Revista Cubana de Farmacia.

2009; 43(4): 20-30

ARTCULOS ORIGINALES

Diseo y validacin de un mtodo espectrofotomtrico

para el control de calidad del piroxicam jalea 0,5 %
Design and validation of a spectrophotometry method used in
quality control of a 0,5 % Piroxican jelly

Yania Surez PrezI; Oscar Garca PulpeiroII; Thuy Dao ThanhIII; Munkhzul
MishigIV
I

Doctor en Ciencias Farmacuticas. Licenciada en Ciencias Farmacuticas. Mster en

Tecnologa y Control de Medicamentos. Profesor Auxiliar. Instituto de Farmacia y
Alimentos. Universidad de La Habana. La Habana, Cuba.
II
Licenciado en Ciencias Farmacuticas. Mster en Tecnologa y Control de
Medicamentos. Empresa Laboratorio "Roberto Escudero Daz". La Habana, Cuba.
III
Licenciado en Ciencias Farmacuticas. Repblica Popular de Mongolia.
IV
Licenciado en Ciencias Farmacuticas. Repblica Socialista de Viet Nam.

RESUMEN
La jalea de piroxicam al 0,5 % es un nuevo producto en fase de desarrollo de la
Empresa Laboratorio "Roberto Escudero Daz". En el presente trabajo se dise un
mtodo por espectrofotometra UV, para lo cual se emple cido clorhdrico
etanlico como disolvente y 328 nm como longitud de onda de mxima absorcin.
Se estableci un procedimiento simple y rpido para procesar la muestra previa al
anlisis. Posteriormente se aplic la validacin de este segn exigencias
regulatorias actuales. El mtodo result suficientemente especfico, lineal, preciso y
exacto en el rango de 3,125 a 9,375 g/mL. Se aplic a la cuantificacin del
principio activo en 3 lotes de la formulacin desarrollada, con resultados
satisfactorios sin diferencias estadsticamente significativas segn el procesamiento
aplicado.
Palabras clave: Piroxicam, jalea, espectrofotometra, validacin.

ABSTRACT

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The 0.5 % jelly Piroxican is a new product in developing phase from "Roberto
Escudero Daz" Laboratory Enterprise. In present paper a UV spectrophotometry
method was designed using ethanol chloride acid as solvent and 328 nm as
maximal absorption wave length. A simple and fast procedure was established to
processing the sample previous to analysis. Subsequently, we applied the validation
of it according current regulatory demands. Method was enough specific, linear,
precise and exact at the 3.125 to 9.375 g/mL. Active principle quantification was
applied in three batches of developed formula achieving satisfactory results without
statistically significant differences according the applied procedure.
Key words: Piroxican, jelly, spectrophotometry, validation.

INTRODUCCIN
La cuantificacin de piroxicam en cualquier matriz por mtodos oficiales se realiza
por cromatografa lquida de alta resolucin (CLAR) y detector ultravioleta (UV) a
248 nm.1,2
La aplicacin de la espectrofotometra UV se limita al ensayo de disolucin de las
cpsulas de piroxicam.1,2 La solucin de la muestra previamente filtrada se analiza
por comparacin contra patrn a 333 nm.
Teniendo en cuenta las posibilidades desde el punto de vista analtico que presenta
la estructura de este compuesto para su cuantificacin por mtodos
espectrofotomtricos, la facilidad de aplicacin de estas tcnicas en cualquier
laboratorio, as como la importancia de desarrollar un mtodo confiable pero a la
vez, rpido, sencillo y de bajo costo para asumir el control de rutina de la nueva
formulacin una vez introducida, se valor como una alternativa ventajosa para el
control de calidad del piroxicam en la jalea al 0,5 %.

MTODOS
Desarrollo de un mtodo espectrofotomtrico para control de calidad del
piroxicam en la jalea al 0,5 %
Se dise un mtodo por espectrofotometra UV directo.
- Determinacin de la longitud de onda de mxima absorcin del piroxicam
en solucin
En la etapa de desarrollo del mtodo se determin la longitud de onda () de
mxima absorcin del piroxicam materia prima en solucin. Se prepar una
solucin de concentracin 6,25 g/mL, con el empleo de HCl etanlico 0,01 N como
disolvente, a la cual se le determin el espectro UV en el rango de 220 a 430 nm.

