Cultura e Crescimento Microbiano

Cultura e Crescimento Microbiano
Nutrio
BIOLOGIA AMBIENTAL
Tecnologia em Saneamento Ambiental
Prof. Mestranda Alexandra Zampieri &
Prof. Mestranda Graziele Ruas
2 Sem 2014
Crescimento Microbiano
Objetivos da Aula:
Identificar as fases da curva de crescimento dos
microrganismos e o que caracteriza o incio e o
fim de cada fase;
Conhecer os tipos de associaes e os fatores
intrnsecos e extrnsecos que influenciam na
velocidade de crescimento dos microrganismos;
Conhecer os mtodos de quantificao dos
microrganismos.
Biologia Ambiental 2014
O CRESCIMENTO CELULAR definido como
aumento coordenado de todos os
constituintes celulares. Consequncia =>
Multiplicao Celular;
O CRESCIMENTO MICROBIANO
normalmente associado ao crescimento de
uma populao de clulas de um dado
microrganismo, ou seja, com aumento do
nmero de clulas da populao
Tempo de Gerao o intervalo de tempo
necessrio para que uma clula se duplique;
O tempo de gerao varivel para os
diferentes organismos, podendo ser de 10 a
20 minutos ou at dias, os microrganismos de
interesse ambiental ou tecnolgico tm tempo
de gerao que varia de 1 a 3 horas;
Depende dos fatores genticos, ambientais e
nutricionais.
O Crescimento Microbiano pode ocorrer em
meio lquido com clulas em suspenso ou
associados a superfcies (biofilmes, flocos, e
outros).
O crescimento
individual
termina com a
diviso da
clula, gerando
duas clulas
filhas,
independentes e
autnomas.
Etapas do Crescimento Populacional

INCIO;
FASE LAG (latncia);
FASE EXPONENCIAL (log);
FASE ESTACIONRIA;
FASE DE DECLNIO.
Sistema fechado de cultivo => curva de
crescimento.
crescimento.
crescimento.
10
Crescimento Microbiano Fase LAG ou

Adaptativa (I)
Fase em que no h multiplicao celular;
Ocorre a sntese de enzimas;
As clulas apresentam-se em tamanho
aumentado;
H sntese e consumo de grnulos de reserva.
11
Crescimento Microbiano Fase LAG ou

Adaptativa (I)
um perodo de adaptao ao novo meio,
ocorre a sntese de enzimas;
Tamanho das clulas;
da atividade Metablica;
Transcrio do DNA (sem replicao);
Sntese de DNA.
12
Crescimento Microbiano Fase LOG ou

Exponencial (III)
Crescimento logartmico (Exponencial);

Fim da sntese de enzimas;
Clula voltam ao tamanho normal;
Absorvendo os nutrientes do meio;
Sintetizando constituintes celulares;
As clulas so sensveis s mudanas
ambientais e compostos antimicrobianos;
H predominncia de clulas jovens.
13

Exponencial (III)
Equao do Crescimento
N = N0.2n
Onde N o n de microrganismos ao fim de n
divises e N0 o n inicial de microrganismos;
A velocidade exponencial de crescimento
expressa pelo nmero de divises no tempo:
R=n/t-t0;
Tempo de Gerao:
G = 1/R.
14

Exponencial (III)
15
Fase Log ou Exponencial (III)
16
Crescimento Microbiano Fase

Estacionria (III)
O nmero de bactrias que surge o mesmo
que morre;
Acmulo de metablicos txicos (cidos
Orgnicos);
Exausto de Nutrientes;
Alterao nas condies fsicas do meio;
As clulas apresentam tamanho
Menor que nas fases anteriores;
17
Crescimento Microbiano Fase

Estacionria (III)
Nessa fase h um favorecimento adeso e
agregao entre as clulas;
A membrana plasmtica torna-se menos
permevel;
A clula tem maior resistncia ao choque
trmico, presso osmtica e estresse
oxidativo;
H reduo da sntese proteica;
H sntese de protenas especficas.
18
Crescimento Microbiano Fase de

