Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
137
INTRODUCCION
Los mtodos analticos que se
apliquen para producir datos de
composicin qumica de alimentos
deben ser apropiados, utilizar tcnicas
analticas exactas y ser realizados por
analistas entrenados.
La seleccin de un mtodo analtico
debe ser realizada por el consejero
cientfico del programa de base de
datos, pero esta responsabilidad debe
ser compartida con el analista.
Si se considera que el principal
objetivo de la base de datos de
composicin de alimentos es
nutricional, es evidente que el mtodo
de anlisis seleccionado para un
nutriente debe reflejar lo ms
fielmente posible el valor nutritivo del
alimento. En esta eleccin de un
mtodo particular, se debe conocer, en
primer lugar la qumica del nutriente,
la naturaleza del sustrato alimenticio a
ser analizado, el efecto del
procesamiento y la preparacin sobre
la matriz del alimento y en el
nutriente, y el rango esperado de
concentracin del nutriente. El
segundo requisito es comprender las
implicancias nutricionales del nutriente, lo cual incluye su rol, su distribucin en los alimentos y su
importancia relativa en alimentos
individuales en el suministro dietario
total del nutriente.
El proceso analtico se puede
considerar dividido en 3 etapas: i)
operaciones previas (muestreo, acondicionamiento, disolucin, separaciones, reacciones analticas y otras); ii)
Medicin y traduccin de la seal
analtica mediante el uso de
instrumentos
y; iii) toma y
tratamiento
de datos. La calidad de los resultados
depende de la calidad de las
diferentes
etapas
del
proceso
En la eleccin de un mtodo se debe
focalizar la atencin en los principios
analticos involucrados, ms bien que
en el grado de sofsticacin del
instrumento. Muchas veces un
mtodo con uso de instrumentos
modernos puede producir valores
menos confiables que el mtodo
tradicional que pretende reemplazar y
es preferible desarrollar programas
que aseguren la calidad de los datos
obtenidos.
Suele suceder tambin que las
legislaciones de alimentos se basen en
un mtodo estandarizado oficial que
puede no ser el ms adecuado desde el
punto de vista nutricional y, por tal
motivo, se deben tomar decisiones
individuales en cada caso.
Especificidad o selectividad
Entre los atributos a considerar en
la
calidad de un mtodo se deben
mencionar aquellas caractersticas que
son bsicas: confiabilidad, aplicabilidad, especifidad, exactitud, precisin,
detectabilidad y sensibilidad.
Confiabilida
d
Es un trmino general cualitativo que
expresa el grado de cumplimiento
satisfactorio de un mtodo analtico
en trminos
de
sus
variados
atributos
tcnicos (aplicabilidad, exactitud,
precisin, sensibilidad y detectabilidad), siendo por lo tanto, un
concepto compuesto.
La especificidad se refiere a la
propiedad del mtodo de producir
una
seal
medible
la
presencia
del debida
analito, slo
libre a de
interferencia de otros componentes en
la matriz de la muestra.
El
objetivo
del
anlisis
es
determinar
cul de estos atributos es importante y
cul puede estar comprometido.
Ejemplo: si se desea analizar un
Exactitud
Es la cercana del valor analtico al
"valor verdadero" de concentracin
del compuesto de inters en el
material bajo examen. Es la concor-
139
Desviacin relativa:
Desviacin:
Recuperacin:
= valor promedio X
= valor verdadero
De todas ellas, sin lugar a dudas, la
ms utilizada es la recuperacin.
Si bien el valor verdadero de la
concentracin no se conoce sino que
slo puede estimarse, es posible
preparar una muestra por un
procedimiento ms exacto que el
evaluado (por pesada, dilucin en
El sistema, evaluando la
dispersin de al menos 6
inyecciones del estndar,
por ejemplo en tcnica HPLC
141
con
la probabilidad
indicada.
Cuando el nmero de muestras es
pequeo (menos de 30), las medidas
independientes y la distribucin
normal se calculan de acuerdo a la
distribucin t de Student:
VALIDACION DE
METODOS
An los mtodos bien establecidos
necesitan ser validados por los
analistas usando el personal, reactivos
y equipos del laboratorio cuyo mtodo
se quiere validar.