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- Procesamiento de la muestra para el anlisis

Teniendo en cuenta que el mtodo se disea para el control de calidad del
piroxicam en la jalea al 0,5 %, fue necesario proponer una metodologa analtica
que permitiera obtener una solucin del principio activo de concentracin adecuada
a partir de la forma terminada.
A continuacin se describe el mtodo propuesto:
1. Pesar 0,125 g de jalea de piroxicam 0,5 % en un vaso de precipitado de 50 mL.
2. Aadir 10 mL de cido clorhdrico etanlico 0,01 N y agitar vigorosamente.
3. Trasvasar cuantitativamente a matraz de 100 mL.
4. Completar a volumen con cido clorhdrico etanlico 0,01 N y agitar.
5. Leer la absorbancia de la muestra a la longitud de onda de mxima absorcin
empleando el disolvente como ensayo de correccin.
Validacin del mtodo analtico para control de calidad
Se realiz la validacin del mtodo espectrofotomtrico segn los parmetros
mnimos establecidos para la categora I.2 Adems se tuvieron en cuenta las
exigencias regulatorias nacionales.3
Especificidad: Se evaluaron por triplicado placebos del producto aplicando el
mtodo propuesto. Se registr el espectro UV en el rango de 220-370 nm y se
realizaron lecturas de estas muestras por triplicado a = 328 nm.
Criterio de aceptacin: No se debe registrar respuesta en el rango de inters
analtico para el piroxicam.
Linealidad del sistema: Se realiz mediante el anlisis de 5 concentraciones de
piroxicam materia prima por triplicado, en un rango de 50-150 % de la cantidad
terica declarada como 100 % (6,25 g/mL), equivalentes a 3,125; 4,687; 6,250;
7,8125 y 9,375 g/mL respectivamente.
Se construy una curva de calibracin de absorbancia vs. concentracin terica
(%). Los resultados se procesaron estadsticamente a travs del paquete
STATISTICA for Windows versin 6.01 (opcin regresin lineal mltiple) y se
determin: coeficiente de correlacin lineal (r), coeficiente de determinacin (r2),
intercepto (a) y pendiente (b), para el 95 % de confianza
Criterios de aceptacin:
- Ecuacin de la recta: y= bx + y
- 0,99
- 0,98

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- Prueba de proporcionalidad del mtodo analtico o hiptesis nula de la ordenada

en el origen a= 0.
- Se emple la prueba estadstica de la t de Student para n-2 grados de libertad,
siendo n el nmero total de valores donde: texp < ttab.
- Prueba de la hiptesis nula de la pendiente: b= 0. Se determin a partir de una
prueba ANOVA de la regresin, teniendo en cuenta la probabilidad asociada al valor
de la pendiente, es decir, si la p<< 0,05, el valor de "b" difiere significativamente
de cero.
- Se calcularon los factores de respuesta (), el valor medio, la DE y el coeficiente
de variacin (CV) que debe ser menor que 5 %.4
Linealidad del mtodo
Se evaluaron placebos del producto cargados con el 50, 75, 100, 125 y 150 % del
principio activo respectivamente. En cada nivel de concentracin se analizaron 3
muestras. Se construy la curva de calibracin correspondiente a los resultados de
los 15 puntos experimentales. Se aplic el mismo procesamiento estadstico
descrito para la linealidad del sistema, as como los mismos criterios de aceptacin.
Exactitud: Se analizaron por triplicado placebos cargados con cantidades
equivalentes al 50, 100 y 150 % respecto a la cantidad terica declarada. Se
construy una curva de recuperacin de % recuperado (Y) vs. % aadido (X). Los
resultados fueron procesados estadsticamente de igual forma que la curva de
calibracin de la linealidad del sistema y del mtodo. Adems se calcul el % de
recobro (R), el recobrado medio ( ) y el CV total.
Criterios de aceptacin:

: 96-104 % (para productos semislidos) y CV

3,0 %

Adems, se realiz la prueba G de Cochran, para determinar si el factor

concentracin tiene alguna influencia en los resultados. Si Gexp < Gtab las
varianzas de las 3 concentraciones evaluadas son equivalentes, o lo que es igual, el
factor concentracin no influye en la variabilidad de los resultados.4
Por ltimo se aplic la prueba de la t de Student para demostrar que no existen
diferencias significativas entre el valor medio de recobro obtenido y el 100 %,
siendo: n-1 los grados de libertad y = 0,05.4,5
Precisin
- Repetibilidad.
Para la repetibilidad se evaluaron por triplicado placebos cargados con la
concentracin equivalente al 100 % y un valor bajo y otro alto comprendido dentro
del rango de la linealidad del mtodo, 50 y 150 % respectivamente. Se calcul el
CV en estos 3 niveles de concentracin y se compar con el criterio establecido. Las
determinaciones las realiz el mismo analista en las mismas condiciones de trabajo.
Criterio de aceptacin: CV

1,5 %.

