EVALUACIN DELOS EFECTOS DE LA Gentiana lutea L.

EN RATAS
CON LESIONES EN LAS MICROVELLOSIDADES DEL EPITELIO
INTESTINAL.

Flores Ongay Juan Alejandro

Ramos Blancas Guillermo Alberto

El proceso de nutricin va mas all del hecho de ingerir los alimentos, si no que tambin hay
que absorberlos, es decir, transportarlos al interior del organismo a travs de la mucosa del tubo
digestivo La digestin y la absorcin de los nutrientes tienen lugar en el intestino delgado el cual
es un tubo de unos 6 m de largo y de dimetro progresivamente decreciente que va desde el
piloro hasta la vlvula ilecoidal, la cual lo separa del intestino grueso. Esta dividido en tres
porciones:
Duodeno: (es una estructura retroperitoneal) que tiene 25 cm de longitud
Yeyuno: Mide entre 2 y 2.5 m
Ileon: mide entre 3 y 3.5 m
Las funciones del intestino delgado son de 3 tipos:

Conduccin de los alimentos desde l estomago hasta el intestino grueso.

Digestin de los alimentos.

Absorcin de los alimentos que deben atravesar la mucosa intestinal y pasar al torrente
sanguneo.
(Robinson 1987)
Cuando alguna de las capas de microvellosidades del intestino ha sufrido algn tipo de
lesin el dao es de consideraciones graves, pues la capacidad de absorcin es menor, y por
tanto se sufre de una desnutricin a gran nivel. (Harrison 2001)
Estas lesiones se encuentran generalizados bajo el nombre de Sndrome de mala absorcin
(SMA), que es el dficit de aprovechamiento de nutrientes debido a una disminucin del rea de
absorcin en el intestino delgado. (Harrison 2001)
En la actualidad, la medicina aloptica no ha buscado la manera de mejorar la absorcin de
nutrientes; mas bien, ha combatido la enfermedad dndole al cuerpo nutrientes en exceso para
que estos sean absorbidos en cantidades mnimas requeridas. Por ello, la herbolaria ha empezado
a entrar en accin contra este tipo de enfermedades con el uso de plantas que se sabe tienen
efectos regenerativos sobre algunas clulas, como en el caso de la planta Gentiana lutea

Evaluacin del efecto de la Gentiana lutea en ratas con lesiones en las

microvellosidades del epitelio intestinal
El proceso de nutricin va mas all del hecho de ingerir los alimentos, si no que tambin
hay que absorberlos, es decir, transportarlos al interior del organismo a travs de la mucosa del
tubo digestivo; por otro lado, la digestin es un proceso continuo desde la boca, hasta el final del
intestino delgado, que se basa en la fragmentacin progresiva del alimento hasta que este de un
tamao que pueda ser transportado a travs de la membrana epitelial hasta el torrente sanguneo.
(Escuredo 1993). Esto es realizado gracias al aparato digestivo que es el sistema encargado de
incorporar los alimentos desde el exterior hasta el torrente sanguneo, el cual los distribuye por
todo el organismo.
Pero el aparato digestivo es una estructura exterior que presenta defensa contra la invasin
de microorganismos, pero al mismo tiempo no debe tener una superficie tan impermeable como
para que los alimentos no puedan entrar en el cuerpo. Esto se soluciona con la presencia de una
sustancia espesa que acta como una barrera, que varia de composicin en las diferentes
porciones del tubo digestivo (moco) y que es secretada por las membranas digestivas (Escuredo
1993).
La digestin y la absorcin de los nutrientes tienen lugar en el intestino delgado el cual es un
tubo de unos 6 m de largo y de dimetro progresivamente decreciente que va desde el piloro
hasta la vlvula ilecoidal, la cual lo separa del intestino grueso. Esta dividido en tres porciones:
Duodeno: (es una estructura retroperitoneal) que tiene 25 cm de longitud
Yeyuno: Mide entre 2 y 2.5 m
Ileon: mide entre 3 y 3.5 m
En el intestino delgado se pueden reconocer 4 capas caractersticas ( mucosa, submucosa,
muscular y serosa)
Las funciones del intestino delgado son de 3 tipos:

Conduccin de los alimentos desde l estomago hasta el intestino grueso.