Declnio (IV)
As clulas perdem a capacidade de se dividir;
Nmero de clulas mortas > clulas novas;
Ocorre o processo de esporulao (Esporos
Bacterianos);
H impossibilidade de produo de energia e
elevado produo de enzimas autolticas.
19
Crescimento Descontnuo e
Crescimento Contnuo
Crescimento Descontnuo: so as quatro fases
citadas (Lag, Log, Estacionria e Declnio);
Crescimento Contnuo: compreende as duas
fases lag e exponencial, estabilizando e
mantendo a fase exponencial com o
suprimento contnuo de nutrientes e remoo
contnua e na mesma proporo de clulas do
meio.
20
Medidas de Crescimento Microbiano

Vrios mtodos na contagem do nmero total
de clulas ou mensurao da massa celular
adaptveis para diferentes organismos ou
situaes;
Avaliao Direta contagem de clulas,
filtrao e tcnica do nmero mais provvel;
Avaliao Indireta Turbidez, Atividade
Metablica e Peso seco.
21
Medidas do Crescimento Microbiano

Mtodos que determinam o nmero de
clulas;
Mtodos que determinam a massa das
clulas.
22
Mtodos que Determinam o Nmero

de Clulas
Mtodo Diretos;
Mtodos Indiretos.
23

de Clulas Mtodo Direto
Mtodos Diretos
1. Enumerao ao microscpio
(com uso de lminas
especiais); (Cmara de
Petroff-Hausser e de
Neubauer);
2. Enumerao por cmara
eletrnica (atravs de
condutividade eltrica).
24
25
26

de Clulas Mtodo Indireto
Mtodos Indiretos
1. Mtodo de contagem de clulas viveis ou
unidades formadoras de colnias (UFC).
27

Diluio Decimal para
Plaqueamento
28
29
til para analisar grandes volumes de gua
30
31

MTODO DO NMERO MAIS PROVVEL
uma tcnica estatstica: quanto maior o nmero de
bactrias em uma amostra, maior ser o nmero de
diluies necessrias para reduzir a densidade at um
ponto em que nenhuma bactria esteja presente nos
tubos de diluio seriada;
Esse mtodo tambm utilizada para identificar
microrganismos (como bactrias que fermentam
lactose produzindo cido = coliformes);
Oferece uma estimativa de 95% de probabilidade de a
populao bacteriana estar em uma faixa determinada.
32

33
34
Mtodos que Determinam a Massa

das Clulas
MTODOS DIRETOS
1. Massa seca: a massa
celular separada por
centrifugao, ou filtrao,
seca e pesada;
2. Dosagem de protena
celular: as clulas so
centrifugadas e o contedo
proteico dosado;
3. Dosagem de ATP (Identifica
clulas viveis) reao de
luminscncia.
MTODOS INDIRETOS
Turbidimetria;
Baseia-se no princpio
ptico da absorbncia.
35
36
Fatores que controlam o

Desenvolvimento Microbiano
Limitaes de Crescimento pelos Fatores Ambientais
Lei dos Mnimos de Leibig
O crescimento da populao limitado pelo elemento
cuja concentrao inferior a um valor mnimo o
crescimento da biomassa determinado pelo nutriente
em menor concentrao;
Lei de Tolerancia de Shleford
Faixa de tolerncia de sobrevivncia e crescimento com
seus limites superior e inferior o organismos s
cresce em determinada faixa de fatores ambientais;
37

Desenvolvimento Microbiano
FATORES AMBIENTAIS
Os fatores ambientais influenciam a absoro
de nutrientes e portanto no prprio
metabolismo celular;
Os principais fatores so: pH, presso
osmtica, Temperatura, Oxignio e Luz.
38

Desenvolvimento Microbiano - pH
A maioria dos microrganismos crescem
melhor em pH prximo a neutralidade (6,5 a
7,5);
Os microrganismos apresentam valores de pH,
mnimo, timo e mximo para multiplicao;
39

Bactrias: pH entre 5 e 9;
Classificao das bactrias em relao ao pH:
Neutrfilas: espcies que crescem em faixas de
pH entre 5,4 a 8,5 (EX: Maioria das bactrias
patognicas);
Acidfilas: espcies que crescem em faixas de pH
extremamente baixas, entre 0,1 a 5,4. Ex:
Bactrias do estomago Helicobacter pylory.
Alcalinfilas: crescem em faixas de pH entre 8,5 e
11,5.
40