- Precisin intermedia

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Participaron 2 analistas, en 2 das diferentes, en el mismo laboratorio. Se

analizaron por triplicado en cada caso muestras equivalentes al 100 %. Se calcul
el CV total.
Criterio de aceptacin: CV < 3,0 %
Adems se realizaron las siguientes pruebas:
- Prueba F de Snedecor: Se utiliz para determinar si existan diferencias
significativas entre los resultados de los analistas que emplearon el mismo mtodo
y entre los das en que se realizaron los anlisis. El valor de Fexp se compar con
Ftab para = 0,05; F1= n - 1 grados de libertad del numerador y F2= n -1 grados
de libertad del denominador. Si Fexp < Ftab no existe diferencia significativa entre la
precisin alcanzada por los analistas, en 2 das de trabajo.4,6
- Prueba de la t de Student: Se utiliz para comprobar si los valores obtenidos
entre los analistas, que emplearon igual mtodo, y los 2 das en que realizaron los
anlisis eran homogneos, para el nivel de significacin = 0,05 y los grados de
libertad seleccionados F= (n1 + n2) - 2. Si valor de texp < ttab, no existen
diferencias significativas.4,6
Rango
Se estableci el intervalo en que se cumplen los criterios de linealidad, exactitud y
precisin del mtodo.
Control de calidad de los lotes elaborados a escala de laboratorio y de la
formulacin de referencia
A cada lote de producto terminado se le realiz el control qumico con el empleo del
mtodo espectrofotomtrico diseado y validado para el control de rutina de los
lotes de jalea de piroxicam al 0,5 %.
Los resultados obtenidos se compararon estadsticamente con el empleo del anlisis
de varianza de clasificacin simple a travs del programa ANOVA-1 (Lpez R,
1994). La existencia de diferencias significativas se determin para el 95 % de
confianza.

RESULTADOS
El espectro UV del piroxicam materia prima en HCl etanlico 0,01 N, se muestra en
la figura (A). Se observaron 2 mximos: 240 y 328 nm. Se seleccion para la
cuantificacin la mxima = 328 nm.

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Una vez seleccionada la de mxima absorcin y establecida una concentracin de

frmaco cuya absorbancia fue adecuada (concentracin de 6,25 g/mL con valores
de absorbancia alrededor de 0,45), se procedi a establecer una metodologa
analtica muy sencilla que permitiera obtener una solucin transparente a partir de
la forma terminada. En la figura (B) se presenta el espectro UV de una muestra al
100%.
El primer parmetro analizado durante la etapa de validacin fue la especificidad.
En la figura (C) se muestra el espectro UV del placebo tratado por el mtodo
propuesto. Como se observa la absorcin UV del placebo ocurre a menores de
290 nm, atribuidas al metil y propilparabeno presentes en la formulacin. El
mtodo result especfico ya que los valores de absorbancia obtenidos en el rango
de inters analtico para el piroxicam, no constituyen interferencias significativas
(0,0056 0,0005), ya que equivalen a menos del 1 %.
Los resultados de la linealidad del sistema y del mtodo se muestran en la tabla 1 y
los correspondientes a repetibilidad y exactitud se resumen en la tabla 2.

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La linealidad en ambos casos fue satisfactoria segn el cumplimiento de los

parmetros estadsticos establecidos (tabla 3).

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Al realizar el procesamiento estadstico de los resultados de la exactitud, se

comprob el cumplimiento de todos los criterios de aceptacin exigidos (tabla 3).
La tcnica fue exacta y no se afect por errores sistemticos de forma significativa.
Para la repetibilidad se estim el CV para 3 niveles de concentracin: bajo, medio y
alto. Se reportaron CV bajos, inferiores al 1,5 % establecido como lmite (tablas 2 y
3).
La precisin intermedia tambin fue evaluada y los resultados fueron satisfactorios.
Se obtuvo un CV acorde con el criterio de aceptacin (CV 3,0 %). Adems se
cumplieron satisfactoriamente las restantes pruebas aplicadas, de modo que los
errores aleatorios no repercutieron en gran medida sobre el mtodo desarrollado.
Todos los lotes mostraron correcta dosificacin de piroxicam, segn criterios de
Farmacopea1 (tabla 4). La comparacin estadstica entre formulaciones por anlisis
de varianza se realiz por ANOVA-1. Los resultados se reflejan en la tabla 4, los
cuales demostraron que no existen diferencias ni entre lotes ni entre rplicas, por lo
que se garantiz reproducibilidad en la dosificacin, que adems cumple con el
rango establecido de 90-110 %.

