Alessandra Vitelli de Araujo

DOENA DO BICO E DAS PENAS: AVALIAO EM PSITACDEOS

NATIVOS APREENDIDOS EM MINAS GERAIS.

Dissertao apresentada Universidade Federal de

Minas Gerais, como requisito parcial para
obteno do grau de Mestre em Cincia Animal.
rea: Medicina Veterinria Preventiva
Orientador: Prof. Nelson Rodrigo da Silva Martins

Belo Horizonte
Escola de Veterinria da UFMG
2011

A663d

Araujo, Alessandra Vitelli de, 1984Doena do bico e das penas: avaliao em psitacdeos nativos apreendidos em Minas

Gerais / Alessandra Vitelli de Araujo. 2011.

58 p. : il.
Orientador: Nelson Rodrigo da Silva Martins
Dissertao (mestrado) Universidade Federal de Minas Gerais, Escola de
Veterinria
Inclui bibliografia
1. Papagaio (Ave ) Doenas Teses. 2. Fgado Histopatologia Teses. I. Martins,
Nelson Rodrigo da Silva. II. Universidade Federal de Minas Gerais. Escola de
Veterinria. III. Ttulo.
CDD 636.686 5
CDD 636.686 089 6

DEDICATRIA
Aos meus pais que sempre sonharam os meus sonhos.

AGRADECIMENTOS
Deus, primeiramente, por permitir o convvio com uma famlia e pessoas maravilhosas.
Aos meus pais pelo apoio incondicional s minhas escolhas, pelo carinho e amor, por me
entender e respeitar.
Ao meu av Adair (in memoriam) e minha av Neusa, por serem mais que avs, meus
segundos pais.
Aos tios e tias, primos e primas, especialmente tia Lau, ao tio Z e tia Maria.
Aos amigos to importantes em todos os momentos da minha vida.
Universidade Federal de Minas Gerais e Escola de Veterinria, pela oportunidade para
realizao desse trabalho de mestrado e ao CNPq pela bolsa concedida.
Ao meu orientador, Professor Nelson Rodrigo da Silva Martins, pelos ensinamentos, pela
pacincia, experincia e exemplo de profissional e pessoa.
Ao Professor Jos Srgio de Resende pela presena sempre constante, pelos momentos de
descontrao e pelos ensinamentos.
s Professoras Bernadete Miranda dos Santos, Tania Raso, Roselene Ecco e ao Professor
Maurcio Resende pela ajuda nas interpretaes dos resultados, materiais e reagentes cedidos e
pelos ensinamentos.
Aos colegas do Setor de Doena das Aves, em especial Danielle Andery pela cumplicidade,
companhia, amizade e participao de momentos importantes durante esses dois anos, Sandra
Marin pelos ensinamentos, pacincia, disponibilidade e amizade durante todo o perodo do
mestrado, ao Daniel Vilela, por ter aberto as portas do IBAMA, pelos ensinamentos,
participao nas anlises laboratoriais e amizade, aos amigos Marcus Vincius, Francisco Carlos
(Chiquinho), Marcela Ortiz, Rogrio Donatti, Flvio Resende, Andr Fernandes, Claiton
Pereira, Renata Rios, Alexis Gomes, Carolina Galvo, Letcia, Carolina, Brbara Tocantins e ao
funcionrio Cludio Rocha Pblio, pelos bons momentos vividos.
Ao Bruno Dos Santos Alves Figueiredo Brasil pelo sequeciamento dos materias e ajuda nas
interpretaes e submisses ao Genbank.
COMECE FAZENDO O QUE NECESSRIO, DEPOIS O QUE POSSVEL, E DE
REPENTE VOC ESTAR FAZENDO O IMPOSSVEL.
So Francisco de Assis

Sumrio
1
1.1
1.2
1.2.1
1.2.2
1.2.3
1.2.4
1.2.5
1.2.6
1.2.7
1.2.7.1
1.2.7.2
1.2.7.3
1.2.7.4
1.2.7.5
1.2.8
1.2.9
2
2.1
2.2
3
3.1
3.2.
3.3
3.4
3.5
3.6
3.7

3.8
3.9
3.9.1
3.9.2
3.9.3
3.9.4
3.9.5
3.10
3.11
4
4.1
4.2
4.2.1
4.2.2
4.3
4.4
5
6
7

RESUMO..........................................................................................................................
ABSTRACT......................................................................................................................
INTRODUO................................................................................................................
PSITTACIFORMES..........................................................................................................
DOENA DO BICO E DAS PENAS (PBFD)..................................................................
A DOENA.......................................................................................................................
HISTRICO......................................................................................................................
ETIOLOGIA......................................................................................................................
EPIDEMIOLOGIA............................................................................................................
PATOGENIA E TRANSMISSO....................................................................................
SINAIS CLNICOS............................................................................................................
DIAGNSTICO.................................................................................................................
DIAGNSTICO SUGESTIVO E CONFIRMATRIO....................................................
HISTOPATOLOGIA.........................................................................................................
HEMAGLUTINAO E INIBIO DA HEMAGLUTINAO (HA E HI)................
REAO EM CADEIA PELA POLIMERASE (PCR)....................................................
HIBRIDIZAO IN SITU.................................................................................................
DIAGNSTICOS DIFERENCIAIS..................................................................................
TRATAMENTO E PROFILAXIA....................................................................................
OBJETIVOS.....................................................................................................................
OBJETIVO GERAL..........................................................................................................
OBJETIVOS ESPECFICOS.............................................................................................
MATERIAL E MTODOS.............................................................................................
LOCAL DE EXECUO DO PROJETO.........................................................................
AVES.................................................................................................................................
AMOSTRAGEM...............................................................................................................
CONTENO DAS AVES...............................................................................................
EXTRAO DO DNA......................................................................................................
DETERMINAO ESPECTOFOTOMTRICA DE CONCENTRAO DO DNA....
CONDIES DE REAO EM CADEIA PELA POLIMERASE (PCR) PARA
AMPLIFICAO DE PARTE DO GENOMA DO CIRCOVRUS DOS
PSITACDEOS..................................................................................................................
ANLISE DOS PRODUTOS AMPLIFICADOS EM PCR.............................................
SEQUENCIAMENTO.......................................................................................................
REAO DE SEQUENCIAMENTO...............................................................................
MONTAGEM E EDIO DAS SEQUNCIAS NUCLEOTIDICAS.............................
BUSCA DAS SEQUNCIAS SIMILARES EM BANCOS DE DADOS........................
ALINHAMENTO DAS SEQUNCIAS...........................................................................
ANLISES FILOGENTICAS........................................................................................
HISTOPATOLOGIA.........................................................................................................
PREVALNCIA................................................................................................................
RESULTADOS E DISCUSSO.....................................................................................
PCR....................................................................................................................................
SEQUENCIAMENTO.......................................................................................................
ANLISE DE SEQUNCIA DE NUCLEOTDEOS E ANLISE DA SEQUNCIA
DEDUZIDA DE AMINOCIDOS...................................................................................
ANLISE FILOGENTICA.............................................................................................
HISTOPATOLOGIA.........................................................................................................
PREVALNCIA................................................................................................................
CONCLUSES...............................................................................................................
BIBLIOGRAFIA..............................................................................................................
ANEXOS...........................................................................................................................

10
10
11
11
13
13
14
14
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22
24
24
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26
26
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29
29
30

30
31
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32
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33
33
33
33
34
34
40
40
41
43
47
49
50
56

Tabela 1 Tabela 2 Tabela 3 Tabela 4 -

LISTA DE TABELAS
Locais de coleta, nmero e tipo de amostra e porcentagem de aves
positivas para PBFD.......................................................................................
Nmero de amostras e porcentagem de positivos para PBFD por tipo de
material coletado.............................................................................................
Avaliao clnica e deteco molecular do DNA de BFDV por PCR em
psitacdeos com problemas de empenamento................................................
Similaridade de nucleotdeos do gene da protena VP1 nos isolados
brasileiros
comparados
com
estipes
descritas
em
outros
pases...............................................................................................................

35
35
36

43

Tabela 5 -

Similaridade entre aminocidos dos genes da protena VP1 nos isolados

brasileiros comparados com outros encontrados no mundo........................... 44

Tabela 6 -

Prevalncia de BFDV por PCR, tendo em conta os grupos taxonmicos......

Quadro 1 Quadro 2 Quadro 3 Quadro 4 Quadro 5 Quadro 6 Quadro 7 Quadro 8 Quadro 9 -

Figura 1 Figura 2 -

Figura 3 Figura 4 -

LISTA DE QUADROS
Papagaios brasileiros considerados ameaados, de acordo coma IUCN Red
List..............................................................................................................
Espcies do gnero Circovirus que afetam aves............................................
Caractersticas fisicas e quimicas de CAV e BFDV.....................................
Espcies de aves que podem ser infectadas pelo BFDV mundialmente......
Prevalncias de PBFD em diferentes pases (Piarra, 2009 modificado).....
Causas de perda de penas em psitacdeos (Piarra, 2009).............................
Locais de coleta, nmero e tipo de amostras dos psitacdeos........................
Iniciadores, sequncias de bases e localizao genmica dos primers
utilizados no estudo......................................................................................
Alteraes macro e microscpicas em papagaios Amazona aestiva
positivos por PCR para o vrus da doena do bico e das penas.....................

LISTA DE FIGURAS
Micrografia eletrnica de partculas do vrus da PBFD negativamente
coradas (Kondiah, 2004).............................................................................
Apresentao esquemtica do genoma BFDV. ORFs so rotuladas de
acordo com sua localizao sobre o vrus (V) ou complementares (C).
Apenas as duas principais ORFs codificando a protena Rep (ORF V1) e
da protena capsidial (ORF C1) so mostradas. (Niagro et al., 1998)........
Posio e orientao dos primers utilizados para a amplificao de ORF1
do genoma do BFDV..................................................................................
Eletroforese em gel de agarose a 1,5%, corado com brometo de etdeo
mostrando o segmento esperado de 717 pb da ORF 1, de produtos
amplificados de amostras de fgado de Amazona aestiva. Canaletas PM
peso molecular (100 pb), C+ controle positivo, C-controle negativo, 1, 2,
3, 4 e 5 amostras de campo.........................................................................

47

13
16
16
19
20
27
29
31
45

15

17
32

34

Figura 5 Figura 6 Figura 7 Figura 8 -

Figura 9 -

Figura 10 -

Figura 11a
Figura 11b -

LISTA DE FIGURAS
Arara Canind (Ara ararauna) do CETAS de Belo Horizonte positiva
para PBFD segundo PCR............................................................................
Arara Canind (Ara ararauna) com penas disformes, quebradias,
ausncia de penas na asa.............................................................................
Arara Canind (Ara ararauna) com penas distrficas, ausncia e quebra
de penas, especialmente visveis na cauda..................................................
Psittacula krameri (Ring Neck) positiva para BFDV por PCR e
sequenciamento. Ave com ausncia de penas na regio toraco-abdominal
com 1ano de idade e infeco crnica.........................................................
Dendograma construido pelo mtodo de neighbor-joining, usando o
modelo de substituio de nucleotdeos Kimura-2 parmetro,
implementado no programa Mega 5.0. Os nmeros representam os
valores de Bootstrap (1000 reamostragens) em que 70 so considerados
confiveis. Amostras deste identificadas com BH 632 e BH 215...............
Agrupamento entre amostras de PBFD do presente estudo e de outras
partes do mundo depositadas no GenBank com base no segmento de 210
aminocidos da regio que codifica a protena VP1. O dendograma foi
construdo pelo mtodo de neighbor-joining, usando modelo de
substituio de aminocido do JTT implementados no programa MEGA
5.0. Os valores de reprodutibilidade das anlises esto apresentados em
porcentagens e so referentes a 1000 repeties (Bootstrap)......................
Fgado ave 412. reas com infiltrado linfoplasmocitrio perivascular.
Fgado ave 412. reas com infiltrado linfoplasmocitrio e hepatcitos
com colorao amarelada sugestiva de hemossiderina...............................

37
37
38

38

41

41
46
46

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

APV
BFDV
Bp
CaCV
CAV
CETAS
CITES
Cm
CyCV
g/dl
DNA
dNTP
DuCV
E. coli
EDTA
ELISA
EUA
EV
FiCV

Avian polyomavirus
Beak and feather disease virus
Pares de Base
Circovrus de canrio
Chicken anemia vrus
Centro de Triagem de Animais Silvestres
Conveno sobre o Comrcio Internacional das Espcies da Fauna e da Flora Silvestres
Ameaadas de Extino
Centmetro
Circovrus de Cisne
Gramas por decilitros de volume
cido Desoxirribonucleico
Trifosfato Deoxyribonucleotdeo
Circovrus de pato
Escherichia coli
cido etilenodiamino tetra-actico
Enzyme-linked immunosorbent assay
Estados Unidos da Amrica
Escola de Veterinria
Circovrus de tentilho

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

GoCV
GuCV
HA
HAU
Hb
HI
IBAMA
ICB
ICTV
IM
IUCN
kb
kDa
KOH
Mg2+
Min
ml
mm
mM M
N
nm
n
ORF
PAGE
PBFD
PBS
PCR
PiCV
RaCV
RT-PCR
Rpm
S
ss-DNA
StCV
TE
UFMG
UV

Circovrus de ganso
Circovrus de gaivota prateada
Hemaglutinao
Unidades de hemaglutinao
Concentrao de hemoglobina
Inibio da hemaglutinao
Instituto Brasileiro de Meio Ambiente
Instituto de Cincias Biolgicas (UFMG)
International Committee on Taxonomy of Viruses
Intramuscular
Unio Internacional para a Conservao da Natureza
Milhares de pares de bases de nucleotdeos
Kilodalton
Hidrxido de Potssio
ons de magnsio
Minutos
Mililitro
Milmetro
Millimolar
Molar
Normalidade
Nanmetro
Nmero
Open reading frame
Polyacrylamide gel electrophoresis
Psittacine beak and feather disease
Phosphate buffered saline
Polymerase chain reaction
Circovrus de Pombo
Circovrus de corvo australiano
PCR em tempo real
Rotaes por minuto
Segundos
DNA fita simples
Circovrus de estorninho
Tris-EDTA
Universidade Federal de Minas Gerais
Ultravioleta

RESUMO
Um estudo de ocorrncia da doena do bico e das penas (PBFD) foi desenvolvido em psitacdeos
mantidos em centro de triagem de animais silvestres (CETAS-IBAMA) pela deteco do genoma do vrus
da PBFD (BFDV) por PCR em fgados (n=140), sangue (n=46) ou swab cloacal (n=144), sendo parte das
aves estudada em mais de uma amostra. Foram avaliadas 190 aves, sendo 12 positivas para o genoma de
BFDV. A prevalncia de BFDV foi de 6,2% em Amazona aestiva e 33,3% em Ara ararauna. No foi
detectado o DNA de BFDV no fgado de Aratinga leucophtalma, Pionus maximiliani, Guarouba
guarouba, Amazona amazonica, Amazona vinacea, Amazona rhodochoryta e Anodorhynchus
hyacinthinus. Na grande maioria dos casos de alopecia no foi detectado BFDV. A histopatologia dos
fgados foi inconclusiva. Houve similaridade de 98% entre as sequncias das estirpes locais com
sequncias de isolados descritos na frica do Sul, ustria e Japo, podendo ser estirpes de ocorrncia
mundial, potencialmente chegadas ao Brasil com o comrcio legal e ilegal de psitacdeos. As sequncias
das estirpes de BFDV brasileiras BH 215 e BH 732 foram depositadas no GenBank (JQ649409 e
JQ649410). No foi possvel relacionar a infeco pelo BFDV com a origem geogrfica das aves. Os
ndices de ocorrncia, embora semelhantes aos encontrados por outros autores, apresentam tendncia para
mais elevados, condio, possivelmente, em parte relacionada ao estresse e concentrao de aves em
confinamento.

Palavras chave: psitacdeos, doena do bico e das penas, vrus.