Digestin de los alimentos.

Absorcin de los alimentos que deben atravesar la mucosa intestinal y pasar al torrente
sanguneo.
(Robinson 1987)
Cuando alguna de estas capas de microvellosidades del intestino ha sufrido algn tipo de
lesin el dao es de consideraciones graves, pues la capacidad de absorcin es menor, y por
tanto se sufre de una desnutricin a gran nivel. (Harrison 2001)
Estas lesiones se encuentran generalizados bajo el nombre de Sndrome de mala absorcin
(SMA), que es el dficit de aprovechamiento de nutrientes debido a una disminucin del rea de
absorcin en el intestino delgado. (Harrison 2001)
En la actualidad, la medicina aloptica no ha buscado la manera de mejorar la absorcin de
nutrientes; mas bien, ha combatido la enfermedad dndole al cuerpo nutrientes en exceso para

que estos sean absorbidos en cantidades mnimas requeridas. Por ello, la herbolaria ha empezado
a entrar en accin contra este tipo de enfermedades con el uso de plantas que se sabe tienen
efectos regenerativos sobre algunas clulas, como en el caso de la planta Gentiana lutea (Ver
apndice 1).
Tomando en cuenta que la regeneracin se debe a varios factores como son:
La diferenciacin de sus clulas: cuando mayor es la diferenciacin celular menor es la
capacidad de regeneracin.
La vida media de la clula: si la vida media de la clula es corta, entonces poseen una gran
capacidad de multiplicacin regeneracin.
Capacidad de divisin celular: cuando la vida media celular es corta existe una gran
capacidad de multiplicacin y se produce un pool de clulas indiferenciadas.
(Matthew 2 ed.)
Se podrn regenerar las microvellosidades del intestino? Tambin surge la pregunta la
raz de la Gentiana lutea, que tiene propiedades regenerativas, tiene realmente la capacidad de
regenerar las clulas epiteliales del ileon?

La metodologa se llev a cabo como se muestra a continuacin:

Se obtuvieron 20 ratas Wistar macho de con peso promedio de 300 a 400 gramos, sin
tratamiento anterior y separarlas en grupos como se muestra a continuacin:
Grupo control: 5
individuos

Se les realiz pruebas

hematolgicas para
estandarizar las
concentracioes de los
nutrientes

Al termino del
experimento se
sacrificaron 2 ratas
para realizar cortes
histolgicos en el
ileon (intestino
delgado.)

Grupo 1: 15 individuos; llevaron un tratamiento con neomicina (100

mg al dia en 2 tomas) durante 2 semanas. Y al termino de estas
semanas se subdividi este grupo de la siguiente forma:
Grupo control
neomicina: al finalizar
las dosis de neomicina,
no se le aplico
tratamiento posterior

Grupo genciana: al termino del

tratamiento de neomicina se le sometio
a un tratamiento contgenciana (250
gramos en 1 litro de agua diluido a una
concentracin al 75% en agua)

Se realizarn pruebas hematolgicas a estos individuos 40

minutos despus de la ingesta de alimentos y
bromatolgicas cada 24 horas.

Una vez a la semana se sacrific a un individuo de

cada grupo para extraer el intestino delgado y
realizarle cortes histolgicos al leon.

OBJETIVO GENERAL
Tratar de regenerar el tejido epitelial del intestino delgado de una rata Wistar con extractos
de Gentiana lutea.
OBJETIVOS PARTICULARES
Corroborar que los extractos de Gentiana lutea tienen alguna actividad teraputica a nivel
del intestino delgado.
Observar si el tratamiento provoca efectos secundarios.