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DISCUSIN
Se desarroll un mtodo espectrofotomtrico directo para el control de calidad del
piroxicam en la jalea al 0,5 %, teniendo en cuenta la presencia de grupos
cromforos en la estructura del compuesto. La espectrofotometra UV tiene como
ventajas la rapidez y simplicidad de la metodologa analtica a seguir. Con vistas al
posterior registro de este producto por la entidad reguladora nacional, se
recomienda el uso de este mtodo espectrofotomtrico para la liberacin de los
lotes de forma ms rpida.
Se seleccion para la cuantificacin la mxima = 328 nm, ya que en esta zona y en
el medio ligeramente cido utilizado, no se deben presentar interferencias de los
parabenos. La absorcin de los parabenos en medio cido se desplaza hacia
menores longitudes de onda, por efecto hipsocrmico, es decir, se presenta por
debajo de los 300 nm. Este fenmeno sera una complicacin desde el punto de
vista analtico si se trabajara en medio alcalino, donde ocurre efecto batocrmico de
la banda de absorcin de los parabenos.
El empleo del HCl etanlico 0,01 N como disolvente, se justifica teniendo en cuenta
la pobre solubilidad del principio activo en medio acuoso y en etanol. A su vez se
reporta como disolvente del piroxicam en Farmacopea, el HCl metnolico de igual
concentracin a la seleccionada, para la identificacin por cromatografa en capa
delgada (CCD), para la preparacin de las muestras y patrones en el mtodo de
cuantificacin por CLAR en la jalea y en el ensayo de disolucin de las cpsulas de
piroxicam.1 Se sustituy el metanol, disolvente de mayor costo y toxicidad por el
alcohol etlico de produccin nacional. De esta forma se propone una metodologa
menos agresiva para el hombre y el medio ambiente, y al mismo tiempo, ms
rentable desde el punto de vista econmico.
El conjunto de resultados obtenidos en los ensayos de linealidad, permiti afirmar
que tanto el sistema como el mtodo fueron lineales en el rango estudiado (3,1259,375/mL), ya que se obtuvo una elevada proporcionalidad entre la respuesta
obtenida y la concentracin del analito, avalado por el cumplimiento de todos los
criterios estadsticos que derivan del anlisis de la regresin lineal.

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El recobrado medio no excedi el lmite de 96-104% propuesto para preparaciones

semislidas. Adems el CV total qued comprendido en el rango de aceptacin
acotado por un lmite superior igual al 3%. Adicionalmente se evalu la influencia
de la concentracin de analito en la varianza (S) de los resultados a travs de la
prueba de G de Cochran (tabla 3). Como la Gexp < Gtab, las varianzas de los 3
niveles de concentracin evaluados fueron equivalentes. Es decir, no influy el
factor concentracin en la exactitud del mtodo. Por su parte, la prueba de la t de
Student corrobor la exactitud, ya que la t obtenida fue inferior a la tabulada, por lo
que no existieron diferencias estadsticamente significativas entre el recobrado
medio y el 100 %.
En el estudio de la precisin, el anlisis se complement con las pruebas de Fischer
y de la t de Student. En ambos anlisis la Fexp < Ftab por lo que no existieron
diferencias significativas entre las precisiones de los analistas, independientemente
del da en que se efectu el ensayo. Los valores de las texp resultaron menores que
las ttab en cada caso, por lo que no existieron diferencias significativas entre los
valores medios obtenidos por los analistas. El conjunto de estos resultados permiti
asegurar que los resultados fueron homogneos, lo que ratifica la precisin del
mtodo en estudio.
El cumplimiento de las exigencias establecidas para la validacin de tcnicas
analticas, garantiza que el procedimiento desarrollado fue suficientemente
especfico, lineal, preciso y exacto para la cuantificacin del piroxicam en la jalea al
0,5 %, por lo que se considera un mtodo vlido para realizar el control de rutina
de este nuevo medicamento, en el rango estudiado.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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1995.

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Recibido: 16 de julio de 2009.

Aprobado: 20 de agosto de 2009.

Lic. Yania Surez Prez. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La

Habana. Ave 23 No. 21 425 e/ 214 y 222, La Coronela, municipio La Lisa, La
Habana, Cuba. Correo electrnico: yania_as@yahoo.es

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