ABSTRACT
A study of psittacine beak and feather disease (PBFD) occurrence was conducted in parrots captive at a
rescue and triage center for wild animals (CETAS-IBAMA), using genomic detection of PBFD virus
(BFDV) DNA by PCR in blood (n=46), cloacal swab (n=144) or liver (n=140), being part of birds
evaluated by more than one sample. Out of 190 birds studied, results indicated 12 positive for BFDV
DNA, with a prevalence of 6.2% in Amazona aestiva (n=160) and 33.3% in Ara ararauna (n=3). No
BFDV DNA was detected in livers of Aratinga leucophtalma, Pionus maximiliani, Guarouba guarouba,
Amazona Amazonica, Amazona vinacea, Amazona rhodochoryta and Anodorhynchus hyacinthinus. In
most cases alopecia was not associated to BFDV in liver. The histopathology of the livers was
inconclusive. There were 98% similarity between sequences of strains isolated sites with sequences
described in South Africa, Austria and Japan, may be strains of worldwide occurrence, potentially coming
to Brazil with the legal and illegal trade of parrots. The sequences of Brazilian strains of BFDV BH 215
and BH 732 were deposited in GenBank. It was not possible to relate the BFDV infection with the
geographical origin of birds. The rates of detection, although similar to other studies, indicate for a
tendency of elevation, possibly associated to the stress and bird concentration in captivity.

Keywords: psittacine, beak and feather disease, virus.

10

1. INTRODUO

Atualmente a doena do bico e das penas

em psitacdeos (psittacine beak and feather
disease - PBFD) tem disseminao
mundial. Foi relatada primeiramente no
continente australiano onde tambm a
doena viral mais comum em psitacdeos
selvagens (Bassami et al., 2001) e
disseminou-se em psitacdeos de companhia
na sia, Europa, frica, Amrica do Norte
e Amrica do Sul, como resultado do
comrcio mundial de aves (Borthwick,
2005).
A infeco pelo vrus da PBFD (BFDV)
enzotica nas populaes selvagens de
cacatuas australianas (Borthwick, 2005).
Embora a origem geogrfica da doena
esteja por se determinar, pode ser
potencialmente originria do continente
africano, nos gneros Poicephalus e
Agapornis (Heath et al., 2004; Khalesi et
al., 2005). Incluses virais semelhantes
PBFD foram demonstradas em pombos da
rocha (Columba livia) em 1986, antes da
primeira descrio do vrus, podendo
sugerir outra origem da infeco, assim
como psitacdeos em ilhas do Pacfico Sul
(Woods et al. 1994; Kaleta, 2007).
A doena foi tambm documentada em aves
nativas da Europa e Amrica. O comrcio
mundial de aves nativas australianas est
proibido desde os anos 50, sendo as
populaes mundiais derivadas desta poca
(McOrist et al., 1984; Piarra, 2009) e foi
h pouco tempo relatada no Brasil, em
Cacatua alba com leses compatveis no
estado de So Paulo. H aparente alta
disseminao de BFDV em psitacdeos
exticos em outros pases, e talvez no
Brasil, tendo em vista os relatos prvios e
no publicados (Werther et al., 1998).
Na Austrlia foi estabelecido um programa
governamental para conter a disperso e
prejuzo ambiental relacionado com o

BFDV, com as espcies Agapornis de

Peito-Preto
(Agapornis
nigrigenis),
Papagaio do Cabo (Poicephalus robustus) e
Periquito-andorinha (Lathamus discolor)
que correm risco de extino pela PBFD
(Borthwick, 2005).
Foram descritas infeces por BFDV em
cacatuas, papagaios ecletus (Ecletus
roratus),
periquitos
australianos
(Melopsittacus undulatus) e lordeos na
Australsia e ilhas do oceano pacfico,
sendo
os
papagaios
cinza-africano
(Psittacus erithacus) e os agapornis
(Agapornis spp.) as espcies africanas mais
afetadas (Bassami et al., 2001)..
No Brasil a doena adquire crescente
importncia para a conservao das
espcies,
reabilitao
de
aves
e
especialmente
devido
aos
grandes
contingentes apreendidos do trfico (aves
que so mantidas por um perodo de tempo
em triagem). Alguns criatrios comerciais
comumente mantm em proximidade, as
aves em reabilitao nativas e as aves
comerciais
exticas,
potencialmente
portadoras. O risco de BFDV tem sido
considerado como agravante em aves
estressadas, com outras infeces e
parasitas e com transtornos nutricionais.
O presente estudo teve por objetivo
determinar a ocorrncia de PBFD em
psitacdeos silvestres em reabilitao nos
Centro de Triagem (CETAS/ IBAMA) e da
rotina do Laboratrio de Doenas das Aves
da UFMG no estado de Minas Gerais,
utilizando uma tcnica de PCR especfica
para a deteco do DNA de BFDV viral em
aves naturalmente infectadas.

1.1. Psittaciformes
As aves psitaciformes so distinguidas das
outras ordens de aves devido s suas
caractersticas fsicas e filogenticas e,
atualmente, incluem 332 espcies e 78

11

gneros, tendo como representantes

principais as araras, papagaios, cacatuas e
maritacas. O Brasil o pas mais rico do
mundo em espcies na famlia Psittacidae
(84 espcies), possuindo desde o menor
exemplar (tuim com 12 cm) at o maior
representante (a arara-azul, com 1 m de
comprimento) sendo que 16 (Amazona
brasiliensis
Papagaio-da-cara-roxa;
Amazona pretrei - Papagaio-charo;
Amazona rhodocorytha Chau; Amazona
vinacea
Papagaio-de-peito-roxo;
Anodorhynchus glaucus - Arara-azulpequena; Anodorhynchus hyacinthinus Arara-azul-grande; Anodorhynchus leari Arara-azul-de-lear; Cyanopsitta spixii Ararinha-azul; Guaruba guarouba
Ararajuba; Pyrrhura anaca - Cara-suja;
Pyrrhura cruentata - Fura-mato; Pyrrhura
lepida coerulescens - Tiriba-prola;
Pyrrhura lepida lepida - Tiriba-prola;
Pyrrhura leucotis - Tiriba-de-orelhabranca; Pyrrhura pfrimeri - Tiriba-deorelha-branca; Touit melanonota - Apuimde-cauda-vermelha) espcies de psitacdeos
esto vulnerveis ou ameaadas de extino
(Brasil, 2003). Duas espcies esto em
condio pior: a Arara-azul-pequena
desaparecida da natureza nos ltimos 50
anos e considerada extinta, e a Ararinhaazul, extinta na natureza. Em Minas Gerais,
5 espcies de ocorrncia natural esto
ameaadas
de
extino:
Amazona
rhodocorytha Chau; Amazona vinacea Papagaio-de-peito-roxo;
Anodorhynchus
hyacinthinus - Arara-azul-grande; Pyrrhura
cruentata - Fura-mato e Pyrrhura leucotis Tiriba-de-orelha-branca (Brasil, 2003).
Dentre as espcies brasileiras destaca-se o
gnero Amazona, que segundo Sick (1997)
composto por 28 espcies, muitas delas
em processo de extino. As principais
caractersticas
que
as
distinguem
psitacdeos das outras famlias de aves so
o fato de serem aves zigodctilas (possuem
nos membros plvicos dois dedos
orientados cranealmente e dois dedos
orientados caudalmente), terem o bico

adunco e de grandes dimenses e possurem

uma regio denominada cera, onde se
abrem as narinas (Forshaw e Knight, 2006).
Algumas espcies consideradas silvestres
vm sendo criadas como domsticas
aumentando a demanda de novos pets nas
clnicas, destacando-se o papagaioverdadeiro (Amazona aestiva) (Goulart,
2006). O papagaio-verdadeiro a espcie
mais popular deste gnero por ser uma ave
socivel, relativamente inteligente e capaz
de imitar palavras humanas (Sick, 1997;
Piarra, 2009). Atualmente est classificado
no anexo II do CITES (Conveno
Internacional para o Tratado contra o
Trfico de Animais Silvestres), no sendo,
portanto, espcie considerada criticamente
ameaada.
O papagaio-verdadeiro sempre foi presena
comum nos lares do Brasil, apesar da
legislao de fauna vigente, que desde 1967
(lei n 5.197 de 3 de janeiro de 1967)
probe a captura de animais para comrcio.
Em 1997, o Instituto Brasileiro de Meio
Ambiente e Recursos Naturais Renovveis
IBAMA criou as portarias 117 e 118- de
15 de outubro de 1997 que permitiram a
criao de animais da fauna silvestre
nacional para fins comerciais. Desde ento,
um nmero crescente de criadores vm
investindo na criao de aves silvestres
(Goulart, 2006). Atualmente, a lista de aves
que podem ser comercializadas est sendo
reelaborada pelo Instituto Brasileiro de
Meio Ambiente e Recursos Naturais
Renovveis IBAMA e dever constar
nelas as espcies de psitacdeos que
podero ser criadas em cativeiro para
comercializao com mudanas na lista
antiga.
A destruio de habitats e a captura em
massa de aves silvestres levaram a ameaa
da conservao ou mesmo extino de
muitas espcies e muitos psitaciformes
foram includos no Apndice II da
Conveno sobre o Comrcio Internacional

12

das Espcies da Fauna e da Flora Silvestres

Ameaadas de Extino (CITES, 2009). Por
esta razo a sua captura est proibida,
exceto em situaes particulares que a
justifiquem, e somente os animais
acompanhados de certificados de origem
podem ser comercializados e mantidos fora
do habitat natural.

As regies neotropicais se destacam com

quase 4.130 espcies, 44% da avifauna
mundial e um grande nmero de psitacdeos
(148 espcies em 27 gneros) (Snyder et
al., 2000).
No quadro 1 esto representados os
papagaios brasileiros ameaados de acordo
com a IUCN Red List.

Quadro 1. Papagaios brasileiros considerados ameaados, de acordo com a IUCN* Red

List
Nome
Papagaio-de-cara-roxa
Papagaio Charo
Papagaio Chau
Papagaio-de-peito-roxo
Papagaio Galego
Hyacinth macaw
Arara-azul-de-lear
Maracan
Jandaia
Ararinha Azul
Ararajuba

Nome Cientfico
Amazona brasiliensis
Amazona pretrei
Amazona rhodocorytha
Amazona vinacea
Amazona xanthops
Anodorhynchus
hyacinthinus
Anodorhynchus leari
Ara maracana
Aratinga auricapilla
Cyanopsitta spixii
Guarouba (Aratinga)
guarouba
Pyrrhura cruentata
Touit melanonota

Distribuio
Brasil
Brasil
Brasil
Brasil
Cerrado do Brasil
Brasil e Bolvia
Brasil
Brasil,
Paraguai
Argentina
Paran, Brasil
Brasil
Brasil

Categoria de risco
Ameaado
Ameaado
Ameaado
Ameaado
Vulnervel
Vulnervel

Ameaado
Vulnervel
Vulnervel
Criticamente ameaado
Ameaado

Tiriba-grande
Brasil
Vulnervel
Apuim-de-caudaBrasil
Ameaado
vermelha
Apuim-de-caudaTouit surda
Brasil
Ameaado
amarela
Sabia-cica **
Triclaria malachitacea
Brasil
Vulnervel
Fonte: IUCN red list
(http://www.iucn.org/about/work/programmes/species/our_work/the_iucn_red_list/).
*International Union for Conservation of Nature; **Espcie proposta para incluso na Red List.

1.2. Doena do Bico e das Penas

(PBFD)

1.2.1. A doena
A doena do bico e das penas dos
psitacdeos, PBFD sigla em ingls para
Psittacine Beak and Feather Disease, mas
tambm denominada Psittacine Circovirus

Infection (infeco de psittacideos por

circovrus), Psittacine Circovirus Disease
(doena de psitacdeos por circovrus) a
doena viral mais comum em psitacdeos na
Austrlia (Pass e Perry, 1984; McOrist et
al., 1984; Raidal et al., 1993), onde pelo
menos uma espcie est em extino devido
presena de BFDV e foi reconhecida em
vrias espcies de aves de vida livre
australianas h mais de cem anos (Kaleta,
2007). tambm um problema para a fauna

13

onde existam aves concentradas em

cativeiro (Bassami et al., 2000; Piarra,
2009). O nome da doena foi cunhado por
Perry em 1981 (Kaleta, 2007). A maioria
das espcies da ordem Psittaciformes e
algumas outras espcies de aves so
susceptveis ao vrus (Ritchie et al., 2003).
Anormalidades nas penas, observadas em
aves livres na natureza, como em periquitos
Red-rumped (Psephotus haematonotus), j
em 1887, foram possivelmente o primeiro
relato da PBFD, muito antes da doena
receber este nome. Foi caracterizada por
uma sndrome com anormalidades de
plumagem e de bico em vrias espcies de
araras na Austrlia (Kaleta, 2007). A
doena foi diagnosticada em mais de 40
espcies de psitacdeos e embora todos os
membros
desta
famlia
parecerem
susceptveis, a doena vista mais
frequentemente nas cacatuas. (Bassami et
al, 2001). Os gneros Eclectus, Agapornis,
Calopsitta,
Melopsittacus
e
outros
Psittaciformes da sia, frica e Oceania
so mais susceptveis doena, enquanto os
Psittaciformes das Amricas Central e do
Sul so mais resistentes (Bassami et al,
2001).

1.3.2. Histrico
A doena do bico e das penas
aparentemente originou-se no continente
Oceania (Australasia), mas j foi
identificada em psitacdeos de cativeiro na
sia, Europa, frica, Amrica do Norte
(Piarra, 2009). A doena dos psitacdeos
selvagens documentada na Austrlia e Nova
Zelndia (Raidal et al. 1993; Piarra, 2009)
j foi relatada em papagaios selvagens do
cabo (Poicephalus robustus) e Agapornis
(Agapornis nigrigenis) na frica (Kock et
al., 1993; Heath et al., 2004).
Os corpsculos de incluso caractersticos
de circovrus foram demonstrados em
cortes histolgicos arquivados de pombos

da Rocha em 1986, quatro anos antes da

primeira descrio do PiCV e sete anos
antes do vrus ser identificado (Woods et al.
1994; Kaleta, 2007).
A descrio do circovrus reflete, portanto,
uma maior sensibilizao entre a
comunidade cientfica e aperfeioamento
das ferramentas de diagnstico (Todd,
2000; Kaleta, 2007).
Acredita-se que a PBFD ocorre enzotica
nas populaes de psitacdeos livres na
natureza do Velho Mundo e do Pacfico
Sul, e que a doena foi introduzida a outras
populaes susceptveis, tanto livres na
natureza como de cativeiro, pelo comrcio
(e trfico) mundial de aves para o mercado
de aves de companhia (pet) (McOrist et al.,
1984).
Grande parte dos autores considera a
doena enzotica nas populaes selvagens
de cacatuas australianas e que, depois de
instalada neste continente, a doena
espalhou-se pelo resto do Mundo (Gerlach,
1999). Segundo outros autores, a origem
geogrfica da doena continua por ser
determinada, sugerindo que possa mesmo
ser no continente africano, pois h registro
de infeco de psitacdeos selvagens neste
continente
em aves
dos
gneros
Poicephalus e Agapornis (Piarra, 2009).
No Brasil, h relato de caso em Cacatua
alba (Werther et al., 1998), com descrio
de ave com distrofia simtrica e perda de
penas. A confirmao se deu por
radiografia, patologia clnica, exame
histopatolgico e hibridizao in situ de
vrios tecidos.

1.2.3. Etiologia
O vrus responsvel pela doena
integrante do gnero Circovrus (Fig. 1) e
famlia Circoviridae. Integrantes dessa
famlia so caracterizados por partculas de

14

tamanho pequeno, sem envelope, capsdeo

em formato icosadrico, DNA fita simples
circular de aproximadamente 1,7-2,3 kb e
que podem infectar aves e mamferos
(Todd, 2000; Kaleta, 2007). As infeces
por BFDV so normalmente por
comprometimento imunolgico causando
anormalidades de penas e/ou infeces
secundrias, mas tambm podem ser
assintomticas (Todd, 2000; Kaleta, 2007).

Figura 1. Micrografia eletrnica de partculas

do vrus da PBFD (BFDV) coradas
negativamente (Kondiah, 2004).

Uma caracterstica comum dos genomas de

DNA fita simples uma estrutura potencial
em forma de haste-lao (stem-loop) que
contm uma cadeia conservada de
nonanucleotideos (TAGTATTAC) em seu
pice e o provvel ponto de incio para a
replicao (Ritchie et al., 2003).
Os
corpsculos
de
incluso
intracitoplasmticos basoflicos podem ser
vistos na bursa de Fabricius, em outros
tecidos linfides e/ou em folculos de pena
em crescimento, mas nem sempre esto
presentes (Kaleta, 2007).
O agente etiolgico da doena foi
definitivamente identificado no final dos
anos 80 (Ritchie et al., 1989) como vrus da
doena do bico e das penas (BFDV) e
includo na famlia Circoviridae. Alguns
circovrus avirios esto apresentados no
Quadro 2.