PESO EN RATAS
PESO (gr)

800
600

grupo control
gpo 1
gpo 2

400
200
0
0

SEMANAS DE
TRATAMIENTO

porcentajes
encontrados

proteinas totales en escreta

50.00%
40.00%

control
gpo 1
gpo 2

30.00%
20.00%
10.00%
0.00%
0

semanas de tratamiento

lipidos en heces
5

mg/ml

4
cont
gpo 1
gpo 2

3
2
1
0
0

semanas de tratamiento

proteinas en suero

mg/ %

20
15

gpo control
gpo 1
gpo 2

10
5
0
0

semanas de tratamiento

ml/%

lipidos en suero
250
200
150
100
50
0
-50 0

control
gpo 1
gpo 2
2

semanas de tratamiento

CONCLUSIONES
Apndice 1: Gentiana lutea L. (Genciana Mayor)
Nombres vulgares:
Gengiba
Xenz

Gentiane
Enzin

Genciana

Descripcin
Planta herbacea, vivaz, con un tallo de 0.50 a 1.30 m, no ramificado, erecto, redondo, de 1
a 2 cm de grosor, hueco, de color verde glauco. Las hojas son abrazadoras, opuestas, elpticas,
de hasta 30 cm de altitud por 15 cm de anchura. La raz es larga, de hasta 1 m, ramificada y
gruesa, de 2 a 5 cm de dimetro, azurcadas longitudinalmente, arrugadas transversalmente, de
color parduzco exteriormente y amarillento en su interior, con olor fuerte y sabor muy margo.
Parte til: Las races.
Hbitat: En montaa, pastizales y laderas.
Altitud: Desde 300 a 2500 m.
Clima: Mediterrneo, atlntico, hmedo y clima de alta montaa.
Suelo: Tierras pardas hmedas con un pH no superior a 6.5.
Rendimiento
Con una densidad de 100,000 pl/ha, el rendimiento en raz varia de 24 a 40 tm/ha, que se
reducen de 6 a 10 tm de raz seca. La raz seca, no fermentada contiene de un 33 a un 45% de
materia extractiva hidrosoluble.
Composicin qumica
La raz contiene Hetersidos amargos como funcin lactona, l ms abundante es el
genciopicrsido, tambin llamado genciopicrina y genciamarina, que supone del 1 al 3% de la
droga fresca; Le acompaan otros glucsidos muy prximos, como el amarogentiosido, que a
pesar de su baja concentracin, 0.1% confiere a la raz su intenso amargor.
Es rica en nutrientes, como el trisacrido gencianosa y los disacridos genciobiosa y
sacarosa, que en la fermentacin se hidrolizan parcialmente a glucosa y fructosa.
Contiene pectina, grasas, trazas de aceite esencial y del 5 al 6% de elementos minerales.
Propiedades y aplicaciones.
Tiene propiedades tnicas, euppticas, aperitivas, estimulantes de las secreciones gstrica
y biliar, as como sus regeneraciones. Tambin tiene propiedades hemostticas (pectina),
antipirticas, antinflamatorias, y cicatrizantes.
Usadas por la industria farmacutica y la herboristera.

Por su carcter tnico y aperitivo, se usa principalmente, su raz fermentada, en las

industrias de bebidas alcohlicas y aperitivas. Se usa en locin, como tnico capilar, y
ampliamente en veterinaria. Se emplea en infusin en polvo y en las tres formas genricas:
Tintura, extracto fluido y extracto blando.

Apndice 2: Preparaciones histolgicas.

Las preparaciones histolgicas se prepararn con la finalidad de llevar a cabo estudios sobre el
epitelio intestinal, enfocndonos principalmente en las microvellosidades.
Primero, se fijar la muestra de tejido en formol salino amortiguado en un bao que durar de 24 a
72 horas. Despus, se lavara en agua para llevar a cabo la deshidratacin en alcohol etlico de
una forma gradual, empezando por alcohol al 10%, luego al 20%, al 40%, al 80% y al 100%,
dejando la muestra sumergida durante 2 horas en cada concentracin.
Ya deshidratada la muestra, se aclara en xilol (xileno) dando a la muestra 2 baos de 15 minutos
en el xilol.
Se infiltra en 3 cambios de parafina de 90 minutos cada uno y se incluye finalmente en parafina en
3 baos que duren de a hora. El bloque de parafina se afina para dejar la capa alrededor de
la muestra lo ms delgada posible, y se corta en micrtomo a un espesor de 5 micras.
A la muestra se le retira la parafina colocndola en una platina a 60 y se retira a la parafina
lquida, para despus sumergir la muestra en hematoxilina de Groat y se le da un lavado con
agua corriente.
Posteriormente, se sumerge en Eosina al 1% durante 2 a 5 minutos; se sumerge en picrofucsina
durante 5 minutos; se deshidrata y se monta en resina

