Resistncia bacteriana as

drogas antimicrobianas

Variao permanente resultante de Mutao

tempo

minutos , horas, dias, meses

1. Populao de uma bactria

em processo de multiplicao

2. Processo de crescimento e diviso

produzem naturalmente clulas
mutantes

5. Os mutantes continuam com o crescimento

na presena do antimicrobiano e iniciam
disperso pelo ambiente

Presso seletiva

4. Clulas so mortas ou impedidas de

multiplicao pela antimicrobiano com exceo
dos mutantes resistentes ao antimicrobiano
especfico.

Clulas so expostas a um
composto antimicrobiano

3. Populao continua multiplicao, e

originando ocasionalmente, mais
clulas mutantes

Variao permanente resultante de Recombinao Gentica

1. Duas populaes bacterianas A e B

crescem em um mesmo ambiente. A
espcie B resistente a droga X.

2. Troca de DNA (elementos genticos mveis)

ocorre entre clulas em baixa frequncia.

Presso seletiva

4. Na presena da droga X, as clulas da

espcie A que receberam gen da resistncia
da espcie B so capazes de multiplicar-se
enquanto que as clulas originalmente
sensveis no multiplicam-se.

Bactrias so expostas a
droga X.

3. Clulas da espcie A recebem o gen de

resistncia a droga X, presente no elemento
gentico mvel da espcie B.

Stios de ao de drogas antibacterianas

Azitromicina
Claritromicina
Estreptograminas
(Quinopristina/
Dalfopristina)

Tigeciclina

Sntese de
lipdeos
Platensimicina

Streptomyces platensis

DEFINIES
Resistente: aquela capaz de crescer in vitro
em presena da concentrao mdia que a droga
atinge no sangue do hospedeiro durante o
tratamento, quando administrada por via oral
Sensvel: Quando no cresce
nestas condies

TIPOS DE RESISTNCIA
Natural: Todos os indivduos da espcie so
resistentes
Ex. Ausncia do stio de ao
(Drogas que atuam na parede; Macroldeos e ausncia de
receptores nos ribossomos de Gram negativas)

Adquirida: Linhagens resistentes e

sensveis na mesma espcie

Mecanismos genticos - Mutaes e

Recombinao Gentica
Resistncia vantajosa s na presena da droga
(no provoca inibio ou morte de possveis
competidores da bactria resistente)

Natural ou intrnseca: Bactria est fora do

espectro de ao da droga

Resistncia

EXEMPLOS:
Penicilina G Bactrias Gram negativas
Penicilinas Micoplasma
Vancomicina Bactrias Gram negativas
Aminoglicosdeos Bactrias anaerbias

Adquirida: Por mecanismos genticos diversos,

surgem numa populao bacteriana amostras que
no sofrem mais a ao da droga, que
eficaz contra o resto da populao

Resistncia Cromossmica

(Mutao)

Resistncia Simples (uma nica droga)

possvel a transferncia desta resistncia

Tipos de Resistncia Cromossmica

Resistncia Extra-Cromossmica
Plasmdeos
Plasmdeo R (possuir o segmento FTR
Plamdeo F)

Perda do fator de resistncia (Cura)

(Repiques frequentes, uso de substncias qumicas)

Expresso Bioqumica da Resistncia

Mecanismos de ao

Drogas que
inibem a RNA
Polimerase:
Rifampicina

Mecanismos de resistncia
Reduo na permeabilidade
para a droga.

Drogas que inibem

a sntese do DNA:
Fluoroquinolonas.

Bomba de Efluxo

Parede
bacteriana

Drogas que inibem

a formao da
parede bacteriana:
Drogas que agem sobre
Penicilinas,
os ribossomos e sntese
Cefalosporinas,
protica:
Manobactmicos,
Aminoglicosdeos,
Carbapenem,
Tetraciclinas,
Vancomicina,
Macroldeos,
Clindamicina,
Cloranfenicol, Linezolida.

Modificao no stio
de ao da droga.
(PBP, DNA girase,
ribossomos)

Drogas que agem

sobre a membrana
plasmatica
alterando sua
estrutura
:Polimixinas,
Daptomicina.

Alterao ou destruio da droga

por enzimas (ex. -lactamase,
fosfotransferases, adenilase,
acetilase, acetiltransferase)

-lactamases do Grupo 1 (AmpC)

Testes de sensibilidade aos antimicrobianos

Kirby&Bauer

E Teste

Determinao de
sensibilidade bacteriana
aos antimicrobianos
Prof. Ary Fernandes Junior
Departamento de Microbiologia e
Imunologia
Instituto de Biocincias - UNESP
Distrito de Rubio Jnior s/n
CEP 18618-000/ Botucatu/ SP /Brasil
Tel. 14 3880.0412/0413
ary@ibb.unesp.br

Diagnstico microbiolgico
O diagnstico laboratorial das doenas
infecciosas comea com a indicao clnica
adequada do exame microbiolgico, o que
requer conhecimento da epidemiologia e da
fisiopatologia do processo infeccioso.

requer o conhecimento e a colaborao

de vrios profissionais

A suspeita clnica do processo

infeccioso determinar o tipo de
amostra clnica que deve ser enviada
ao laboratrio para confirmar,
estabelecer ou complementar o
diagnstico clnico
A coleta e o transporte da amostra so
etapas crticas na execuo do exame
microbiolgico.