As infeces por circovrus em pombos

foram relatadas pela primeira vez em 1993
por Woods (Smyth et al., 2001). Incluses
parecidas
com
circovrus
foram
reconhecidas na bursa de pombos antes de
1986 no Canad e em 1989 na Austrlia.
Subsequentemente, infeces similares
circovrus em pombos foram reconhecidas e
caracterizadas nos Estados Unidos em
1990. Desde ento, casos de circovrus em
pombos ocorreram esporadicamente na
Califrnia e na Austrlia (Woods et al.,
1994), na Irlanda do Norte e vrios pases
europeus (Smyth et al., 2001).
De acordo com estudos estruturais os
circovrus de pombos formam matrizes
paracristalinas e semicrculos compostos de
virions de 14-17 nm de dimetro, similares
ao vrus de PBFD. Essas matrizes foram
reconhecidas pela microscopia de luz como
incluses citoplasmticas basoflicas em
macrfagos (Pass e Perry, 1984; Latimer et
al., 1991, Woods et al., 1994).
Com base no tamanho das particulas do
vrus, na associao de resultados
patolgicos e na demonstrao de baixo
nivel de homologia do DNA com PBFD, o
vrus foi incluido como membro da famlia
circovrus e designado como circovrus de
pombo (PiCV) (Todd, 2000, Smyth et al.,
2001). A colorao imunohistoquimica
indica que o circovrus de pombo
antigenicamente diferente do vrus da
PBFD (Woods et al., 1994).
O circovrus infecta pombos jovens antes da
involuo da bursa de Fabricius, podendo
ser este o primeiro stio de replicao para o
vrus. Incluses de circovrus tem sido
observadas em pombos de 4 semanas at 1
ano de idade (Woods et al., 1994, Woods e
Latmer, 2000). Nos pombos infectados a
apresentao clnica semelhante de
psitacdeos com PBFD (Woods e Latmer,
2000). A infeco viral associada alta
morbidade e baixa mortalidade (Smyth et
al., 2001). Em alguns pombos infectados

15

observa-se
a
recuperao
espontnea. O diagnstico da
dependente do reconhecimento
de incluso intracitoplasmticos
histolgicos de tecido linfides
al., 2001).

clnica
doena
de corpos
em cortes
(Smyth et

A Famlia Circoviridae possui ainda dois

outros gneros, Gyrovirus sendo nico
intergante o vrus da anemia infecciosa da
galinha (CAV), e Geminivirus constitudo
por diversos vrus que afetam plantas. As
caractersticas fisicas e quimicas de CAV e
BFDV so apresentadas no Quadro 3.

usado como modelo no estudo do circovrus

de PBFD (Schat, 2003).
Os virions de CAV so tpicos e tm 23-25
nm de dimetro, so icosadricos, no
envelopados e possuem DNA circular fita
simples (Natesan et al., 2005). Incluses
nucleares em macrfagos so observadas
frequentemente no fgado, intestino e
brnquios associadas ao tecido linfoide e
incluses citoplasmticas so observadas
em clulas epiteliais (Schat, 2003).

O vrus da anemia infeciosa das galinhas

o circovrus mais bem estudado e pode ser
Quadro 2. Espcies do gnero Circovirus que afetam aves.
Espcie de circovirus
Espcie(s) afetada(s)
CaCV
Canrio (Serinus canaria)
RaCV
Corvo Australiano (Corvus coronoides)
GuCV
Gaivota prateada (Larus argentatus)
GoCV
Ganso (Anser spp.)
DuCV
Pato (Anas spp.)
PiCV
Pombo (Columba livia)
BFDV
Psitacdeos
FiCV
Tentilho (Carpodacus mexicanus, Fringillidae)
StCV
Estorninho (Sturnus vulgaris)
CyCV
Cisne (Cygnus olor)
http://www.ictvonline.org/virusTaxonomy.asp?bhcp=1

Quadro 3. Caractersticas fisicas e quimicas de CAV e BFDV

Dimetro da Partcula (nm)
Densidade
(g.ml-1 em CsCl)
Coeficiente de Sedimentao
Tamanho do Genoma (b)
Protenas Virais (Massa)

CAV
19.1-26.5
1.33-1.37

BFDV
14-20.7
1.378

91S

2298/2319
50.000

1993-2018
26.300, 23.700,
15.900

Todd, 2000; Kondilah, 2004 modificada

16

O genoma de BFDV foi sequenciado por

dois grupos de pesquisa independentes.
Ambos publicaram resultados de que ele
possui um DNA circular, de fita nica
(ssDNA) e molcula de 1993 nucleotdeos
(Niagro et al., 1998; Ypelaar et al., 1999).
O BFDV possui genoma de 1,7 a 2,3 kb de
cadeia simples de DNA circular (dos mais
pequenos entre os vrus patognicos
conhecidos), envolvido por um capsdeo
esfrico ou icosadrico e no possui
invlucro (Heath et al., 2004; Raue et al.,
2004). O genoma deste vrus possui 7 open
reading frames (ORF) que podem codificar
sete
protenas
diferentes.
Foram
identificadas trs ORF na cadeia do sentido
paralelo (V1, V2 e V3) e quatro na cadeia
do sentido complementar (C1, C2, C3 e C4)
(Raue et al., 2004). Em partculas virais
purificadas, porm, trs grandes protenas
virais,
com
massas
moleculares
aproximadas de 26,3, 23,7 e 15,9 kDa, tm
sido relatadas (Khalesi, 2007). Baseado em
comparaes de seqncia entre circovrus
de origem diferente as ORF V1 e C1 (as de
maior dimenso) codificam as proteinas
associadas replicao (Rep) e a protena
do capsdeo, respectivamente (Kaleta,
2007).
Atualmente sabe-se que a ORF V1 (de
maiores dimenses) codifica uma protena
associada replicao viral semelhante
protena replicase encontrada no circovrus
suno (protena rep). A ORF C1
aparentemente codifica uma protena do
capsdeo e tambm semelhante
encontrada no circovrus suno (de Kloet e
de Kloet, 2004). A protena da replicao
possui entre 26 e 33 kDa e a protena do
capsdeo possui entre 23 e 28,9 kDa
(Bassami et al, 1998; Khalesi, 2007).
O papel das ORFs restantes no est ainda
bem definido no BFDV e na produo de
protenas e apresentam menor conservao
no genoma viral (Raue et al., 2004; de
Kloet e de Kloet, 2004).

Figura 2. Apresentao esquemtica do genoma

BFDV. As ORFs so nomeadas de acordo com
sua localizao no genoma viral o vrus (V) ou
complementares (C). Apenas as duas principais
ORFs codificando a protena Rep (ORF V1) e
da protena capsidial (ORF C1) so mostradas
(Niagro et al., 1998).

Diferentes gentipos e/ou estirpes foram

definidos com base nas variaes da
sequncia de DNA. Foram encontradas
variaes totais at cerca de 20% (Raue et
al., 2004, Khalesi et al., 2005). Um estudo
feito por Raue et al, (2004) indica a
possibilidade da existncia de gentipos do
vrus da doena do bico e das penas, pois
sequencias obtidas de aves de um surto
agudo de doena do bico e das penas em
lordeos foram agrupadas em ramos
diferentes da rvore gentica. O
sequenciamento de estirpes de Papagaio
Africano Cinza com desordens de
empenamento foi agrupado no mesmo ramo
enquanto
algumas
espcies
com
imunossupresso foram agrupadas em
outros ramos.
A ORF V1 mostrou ser altamente
conservada entre todos os circovrus

17

avirios. A sequncia de nucleotideos

includa na ORF V1 extremamente
semelhante nos circovirus isolados por de
Kloet e de Kloet (2004), embora tenham
sido detectadas algumas variaes. A
protena da replicao codificada pela ORF
V1 apresenta entre 86,9% e 98,3% de
identidade na sequncia de amino-cidos.
Por sua vez, a protena do capsdeo
apresenta apenas entre 76,3% e 83,3% de
conservao da sequncia de amino-cidos.
Estas
variaes
so
encontradas
comparando protenas isoladas de gentipos
distintos (Raue et al., 2004).
Segundo experimento feito por Bassami et
al. (2001) as ORF 1, ORF 2 e ORF 5 foram
as nicas comuns a todos eles. A ORF 1
codifica a protena Rep. ORF2 ou ORF 5
codificam a protena do capsdeo. Baseado
nas sequencias deduzidas de aminocidos
de ORF 2 em BFDV e de ORF 2 em PCV
(Bassami et al., 1998; Bassami et al.,
2001), concluiu-se que a ORF 2 de BFDV
codifica a protena do capsdeo (Niagro et
al., 1998).
Atualmente, reconhecida a existncia de
diferentes gentipos ou estirpes mais ou
menos adaptadas s famlias Loriidae,
Cacatuidae e Psittacidae. Apesar desta
tendncia para a relao entre gentipo e
ave, no foram encontrados casos de
especificidade na interao entre uma
estirpe viral e determinado hospedeiro
(Heath et al., 2004, de Kloet e de Kloet,
2004; Khalesi et al., 2005) com algumas
excees de aves na Australia. Baseado nos
dados de sequenciamento obtidos da ORF
V1 codificando a protena rep, h
evidncias de especificidade das cepas de
BFDV de algumas espcies (Ritchie et al.,
2003, Raue et al., 2004).
As diferenas nas manifestaes clnicas e
patolgicas de PBFD em espcies de

psitacdeos susceptveis infeco com o

vrus da doena do bico e penas (BFDV)
podem ser devidas a fatores ligados ao
hospedeiro ao invs de variao antignica
ou gentica na BFDV, no entanto, isso no
foi comprovado cientificamente ainda
(Ritchie et al., 1990; Bassami et al., 2000;
Piarra, 2009).
Inicialmente, sugeria-se que assim como o
Poliomavrus (APV), apenas sequncias de
diversidade limitadas existiam entre as
diversas estirpes de BFDV (Piarra, 2009).
Entretanto recentemente foi demonstrado
que a diversidade gentica de BFDV na
Austrlia maior do que o esperado
(Bassami et al., 2001, Raue et al., 2004).

1.2.4. Epidemiologia
A epidemiologia dos circovrus em aves de
cativeiro e de vida livre continua a ser
desconhecida. A infeco por circovrus
frequentemente subclnica ou latente e
muitas vezes o animal tem a infeco viral,
mas no suspeito (Woods et al., 1994;
Kaleta, 2007).
A PBFD uma doena que afeta menos as
aves do Novo Mundo (Hemisfrio
Ocidental - Continente Americano) do que
aquelas originrias do Hemisfrio Oriental
(aves do Velho Mundo frica,
Australsia e Pacfico) (Gerlach, 1999).
Supe-se que estes tm maior resistncia
infeco (Greenacre, 2005; Piarra, 2009).
Por existirem portadores assintomticos e
contato entre animais de diferentes
espcies, origens e idades, a disperso da
doena fica facilitada (Khalesi, 2007;
Piarra, 2009). No Quadro 4 apresentam-se
as espcies documentadas susceptveis de
infeco por BFDV.

18

Quadro 4. Espcies de aves que podem ser infectadas pelo BFDV mundialmente
Psittacidae
Arara azul e amarela
(Ara ararauna)
Arara escarlate (Ara macao)
Arara militar (Ara militaris)
Arara vermelha (Ara
chloroptera)
Jandaia de testa vermelha
(Aratinga auricapilla)
Jandaia-Sol ou amarela
(Aratinga solstitialis)
Maitaca-verde (Pionus
maximiliani)
Papagaio cinzento
(Psittacus erithacus)
Papagaio de barriga-laranja
(Neophema chysogaster)
Papagaio de frentevermelha
(Amazona autumnalis)
Papagaio de fronte azul
(Amazona aestiva)
Papagaio de fronte branca
(Amazona albifrons)
Papagaio de cabea
castanha (Poicephalus
cryptoxanthus)
Papagaio de ventre
vermelho (Poicephalus
rufiventris)
Papagaio do Cabo
(Poicephalus robustus)
Papagaio do Senegal
(Poicephalus senegalus)
Papagaio Meyer
(Poicephalus meyeri)
Papagaio preto
(Coracopsis nigra)
Papagaio vasa (Coracopsis
vasa)
Papagaio-ecletus (Eclectus
roratus)
Periquito-andorinha
(Lathamus discolor)
Periquito australiano
(Melopsittacus undulatus)

Periquito cornudo
(Eunymphicus cornutus)
Periquito de asas douradas
(Psephotus chrysopterygius)
Periquito de Bourke
(Neopsephotus bourkii)
Periquito de colar (Psittacula
krameri)
Periquito de colar de Manila
(Psittacula manillensis)
Periquito de dorso vermelho
(Psephotus haematonotus)
Periquito do prncipe de
Gales (Polytelis alexandrae)
Periquito de Bluebonnet
(Psephotus haematogaster)
Periquito encapuzado
(Psephotus dissimilis)
Periquito Port Lincoln
(Barnardius zonarius)
Periquito rei
(Alisterus scapularis)
Rosela azul ou plida
(Platycercus adscitus)
Rosela do Leste
(Platycercus icterotis)

Cacatuidae
Cacatua branca
(Cacatua alba)
Cacatua das Molucas (Cacatua
moluccensis)
Cacatua das palmeiras
(Probosciger aterrimus)
Cacatua de bico comprido
(Cacatua tenuirostris)
Cacatua de crista amarela
(Cacatua galerita)
Cacatua de crista citrina
(Cacatua citrinocristata)
Cacatua de Galah ou de peito
rosa (Eolophus roseicapillus)
Cacatua de Goffin (Cacatua
goffini)
Cacatua de Mitchell ou de
leadbeater (Cacatua leadbeateri)
Cacatua filipina (Cacatua
haematuropygia)
Cacatua gang-gang
(Callocephalon fimbriatum)
Cacatua sangunea ou pequena
(Cacatua sanguinea)
Cacatua triton
(Cacatua triton)

Rosela do Norte
(Platycercus venustus)

Caturra
(Nymphicus hollandicus)

Rosela elegante (Platycercus

elegans)
Rosela multicolorida
(Platycercus eximius)
Inseparvel de Angola
(Agapornis roseicollis)
Inseparvel de Madagscar
(Agapornis cana)
Inseparvel de faces negras
(Agapornis nigrigenis)
Inseparvel de Fisher
(Agapornis fischeri)
Inseparvel de Nyassa
(Agapornis lilianae)
Inseparvel mascarado ou da
Tanznia (Agapornis
personatus)

Loridae
Lris arco-ris
(Trichoglossus haematodus)
Lris chlorocercus
(Lorius chlorocercus)
Lris de Mitchell (Trichoglossus
haematodus mitchellii)
Lris reticulado ou de crista-azul
(Eos reticulata)
Lris de Goldie (Psitteuteles
goldiei)
Outras
Rola do Senegal
(Streptopelia senegalensis)

Periquito Barnardi
(Barnardius barnardi)
(Heath et al., 2004; Ritchie, 1995; de Kloet e de Kloet, 2004; Rahaus et al., 2008; Piarra, 2009).

19

A prevalncia de PBFD em pases europeus

foi estudada por Rahaus e Wolff (2003) e
por Bert et al. (2005). Rahaus e Wolff
(2003) determinaram uma prevalncia da
infeco de 39,2% atravs do teste por PCR
da ORF V1 de penas em psitacdeos na
Alemanha numa amostra de 142 animais.

No quadro abaixo (Quadro 5) esto

compilados alguns dados publicados sobre
a prevalncia de PBFD, inclusive dos
estudos citados acima. Esses dados so
variveis e os motivos para tal podem ser a
regio
geogrfica,
a(s)
espcie(s)
estudada(s) e a tcnica de anlise aplicada
(Piarra, 2009).