Apndice 3: Glucosa (mtodo Trinder (GOD- PAP))

Fundamento: la glucosa es oxidada por la glucosa oxidasa (GOD) liberando peroxido de
Hidrgeno; este reacciona con e fenol y 4- aminofenazona en presencia de peroxidasa (POD),
dando un colorante rojo- violeta de antipirilquinonimina en cantidad proporcional a la glucosa
presente en la muestra.

GLUCOSA + O2 + H2O

GOD

Ac. Glucnico + H2O2

POD
2 H2O2 + 4- Aminofenazona + Fenol

Quinonimina + 4H2O

REACTIVOS:

Reactivos de color- enzimas.

Amortiguador de fosfatos 0.1 Mol/L, pH 7.5
4- Aminofenazona 0.25 mmol/L
Fenol 0.75 mmol/L
GOD 7.5 kU/L
POD 1.5 kU/L
Mutarrotasa 1.5 kU/L
Estabilizadores
Solucin patrn de glucosa: glucosa 100 mg/dL.

MTODO:
Mezclar en tubos 13 x 100
Adicin

Problema

Patrn

Suero o plasma

20 mL

___________

Solucin patrn

___________

20 mL

Reactivo de color

2mL

2 mL

Mezclar bien. Incubar a 25C durante 30 minutos o bien a

37C durante 10 minutos. Leer la absorbancia del
problema y del patrn a 546 NM contra blanco de agua. El
color es estable 1 hora.
CLCULO:
Glucosa mg % = (Aprod. /Apatron) x 100
CIFRA DE REFERENCIA.

Suero o plasma: 75- 115 mg %

Apndice 4: Lpidos totales (mtodo Merckotest)
INTRODUCCIN.
Debido a que las grasas son insolubles en agua, se define a los lpidos totales cricos como la
masa de material que puede ser extrada del suero como los solventes orgnicos tradicionales.
Los lpidos totales estn constituidos por los siguientes elementos: triglicridos, colesterol libre,
steres de colesterol, fosfolpidos, glucolpidos (cerebrosidos), lipoprotenas de baja y muy baja
densidad, as como lipoprotenas de alta densidad. Los lpidos desempean dos funciones
principales:
1.- Son componentes estructurales de la membrana nuclear mitocondrial y celular.
2.- Sirven como deposito de reserva de combustible metablico
3.- Los lpidos circulan en la sangre perifrica unidos a protenas derivndose en protenas; como
ejemplos el colesterol y los triglicridos, que constituyen las lipoprotenas de baja y alta densidad.
Se ha estimado una cifra media de los lpidos totales presentes en el torrente sanguneo que
oscilan entre los 500 y 600 mg %. De encontrarse un excedente de la cifra normal, se conoce
como hiperlipemia o estado quiloso.
FUNDAMENTO.
Los lpidos del suero sin desproteinizar reaccionan con cido sulfrico concentrado, en bao Mara
hirviendo, para formar iones carbonio que reaccionan con el grupo carbonilo del cido fosfricovainilla produciendo un complejo de color rosa, cuya intensidad es directamente proporcional a la
cantidad de lpidos presentes en la muestra problema.
REACTIVOS.

cido sulfrico concentrado (95-97 %)

Reactivo de coloracin (cido fosfrico- vainillina)
Patrn de lpidos totales (1000 mg %)

APARATOS Y MATERIAL.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Centrfuga clnica
Espectrofotmetro
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Tubos de ensaye de 16 x 150 mm
Pipetor automtico conteniendo el cido sulfrico concentrado
Pipetas graduadas de 5 mL
Pipeta para 50 microL.

