetico

Tinta indeleble
Cuba cromatografica
Vasos de precipitados
alcohol
n-butanol

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PROCEDIMIENTOS
se coloca un poco de
tinta de lapicero y se disuelve
con alcohol en un vaso
de precipitado.

En otro vaso de precipitado se coloca tinta indeleble y se disuelve con alcohol.

se dibujan 5 surcos,
dejando camino para que
hacienda el eluyente(acido acetico) de 1cm, con una regla y un limite inferior en la
placa cromatografica.

En la cuba cromatografica se echa un poco de acido actico con tal de que no

sobrepase el limte inferior dibujado en la placa cromatografica, se procede a tapar y
agitar constantemente por 3minutos.

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Se toma un tubo capilar y se coloca en la llama del mechero de alcohol hasta que
este se pueda estirar y romper sellndose por completo en cada extremo.
Con ayuda de la micropipeta(mitad del tubo capilar) se toma 3 muestras de tinta
indeleble y 3 de tinta de lapicero y se colocan en cada uno de los surcos.
Se coloca la placa dentro de la cmara cromatografica y tapa.

RESULTADOS:

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Una vez que la fase mvil esta a punto de llegar al borde superior de retira la placa y
se dibuja una lnea de limite.
El disolvente al ser voltil se evapora rpidamente.
Se ve q la tinta subio formando una lnea y descomponindose en varios colores
hasta el color rosado.
CALCULOS:
Se puede calcular la relacin de frentes (distancia recorrida del soluto/distancia
recorrida del solvente). Desde la lnea dibujada inferior hasta el centro de cada
punto.
Para cada uno se tendra una distancia recorrida del solvente = 4.5cm, distancia
recorrida por la tinta de lapicero (en colores bajos se tiene
azul,morada,rosado=2.2;2.6;3cm respectivamente) y para la tinta recorrida por la
tinta
indeleble
(en
colores
fuertes
se
tiene
azul,morado,purpura,rosado=2.3;2.75;3.2;3.6cm respectivamente).
a) Para la tinta de lapicero en colores bajos:

Rf =

2.2
=0.49
4.5

Rf =

2.6
=0.58
4.5

Rf =

3
=0.67
4.5

b) Para la tinta indeleble en colores fuertes:

c)

d)

Rf =

2.3
=0.51
4.5

e)

Rf =

2.75
=0.61
4.5

f)

Rf =

3.2
=0.71
4.5

Rf =

3.6
=0.8
4.5

g)
h) CONCLUSIONES:
La cromatografa en capa fina es uno de los mtodos ms verstiles de anlisis
cromatogrfico para la separacin e identificacin de sustancias qumicas. Es un
instrumento de separacin sencillo, rpido y efectivo para el anlisis cualitativo y
cuantitativo.

El factor que mas influye en la separacin de los componentes en este tipo de

cromatografa es la polaridad de estos compuestos.
La placa esta formada por una capa de gel de slice, una sustancia muy polar, y por
lo tanto atraer en mayor cantidad a los componentes mas polares.
i) WEBGRAFIA:
http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina
http://es.scribd.com/doc/14172689/5-Cromatografia-en-Capa-Fina
http://www.merckmillipore.com/chemicals/thin-layer-chromatography-tlc-andhptlc/spanish/c_46yb.s1LzOMAAAEWuOAfVhTl
http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/fina.htm
http://html.rincondelvago.com/cromatografia-en-capa-fina.html
http://www.slideshare.net/yerga/cromatografia-de-capa-fina
j)