Quadro 5. Prevalncias de PBFD em diferentes pases (Piarra, 2009 modificado)

Pas
Austrlia

Prevalncia
41-94%

Mtodo
IH

Espcie(s)
Cacatuas
selvagens
Vrias

EUA

5%

PCR
Sangue

Alemanha

39,2%

PCR penas

Vrias

Itlia

8,05%

PCR
sangue e penas

Vrias

Austrlia

23%

PCR penas

Vrias com
suspeita de
infeco

Khalesi et al.,
2005

Taiwan

41,2%

PCR

Vrias

Austrlia

18,85%

PCR penas

Nova
Zelndia

3%

PCR penas
e sangue

Vrias com
suspeitas de
Infeco.
Vrias
espcies
autctones

Hsu et al.,
2006
Khalesi, 2007

Barcelona

2,6%

PCR sangue e tecidos

Vrias
espcies

Fonte
Raidal et al.,
1993
Dahlhausen e
Radabaugh,
1997
Rahaus e
Wolff, 2003
Bert et al.,
2005

Ha et al.,
2009

Piarra, 2009

(*) N/A =
no
apresentado

1.2.5. Patogenia e transmisso

O vrus eliminado pelas aves infectadas
atravs das penas e p das plumas de
descamao (naturalmente abundantes em
algumas espcies), das fezes e das
secrees do papo (Gerlach, 1999). A

transmisso pode ocorrer por inalao ou

ingesto de partculas virais ou devido
infeco do epitlio folicular da bolsa de
Fabricius (Phalen, 2006; Piarra, 2009). A
transmisso vertical foi demonstrada em
Cacatua sanguinea, em filhotes de uma ave
positiva para PBFD que teve os ovos

20

incubados e criados de forma independente

da me (Latimer et al., 1991) e tambm foi
recentemente demonstrada em periquitos
australianos (Melopsittacus undulatus) e
papagaios - de - cabea - castanha
(Poicephalus cryptoxanthus cryptoxanthus)
nos quais 20% (n=15) dos ovos
embrionados descendentes de adultos
infectados demonstraram a presena no seu
interior do BFDV por PCR (Rahaus et al.,
2008).
Nos
locais onde aves
infectadas
permaneceram o p ambiental pode ser uma
importante
fonte
de
contgio
(a
concentrao de virions pode ser elevada)
(Gerlach, 1999). O BFDV pode permanecer
vivel
em
fmites
por
perodos
relativamente prolongados (Doneley, 2003).
O quadro clnico determinado conforme a
espcie, idade, via de infeco, estado
imunolgico da ave, ttulo de anticorpos e
antgenos e o gentipo do vrus (Raue et al.,
2004). O perodo de incubao pode variar
entre 2 a 4 semanas (quando infectados
filhotes) at meses ou anos. O vrus
replicado em tecidos onde existam clulas
em diviso e foi demonstrada a sua
presena no timo, bursa de Fabricius, bao,
papo, esfago, intestino, fgado, pele,
penas, crebro e leuccitos circulantes
(Gerlach, 1999; de Kloet e de Kloet, 2004).
Ocorre a distrofia e hiperplasia do folculo
das penas, bico e unhas resultando nas
anormalidades clnicas observadas em
PBFD. H necrose e hiperplasia das clulas
da bainha e das camadas exteriores do bico
e unha (Pass e Perry, 1984; Kondiah, 2004).
A necrose dos rgos linfides e dos
leuccitos circulantes pode levar a
infeces secundrias e ao bito (Phalen et
al., 2003; Phalen, 2006).
O BFDV pode ser eliminado por uma ave
portadora, sem a demonstrao de sinais da
doena,
em
quadro
silencioso
(assintomtico) da doena (Phalen, 2006).
Nas aves infectadas subclnicas, acredita-se

que o vrus persista nas penas e clulas

epiteliais, afetando assim em menor grau
outros rgos vitais da ave (Greenacre,
2005).
O BFDV apresenta epiteliotropismo e
linfotropismo (Latimer et al., 1991). A
infeco em uma ave susceptvel resulta em
disseminao hematognica do vrus que se
inicia no epitlio folicular das penas com
anomalias de empenamento, na bursa de
Fabricius e no timo (Latimer et al., 1991).
A recuperao de PBFD clnica foi
documentada em araras (Ara spp.) e pionus
(Pionus spp.), bem como na famlia
Loriidae (Kaleta, 2007).
provvel que os vrus atinjam as clulas
precursoras T e provoquem diminuio das
populaes das clulas auxiliares (CD4) e
as clulas citotxicas (CD8) T (Adair,
2000; Ritchie, 2003) e a mortalidade
geralmente o resultado de uma infeco
secundria como citado acima.
Ao final de casos prolonagados podem ser
vistos necrose do bico e das unhas, mas
raramente ocorrem esses sinais sem a
presena anormalidades no empenamento.
Na forma superaguda da doena, achados
de necropsia podem ser mais consistentes
com septicemia aguda (Kaleta, 2007).
Nas aves com patologia no bico, necrose e
inflamao do epitlio da lngua, da
cavidade do bico e cloaca tambm j foram
reportadas (Gerlach, 1999). necropsia em
aves adultas o bao freqentemente
pequeno e tem poucos linfcitos, e
ocasionalmente pode observar-se necrose
das
clulas
reticulares.
Incluses
extracutneas do vrus de PBFD so
encontradas principalmente em macrfagos
no bico, do palato, esfago, cloaca, nariz,
lngua, glndula paratireide, medula ssea,
clulas estreladas de Kupffer do fgado,
bao e glndula tireide (Kaleta, 2007).

21

Corpsculos de incluso intranucleares e

intracitoplasmticos foram demonstrados
por colorao por hematoxilina e eosina nos
tecidos de penas, bico, timo e bursa
coletados de aves com sinais clnicos de
PBFD (McOrist et al., 1984; Latimer et al.,
1991; Gerlach, 1999).

O tipo de doena clnica (hiperaguda, aguda

ou crnica) varia na sintomatologia e de
acordo com a idade da ave, mas pode
tambm ser influenciado pela via de
infeco viral, pelo ttulo do vrus
infectante e condio da ave quando
exposto ao vrus (Kondiah, 2004).

Os
corpsculos
de
incluso
intracitoplasmticos
tm
sido
mais
relatados, mas em casos especiais em que a
infeco est no inicio, os relatos so de
corpsculos de incluso intranucleares
(McOrist et al., 1984; Gerlach, 1999).

Ambos os sexos podem ser afetados. O

curso agudo progressivo ao longo de
vrios meses ou anos e irreversvel
(Kondiah, 2004).

Alm de estarem localizados no epitlio do

folculo das penas e dos tecidos linfticos,
os corpsculos de incluso viral de PBFD
tambm foram demonstrados por anticorpos
especficos virais no palato, lngua,
glndula paratireoide, cloaca, esfago,
bao, intestino, medula ssea, fgado e
glndulas tireoide e supra-renais (Latimer et
al., 1990). As incluses intracitoplasmticas
originam-se nas clulas epidrmicas e
atingem seu maior tamanho dentro dos
macrfagos, que fagocitam essas clulas
infectadas (Latimer et al., 1991). Sugere-se
que o vrus da PBFD replicado no ncleo
das clulas epidrmicas infectadas e as
incluses so ento liberadas quando as
clulas necrticas so fagocitadas por
clulas como macrfagos na polpa e
epiderme (Gerlach, 1999).

1.2.5. Sinais clnicos

A
PBFD
pode
manifestar-se
sintomaticamente segundo dois quadros
clnicos distintos o quadro agudo e
crnico. Existe tambm o quadro
assintomtico (Phalen, 2006; Piarra, 2009)
que comum em aves do novo mundo.
Outros autores consideram trs tipos de
infeco hiperaguda, aguda e crnica
(Gerlach, 1999; Kondiah, 2004).

De acordo com alguns estudos a infeco

latente assintomtica pode ser bastante
frequente em algumas espcies de
psitacdeos da Oceania e Pacfico, onde
existem grandes diferenas na relao entre
indivduos doentes e indivduos infectados
(Ritchie et al., 2003).
Bert et al. (2005), ao estudarem a presena
de PBFD em aves de cativeiro na Itlia,
tambm
encontraram
uma
grande
prevalncia de psitaciformes infectados de
forma latente.
Pensava-se que as diferenas nas
manifestaes clnicas e patolgicas de
PBFD nas espcies de aves silvestres
susceptveis doena eram devidas a
fatores ligados ao hospedeiro e no a
fatores antignicos ou genticos (Bassami,
2001).
A forma superaguda da doena pode
ocorrer em aves neonatais encontradas em
bito, sem sinais premonitrios. Esta forma
subnotificada em aves silvestres (Kaleta,
2007). As leses histolgicas podem ser
limitadas necrose grave da bursa de
Fabricius ou timo com a presena de corpos
de incluso viral induzidos. A patologia da
pena nestes casos pode no ocorrer, ou pode
ser limitada a um edema no epitlio
folicular (McOrist et al., 1984; Latimer et
al, 1991).
O quadro agudo observado nas aves mais
jovens, nas quais a bursa de Fabricius ainda

22

no involuiu (Piarra, 2009). Os animais

com menos de um ano so particularmente
susceptveis a este quadro, que
especialmente comum em papagaios
cinzentos incubados e criados mo
(Doneley, 2003). As aves criadas pelos seus
progenitores desenvolvem o sistema imune
de forma mais competente. O contato com a
flora do material do ninho, dos excrementos
e com as secrees digestivas das aves
adultas
estimulam
o
melhor
desenvolvimento do sistema imunolgico
(Crosta, 2008 Apud Piarra, 2009). A
susceptibilidade da ocorrncia do quadro
clnico agudo nos animais jovens est mais
relacionada a fatores inerentes s aves do
que referentes a propriedades antignicas
ou genotpicas virais (Ritchie et al., 2003).

(Kaleta, 2007), embora um estudo realizado

por Schormaker et al., (2000) em papagaios
Africanos Cinza com menos de sete meses
de idade com PBFD revelou grave anemia,
leucopenia ou pancitopenia.

Em alguns casos agudos de PBFD, aves

com sintomatologia mnima nas penas
podem estar deprimidas, desenvolver
constipao ou diarreia e ir a bito em uma
semana (Gerlach, 1999).

A infeco crnica est descrita na

literatura h mais tempo e manifesta-se por
sinais clnicos que resultaram no nome da
doena do bico e penas. O quadro
progressivo e os primeiros sintomas
normalmente aparecem entre os 6 meses e
os 3 anos de idade, tendo as aves em sua
maioria mais de 8-10 meses (Phalen, 2006;
Piarra, 2009).

De acordo com a espcie da ave infectada, a

forma aguda pode ser rapidamente fatal.
Este tipo de infeco ocorre em papagaios
cinzentos africanos (Psittacus erithacus),
cacatua-de-crista-amarela
(Cacatua
galerita) e cacatua-branca (Cacatua alba)
(Phalen, 2006; Piarra, 2009).
A imunossupresso deixa o animal
susceptvel a infeces secundrias
(bacterianas, fngicas e virais), que
normalmente acabam por provocar a morte
(Doneley, 2003). A aspergilose , para
alguns autores, a infeco secundria mais
frequente resultante da imunossupresso
(Niagro, 1990; Piarra, 2009). Segundo
Doneley (2003), a hepatite por adenovrus
uma infeco secundria comum
que
ocorre devido imunossupresso causada
pelo quadro agudo da infeco por
circovrus avirio.
A hematologia e a bioqumica srica so
geralmente de pouco valor na tentativa de
estabelecer um diagnstico de PBFD

Os filhotes de cacatudeos infectados

normalmente recusam ser tocados e
manejados, pois a dor nos folculos das
penas intensa. As leses mais severas so
observadas nas aves infectadas antes da
plumagem definitiva ter comeado a
substituir a de neonato (Gerlach, 1999). O
tratamento
sintomtico
revela-se
praticamente infrutfero e a septicemia por
bactrias e fungos oportunistas
frequentemente apontada como causa de
morte (Doneley, 2003).

Os sintomas da doena crnica so

desenvolvimento anormal, simtrico e
progressivo das penas durante mudas
sucessivas, reteno da bainha das penas,
hemorragia dentro da cavidade da poupa,
fraturas no eixo das penas e plumas
anormais. Os folculos de penas tornam-se
inativos e a ave que sobrevive torna-se
careca (Kondiah, 2004).
As anormalidades na plumagem e alopecia
no so especficas de PBFD e podem ter
muitas outras causas. A abordagem clnica
de uma ave que apresente sintomatologia
condizente

complexa
e
exige
conhecimento e experincia por parte do
clnico (Molina et al., 2002 Apud Piarra,
2009).
As aves silvestres podem apresentar
colorao castanha da pele, provavelmente

23

por excessiva exposio solar da mesma.

Nos casos mais antigos pode-se observar
aplasia folicular mais ou menos dispersa
(Gerlach, 1999; Doneley, 2003).
Nos papagaios cinzentos pode-se observar o
aparecimento de penas avermelhadas
(penas de conure) intercaladas com as
penas cinzentas, o que no , no entanto,
especfico de PBFD (Gerlach, 1999). A
patologia no bico nem sempre presente
em pssaros com PBFD e parece
dependente das espcies envolvidas
(Ritchie et al., 1989 Apud Kondiah, 2004).
Mudanas semelhantes ocorrem nas unhas
que eventualmente podem vir a cair,
embora essa apresentao seja mais rara
(Kondiah, 2004).
As leses no bico so vistas mais
frequentemente em aves do gnero Cacatua
sp. e em cacatuas de Galah (Eolophus
roseicapillus) (Olsen, 2003 Apud Piarra,
2009). Tal como a afeco da plumagem,
as alteraes do bico costumam ser
simtricas (Gerlach, 1999). O desgaste
irregular e infeces bacterianas contribuem
para a diminuio da capacidade de comer e
podem levar a maior debilidade e perda de
peso (Jergens et al., 1988 Apud Kondiah,
2004).
As aves afetadas com frequncia esto
imunossuprimidas, devido infeco da
bursa de Fabricius, bao, timo e medula
ssea e na maioria das vezes morrem
devido a infeces bacterianas, parasitrias,
fngicas ou virais secundrias, no perodo
de um ano aps o incio das alteraes na
plumagem (Greenacre, 2005; Piarra,
2009).
A expectativa de vida dos animais
infectados pode, no entanto, prolongar-se
acima dos 10-15 anos em quadros menos
malignos e com assistncia e manejo
adequado (Greenacre, 2005; Piarra, 2009).
As aves brasileiras aparentemente so
assintomticas,
no
apresentando

sintomatologia clinica na maioria dos casos.

So aves que podem transmitir o vrus entre
si e para aves exticas.

1.2.7. Diagnstico

1.2.7.1. Diagnstico
confirmatrio

sugestivo

Na presena de um quadro clnico

compatvel, o diagnstico laboratorial
fundamental. Os mtodos de diagnstico
podem tambm servir para diagnosticar
quadros silenciosos e precoces ou monitorar
grupos de psitacdeos. Atualmente, a PBFD
diagnosticada atravs de PCR,
hibridizao in situ, HA e HI (Bert et al.,
2005; Phalen, 2006; Piarra, 2009). A
histopatologia utilizada como diagnstico
sugestivo. Os corpsculos de incluso no
so patognomnicos da doena. No caso da
utilizao da microscopia eletrnica com a
visualizao do vrus o diagnstico
confirmatrio. O mtodo de PCR
atualmente o mais frequentemente utilizado
no diagnstico in vivo nos pases europeus,
norte-americanos e na Oceania (Bert et al,.
2005; Phalen, 2006; Piarra, 2009) sendo
juntamente com os testes de hibridizao in
situ, HA e HI diagnstico confirmatrios da
doena.

1.2.7.2. Histopatologia
A histopatologia o mtodo de diagnstico
mais antigo de PBFD e pode ser aplicada a
microscopia ptica e eletrnica.
Esse
mtodo tem como vantagem a possibilidade
de se observar diretamente o vrus na forma
de corpos de incluso intracitoplasmticos
de 15-20 nm nas clulas epiteliais e
leuccitos da medula ssea, bao, timo,
bursa de Fabricius e dos folculos da pena.

24

(McOrist et al., 1984; Greenacre, 2005;

Piarra, 2009).

1.2.7.4. Reao em
Polimerase (PCR)

Algumas leses histopatolgicas so

tambm tpicas de PBFD, principalmente
dos rgos linfides: depleo linfocitria,
edema, infiltrao leucocitria, assim como
os j referidos corpos de incluso
intracitoplasmticos virais (Doneley, 2003).
A
desvantagem
das
tcnicas
histopatolgicas devido ao fato de serem
necessrias amostras cuja retirada
obrigatoriamente invasiva ou apenas
praticvel no exame post mortem. Este fato
torna-a pouco prtica no diagnstico de
animais vivos, sendo, no entanto,
extremamente til na investigao de
animais que vieram a bito (Gerlach, 1999).

A reao em cadeia pela polimerase

(polymerase chain reaction, PCR) uma
das mais importantes ferramentas de
diagnstico desenvolvida nos ltimos 20
anos para identificar e caracterizar
patgenos (Olsen & Speer, 2009).