Tolerncia ao pH
Maior tolerncia a valores baixos de pH:
Bolores > Leveduras > Bactrias;
Microrganismos patognicos apresentam uma
faixa de pH mais estreita;
41
42

Efeito dos cidos nos Microrganismos

Maior gasto de energia para manter o pH
intracelular;
Desnaturao de protenas (DNA);
Alterao das atividades das enzimas, vitais
para as clulas;
Menor velocidade de crescimento.
43

pH do Alimentos
Alimentos pH > 4,5 => mais sujeitos ao
crescimento bacteriano;
pH entre 4,0 e 4,5 => predominncia do
crescimento de bolores e leveduras, poucas
bactrias;
pH < 4,0 => crescimento de bolores e
leveduras.
44
Fatores que controlam o Desenvolvimento

Microbiano Presso Osmtica
As bactrias tem mecanismos que as
permitem manter a presso osmtica
elevada.
Sempre que houver uma diferena de
concentrao de soluto entre os meios
externos e internos (intracelular), as
molculas de gua tendero a igualar as
concentraes, fluindo do lado menos
concentrado para o mais concentrado.
45

Microbiano Presso
Osmtica
As bactrias geralmente vivem meios

hipotnicos, mas possuem recursos que
permitem a manuteno de alta osmolaridade
interna;
Por outro lado a parede celular rgida permite
que o citoplasma possa apresentar alta
concentrao de solutos sem lise celular.
46

Microbiano
Presso Osmtica
47

Microbiano Temperatura
Quando a temperatura
aumenta, os processos
qumicos e enzimticos
ficam mais rpidos;
Temperatura =>
Taxa de crescimento;
Pode ocorrer
desnaturao proteica.
48

Classes Trmicas do Microrganismos
49

Psicrotrfico:
Pseudomonas, Alcalgenes, Flavobacterium, Micrococcus;
Mesfilos:
A maioria das espcies ; Maior parte dos patgenos;
Termfilos:
Algumas espcies de Bacillus e Clostridium.
Bolores:
Faixa ampla de temperatura; Crescem em temperatura de
refrigerao;
Leveduras:
Crescem na temperatura de psicrotrficos e mesfilos.
50

Desenvolvimento Microbiano Luz
A luz um fator essencial para bactrias
fotossintetizantes;
Pode inibir o crescimento de alguns
microrganismos.
51

Microbiano Oxignio
O oxignio exerce um papel decisivo no crescimento
bacteriano, j que os microrganismos reagem
diferentes a sua presena.
As bactrias podem ser divididas em:
Aerbias estritas: Necessitam de O2;
Microaerfilas: Necessitam de O2 em baixa
concentrao;
Facultativas: Desenvolvem-se tanto na presena,
quanto na ausncia de O2;
Anaerbias Tolerantes: no utilizam O2;
Anaerbias Estritas: Oxignio letal.
52

Microbiano Oxignio
53
Efeito da Concentrao de Nutrientes

(ou Substrato)
54

(ou Substrato)
55

(ou Substrato)
Baixas concentraes de nutrientes determinam baixa
velocidade de tomada de nutrientes.
Quando as concentraes dos nutrientes esto baixas a
velocidade de assimilao que determina a
velocidade especfica de crescimento;
J quando as concentraes dos nutrientes so altas, a
constante de velocidade especfica independe de tais
concentraes. Segundo Barbosa et al. (1999) a
velocidade mxima provavelmente resultante da
saturao dos transportadores de membrana pelos
nutrientes.
56

(ou Substrato)
Macronutrientes
Necessrios em grandes quantidades;
Tem papel na estrutura celular e metabolismo;
Micronutrientes:
Necessrios em Pequenas quantidades;
Funes enzimticas e estruturais das
biomolculas.
57
Componentes Celulares
Fonte de Carbono
Compostos Orgnicos (heterotrficos)
carboidratos, lipdeos, protenas;
Dixido de Carbono (autotrficos) a fonte
de energia a luz ou compostos inorgnicos.
58
Componentes Celulares Macronutrientes