Detectabilidad
Es la cantidad mnima de una
sustancia (definida en trmino de
cantidad absoluta o concentracin)
Sensibilidad
La validacin
puede hacerse
analizando un conjunto de muestras
que han sido analizadas por otro
mtodo o por otro laboratorio. El
analista debe familiarizarse con un
mtodo y asegurarse que ha alcanzado
142
Grfico 1
Respuesta en funcin de la concentracin del analito Atributos de los
mtodo
selectividad
linealidad
precisin
exactitud
sensibilidad
robustez
Grfico 2
Rectas de regresin del analito y analito ms matriz para HPLC
BIBLIOGRAFIA
1. Quattrocchi, O.A.; Abelaira, S. L.
and Laba, R.F. 1992. Introduccin a
la HPLC; Aplicacin y prctica.
Buenos Aires,
Argentina, Artes
Grficas Farro
2. Euchem and Welac. 1993.
Acreditation
for
Chemical
LaboTatories.
3. Miller, J.C. and Miller, J.N. 1988.
Statistic of Analytical Chemistry.
John Wiley & Sons.
4. Garfield, F.M. 1991. Quality
Assurance Principies for Analytical
Laboratories. AOAC International.
146
CAPITULO 14
147
HUMEDAD
La determinacin de humedad es un
paso obligado en el anlisis de
alimentos (1,2). Es la base de
referencia
que permite: comparar valores;
convertir a valores de humedad tipo;
expresar en base seca y expresar en
base tal como se recibi.
Por estas razones debe seleccionarse
cuidadosamente el mtodo a aplicar
para la determinacin de humedad en
un alimento, ya que un mismo mtodo
no sirve para todos los alimentos.
En general, los ms usados aplican un
cierto grado de calor. El alimento
sufre cambios que pueden afectar el
valor obtenido como humedad. Se
pierden compuestos voltiles junto con
el
agua,alcohol, aceites esenciales y
como
materia grasa.
En el Cuadro N 1 se encuentra un
resumen de los mtodos ms usados
para la determinacin de humedad en
alimentos, sealando brevemente sus
ventajas, limitaciones y aplicaciones.
ENERGIA
Los mtodos ms usados (3)
son:
1. Bomba
calorimtrica
Requiere correcciones por el calor
producido por solubilizacin de los
xidos de azufre y nitrgeno.
La calibracin se realiza
generalmente
con cido benzoico como
patrn termoqumico.
Los valores obtenidos son los valores
brutos de combustin y que deben
diferenciarse de los valores de energa
metabolizable, que habitualmente se
emplean en nutricin.
148
Cuadro 1
Mtodos mas usados para la determinacin de humedad
Temperatura C
Tiempo
Limitaciones
Ventajas
Aplicaciones
3 hrs.
Peso constante
5mg
Rpido
Semillas oleaginosas
Mayora de los alimentos
Mtodo Universal
METODO
DESECACION POR ESTUFA
130 1
105 1
60 a presin reducida
grasas. Variante de agregar arena
tanto a 105 C como a 60C
y a presin reducida *
Facilita la determinacin.
Alimentos con aceites esenciales.
Mayor superficie para la salida Alimentos con contenido graso
de la humedad general.
importante. Alimentos en general.
HORNO MICROONDA
Rpido
KARL FISHER
Rpido
NMR
Rpido
LIOFILIZACION
No altera el producto
Rpido. Determina
slo la humedad.
DETERMINACION
CON ARRASTRE
CONXILOLO
TOLUENO (MET.
DEANYSTARK)
Energa bruta
17
Materia grasa
Monosacrido
Disacrido
Almidn y glicgeno
Alcohol etlico
Glicerol
Acido actico
Acido ctrico
Acido lctico
Acido mlico
Acido qunico
9
3,75
3,94
4,13
7
4,31
3,49
2,47
3,62
2,39
2,39
37
16
16
17
29
18
15
10
15
10
10
150
Problema de los
carbohidratos
Otras tablas miden los carbohidratos
disponibles, no calculan por
diferencia. Calculados como
monosacridos usan
3,75 kcal o 16 kJ/g.
Fibra diettica
Se reduce la energa aparente
disponible de grasa y protena en 23%
con ingestas moderadas y en un 4-6 %
con ingestas altas
ALCOHOL ETILICO
Se pueden aplicar varios mtodos (1).
A continuacin se resear
brevemente la base de ellos.
1.
Hidrometra
El contenido de etanol se puede
medir
en el destilado a partir de un volumen
de la muestra exactamente medido.