1.2.7.3. Hemaglutinao e inibio da

hemaglutinao (HA e HI)
Uma das propriedades do circovrus avirio
a capacidade de aglutinar os eritrcitos de
determinadas espcies animais. (Phalen,
2006; Piarra, 2009). O diagnstico do
BFDV por hemaglutinao pode ser feito
com eritrcitos
de Cacatua-Goffin,
Cacatua- Galah ou de cobaio (Cavia
porcellus), embora tambm tenha sido
demonstrado com sangue de outros
psitacdeos (Kondiah et al., 2005).
Comparativamente aos outros mtodos, tem
como vantagem o fato de ser o mais
econmico e obter resultados de HA e HI
quantitativos, o que pode permitir ao clnico
avaliar melhor o estado da infeco
(Khalesi et al., 2005).
A HI o mtodo de eleio para deteco
de
anticorpos
e
estudos
seroepidemiolgicos (Khalesi et al., 2005).

Cadeia

pela

Atualmente, este mtodo o mais utilizado

para a deteco do DNA de BFDV e
consiste na amplificao de um segmento
de DNA viral que permitir confirmar a
presena do agente patognico. As amostras
a serem submetidas PCR podem ser de
qualquer tecido animal ou mesmo de
zaragatoas ambientais (Phalen, 2006;
Piarra, 2009). A anlise de PCR efetuada
sobre o gene ORF V1, localizado na cadeia
de DNA no sentido paralelo. Este gene
codifica uma protena associada
replicao do vrus (Ypelaar et al., 1999). O
PCR com primers deste gene originou
resultados mais consistentes que para ORF
C1 (gene codificante de uma protena do
capsdeo). Variaes no gene ORF V1
foram observadas, mas estas so
suficientemente
pequenas
para no
provocarem falsos negativos (Ritchie et al.,
2003; Hess et al., 2004). A anlise de PCR
demonstrou ser mais sensvel e especfica
que a H/HI na deteco de antgeno
(Khalesi et al., 2005).
A anlise para o genoma de BFDV pode ser
realizada em qualquer tecido da ave, no
havendo,
entretanto,
ainda
dados
conclusivos quanto ao(s) tecido(s) de
eleio. Como exemplo, num estudo com
agapornis (Agapornis sp.), nenhuma ave
resultou positiva no PCR de penas sem que
o vrus ocorresse no sangue (Khalesi et al.,
2005).
Nos
periquitos
australianos
(Melopsittacus undulatus), pelo contrrio, o
PCR de penas e de hastes de algodo
cloacais mostrou-se mais sensvel que o de
sangue (Hess et al., 2004; Piarra, 2009).

25

A anlise sangunea por PCR pode dar

origem a falsos negativos nas situaes de
amostras em tubos heparinizados, devido ao
excesso de material biolgico que pode
gerar interferncia (neste caso a amostra
pode ser purificada por filtrao), erros de
procedimento
na
colheita
e
no
processamento, degradao das amostras no
transporte ou mesmo devido ao nmero de
leuccitos ser to reduzido que no se
detectem clulas portadoras de DNA viral
(Khalesi, 2007; Olsen & Speer, 2009).
Os falsos positivos podem surgir devido
presena de material gentico viral em aves
que tenham eliminado a infeco
anteriormente os virions inativados
podem persistir at 3 meses no corpo da
ave. Assim, numa ave positiva, a anlise
dever ser repetida pelo menos trs meses
aps a remisso dos sintomas. Podem
tambm ocorrer falsos positivos por
contaminao cruzada no momento da
colheita ou no laboratrio (Khalesi et al.,
2005).
A ausncia de kits de diagnstico com
certificao oficial pode limitar a confiana
depositada nos vrios mtodos laboratoriais
e obriga o laboratrio que processa a
anlise a assumir a responsabilidade do
mtodo utilizado (Olsen e Speer, 2009).

1.2.7.5. Hibridizao in situ

A hibridizao in situ (ISH) foi descrita
pela primeira vez em 1969 (Gall, 1969
Apud Silva-Valenzuela et al., 2006) mas
teve mais ateno da comunidade cientifica
na dcada de 80 e foi usada com sucesso
para a identificao de circovrus em
pombos em um estudo (Woods et al.,
1994).
A grande vantagem da utilizao do ISH a
possibilidade de localizar com preciso no
tecido parafinado ou congelado, um gene
especfico ou seus transcritos (SilvaValenzuela et al.,2006).
Em psitacdeos com PBFD testes de
hibridizao in situ de cido nuclico
demonstraram circovrus em sees de
bao, fgado e bursa (Woods, 2000).

1.2.8. Diagnsticos Diferenciais

No Quadro 6, de acordo com Piarra
(2009), esto listadas algumas alteraes
que so causa de arrancamento e perda de
penas em psitacdeos e podem ser utilizadas
no diagnstico diferencial para PBFD.

A
combinao
de
vrias
provas
laboratoriais recomendada como melhor
forma de diagnstico, podendo a HA e a HI
ser teis para monitorar um animal doente
(Khalesi et al., 2005).

26

Quadro 6. Causas de perda de penas em psitacdeos.

Causas
Orgnicas
- Processo de muda normal

Causas
Ambientais
- Umidade relativa baixa

- Polyomavirus (APV)
- Hipotireoidismo

- Irritantes ambientais
- Falta de banhos

Carncias
nutricionais
(Vitamina A e aminocidos
essenciais)
- Doena heptica (metablica
ou infecciosa)
- Foliculite (Fngica, bacteriana,
por clamdeas ou viral)
- Parasitas (internos e externos)
- Processos alrgicos (atopia,
alergia alimentar)
- Neoplasias cutneas
- Aspergilose sistmica
- Clamidiose
- Aerossaculite bacteriana
- Doena que produza dor
(artrites, outras)
- Apresentao clnica de PBFD
(Piarra, 2009)

- M higiene das instalaes

Causas
Comportamentais
- Demasiado estresse (presena
de humanos e de outros animais,
acumulo de estresse)
- Excesso de tempo livre
- Sexual - frustrao ou
estimulao
hormonal em
excesso
- Comportamento de
postura

- Alteraes do fotoperodo

1.2.9. Tratamento e profilaxia

No existe tratamento especfico e com
eficcia inquestionvel para a PBFD
(Dahlhausen e Radabaugh, 1997; Bert et
al., 2005). O tratamento sintomtico e de
suporte so as nicas formas de controlar a
doena (Kondiah, 2004). A profilaxia
envolve o controle analtico e a quarentena
dos animais recm-adquiridos, o isolamento
e/ou a eutansia dos animais positivos,
assim como a limpeza, desinfeco e vazio
sanitrio prolongado das instalaes onde
permaneceram
indivduos
infectados
(Dahlhausen e Radabaugh, 1997; Bert et
al., 2005).

O monitoramento preventivo de aves tem

sido utilizado como forma de prevenir a
disseminao da doena e de reduzir a
prevalncia da infeco (Dahlhausen e
Radabaugh, 1997; Bert et al., 2005).
Foi demonstrado em estudo alguma eficcia
na utilizao de interferon omega felino
tipo 1 (Virbagen omega, Virbac Animal
Health, Frana) em conjunto com
nebulizaes
ambientais
com
um
desinfetante viricida base de amnia
quaternria (F10 SC, Health and Hygiene
td, frica do Sul) (Piarra, 2009) e tambm
em outro trabalho foram obtidos bons
resultados com a utilizao de beta(1,3/1,6)-D-glucano na eliminao da
infeco por BFDV em periquitos do

27

gnero Eunymphicus sp. e cacatuas de

Mitchell (Cacatua leadbeteri) (Tomasek e
Tukac, 2007).
Os circovrus so muito estveis no
ambiente e resistentes a muitos tratamentos
fsicos e qumicos. O PCV 1 e CAV
mostraram ser resistentes a formol e ter 15
minutos temperatura de 70C e pH 3. O
tratamento com iodo ou lixvia a altas
concentraes foi capaz de inativar o BFDV
num estudo (Khalesi, 2007). Segundo
Greenacre (2005) o agente pode ser
inativado com a aplicao de iodo a 1%,
hipoclorito de sdio, B-propionolactona a
0,4%, glutaraldedo a 1% e com calor (80
C durante 1 hora). Iodo, hipoclorito de
sdio a 10%, 0,4% beta propriolactona,
glutaraldedo 1%, e aquecimento a 80 C
por uma hora inativam CAV e podem ser
considerados como opes para a
desinfeco (Ritchie, 1995).
Bonne et al., (2009) publicaram resultados
satisfatrios na produo de uma vacina
recombinante a partir da protena do
capsdeo do BFDV (recBFDVcap), que
poder
vir
a
ser
desenvolvida
comercialmente no futuro.

2. Objetivos
Determinar a ocorrncia da doena do bico
e das penas (PBFD) em psitacdeos nativos
silvestres de Centros de Triagem no estado
de Minas Gerais e da rotina do laboratrio
do setor de Doena das Aves da
Universidade Federal de Minas Gerais UFMG; utilizando a PCR para a deteco
do DNA de BFDV e o diagnstico
histopatolgico complementar em aves
naturalmente infectadas.

2.1. Objetivo geral

Determinar a ocorrncia da doena do bico

e das penas (PBFD) em psitacdeos em
triagem e cativeiro em Belo Horizonte e
Uberaba, Minas Gerais.
2.2. Objetivos especficos
Avaliar a ocorrncia do vrus da PBFD
(BFDV) em espcies de psitacdeos em
triagem.
Empregar tcnica de PCR para a deteco
do DNA de BFDV.
Examinar amostras de sangue, fgado e
swabs cloacais de psitacdeos.

3. Material e mtodos

3.1. Local de execuo do Projeto

Foram coletadas amostras de aves do
CETAS (Centro de Triagem de Animais
Silvestres) de Belo Horizonte e de Uberaba
e amostras recebidas na rotina do
laboratrio de criatrios comerciais. As
amostras foram processadas no Setor de
Doenas das Aves, Departamento de
Medicina Veterinria Preventiva, Escola
de Veterinria da UFMG (EV-UFMG),
com extraes de DNA iniciais no Setor de
Virologia Comparada do ICB/UFMG e
sequenciamentos no Setor de Gentica,
Departamento de Zootecnia, EV-UFMG.

3.2. Aves
Foram estudadas nove espcies de
psitacdeos num total de 190 indivduos,
sendo 160 indivduos da espcie Amazona
aestiva, 3 da espcie Ara ararauna, 2 da
espcie Aratinga leucophtalma, 1 da
espcie Pionus maximiliani, 1 da espcie
Guarouba guarouba, 11 da espcie
Amazona amazonica, 5 da espcie Amazona

28

vinacea,
4
da
espcie
Amazona
rhodochoryta e 3
da espcie
Anodorhynchus hyacinthinus.

3.3. Amostragem
A amostragem est apresentada no Quadro
7. Foram coletados swabs cloacais de 80
aves do CETAS de Belo Horizonte ao acaso
e sangue e swab cloacal de 30 aves ao
acaso, sangue e swab cloacal de 16
amostras de aves selecionadas por
apresentarem sintomatologia, no CETAS de
Belo Horizonte, 18 amostras de swab
cloacal de aves do CETAS de Uberaba e
140 amostras de fgado de aves que vieram
a bito e foram necropsiadas no Setor de
Doena das Aves da UFMG, incluindo
animais do CETAS de Belo Horizonte e de
criatrios comerciais, totalizando 330

amostras. As amostras foram coletadas

durante o perodo do ms 01 de 2009 a ms
10 de 2010.
As amostras cloacais foram coletadas com
hastes flexveis estreis e colocadas em
soluo salina tamponada com fosfato (PBS
0,15M) PBS (phosphate buffered saline)
(NaCl 8,77 gL-1, Na2HPO4 3,58 gL-1,
KH2PO4 1,36 gL-1) e mantidas a 20C. O
sangue foi coletado por puno da veia
braquial e foram retirados mais ou menos
0,5 ml, em tubos com ou sem EDTA e
mantidos 20 C. As aves que vieram a
bito foram necropsiadas e amostras de
fgado foram coletadas e mantidas 20C.
Com poucas excees, as aves foram
anilhadas e pesadas. As aves foram
escolhidas aleatoriamente e examinadas
logo chegada ao CETAS, antes de ter
contato com qualquer outro animal do local.

Quadro 7. Locais de coleta, nmero e tipo de amostras dos psitacdeos

Local da coleta

Nmero de amostras

Tipo de amostra

CETAS BH

80

Swab cloacal

CETAS BH

140

Fgado

CETAS BH

30

Swab cloacal

CETAS BH

30

Sangue

CETAS Uberaba

18

Swab cloacal

CETAS aves com problemas de empenamento

16

Swab cloacal

CETAS aves com problemas de empenamento

16

Sangue

Total de amostras

330

3.4. Conteno das aves

As aves foram contidas fisicamente pelo
mdico veterinrio responsvel, sem o uso

de conteno qumica, visando reduzir o

estresse e o risco de eventuais efeitos
colaterais indesejveis da sedao qumica.

29

3.5. Extrao do DNA

A extrao do DNA dos tecidos (fgado) foi
feita pelo mtodo de slica seguindo o
protocolo de Boom et al. (1990) modificado
por Caxito et al. (2007). A extrao foi
realizada atravs da reao de mais ou
menos 1 cm cbico de material bruto
(fgado) previamente macerado com trs
volumes (600l) de iodeto de sdio (NaI)
sob aquecimento a 55C e agitao por 15
min. O material obtido foi ento submetido
centrifugao por 15 minutos a 4000g e o
sobrenadante coletado com o auxlio de
uma pipeta. Foram adicionados mistura
50l de suspenso de slica e a nova
mistura foi homogeneizada com o auxlio
de um vortex. A mistura foi incubada em
agitador por 10 minutos a temperatura
ambiente. Aps centrifugao por 30
segundos a 14000g, o sobrenadante foi
descartado por inverso do tubo.
O sedimento foi ressuspendido em 1 ml de
NaI e rapidamente homogeneizado com o
auxlio de um vortex. A mistura foi
centrifugada por 30 segundos a 14000g e o
sobrenadante descartado.
O sedimento foi lavado duas vezes com 1
ml de tampo de lavagem (Etanol 50%,
50mM Tris-HCl pH8,0, 10mM EDTA pH
8,0). Aps centrifugao por 30 segundos a
14000g todo o tampo de lavagem foi
removido com o auxlio de uma pipeta.

sobrenadante (DNA molde) foi removido

com o auxlio de uma pipeta e estocado em
freezer a -20C at a hora de uso.
A extrao do DNA dos swabs cloacais foi
feita da mesma maneira como citado acima,
modificando somente as etapas inicias nas
quais foram adicionados trs volumes
(600l) de iodeto de sdio (NaI) sob
aquecimento a 55C e vorterizao por 15
min como citado. O material obtido foi
submetido centrifugao durante 4 min.
em agitao e ento os swabs foram
retirados com o auxilio de uma pina. A
partir dessa etapa adicionou-se a slica o
mtodo utilizado foi o mesmo.
A extrao do sangue foi feita tambm com
similaridade ao mtodo de extrao do
fgado, modificando a etapa inicial na qual
se utilizou 50 l da amostra de sangue
adicionando-se trs volumes (600 l) de
iodeto de sdio (NaI) sob aquecimento a
55C e agitao por 15min. A partir dessa
etapa adicionou-se a slica e o mtodo
utilizado tambm foi o mesmo.

3.6. Determinao espectrofotomtrica da concentrao de DNA

Foi adicionado 1 ml de acetona e aps

homogeneizao no vortex, e centrifugao
por 30 segundos a 14000g, o sobrenadante
foi descartado e o resduo de acetona
evaporado do sedimento em tubo com
tampa aberta, mantido a 55C por 10
minutos.

As amostras de DNA total extradas foram

analisadas e quantificadas por leitura em
espectrofotmetro NanoDrop ND-1000.
Este aparelho permite a anlise e
quantificao de amostras de cido
nuclicos utilizando 1l da amostra de
interesse. ligado a um computador que
analisa os dados enviados pelo aparelho e
estima a quantidade de DNA na amostra
em ng/l e a qualidade do material pelo
valor obtido na razo DO260nm/DO280 nm.