Fonte de Nitrognio
o elemento necessrio em maior quantidade
depois do carbono, ~12%. constitui
protenas, cidos nuclicos, etc).
O N est presente em molculas orgnicas
(Aminocidos, peptdeos) e em molculas
inorgnicas (NH3, NO3-, N2)
59
Componentes Celulares Macronutrientes
Hidrognio
Presente em compostos orgnicos e
inorgnicos (gua, sais e gases);
Funes:
Manuteno do pH;
Formao de ligaes de H entre molculas;
Fonte de energia nas reaes de oxirreduo
na respirao.
60
Outros Macronutrientes:
P Sntese de cidos nuclicos, ATP;
S Estabilidade de aminocidos, componente de vitaminas;
KAtividade de enzimas;
MgEstabilidade dos ribossomos;
CaEstabilidade da parede celular e termoestabilidade de
endsporos;
NaRequerido em maior quantidade por microrganismos
marinhos. Bactrias haloflicas extremas no crescem com
menos de 15% de sal;
FePapel chave na respirao, componente dos
citocromos e das protenas envolvidas no transporte de
eltrons.
61
Micronutrientes
So necessrias quantidade muito pequenas
na composio do meio de cultura : Zn, Cu,
Mn, Co, Mo e B.
Funo estrutural em vrias enzimas;
Nem sempre sua adio necessria;
Meio de Sintticos com alto grau de pureza
podem no ter esses elementos.
62
Meios de Cultura
Meios de cultura so solues de nutrientes
que promovam o crescimento dos
microrganismos;
Existem diferentes meios de cultura para os
diferentes microrganismos e finalidades;
Para se ter sucesso no cultivo de
microrganismos necessrios: conhecer suas
necessidades nutricionais => fornecer os
nutrientes na proporo adequada.
63
Meio de Cultura
Pode ser:
Quimicamente Definidos (vendidos com os
componentes pr misturados) pode-se usar o
Agar como agente solidificante (polissacardeo
complexo de algas marinhas;) ou
Complexos tem maior variabilidade de acordo
com o lote.
Meios gerais (vrios organismos crescem); ou
Especficos (identificao de espcies).
64
65
66
67
Meio de Cultura
Observao:
Os micro-organismos introduzidos em um
meio de cultura para iniciar o crescimento so
chamados de inculo. Os microorganismos
que crescem e se multiplicam dentro ou sobre
um meio de cultura so denominados cultura.
68
Meios de Cultura Como de ser?
Nutrientes na proporo adequada;

gua;
pH adequado;
O Meio deve ser estril inicialmente no
deve conter microrganismos vivos, assim a
cultura ser somente do organismos
inoculado;
Incubada em temperatura apropriada.
69
Meios de Cultura Seletivos e

Diferenciais
No saneamento interessante detectar a
presena de microrganismos especficos
associados a doenas e para esse fim so usados
meios seletivos e diferenciais;
Os meios seletivos impedem o crescimento de
bactrias indesejadas e favorecem as de
interesse.
Exemplo: o gar sulfeto bismuto isola a bactria
da tifoide, gram negativa (Salmonella typhi), pois
inibe as bactrias gram positivas e a maiorias das
bactrias gram negativas intestinais.
70

Diferenciais
Os meios diferenciais facilitam a identificao
de colnias em relao as outras colnias;
Alguns meios de cultura tem reaes
identificveis com meios diferenciais em tubos
ou placas. (Identificao de colnias de
Streptococis pyogenes lisam as hemcias,
meio Agar sangue (contm hemcias)).
71

Diferenciais
Meio Diferencial
72

Diferenciais
73
Bibliografia
MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M., PARKER,
J. Microbiologia de Brock.So Paulo: Prentice
Hall, 2004.
PELCZAR, M.J., CHAN, E.C.S., KRIEG, N.R.
Microbiologia. So Paulo: Makron Books,
1996. volumes 1 e 2.
TORTORA, G.J., FUNKE, B.R., CASE, C.L.
Microbiologia. Porto Alegre: Artmed, 2000.
74
Perguntas
1. Quais so as etapas do crescimento
microbiano? Explique cada uma delas.
2. O que so macro e micronutrientes? Porque
importante conhecer as necessidades
nutricionais dos microrganismos?
3. Para que serve os meios de cultura?
75

Cultura e Crescimento Microbiano - AULA3 - 2014

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