Los azcares reductores no son
destilables. Interfieren el S02 y el
cido actico a los niveles que se
sealan a continuacin:
Niveles de S02 superiores a 200
mg/1
2. Mtodo
densitomtrico
Requiere de un equipo especial. Mide
el peso especfico de la muestra, por
el cambio de frecuencia de oscilacin
en un tubo en U comparado con dos
estndares.
El peso especfico se convierte a
porcentaje de etanol a 15,56C. Se
aplica a destilados entre 25-79
alcohlicos.
El control de la temperatura y
presin
son factores importantes a considerar
en la determinacin.
3. Mtodo
Por esta razn las muestras refractomtrico
Ocupa el refractmetro de
deben
neutralizarse antes de la destilacin. inmersin.
La determinacin se efecta por Debe tenerse un muy buen control de
medio de un hidrmetro calibrado y se la temperatura a 15,56C. A
151
Actualmente
se
dispone
de
mezclas
preparadas. Debe tenerse precaucin
en la medicin cuantitativa de
volmenes muy pequeos de reactivo
La reaccin se desplaza a la derecha
en
medio
alcalino,
atrapando
el
acetaldehido formado y luego
152
.
-
materia insaponificable
esteroles
cidos grasos
pigmentos carotenoides
vitaminas liposolubles A, D, E,
K
Para cada uno de estos temas se
dispone de diversas metodologas que
Dependiendo de la longitud de onda se
expondrn
brevemente
a
que se elija, se debe tener la continuacin. Los dos ltimos
precaucin de que la concentracin de sern
etanol sea de 0,01 a 0,12g/l (365 nm) tratados en otra seccin.
o de 0,005 a
0,06g/l(340o334nm).
1. Materia grasa
En general en alimentos lquidos se total
recomienda clarificar y filtrar.
En el Cuadro 3 aparece un resumen
de
El mtodo es muy sensible, debe
los mtodos ms empleados en la
tenerse especial cuidado con el extraccin de materia grasa total. Se
agua empleada que debe estar libre de ha
sealado
brevemente
sus
etanol. Igualmente se recomienda limitaciones, ventajas y aplicaciones.
tapar las cubetas en el momento de la
lectura. El etanol es muy voltil. 2. Materia
Debe trabajarse en atmsfera libre de insaponificable
etanol. Para controlar el mtodo se Es un dato que normalmente se
recomienda emplear una solucin determina cuando se van a cuantificar
patrn de etanol.
esteroles u otros componentes que
se encuentran en la materia insaponificable.
LIPIDOS
Mtodos
Desde el punto de vista de una base
de
Generalmente se aplica mtodo
datos de composicin de alimentos, el AOAC- AOCS o Comunidad
anlisis y determinacin de los dife- Europea
rentes componentes lipidcos de un (1,6). Se tienen las siguientes etapas:
alimento encierra una serie de saponificacin
desafos y problemas.
lavado
Entre las determinaciones ms
extraccin con ter de petrleo,
frecuenter etlico
tes se pueden sealar:
evaporacin del solvente
materia grasa
pesada del residuo
total
153
Limitaciones o
inconvenientes
Debe asegurarse una completa saponificacin, para lo cual la preparacin
del KOH alcohlico es importante.
Debe realizarse una cuidadosa
extraccin con los
solventes.
Evitar los problemas de separacin de
fases, formacin de emulsiones.
Realizar un lavado exhaustivo para
retirar jabones.
Proceder a una cuidadosa evaporacin
del solvente y control del residuo final
por pesada, que corresponde a la
materia insaponificable.
3. Esteroles por GLC
a) Mtodode la
Comunidad
Europea (6)
El mtodo se basa
en:
Saponificacin de la materia grasa con
KOH alcohlico, a la cual se adiciona
alfa colestanol como patrn interno.
Extraccin de la materia insaponificable con ter etlico.
Separacin de la fraccin de
esteroles
del insaponificable extrado mediante
cromatografa en placa de slica gel
bsica.
154
Cuadro 3
Mtodos para determinar materia grasa total
Mtodo
Extraccin con un solvente
Continuo (BUTT)
Discontinuo (SOXHLET)
Eter etlico, ter de petroleo, alcoholes
Automtico (FOSS-LET
FAT ANALYZER) solvente
Tetracloroetileno
Limitaciones
Ventajas y aplicaciones
Solventes inflamables
Debe trabajarse sobre muestra seca 0 de muy
baja humedad, menos de 8%.
Equipo especial
Mtodos volumtricos
Carbonizacin selectiva con H2S04 concentrado
Otros mtodos
Equipo especial
Cereales. Leche.