O DNA aderido slica foi eludo por

adio de 50l de TE (5 mM Tris-HCl pH
8,0, 0,5 mM EDTA pH 8,0), incubado a
55C por 10 minutos e o tubo foi
centrifugado por 30 segundos a 14000g
para
solidificar
o
sedimento.
O

3.7. Condies da reao em cadeia

pela
polimerase
(PCR)
para
amplificao de parte do genoma do
circovrus dos psitacdeos

30

O DNA total das amostras foi empregado

como molde para a amplificao de parte
do genoma do circovrus dos psitacdeos
pelo
PCR.
Foram
utilizados
oligonucleotdeos iniciadores (Quadro 8) de
acordo com Ypelaar et al. (1999).
Os oligonucleotdeos iniciadores foram
confeccionados pela INVITROGEN Life
Technologies (So Paulo, Brasil), e
armazenados
a
-20C
em
sua
formareconstituda em TE. O controle
positivo utilizado foi amostra de sangue de
Psittacula krameri (Ring neck). A ave
apresentou sintomatologia crnica da

doena e foi confirmada como sendo

positiva por PCR, sequenciamento da
amostra e comparao no GenBank,
apresentando similaridade com amostras
anteriormente sequenciadas. A amostra
utilizada como controle positivo foi
denominada como BH 27.
Os primers foram desenvolvidos de acordo
com o posicionamento em ORF 1 (Fig. 5)
e tm como produto uma sequncia de 717
pb (Ypelaar et al., 1999).

Quadro 8. Iniciadores, sequncias de bases e localizao genmica dos primers utilizados no

estudo
Sequencia (5 3)

Posio BP

5-AACCCTACAGACGGCGAG-3

182199

5-GTCACAGTCCTCCTTGTACC-3

879898

Primer

Ypelaar et al., (1999).

Os primers citados acima amplificam

regies dentro da cadeia aberta de ORF 1
produzindo
produtos
consistentes.
Oligonucleotdeos baseados em regies
fora da ORF1 no produziram produtos
consistentes do PCR, sugerindo haver
variaes genticas fora da ORF 1
(Ypelaar et al., 1999).

3.8.
Anlise
dos
amplificados em PCR

produtos

Aps o ciclo de amplificao, a cada 8L

do produto amplificado foram adicionados
2L de tampo corante de amostra (60%
de glicerol, 10% de TBE 10X e azul de
bromofenol) na concentrao de 5X), e
submetidos a eletroforese em gel de
agarose a 1,5%, em tampo de corrida
TBE 0,5 X (100mM Tris-base pH8,3,
25mM EDTA e 50mM cido brico).

31

Fig. 3. Posio e orientao dos primers

utilizados para a amplificao de ORF1 do
genoma do BFDV.

A corrida foi realizada em temperatura

ambiente, com tempo mdio de 20 minutos,
em voltagem constante (100 V). Aps a
corrida, o gel foi corado com brometo de
etdio (10mg/ml), por 20 minutos, em
ambiente desprovido de luz, para a
visualizao dos fragmentos.
Para
visualizao
dos
fragmentos
amplificados, utilizou-se transiluminador
ultravioleta (254nm Pharmacia LKB
MacroVue TM , Amersham, EUA).

3.9. Sequenciamento

Estados Unidos), de acordo as condies de

reao e leitura indicadas pelo fabricante.
Aproximadamente 1l do produto de PCR
purificado foi utilizado em cada reao de
sequenciamento, adicionando 1 l de cada
iniciador na concentrao de 10 mol, 2 l
de Big Dye, 1,5 l de tampo Save Money
(Applied Biosystems, Estados Unidos) e
gua milliQ quantidade suficiente para 10
l. A reao de sequenciamento foi feita em
termociclador (PTC-100, MJ Research,
Inc., Estados Unidos), utilizando o seguinte
ciclo: desnaturao a 96C por 15 segundos,
anelamento do iniciador a 50C por 15
segundos, extenso a 60C por 4 minutos,
sendo esse ciclo repetido por 30 vezes. Em
seguida, o produto da reao de
sequenciamento
foi
purificado
por
precipitao utilizando isopropanol e etanol
e homogeneizado em formamida, sendo
ento feita a desnaturao rpida a 95 oC
por 2 minutos e colocado no gelo
imediatamente. O sequenciamento foi feito
pelo programa Sequencing Analyses verso
5.2 da Applied Biosystems.

3.9.2. Montagem e edio

sequncias nucleotdicas

das

Para anlise da qualidade das bases de

nucleotdeos dos eletroferogramas, obtidos
pelo sequenciamento das fitas senso e antisenso, foi utilizado o programa Bioedit
(Hall, 1999).

3.9.1. Reao de sequenciamento

O sequenciamento foi feito no laboratrio
de Gentica e no Setor de Doena das Aves
da UFMG. Os produtos amplificados foram
submetidos
a
um
processo
de
sequenciamento
pelo
mtodo
de
dideoxinucleotdeos, descrito por Sanger et
al. (1997), em um sequenciador automtico
capilar (ABI 310, Applied Byosistems,
Estados Unidos), utilizando o kit Big Dye
Terminator Mix (Applied Biosystems,

3.9.3. Busca das sequncias similares

em bancos de dados
Para incio das anlises, todas as sequncias
finais geradas foram comparadas com
sequncias disponveis no banco de dados
do National Center for Biotechnology
Information
(NCBI

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).
Os
algoritmos dos programas BLAST 2.0
(Basic Local Alignment Search Tool),

32

BLASTn
e
BLASTx
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/),
desenvolvidos pelo NCBI, foram utilizados
para a busca de similaridade entre os
nucleotdeos
e
aminocidos,
respectivamente (Altschul et al., 1997).

com 1000 reamostragens, para testar o grau

de confiabilidade dos agrupamentos obtidos
nas rvores filogenticas. Com o mtodo de
substituio de nucleotdeos Kimura 2parmetro (Kimura, 1980) e o mtodo de
substituio de aminocidos JTT (Jones et
al., 1992).

3.9.4. Alinhamento das sequncias

Os alinhamentos das sequncias de
nucleotdeos e sequncias inferidas de
aminocidos foram feitos com o auxlio dos
programas Clustal W verso 1.6
implementado no programa Molecular
Evolutionary Genetics Analysis (MEGA
5.0/ www.megasoftware.net) verso 5.0
para Windows. Todos os alinhamentos
foram revisados e editados manualmente
quando necessrio.

3.10. Histopatologia
Alguns animais que vieram a bito durante
o perodo do experimento foram
necropsiados. Foram coletadas amostras de
fgado, rins, bao, corao e mantidos no
formol a 10%. Dos animais positivos no
PCR dos quais havia o material preservado
em formol foram feitos procedimentos de
rotina e a colorao utilizada foi
hematoxilina-eosina.

3.9.5. Anlises filogenticas

Para anlise da qualidade das bases de
nucleotdeos dos eletroferogramas, obtidos
pelo sequenciamento das fitas senso e antisenso, foi utilizado o programa BioEdit
(Hall, 1999). Todas as sequncias finais
geradas foram comparadas com sequncias
disponveis no banco de dados do National
Center for Biotechnology Information
(NCBI http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). As
sequncias de nucleotdeos e aminocidos
foram alinhadas com as sequncias de
PBFD depositadas no GenBank com o
auxlio do programa Clustal X (Thompson
et al., 1997), implementado no programa
Molecular Evolutionary Genetics Analysis
MEGA verso 5.0 e no programa BioEdit
para Windows (Tamura et al., 2011).

3.11. Prevalncia
A prevalncia para a doena foi calculada
de acordo com a seguinte frmula, de
acordo com Smith, (1994).

Nmero de casos
Taxa de Prevalncia =________________________________________
Nmero de Indivduos Estudados

A anlise filogentica dos nucleotdeos e

dos aminocidos do gene VP1 foi feita
usando o mtodo neighbor-joining, com o
programa MEGA 5.0. Neste mesmo
programa, os dados foram submetidos ao
teste de confiana em topologia (Bootstrap)

33

4. Resultados e discusso

4.1. PCR
Os resultados esto apresentados Tab. 1.
Um produto de 717 pares de bases foi
obtido (Fig. 4), compatvel com a descrio
da literatura (Ypelaar et al., 1999). Entre as
amostras coletadas de swabs cloacais
(n=110) de aves do CETAS de Belo
Horizonte 0% foram positivas. Entretanto,
das amostras de fgado (n=140), 7,85%
(11/140) foram positivas para PBFD. Das
aves que tiveram swabs cloacais analisados,
19 vieram a bito e amostras de fgado
tambm foram analisadas, sendo 21%
(4/19) positivas na anlise das amostras de
fgado e 0% positivas (0/19) para PBFD na
analise das amostras de swab cloacal. Das
amostras de sangue 0% (0/30) foram
positivas para PBFD.

Amazona vinacea, Amazona rhodochoryta e

Anodorhynchus hyacinthinus.
Os resultados detalhados esto descritos nas
tabelas 1, 2 e 3.

717 bp

717 bp

717 bp

Entre as amostras de swab cloacal das aves

do CETAS de Uberaba, 100% (0/18) foram
negativas (swab cloacal).
Das amostras de coletadas nas aves
selecionadas
com
problema
de
empenamento, 6,25% (1/16) foram
positivas em sangue e 0% (0/16) foram
positivas para amostras de swab cloacal.
As espcies Amazona aestiva e Ara
ararauna foram positivas. Existem poucos
relatos no Brasil nessas espcies e pode
haver algum fator associado de maior
susceptibilidade. Sugere-se ateno para o
risco da mistura de aves de origens e
espcies diferentes. As aves da espcie
Amazona aestiva positivas apresentaram-se
assintomticas, j a arara canind (Ara
ararauna)
positiva
apresentou
sintomatologia clnica que ser descrita
posteriormente (Fig. 5, 6 e 7).
Foram negativas as espcies Aratinga
leucophtalma,
Pionus
maximiliani,
Guarouba guarouba, Amazona amazonica,

Figura 4. Eletroforese em gel de agarose a

1,5%, corado com brometo de etdeo mostrando
o segmento esperado de 717 pb da ORF 1, de
produtos amplificados de amostras de fgado de
Amazona aestiva. Canaletas PM peso molecular
(100 pb), C+ controle positivo, C-controle
negativo, 1, 2, 3, 4 e 5 amostras de campo.

Do total de 330 amostras 3,63% foram

positivas para PBFD e do total de animais
testados 6,31% (12/190) foram positivos
para PBFD. Segundo Dahlhausen e
Radabaugh (1993) nas aves do novo
mundo, as taxas chegam apenas a cerca de
4% (gneros Ara e Amazona). Poder-se-ia
justificar a maior ocorrncia em nosso
estudo, tendo em vista que as condies em
triagem poderiam favorecer a disseminao
de BFDV. A avaliao clnica e de outros

34

parmetros das aves testadas com

sintomatologia clnica condizente com
PBFD esto citadas na Tabela 3. Algumas
aves podem desenvolver uma resposta
imune protetora com ausncia de sinais
clnicos e eliminao viral com reagudizao da infeco em condies
adversas (Dahlhausen e Radabaugh, 1993).
Um estudo semelhante foi realizado por
Khalesi et. al. (2005).

Tabela 1. Locais de coleta, nmero e tipo de amostra e porcentagem de amostras positivas

Nmero de
amostras

Tipo de amostra

Porcentagem de
positivos

80 (61+19)

Swab cloacal

0%

140 (121 +
19)

Fgado

7,8%

19 + 19

Fgado + Swab
cloacal do mesmo
animal

21% e 0%

30

Sangue

0%

CETAS Uberaba

18

Swab cloacal

0%

CETAS aves com problemas de

empenamento

16

Swab cloacal

0%

16

Sangue

0%

330

Sangue + swab
cloacal + fgado

3,63%

Local da coleta

CETAS BH

Total de amostras

35

Tabela 2. Nmero de amostras e porcentagem de positivos por tipo de material coletado

Nmero de amostras coletadas
por tipo de material

Porcentagem
positivas

Swab cloacal

144

0%

Fgado

140

7,8%

Sangue

46

2,1%

Total de amostras

330

3,63%

A infeco de aves saudveis devido ao

contato com portadores assintomticos j
foi descrita e sabe-se da capacidade de
algumas espcies de manterem infeces
latentes (Phalen, 2006; Piarra, 2009). A
partir da realizao de testes de diagnstico
preventivos, a deteco dos animais
portadores do BFDV permite isol-los e
impedir o contgio da PBFD.

de

amostras

A partir de estudos recentes, sabe-se que a

infeco por BFDV pode resultar em sinais
clnicos em psitacdeos do Novo Mundo
(Phalen, 2006; Piarra, 2009) embora
alguns autores acreditarem que tal efeito
no deveria ocorrer (Gerlach, 1999). A
infeco das aves nativas do Neotropico
pode ser muito importante, pois pode afetar
a sua sade e viabilidade, com riscos
recuperao das espcies ameaadas.

Os dados das aves com alteraes de

empenamento (Tab. 3) do CETAS de Belo
Horizonte foram obtidos de acordo com o
preenchimento da ficha clinica (Anexo II),
baseada em Rupley (1999).

36

Tabela 3. Avaliao clnica e deteco molecular do DNA de BFDV por PCR em psitacdeos
com problemas de empenamento
Ficha

Espcie

PCR

C.C.

Ht%

Pplas

Problemas Observados
Blefarite no olho direito, ausncia de penas na
cabea, ao redor dos olhos, asas e na regio
dorsal. Colorao anormal (amarelada com
pontos vermelhos na face). Canho das penas
expostos na asa direita.
Ausncia de penas no dorso do corpo,
descamao da pele, canhes de penas
expostos.
Penas amorfas nascendo no peito, nas asas e
no dorso e no dorso das asas penas
quebradias, soltando fcil e amorfas.
Penas escassas na regio da cauda, amorfas e
canho das penas exposto nas asas. Ausncia
de penas nas asas (primrias e secundrias).
Ausncia de penas na regio do dorso, peito e
asas, penas friveis ao remover, amorfas e de
colorao anormal.
Ausncia de penas na cauda, nas asas,
crescimento anormal e canhes expostos na
cauda. Penas amorfas.
Penas amorfas de colorao escura, ausncia
de penas no peito, penas amorfas na cauda.

01

Amazona
aestiva

Boa

61

6,2

02

Aratinga
leucophtalma

Boa

58

4,1

03

Amazona
aestiva

Boa

50

4,7

04

Ara ararauna

Boa

50

3,6

05

Amazona
aestiva

Boa

50

4,7

06

Amazona
aestiva

Regular

41

4,8

07

Amazona.
amazonica

Boa

53

6,7

08

Pionus
maximiliani)

Regular

47

5,8

Ausncia de penas na cabea, na cauda, penas

amorfas.

09

Amazona
aestiva

Boa

54

4,6

Ruptura de saco areo na regio do dorso da

cabea, ausncia de penas no dorso da cabea.

10

Amazona
aestiva

Regular

51

11

Amazona
aestiva

Regular

62

6,8

12

Amazona
aestiva

Ruim

48

4,0

13

Aratinga
leucophtalma

Regular

46

3,4

14

Amazona
aestiva

Ruim

58

5,4

15

Amazona
aestiva

Regular

Penas amorfas, sinusite, ausncia de penas no

dorso das duas asas.
Ruptura de saco areo na regio torcica
(peitoral), penas amorfas em pequena
quantidade no dorso. Penas amorfas na cauda.
Penas da face amorfas, conjuntivite,
escamao do bico, sinusite.
Ausncia de penas na cabea, rabo e asas.
Ausncia de penas na cabea, penas amorfas
na quilha do esterno. Penas com colorao
anormal.
Sinusite, dificuldade respiratria, penas
amorfas.

Amazona
Penas amorfas nas asas e na cabea.
Regular
54
7,0
aestiva
Lacerao na cabea (dorso).
Notas: C.C. - condio corprea; Ht- hematcrito; Ppla protena plasmtica %.
16

37

A maioria dos sinais observados nas aves

estudadas com alteraes de empenamento
foi, provavelmente, devido a causas
externas PBFD, j que, das 16 aves
avaliadas clinicamente com quadro de
alopecia, apenas uma foi positiva para
BFDV. Entretanto, pode ocorrer tambm
que as aves infectadas pelo BFDV no
estavam em fase de viremia, no sendo
BFDV detectvel pela PCR em um nico
teste.

Os swabs cloacais das aves amostradas em

todo o estudo foram quantificados e
resultaram em sua maioria, em menos de
200 ng de DNA por L e pureza muito
abaixo de 2 (mdia entre 0,4 e 0,5)
indicando que para o mtodo de extrao
utilizado, o swab cloacal no seria o mais
recomendado. A negatividade do swab
cloacal de indivduos positivos no fgado
poderia ser explicada pela presena de
inibidores de DNA, potencialmente de
origem fecal. Outra possibilidade seria um
estado de latncia, no qual haveria a
integrao do genoma de BFDV em poucas
clulas do hospedeiro, sem eliminao
fecal.