Representao esquemtica do fluxograma da

amostra clnica enviada para o exame
microbiolgico

Identificao laboratorial de patgenos clnicos

(Fase analtica)

Antibiograma

Antibiograma
(Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI),

Auxiliar o clnico com a escolha do

antimicrobiano a prescrever para o
paciente
pois verifica se a bactria pesquisada
sensvel ou resistente aos antimicrobianos
testados.
Princpio da Diluio

Princpio da Difuso

1.Mtodos baseados na diluio da

droga
Diluio em caldo Concentrao
Inibitria Mnima (CIM) e Concentrao
Bactericida Mnima (CBM)
Diluio em meio de cultura slido
CIM

Macrodiluio em tubos (1 a 2 ml de meio)

Primeira a ser utilizada na avaliao da sensibilidade aos

agentes antimicrobianos e envolve a preparao de
diluies seriadas e logartmicas de antimicrobianos (por
exemplo, 1, 2, 4 e 8 g/mL) em um meio de cultura lquido,
o qual permitir o crescimento bacteriano.

Determinao da CIM pelo mtodo da diluio em

caldo. A CIM no exemplo abaixo de 16g/ml.

Microdiluio em Placas de Elisa (100 a 200 l)

Apresentao de uma
placa utilizada no
teste de microdiluio,
aps sua inoculao e
incubao.

16

32

64

128

256

512

1024 g/mL

Controles
positivos

2.Mtodos baseados na difuso da

droga
Princpio do mtodo de Kirby - Bauer
Parmetros a serem padronizados: meio
de cultura, discos, inoculao do germe
no meio, incubao das placas, leitura e
interpretao

a.Controle de qualidade

Mtodo de Kirby-Bauer
Meio de Cultura (Mueller-Hinton Meio Padro)
Permite crescimento satisfatrio da maioria dos
germes no fastidiosos;
No interfere com a atividade da droga
(Ex.: peptonas sulfas; Mg++ - gentamicina; Ca++,
Fe++, Mg++ - tetraciclinas)
So utilizadas placas de Petri (vidro ou plstico)
com camada do meio de 6 mm de espessura

Inculo (Padronizado)
Preparo: Transferir para um tubo com BHI
(Brain Heart Infusion) 5 colnias da bactria
em estudo; incubar a 37oC; obter densidade
equivalente ao padro de Mc Farland 0,5
(1,5 x 108 UFC/mL)

Obs. O padro 0,5 de Mc Farland o

correspondente a turvao mostrada em
soluo contendo 0,5 mL de BaCl2 a 1% em
99,5 mL de soluo de cido sulfrico a 1%)

0,5

1,0

2,0

3,0

Tubos da escala de McFarland

posicionados em frente do carto de
Wickerham.

Comparao da escala 0,5 de McFarland com

suspenso bacteriana
(E. coli ATCC 25922)

Semeadura: Swab estril; retirar excesso

de caldo e semear na superfcie do meio
uniformemente; secar em temperatura
ambiente por 3 a 5 minutos.
Importante: nmero de colnias
utilizadas (vrias); material contaminado
com flora normal (no usar colnias
provenientes de meios de
enriquecimento); variaes na densidade
do inculo possibilitam variaes tambm
no tamanho do halo de inibio

Discos
Aplicao: pressionar levemente contra a
superfcie do meio e pelo menos 2 cm da
borda da placa e a pelo menos 3 cm um
do outro (evitar halos de inibio em
fuso); usar apenas um disco de cada
grupo de drogas (concentrao nica)

Caractersticas: papel de filtro adequado;

concentrao de droga suficiente; prazo
de validade; controle de eficincia

Incubao das Placas

Em temperatura (37oC) e atmosfera
adequada para o crescimento da
bactria (aerobiose, anaerobiose, 10%
de CO2)
Atmosfera influi na atividade das drogas:
tetraciclina, meticilina e novobiocina
CO2; estreptomicina e canamicina anaerobiose

Leitura das Placas

Aps 18-24 horas de incubao; usar
compasso ou rgua para determinar o
dimetro do halo de inibio; colnias
dentro do halo sugerem mutantes
resistentes ou contaminantes.

Halo de
leitura em
mm

Interpretao

resistente, moderadamente resistente ou

sensvel, de acordo com o halo de
inibio;
h correlao inversa entre concentrao
inibitria mnima e dimetro do halo de
inibio.

Curva de regresso linear da correlao entre a

CIM e o halo de inibio.

Kirby e Bauer Mtodo dos discos

Intermedirio Sensvel

CIM (g/mL)

Resistente

Halo de inibio (mm)

Etest ( teste da elipse = Episilometer test)

rea de
Crescimento
bacteriano
Fita graduada
de material
impermevel

Elipse de
inibio

Concentrao
Inibitria Mnima
(CIM)

Apresentao do Etest para avaliao da CIM aps

incubao

Muito obrigado!!!!