UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOS

CARRERA DE INGENIERA BIOQUMICA
LABORATORIO DE BIOPROCESOS

Profesor:
Ing. Cecilia Carpio
Ayudante: Ing. Juan Pablo Peafiel
Semestre: Sptimo Bioqumica

Prctica # 1
25/04/2014

OBSERVACIN DE Rhizobium en NDULOS DE RACES DE

LEGUMINOSAS
1. INTRODUCCIN
Fijacin de nitrgeno: el nitrgeno es uno de los principales nutrientes de las plantas y se considera un factor

limitante en la agricultura. La principal fuente de este elemento para las plantas proviene de la materia orgnica del
suelo la cual es oxidada por los microorganismos del suelo. Varias especies de PGPR tienen la capacidad de fijar el
nitrgeno atmosfrico en el suelo volvindolo disponible para las plantas evitando as el uso excesivo de fertilizantes
qumicos. Entre las especies fijadoras de nitrgeno estn las cianobacterias (Ej. Anabaena y Nostoc), arqueobacterias
(Methanococcus), bacterias gram positivas (por ej. Frankia), enterobacterias (Klebsiella) y proteobacterias (como
Rhizobium, Azospirillum y Acetobacter).

La formacin de ndulos en las races de leguminosas es una de las etapas fundamentales en el proceso de
fijacin biolgica de nitrgeno. Cada especie de leguminosa solo se relaciona con una especie determinada de
Rhizobium, por esta razn inoculantes preparados para un tipo de planta no funcionar para otra.
Dentro de las eubacterias existen grupos de bacterias que se pueden diferenciar debido a la estructura de la
pared celular. La tincin Gram, una tincin diferencial permite distinguir bacterias Gram-positivas, las cuales se
tien de color violeta debido a que la estructura de su pared celular es diferente a la de las bacterias Gram
negativas que al contacto con el colorante toma una coloracin rosada.
2. OBJETIVOS

Observar Rhizobium con la ayuda de un microscopio compuesto y de un estereomicroscopio.

Determinar diferencias entre los ndulos existentes en los distintos tipos de leguminosas.
3. MATERIALES Y REACTIVOS
Reactivos

Materiales

Etanol
Rojo congo
Agua destilada
Aceite de inmersin

Material vegetal
Races de habas, frjol, alfalfa, chocho y
trbol con ndulos

Microscopio compuesto
Estereomicroscopio
Mechero de alchol
Aceite de inmersin
Piceta
Porta y cubre objetos
Escarpelo
Asa
Gotero
Lupa

4. PROCEDIMIENTO

Observe los ndulos presentes en las races de cada leguminosa.

Con la ayuda de una lupa observe los ndulos para identificar similitudes y diferencias entre las distintas
leguminosas.

Con un escarpelo realice un corte en un ndulo, presinelo con una varilla y extraiga una pequea porcin,
realice un frotis de la muestra en un portaobjetos y fjela con la ayuda de un mechero.

Coloree la muestra fijada con rojo congo durante 1 min. Enjuague con agua destilada.

Observe la muestra teida al microscopio con el lente 100x utilizando aceite de inmersin

5. RESULTADOS Y DISCUSIN

Presentar grficos, fotografas y discusin de las observaciones realizadas.

6. CUESTIONARIO

Especifique la especie de m.o. presente en cada una de las muestras observadas.

Cules son las funciones que cumple el nitrgeno en los cultivos vegetales?

Qu factores influyen sobre la simbiosis?.

REFERENCIAS
[1]

Velastegu, J.R. y Proao, J. 2012. Observacin de Rhizobium al microscopio compuesto. Gua de

Laboratorio. Bioprocesos.

[2]

Fijacin simbitica de nitrgeno http://www.oni.escuelas.edu.ar/olimpi98/SuperSojaRR/nodulos.htm

[3]

Bhattacharyya, P.N. and Jha, D.K. 2012. Plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR): emergence in
agriculture. World J Microbiol Biotechnol 28:13271350.