Figura 5. Arara Canind (Ara ararauna) do

CETAS de Belo Horizonte positiva para PBFD
(PCR).
Figura 7. Arara Canind (Ara ararauna) com
penas distrficas, ausncia e quebra de penas,
especialmente visveis na cauda.

De forma a aumentar a sensibilidade do

teste efetuado, o controle laboratorial
sistemtico dever consistir na retirada de
amostras de swab cloacal, juntamente com
a amostra de sangue, e se o animal vier a
bito, o recolhimento de amostras de tecido
do fgado, visto que a anlise conjunta das
amostras biolgicas pode ser mais sensvel
(Khalesi et al,. 2005).
Figura 6. Arara Canind (Ara ararauna) com
penas disformes, quebradias, ausncia de penas
na asa.

O PCR de amostras de sangue pode no ser

a melhor anlise para exames de
monitoramento e rotina, pois podem surgir
falsos negativos e tambm pode ocorrer a
no deteco de aves portadoras

38

assintomticas que no esto em fase

virmica. Nestes casos, poder ser mais
indicado realizar anlise gentica de
amostras conjuntas dos vrios tecidos
(sangue, penas e swab cloacal) (Piarra,
2009).
Como
j
descrito
anteriormente,
anormalidades nas penas podem ser devido
a vrios fatores e uma investigao
minuciosa do mdico veterinrio
necessria para um diagnstico preciso.
O principal foco do atual estudo foram os
psitacdeos
da
fauna
brasileira,
principalmente o papagaio verdadeiro, e os
resultados foram positivos, indicando que
tambm so susceptveis doena e,
portanto devem tambm considerados como
importantes objetos de estudo.
Apesar de no apresentarem sintomatologia
na maioria das vezes, so portadores e
transmissores da doena. Observou-se que
os psitacdeos estudados apresentaram na
grande maioria dos casos, infeco
assintomtica, condizente com estudos j
publicados e torna-se importante, pois
sabemos tratar-se de possveis fontes de
contgio e disperso do vrus (Dahlhausen e
Radabaugh, 1997).
As aves positivas foram recebidas na rotina
dos Cetas sem apresentar alteraes
relacionadas
ao
empenamento,
comprovando que um levantamento da
doena nos plantis de grande
importncia. Os sinais clssicos observados
(Fig. 8) em aves da fauna extica no foram
observados nos animais da fauna brasileira.

Figura 8. Psittacula krameri (Ring Neck)

positiva para BFDV por PCR e sequenciamento.
Ave com ausncia de penas na regio toracoabdominal com 1ano de idade e infeco
crnica.

Atualmente os criatrios, principalmente

comerciais, tm grande variedade de
psitacdeos silvestres e exticos sendo
criados conjuntamente facilitando a
disperso da doena. Observou-se na rotina
do laboratrio de doena das aves da
UFMG que surtos esto ocorrendo em
criatrios comerciais de psitacdeos
exticos. O atual estudo demonstra que uma
relao entre a contaminao entre aves
exticas e aves silvestres pode estar
ocorrendo. Matrizes positivas para BFDV
devem ser retiradas da reproduo, tendo
em vista o risco de transmisso vertical. A
venda de aves positivas no deve ocorrer
pois risco potencial de transmisso e
disseminao da doena entre criatrios. O
controle desse comrcio muito difcil,
porque na maioria das vezes os donos dos
criatrios esto interessados no lucro que
obtero com a venda das aves,
desconsiderando os riscos e o impacto que
podero causar fauna revendendo animais
positivos para PBFD. Recomenda-se para
aves positivas a eutansia. No existe
tratamento comprovado para a doena em
questo. Deve-se levar em conta a espcie,

39

a idade e a origem da ave em questo no

diagnstico da doena (Phalen, 2006;
Piarra, 2009; Ritchie, 1995).
Neste estudo, aves ameaadas, como a
ararajuba e arara azul que vieram a bito e
foram encaminhadas para o laboratrio,
foram negativas para PBFD.
Tal como referido por Bert et al. (2005) a
aplicao de mtodos de diagnstico de
forma sistemtica, especialmente nos
centros de triagem, criao e dos circuitos
comerciais uma forma de combater e
reduzir a prevalncia da PBFD. O
isolamento e/ou eliminao dos animais
positivos, junto com as medidas de
quarentena mnimas, permitiu diminuio
da prevalncia nos EUA (Bert et al., 2005)
e poderia obter resultados semelhantes na
regio geogrfica estudada. Os animais
recm-adquiridos devem sempre ser
colocados em quarentena pela possibilidade
de ocorrncia de falsos negativos
laboratoriais e de quadros silenciosos em
animais no testados (Olsen e Speer, 2009).
A vacinao individual dos psitacdeos
poder ser a ferramenta de eleio num
futuro mais ou menos prximo, no controle
da BFDV. A vacina poder ser produzida
atravs
da
protena
recombinante
recBFDVcap (Bonne et al., 2009), embora
sejam necessrios estudos que permitam
confirmar a eficcia e segurana da vacina.

4.2. Sequenciamento
Foram analisadas sequncias de BFDV
encontrados em duas amostras de fgado
(BH 215 e BH 732) de papagaio verdadeiro
(Amazona aestiva) que foram comparadas a
amostra BH 27 de Ring-Neck (Psittacula
krameri) (controle positivo). A estirpe BH
27 foi considerada positiva aps resultado
positivo por PCR e sequenciamento.
Demonstrou-se
alta
qualidade
do
eletroferograma das estirpes positivas por

PCR que foram sequenciadas. Atribui-se

esses resultados utilizao de pares de
iniciadores altamente especficos (Ypelaar
et al., 1999). Confirmou-se a similaridade
das sequncias obtidas em comparao com
sequncias disponibilizadas no GenBank,
com identidade unicamente com estirpes de
BFDV. As trs amostras foram depositadas
no GenBank (JQ649409 a JQ649411).

4.2.1. Anlise da sequncia de

nucleotdeos e anlise da sequncia
deduzida de aminocidos
Foram analisadas as sequncias de BFDV
de duas estirpes, BH 215 e BH 732, obtidas
do fgado de Amazona aestiva, em
comparao
com
sequncias
disponibilizadas no GenBank, resultando
em identidade apenas com estirpes de
BFDV.
Para estirpe BH 215 o alinhamento das
seqncias de nucleotdeos com as
sequncias de estirpes publicadas, revelou
19 substituies de nucleotdeos. Baseado
nas comparaes de porcentagem de
homologia, obteve-se identidade de 97,2%
com a estirpe AF311302.1 de Cacatua
galerita, com escore foi 1181 bits (639)
nucleotdeos. No houve insero nem
deleo de bases.
Para a estirpe BH 732, a anlise da
sequncia dos 659 nucleotdeos entre as
posies 203 a 861, em alinhamento com
alguns isolados publicados, revelou 18
substituies de nucleotdeos. Com base
nas comparaes de porcentagem de
homologia foi encontrada identidade de
97,2% com GQ165758.1 do isolado
BK53ZA_86 de periquito (Melopsittacus
undulatus), com escore de 1118 bits (605)
nucleotdeos,
demontrando
alta
confiabilidade e e-value baixo indicativo de
bom alinhamento. No houve insero nem
deleo de bases.

40

As anlises das sequncias de

aminocidos deduzidos revelaram, para a
estirpe BH 215, que no houve substituio
de aminocidos, com 99% de similaridade
com a sequncia (ACY78221.1) do isolado
BKS3ZA_86, ocorrendo substituio dos
aminocidos treonina por alanina. Essa
substituio pode significar troca natural
(mutao) e potencial alterao da funo
da protena, podendo, entretanto, ser devida
a erro durante a polimerizao. Entretanto,
a anlise da sequencia de 232 aminocidos
entre as posies 180 e 696, revelou 100%
de identidade. Outros sequenciamentos da
mesma estirpe sero necessrios para
esclarecer se a troca real.
O alinhamento das sequencias de
aminocidos deduzidas para a estirpe BH
732
no
revelou
substituio
de
aminocido, com 98% de similaridade com
a sequencia ACY78221.1 (frica do Sul),
com indicao de substituio positiva de
cido aspartico por cido glutmico,

embora com 100% de similaridade no

segmento de 219 aminocios entre as
posies 25 e 243. A substituio observada
entre aminocidos de carter semelhante
(cidos) parece no acarretar alteraes na
funo protica.

4.2.2. Anlise filogentica

Para a construo da rvore
filogentica
por
substituio
de
nucleotdeos foram escolhidas sequncias
depositadas no GenBank de estirpes de
BFDV originrias de regies distintas,
geograficamente distantes em diferentes
continentes e tambm a amostra controle
BH 27 tambm depositada no Genbank
(JQ649411), na tentativa de estabelecer
alguma relao geogrfica entre as
sequncias obtidas nesse estudo e aquelas
depositadas (Fig. 9).

Figura 9. Dendograma construido pelo mtodo de neighbor-joining, usando o modelo de substituio

de nucleotdeos Kimura-2 parmetro, implementado no programa Mega 5.0. Os nmeros representam os
valores de Bootstrap (1000 reamostragens) em que 70 so considerados confiveis. Amostras deste
identificadas com BH 632 e BH 215.

41

Figura 10. Agrupamento entre amostras de PBFD do presente estudo e de outras partes do mundo
depositadas no GenBank com base no segmento de 210 aminocidos da regio que codifica a protena
VP1. O dendograma foi construdo pelo mtodo de neighbor-joining, usando modelo de substituio de
aminocido do JTT implementados no programa MEGA 5.0. Os valores de reprodutibilidade das anlises
esto apresentados em porcentagens e so referentes a 1000 repeties (Bootstrap).

Os resultados obtidos com agrupamento de

nucleotdeos (Fig. 9) permitiram estabelecer
relao geogrfica entre as sequncias
avaliadas, sendo a estirpe BH 732 bastante
similar s estirpes MU-JP1P (Japo) e
GQ165758. O bom alinhamento das
sequncias, obtido nos
testes
de
similaridade, refora a boa qualidade das
sequncias e indica que no houve resultado
falso-positivo. A estirpe BH 215 se mostrou
similar AF 311302.1 Cacatua galerita e
AF 311298.1 Eolophus roseicapillus
Austrlia. J a estirpe BH 27 bastante
similar Ay 521237.1 PEG 07 USA. No
houve insero nem deleo de bases nas
sequncias estudadas.

Os resultados obtidos com agrupamento de

aminocidos
(Fig.
10)
permitiram
estabelecer relao geogrfica entre as
sequncias avaliadas, sendo a estirpe BH
732 bastante similar s estirpes MU-JP1P
(Japo) e GQ165758. O bom alinhamento
das sequncias, obtido nos testes de
similaridade, refora a boa qualidade das
sequncias e indica que no houve resultado
falso-positivo. A estirpe BH 215 se mostrou
similar AF 311302.1 Cacatua galerita e
AF 311298.1 Eolophus roseicapillus
Austrlia. J a estirpe BH 27 bastante
similar DQ 304756.1 Taiwan TW04-13.
No houve insero nem deleo de bases
nas sequncias estudadas.
Menor similaridade foi encontrada de
ambos isolados BH 215 e BH 732 com os

42

isolados WBC1-ZA (frica do Sul), TW0413 (Taiwan) e BFDV16 (Tailndia).

Nenhum isolado deste estudo apresentou
100% de homologia de nucleotdeos. A
estirpe BH 215 apresentou maior
similaridade
com
as
estirpes
GQ165758.1Isol_BKS3ZA_86 (97,2%) e
AB277746.1isolate:_MU-JP1P (97,2%). A
estirpe BH 732 apresentou maior
similaridade com AF311302.1 Cacatua
galerita (97,2%) e AF311298.1 (Eolophus
roseicapillus, Australia) (97,1%). As
estirpes BH 215 e BH 732 (de Amazona
aestiva) apresentaram similaridade com o
controle positivo BH 27 (de Psittacula
krameri)
de
94,1%
e
93,8%,
respectivamente (Tab.4).
Nenhum isolado deste estudo teve 100% de
homologia dos aminocidos. A estirpe BH
215 apresentou maior similaridade com as
estirpes GQ165758.1 isolado BKS3ZA_86,
AB277746.1
isolado
MU-JP1P,
AF311298.1 de Eolophus roseicapillus
Australia e AF311302.1 de Cacatua
galerita, de 99,1 %. A estirpe BH 732
apresentou maior similaridade com
GQ165758.1 isolado BKS3ZA_86 e
AB277746.1 isolado MU-JP1P, de 99,5%
(Tab.5).

neoplsica que pode estar associada a

retrovrus. Sugere-se que no animal 412
havia algum agente que estava em
replicao no fgado (Fig. 10a e 10b). Pode
ter ocorrido imunodepresso por circovrus
(leso sugere infeco viral). No animal
732 a perda de hepatcitos pode indicar
provvel replicao de agente, sugerindo
que possa ser, por exemplo, uma infeco
por herpesvrus. A quantidade de linfcitos
diminuda indicou depresso da imunidade,
que pode ser gerada pela infeco por
circovrus. Na ave 865 partir dos resultados
as leses sugeriram um quadro de
hemocromatose. O aumento na quantidade
de plasmcitos e diferenciao leucocitria
indicaram que a ave estava em processo
inflamatrio, decorrente possivelmente de
resposta a alguma infeco. Na ave 885
havia
presena
de
megacaricitos
possivelmente pelo fato da medula ssea
no estar repondo clulas levando
ocorrncia de hematopoiese extramedular,
sugerindo anemia e hematcrito baixo. O
infiltrado leve sugestivo de infeco viral.

4.3 Histopatologia
Os resultados das estirpes de 8 aves
positivas pela tcnica PCR que vieram a
bito e foram necropsiadas no Laboratrio
de Doena das Aves da UFMG esto
descritos no Quadro 9.
Observou-se que das oito aves, duas eram
machos, cinco eram fmeas e uma no teve
o sexo determinado. O acesso ao resultado
da necropsia do animal 15 no foi possvel.
No
h
relao
dos
achados
histopatolgicos com circovrus neste
animal. Os achados remetem condio

43

Tabela 4. Similaridade de nucleotdeos do gene da protena VP1 nos isolados brasileiros comparados com estipes descritas em outros pases.
1

10

11

12

BH732 (Amazona aestiva)

BH215 (Amazona aestiva)

96,2

BH27 (Psittacula krameri)

94,1

93,8

GQ165758.1 isolado BKS3ZA_86

97,2

96,6

93,6

AB277746.1 isolado MU-JP1P

97,2

96,3

93,5

97,1

AF311302.1 Cacatua galerita

95,6

97,2

94,5

96,0

95,5

GU015023.1 isolado BFDV16 Tailndia

94,1

96,0

93,3

94,4

94,1

94,9

AY450434.1 isolado WBC1-ZA_frica_do_sul

93,5

94,0

92,5

93,7

93,0

93,8

94,0

AF311298.1_Eolophus_roseicapillus_Australia

95,5

97,1

94,3

95,8

95,4

99,9

94,8

93,7

10

GU047347.1_isolado_PT09-2_Portugal

95,1

95,8

96,1

95,5

95,1

96,5

95,1

93,3

96,3

11

DQ304756.1_Taiwan_TW04-13

94,2

94,9

94,6

94,0

94,4

94,8

95,6

93,3

94,8

95,1

12

AY521237.1_PEG07_USA

95,9

95,4

96,1

95,4

95,4

95,9

94,6

93,2

95,7

96,6

94,7

13

EF457974.1_isolado_05-106_Australia

94,1

94,4

92,8

94,3

94,0

94,5

94,0

92,4

94,6

94,1

94,4

94,8

14

JF501530.1_IT33_Itlia_gene_rep

95,1

95,9

96,0

95,6

95,1

96,5

95,1

93,3

96,4

100,0

95,1

96,8

13

94,1

44

Tabela 5. Similaridade entre aminocidos dos genes da protena VP1 nos isolados brasileiros comparados com outros encontrados no mundo.
1

10

11

12

BH732 (Amazona aestiva)

BH215 (Amazona aestiva)

98,5

BH27 (Psittacula krameri)

95,6

95,6

GQ165758.1 Isolado_BKS3ZA_86

99,5

99,1

96,1

AB277746.1 isolado_MU-JP1P

99,5

99,1

96,1

100,0

AF311302.1 Cacatua galerita

98,5

99,1

95,1

99,1

99,1

GU015023.1 isolado BFDV16 Tailndia

95,1

96,8

94,1

95,9

95,9

95,9

AY450434.1 isolado WBC1-ZA_frica_do_sul

94,1

94,0

93,1

94,0

94,0

93,1

92,6

AF311298.1_Eolophus_roseicapillus_Australia

98,5

99,1

95,1

99,1

99,1

100,0

95,9

93,1

10

GU047347.1_isolado_PT09-2_Portugal

97,6

97,2

97,1

98,2

98,2

97,2

94,9

92,1

97,2

11

DQ304756.1_Taiwan_TW04-13

97,9

96,8

97,4

97,4

97,4

96,3

96,3

93,6

96,3

97,4

12

AY521237.1_PEG07_USA

97,6

97,3

96,1

98,2

98,2

97,3

94,9

92,1

97,3

98,2

96,3

13

EF457974.1_isolado_05-106_Australia

97,1

96,3

94,6

96,8

96,8

95,9

94,9

92,1

95,9

96,3

97,4

96,3

14

JF501530.1_IT33_Italia_gene_rep

97,6

97,2

96,6

98,1

98,1

97,2

94,8

91,8

97,2

100,0

97,4

98,1

13

96,2

45

Quadro 9. Alteraes macro e microscpicas em papagaios Amazona aestiva positivos por PCR para o vrus da doena do bico e das penas.
N

Espcie

15

Amazona
aestiva
Amazona
aestiva

324
325
350
412

Amazona
aestiva
Amazona
aestiva
Amazona
aestiva

Sexo

Condio
corporal

Necropsias

Histopatologia
Fgado: reas multifocais coalescentes com perda de hepatcitos. Linfcito neoplsico. Presena de clulas
em mitose de origem hematocitria.

