INTRODUCCIN

Las enzimas son complejos protenicos que a nivel corporal cumplen la funcin
de catalizar una enorme cantidad de reacciones, permitiendo mantener un
balance de todas las sustancias necesarias para un apropiado funcionamiento
del cuerpo, sin ellas las reacciones al interior del cuerpo tomaran demasiado
tiempo en darse. De ah que el estudio y comprensin del funcionamiento de
las enzimas sea de vital importancia en la prctica mdica, ya que tanto el
diagnstico de ciertas enfermedades como el funcionamiento de muchos
frmacos (entre otras cosas) estn fundamentados en el funcionamiento de las
enzimas.

La cintica enzimtica es un apndice de la qumica que estudia procesos en

los que interviene una enzima como catalizador de las reacciones, y sus
principios estn dados por los postulados expresados en los grficos de
Michaelis-Menten y Lineweaver-Burk.

La prctica descrita a continuacin se basa en la medicin de la cantidad de

sustrato que aparece en los tubos de ensayo pasado un tiempo de reaccin,
con lo que se puede determinar la velocidad de la reaccin y como cambia la
reaccin enzimtica en presencia de un inhibidor.

OBJETIVOS

Objetivo general.
Estudiar los cambios que se producen en la actividad de la fosfatasa alcalina
de intestino de rata con p-nitrofenol fosfato (sustrato) bajo diferentes
condiciones experimentales y as evaluar algunos parmetros cinticos de
dicha reaccin.

Objetivo especfico.
Evaluar cmo se comporta una reaccin enzimtica a distintas temperaturas.
Evaluar cmo se comporta una reaccin enzimtica a distintos pH.
Evaluar cmo se comporta una reaccin enzimtica a distintas concentraciones
de sustrato.

MATERIALES Y MTODOS
Espectrofotmetro

Baos maria a diferentes temperaturas (37 C).

Tubos de ensayo.

Pipetas

.
Pipeteadora

.
Cubetas para espectrofotmetro.

Reactivos:
Extracto enzimtico de intestino de rata .
TRIS (hidroximetil- aminometano), 20 mM, pH ptimo.
TRIS, 20 mM, pH 7,0, 8,0, 9,0, 9,5,10,5, 11,0, 12,0.
p-nitrofenil fosfato (PNFP), 2mM.,MWr = 371.15 g / mol.
Estndar de p-nitrofenol (PNF), 0,5 mM,, MWr = 139,00 g / mol,
Solucin acuosa de fosfato (K2HPO4), 0,1 M, MWr = 174,19 g / mol.
Hidrxido de sodio (NaOH) 2N.
Agua destilada
Procedimiento:
1. Mezclar los reactivos en el orden que aparece en la tabla ( antes aadir el
extracto enzimtico sumergir los tubos durante un minuto a la temperatura de
incubacin correspondiente, menos el blanco y el estndar).
2. Adicionar el extracto enzimtico a cada tubo sin retirar del bao mara,
mezclar y contar 15 minutos a partir del momento de agregar la enzima.
3. Al pasar los 15 minutos agregar en igual orden que se agreg la enzima 1 ml
de NaOH (2N), lo cual detiene la reaccin, tambin se debe adicionar al blanco
y el estndar.
4. Retirar los tubos del bao mara y determinar DO 405 en el
espectrofotmetro.
5. Registrar los datos obtenidos.

BIBLIOGRAFA
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Spektrofotometri.jpg
http://www.figursa.com/banos.php
http://es.123rf.com/photo_7298509_tubos-de-ensayo-de-vidrio-listos-para-unexperimento-en-un-laboratorio-de-investigacion-de-ciencia.html
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Micropipeta_icona.png
http://www.jjimeno.com/431-cubeta-espectrofotometro-45-ml-macro910000001915.html