TCNICA

1. Etiquetar dos tubos de 16 x 150 como ST (estndar) y P (problema) y proceder como

sigue para obtener cada una de las correspondientes mezclas reactivas:
METODO BIOXON:
TUBO PROBLEMA
TUBO ST (MEZCLA
(MEZCLA REACTIVA
REACTIVA ST)
P)

ADICIN

50 L

Suero

Sol. Patrn de
50 L
lpidos tot.
Ac. Sulfrico
1 mL
1 mm
concentrado
Mezclar bien e incubar en bao Maria 10 min. Enfriar en
bao Mara fri 5 min.
2. Etiquetar 3 tubos de 13 x 100 como problema, ST y Blanco y proceder como sigue:
ADICIN

TUBO PROBLEMA

TUBO ST

Mezcla reactiva
correspondiente
Ac. Sulfrico
concentrado

100 L

100 L

Reactivo de color

2.5 mL

TUBO BLANCO

100 L
2.5 mL

2.5 mL

Mezclar bien e incubar a 37 C durante 15 min. Medir la absorbencia A de los

tubos problema y ST a 540 nm calibrando el espectrofotmetro en el blanco.
CLCULO.
Lpido tot. del problema igual (CONC.Patron/ D.O.Patron) x D. O.Problema.
CIFRAS DE REFERENCIA.
450- 1000 mg %
ADICIN
Suero

MUESTRA
50 L

50 L

Patron
Reactivo de color

PATRON

2.5 mL

2.5 mL

Mezclar bien e incubar a 37 C durante 10 min. Leer la

absorbencia a 625 nm contra blanco de agua. El color es
estable 10 min.

CALCULOS.
Colesterol total mg/ 100 mL igual (Amuestra / Apatron) x 200
CIFRAS DE REFERENCIA.
Colesterol total hasta 239 mg %.

Apndice 5: Protenas totales (mtodo Biuret).

FUNDAMENTO
La reaccin de Biuret se basa en la adicin del reactivo alcalino de cobre (el biuret) que reacciona
con los enlaces peptdicos de las protenas, produciendo un color azul violeta debido al in que
forma entre el in cuprico y dos enlaces peptdicos adyacentes.
REACTIVOS
1. Reactivo de biuret (concentrado)
2. Reactivo de referencia para protenas totales (concentrado)
3. Solucin patrn de protenas totales.
SOLUCIONES

Reactivo de Biuret para protenas totales

Reactivo de referencia para protenas totales

Solucin patron: concentracin 4 g%

TCNICA
Pipetear en tubos de ensaye de 13 x 100
ADICIN
Suero
Patrn
Reactivo de
Biuret

BLANCO PATRON PROBLEMA

50
microlitros
50
microlitros
2.5 mL

2.5 mL

2.5 mL

Mezclar bien e incubar en bao mara a 37 C durante 15 minutos. Medir la bsorbancia de los
tubos a 545 nm calibrando a cero de absorbancia con el blanco. El color es estable durante 6
horas.
CLCULO
Protenas totales (g%)= (Conc patron/ D. O. Patrn) x D. O. Problema
CIFRAS DE REFERENCIA
Adultos y nios a 6.7 a 8.7 g
partir de los 3 aos
%

Nios menores de 3 5.4 a 8.7 g

aos
%
5.2 a 9.0 g
Recin nacidos
%

BIBLIOGRAFA

Robins, S. L. (1987) Patologa estructural y funcional. Editorial Interamericana Pgs. 816 817, Mxico, D. F.
RB27R62

Matthew, J. ; Lynch et al Mtodos de laboratorio 2 edicin. Editorial Interamericana. Mxico

D. F. Pgs. 695 883

Fauci, Longo. (2001) Harrisons principles of internal medicine. 15 edicin. Editorial

McGraw- Hill. Nueva York, EUA.

Paniagua C. Gloria (2003) manual de anlisis clnicos. 1 edicin. UNAM. Tlalnepantla,

Mxico.

Luna (1968) Histologist staining methods. The armed forces institute of pathology. EUA.

Muoz, Fernando (1993) Plantas medicinales y aromticas (estudio, cultivo y procesado).

2 edicin. Ediciones Mundi- Prensa. Bilbao, Espaa.