Fmea

Regular

Hepatomegalia, autlise avanada, liquido no

pericrdio.

Fmea

Regular

Autlise.

Fmea

Ruim

Macho

Caquexia

Hepatomegalia, esplenomegalia, candidase,

autlise avanada.
Hepatomegalia, aerossaculite, esplenomegalia.

721

Amazona
aestiva

Caquexia

Proventrculo dilatado, trato gastrointestinal

hipermico, petquias no corao, ndulos
caseosos raros no fgado, placas esbranquiadas
no bao, proventrculo hemorrgico, jejuno
hemorrgico.
Aerossaculite, hepatomegalia, esplenomegalia,
gastroenterite
hemorrgica,
pulmo
esbranquiado.

732

Amazona
aestiva

Fmea

Caquexia

865

Amazona
aestiva

Macho

Regular

Aerossaculite e hepatomegalia.

885

Amazona
aestiva

Fmea

Ruim

Gastroenterite hemorrgica, esplenomegalia

Fgado: aumento na quantidade de plasmcitos, presena de hemossiderina no interior dos macrfagos,

aumento moderado na quantidade de macrfagos, autlise, focos de infiltrado multifocal linfoplasmocitrio
associado ao espao periportal. Foco de necrose sugestivo de herpesvrus. Bao: reas eosinoflicas, depleo
linfide. No h presena de chlamydophila ou corpsculos de incluso.

Fgado: congesto (grande quantidade de hemcias), infiltrado linfoplasmocitrio predominantemente na

regio periportal, mas tambm no parnquima. No visualizou-se hepatcitos. Hepatite multifocal
linfoplasmocitria associada a necrose focal.
Bao: hemossiderose moderada, com aumento dos plasmcitos.
Fgado: Presena de clulas inflamatrias, com proliferao de ducto biliar sugerindo leso crnica. Grande
quantidade de hemossiderina nos hepatcitos. Perda de hepatcitos. Necrose multifocal. Infiltrado
plasmocitrio periportal e no parnquima. Leve proliferao de ducto biliar. Hepatite plasmocitria periportal.
Infiltrado neutroflico. Hemossiderina associada proliferao de ductos biliares associada necrose de
hepatcitos. Bao: hemossiderose. Aumento na quantidade de plasmcitos e na diferenciao linfocitria.
No h presena de chlamydophila ou corpsculos de incluso.
Fgado: infiltrado linfoplasmocitrio periportal de baixa intensidade, autlise, sem foco de necrose. Hepatite
linfoplasmocitria leve. Bao: quantidade moderada de macrfagos com hemossiderina. Presena de
megacaricitos. Depleo linfide moderada. Ativao moderada de plasmcitos.

46

No foram encontrados corpsculos de

incluso intracitoplasmticos.
Segundo Donoley (2003), algumas leses
histopatolgicas podem ser tpicas de
PBFD, nomeadamente ao nvel dos rgos
linfides onde se observa depleo
linfocitria e infiltrao leucocitria o que
foi observado em quatro estirpes. Os
resultados do exame histopatolgico das
aves 412, 885, 865 e 732 sugerem que esses
animais podem ter sofrido ao de algum
um agente viral, possivelmente o BFDV,
conforme indicado pela PCR positiva,
assim como poderia ter ocorrido a coinfeco por algum outro vrus, que se
instalou na ave imunodeprimida pela
infeco por BFDV, como o herpesvrus,
por exemplo.

Aps o diagnstico histopatolgico, podem

ser aplicadas tcnicas de PCR para a
deteco genmica nas amostras teciduais
fixadas, para confirmar o diagnstico
(Gerlach, 1999).

4.4. Prevalncia
Foram estudadas 190 aves sendo que destas
12 foram positivas para PBFD. A
prevalncia da PBFD no estudo de 6,3%
(12/190). Em Amazona aestiva (6,25%) e
Ara ararauna (33,33%) foi detectado o
genoma de BFDV. Entretanto, a
amostragem foi representativa apenas para
A. aestiva e no suficiente para as outras
espcies. A relao entre alteraes da
qualidade das penas e a infeco por BFDV
no pode ser confirmada, apenas associvel
em um caso em Ara ararauna.
Os resultados de prevalncia por espcie e
total so apresentados na Tab. 6.

Figura 11a. Fgado ave 412. reas com

infiltrado linfoplasmocitrio perivascular.

Figura 11b. Fgado ave 412. reas com

infiltrado linfoplasmocitrio e hepatcitos com
colorao
amarelada
sugestiva
de
hemossiderina.

A prevalncia em pases europeus foi

estudada por Rahaus e Wolff (2003) e por
Bert et al. (2005). Rahaus e Wolff (2003)
determinaram uma prevalncia da infeco
de 39,2% utilizando a tcnica PCR da ORF
1 de penas em psitacdeos na Alemanha
numa amostragem de 142 animais. Em
2005, Bert et al., determinaram um valor
mais reduzido para a prevalncia de PBFD
na Itlia 8,05%, numa estirpe de 1516
animais. Estes autores realizaram anlises
de PCR da ORF V1 de sangue de animais
vivos e, ocasionalmente, de penas do ninho
onde permaneceram filhotes que vieram a
bito com suspeita de PBFD. A
discrepncia entre estes dois resultados
deve-se principalmente natureza do
material biolgico que foi testado (penas) e
diferena no tamanho das amostras. De
fato, essas diferenas no permitem sequer
que se comparem os resultados obtidos nas
duas publicaes (Bert et al., 2005).

47

A diferena entre as astirpes do estudo de

Rahaus e Wolff (2003) e as do atual estudo
poderia ser devida ao fato de os psitacdeos
do novo mundo serem mais resistentes
PBFD e no apresentarem sintomatologia,
sendo portadores da doena. Diversos
autores tm descrito a menor predisposio
das espcies americanas para um quadro
sintomtico (Gerlach, 1999). Essa diferena
poderia ser tambm devida natureza do
material biolgico testado, visto que na
Itlia foram feitos PCRs de sangue e pena.

quadro agudo da doena sem se chegar a

um diagnstico que possa entrar no clculo
da prevalncia (Bert et al., 2005). Esses
resultados podem indicar que a propagao
do vrus no continente europeu pode estar
descontrolada e a PBFD pode ser
responsvel pela perda de grande
quantidade de psitacdeos, sendo prejuzo
tanto para o comrcio quanto para os
amantes dessas aves (Bert et al., 2005).
O quadro clnico mais identificado foi o
assintomtico (n=11), 91,6% do total de
positivos (animais de rotina do CETAS).
Este fato relevante em termos de
patogenia do vrus e refora a importncia
do teste rotineiro das aves, mesmo que
aparentemente saudveis. Os animais
positivos
assintomticos
apresentam
quadros latentes e so potencias
transmissores ou mesmo podem vir a
desenvolver
sintomas
posteriormente
(Piarra, 2009).

As prevalncias encontradas no estudo feito

na Itlia (Bert et al., 2005) e encontradas no
presente estudo foram similares, embora
no diretamente comparveis, devido s
diferenas das espcies de aves estudadas,
nmero de amostras e natureza do material
biolgico testado.
Ambos estudos realizados na Europa
apresentaram prevalncias elevadas e
bastante preocupantes, devido ao fato de
muitos filhotes poderem vir a bito com o

Tabela 6. Prevalncia de BFDV por PCR, tendo em conta os grupos taxonmicos

Grupo taxonmico
Amazona aestiva
Amazona amazonica
Aratinga leucophtalma
Pionus maximiliani
Ara ararauna
Amazona vinacea
Amazona rhodochoryta
Guarouba guarouba
Anodorhynchus
hyacinthinus
Total

Total
160
11
2
1
3
5
4
1
3

Total de positivos (n)

11
0
0
0
1
0
0
0
0

Prevalncia (%)
6,25%
0%
0%
0%
33,33%
0%
0%
0%
0%

190

12

6,31%

O estudo feito por Piarra, (2009) indicou

que as amostras post-mortem de outros
tecidos que no sangue foram sempre
positivas (n=3), o que pode revelar maior
sensibilidade da anlise de PCR para o
tecido de rgos linfides e heptico. No
atual estudo a maioria dos testes positivos

foram de tecidos hepticos. Como j foi

referido anteriormente, o BFDV infecta
clulas linfides em multiplicao e estes
tendem a concentrar-se nos rgos com
funes imunitrias da ave.

48

No estudo feito por Bert (2005), foram

estudados 253 aves do gnero Amazona,
com porcentagem de positivos de 2,42%
(6/253). No estudo atual foram avaliados
180 psitacdeos do gnero Amazona sendo a
porcentagem de positivos de 5,5%.
A prevalncia em aves em triagem
observada no presente estudo menor que a
relatada na maioria dos estudos anteriores,
particularmente daqueles realizados em
pases europeus os quais estudaram aves
tanto do novo como do velho mundo
(Raidal et al., 1993; Rahaus & Wolff,
2003; Bert et al., 2005; Khalesi et al., 2005;
Phalen, 2006; Hsu et al., 2006; Piarra,
2009). Tambm as aves estudadas nos
outros pases, muitas das vezes chegavam
rotina dos laboratrios de vrias origens,
indicando tambm que esses resultados no
podem ser comparados com o atual estudo,
pois este teve foco em animais de centro de
triagem.
At ao momento no foram designadas
espcies reservatrio do vrus. A existncia
de vrios gentipos que no esto
totalmente
caracterizados
quanto

patogenia e especificidade ao hospedeiro,

vem dificultar o controle da PBFD. No
entanto, a prevalncia e sintomatologia em
diferentes espcies hospedeiras poderiam
estar relacionadas a algumas caractersticas
genticas prprias. Entretanto, o contato e a
proximidade entre animais de espcies e
origens distintas, devero ser sempre
evitados. Enquanto a imunizao vacinal
no estiver disponvel comercialmente, a
realizao de testes de diagnstico
preventivos parece ser a melhor forma de
controle com estratgias de biosseguridade
entre plantis.
A separao entre espcies nativas e
selvagens, em criatrios conservacionistas,
pode ser uma estratgia para a viabilizao
da recuperao das espcies ameaadas,
com vistas reduo de PBFD. A
reproduo, o isolamento e/ou eliminao

dos animais positivos em conjunto com as

medidas de quarentena mnimas, so
medidas a serem observadas para reduzir a
disseminao do vrus. A aplicao de
mtodos rpidos e especficos de
diagnstico para PBFD, especialmente nos
centros
de
triagem,
unidades
de
conservao e criatrios comerciais poder
permitir melhor conhecimento sobre a
prevalncia da PBFD no Estado e no Brasil,
e o delineamento de estratgias ideais de
controle.

5. Concluses
- Demonstra-se a ocorrncia do circovrus
BFDV nos psitacdeos em triagem no
CETAS em Belo Horizonte.
- Na grande maioria dos casos de alopecia
no houve deteco de BFDV, sugerindo
outras etiologias para problemas de
empenamento.
- Detectou-se a ocorrncia do genoma de
BFDV em maior percentagem em Amazona
aestiva e, em apenas um indivduo de Ara
ararauna.
- Foram negativas para o genoma de BFDV
as espcies Aratinga leucophtalma, Pionus
maximiliani,
Guarouba
guarouba,
Amazona amazonica, Amazona vinacea,
Amazona rhodochoryta e Anodorhynchus
hyacinthinus.
- Com a exceo de Ara ararauna, com
alteraes de empenamento, todos os
demais quadros positivos para BFDV foram
assintomticos.
- A predominncia de infeces subclnicas
sugere ateno para o risco da mistura de
aves de origens e espcies diferentes.
- Os materiais de eleio para PCR com a
extrao de DNA por slica, foram amostras
de fgado e sangue. Com este mtodo de
extrao o swab cloacal no foi satisfatrio.

49

- A deteco, significativa no fgado sugere

o rgo como a melhor escolha para
diagnstico e triagem de lotes para PBFD.
- A deteco em Amazona aestiva e Ara
ararauna, espcies em que h poucos
relatos no Brasil, poderia haver algum fator
associado de maior susceptibilidade.
- Houve similaridade de 98% entre as
sequncias das estirpes locais com
sequncias de isolados descritos na frica
do Sul, ustria e Japo, podendo ser
estirpes
de
ocorrncia
mundial,
potencialmente chegadas ao Brasil com o
comrcio legal e ilegal de psitacdeos.
- As sequncias das estirpes de BFDV
brasileiras BH 215 e BH 732 foram
depositadas no GenBank (JQ649409 e
JQ649410).
- A sequncia da estirpe BH 27 de
Psittacula krameri foi depositada no
GenBank (JQ649411).
- A histopatologia, considerada como
mtodo diagnstico complementar, no
permitiu a visualizao de corpsculos de
incluso nos hepatcitos, caractersticos da
PBFD nas aves positivas, embora com
indcios de infeco viral.
- No foi possvel relacionar a infeco pelo
BFDV com a origem geogrfica dos
animais.

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Anexo I
CITES
Apndices I, II, III para PSITTACIFORMES em 14/10/2010
Anexo I

Anexo II

Cacatuas (Cacatuidae)

PSITTACIFORMES spp.

Cacatua goffiniana, Cacatua

(Exceto as espcies incluidas no

haematuropygia , Cacatua

Apndice I e Agapornis

moluccensis , Cacatua

roseicollis, Melopsittacus

sulphurea, Probosciger

undulatus, Nymphicus

aterrimus

hollandicus e Psittacula

Anexo III

krameri, que no esto includos

no Apndices)
Lordeos (Loriidae)
Eos histrio, Vini ultramarina
Papagaios, periquitos, araras
(Psittacidae)
Amazona arausiaca , Amazona,
auropalliata , Amazona
barbadensis, Amazona
brasiliensis, Amazona finschi,
Amazona guildingii, Amazona
imperialis, Amazona
leucocephala, Amazona oratrix,
Amazona pretrei, Amazona
rhodocorytha, Amazona
tucumana , Amazona versicolor,
Amazona vinacea , Amazona
viridigenalis

56

Anexo II

Ficha clinica n:

Data:

Animal:

Espcie:

Condio corporal:

Ruim

Anilha:

Regular

Boa

Histrico e anamnese:

Exame clnico:
Temp:

F.C.:

F.R.:

Mucosas:

Exame especfico:
Falta de penas?

Sim

No

Se sim, qual regio:

Alimentao: est se alimentando? Ingerindo gua?

Ao remover as penas:

friveis

feias

arrancando fcil

Cicatriz:
Mancha reprodutora:
Leses knemidocpticas:
Marcas de estresse:

Pena hemorrgica:

57

Colorao anormal de penas:

Reteno de bainha das penas (umidade):
Penas de formas anormais:
Malnutrio:
Traumatismo:
Administrao de parasitcida:
Obesidade, muda de pena:
Recinto:

Autobicamento:
Dieta:
Problema comportamental:

Ectoparasitos macroscopia:
Penas para microscocpia :
Observaes:

58