NMR
4. Acidos
grasos
El anlisis de los cidos grasos de
cualquier alimento requiere de las
siguientes etapas:
c) Mtodo enzimtico
d) Contaminacin y dao de
columna GLC proveniente
muestras contaminadas o
restos de los reactivos
derivatizacin.
Los mtodos de derivatizacin se
pueden dividir en cuatro categoras
(8):
catlisis bsica
-
la
de
de
de
a) Catlisis
bsica
Metxido de sodio en metanol
anhidro
Ventajas
Rpido,
puede
efectuarse
a
temperatura
ambiente. Convierte los triglicerdos o
acilgliceroles directamente a steres
metlicos (transesterificacin).
No
produce
isomerizacin
de
dobles
enlaces. No libera el aldehido del
plasmalgeno. No transesterifca ni
esfingolpidos ni colesterol.
Desventaja
s
No convierte los cidos grasos libres
a
steres metlicos. Por lo tanto no sirve
para muestras de materias grasas con
elevada acidez.
Debe trabajarse en medio anhidro.
La
presencia
de
agua
produce
saponificacin lo cual resulta en
157
ajenos
Reacciona
conplasmalgenosformando
aldehido.
Reacciona con colesterol formando
colesterolmetilster y colestadieno.
El reactivo es caro e inestable. Debe
refrigerarse. El empleo de BF3 antiguo
o concentrado produce prdidas de
cidos grasos poliinsaturados.
Cloruro de acetilo en
metanol
Ventajas
Presenta buenos resultados con leche y
aceites vegetales sin extraccin previa
de los lpidos.
Comparable al BF3-metanol para
transesterifcar los colesteril esteres, no
produce compuestos extraos.
Desventaj
a
Reactivo muy txico. Se puede usar
slo si es estrictamente necesario.
Es explosivo. Forma compuestos
extraos reaccionando con dobles
enlaces o grupos carbonilos.
d) Otros mtodos de
esterificacin
Se han buscado nuevos reactivos con
el
objeto de obtener mas rpidamente
los steres metlicos de los cidos
grasos.
1. Utilizacin de sales cuaternarias de
amonia
Se han usado sales cuaternarias de
amonio fuertemente bsicas como:
-
hidrxido de m-trifluorometilfeniltrimetilamonio
(TFMPTAH)
c) Diazometano
hidrxido de
trimetilfenilamo
(TMPAH)
hidrxido de trimetilamonio
(TMAH)
Desventaja
Ventaja
s
Es un mtodo rpido casi instantneo a
temperatura ambiente.
Esterifica los cidos grasos libres en
presencia de metanol.
El exceso de reactivo se elimina por
evaporacin bajo N2.
Ventajas
Se produce la transesterificacin de
los
acilglicexoles o triglicridos a steres
metlicos de cidos grasos por pirlisis
en la columna GLC.
La transesterificacin se efecta en
una
etapa, no se requiere etapa de
158
160
Gas
portador
El hidrgeno tiene ventajas como
gas
portador para las columnas capilares
de tubo abierto en trminos de
eficiencia.
Problema:
detectar
prdidas o escapes permanentemente
por seguridad. El helio es ms seguro
pero ms costoso en diversos pases.
Los gases deben pasarse a travs
de
trampas de oxgeno y humedad antes
de la columnas para dar mayor
estabilidad a la lnea base cuando se
trabaja a altas sensibilidades y para
prolongar la vida de la
columna.
Para
columnas
empacadas, nitrgeno con menos de 5
ppm de oxgeno es adecuado. El
argn es ms caro que el nitrgeno y
El
horno
Deber tener un dispositivo
altamente
sensible para controlar la temperatura,
BIBILIOGRAFI
A
1. AOAC. 1990. Official Methods of
Analysis. 15 ed. USA.
2. Chile. Instituto Nacional
Normalizacin. 1988. NCh 484
162
de
CR 88; Determinacin de la
humedad y materias voltiles en
granos o semillas oleaginosas.
Santiago.
3. Greenfield, H. and Southgate,
D.A.T. 1992. Food Composition Data.
Production, Management and Use.
London, Elsevier Applied Science.
4. Bligh,E.G. and Dyer,W.J. 1959.
A rapid method of total lipid
extraction and purification. (Can. J.
Biochem. and Physiol. 37: 911-917).
5. Folch, J.; Lees, M. and Stanley,
G.H.S. 1957. A simple method for
the isolation and purification of
163