DETERMINACIN DE COMPUESTOS ACTIVOS DE PIPER

AURITUM KUNTH POR CROMATOGRAFIA Y ANLISIS FTIR.

Objetivo General.
Identificacin de los compuestos activos presentes en el aceite de P. auritum kunth
(hierba santa) mediante el anlisis de sus grupos funcionales obtenidos por medio
de cromatografa y FTIR, dando nfasis en el contenido de la molcula safrol y
realizando una comparacin con la literatura.
Objetivo especficos.
Comprobar que existen compuestos activos presentes en la planta por
Cromatografa y anlisis FTIR.
Identificar la composicin qumica del aceite esencial, identificando los grupos
funcionales del safrol por Cromatografa y anlisis FTIR.

Planteamiento del problema.

En la actualidad en la industria se ha desarrollado un amplio inters por los
principios activos de diversas plantas. En Mxico gran variedad de plantas
silvestres contienen compuestos activos de las cuales se conoce

poca

informacin. El presente trabajo busc obtener informacin de la composicin

qumica de la planta piper auritum kunth comnmente conocida como hierba
santa, utilizada en la cocina mexicana, dando nfasis en el compuesto activo
safrol. Al safrol se le atribuyen propiedades antibacterianas, adems, tiene una
alta demanda en la industria de insecticidas y plaguicidas en sentido general.

Justificacin.

Piper auritum kunth (hierba santa) es una planta que posee actividad
antiinflamatoria, antibacteriana, antifngica y antidermatoftica generada por sus
fenilpropanoides, lignanos, sesquiterpenos y monoterpenos como son; el borneol,
alcanfor, cineol, eugenol, safrol y una amplia variedad de componentes
bencnicos.
Si bien uno de los compuestos activos ms destacados de esta planta que se
encuentra en un 93% es el safrol. Su importancia tambin radica en sus
propiedades antibacterianas, adems de tener una alta demanda en la industria
de insecticidas y plaguicidas.
El safrol, es un monoterpeno oxigenado, presente como compuesto mayoritario en
especies tales como, sassafras (70-80%) y Ocotea cymbarum (90%). Forma parte
de la lista de sustancias controladas por las autoridades, debido a su uso como
precursor en la sntesis de drogas de uso ilcito como MDMA y por su efecto
carcinognico y citotxico. No obstante, es til en la hemisntesis de compuestos
de elevada actividad biolgica
*Generar informacin qumica de piper auritum kunth, para validar la existencia de
componentes activos, que sirva como instrumento para estudios posteriores de
variabilidad e implementacin de tecnologa para la explotacin adecuada de este
recurso.
.

HIPOTESIS
Determinar que existen los principales componentes qumicos del safrol en el
aceite esencial de la hierba santa

MARCO TEORICO

Los extractos vegetales son compuestos hechos a base de plantas de las cuales
se extraen metabolitos secundarios mediante varias tcnicas de extraccin como
la maceracin, las tisanas e infusin, con la ayuda de solventes como agua,
etanol, metanol, etc. La calidad y concentracin de las sustancias activas pueden
llegar a variar de una estacin a otra o con la localizacin de la planta, edad y
madurez del material vegetal con el que se prepara el extracto. La sustancia activa
se encuentra a menudo concentrada en una parte especifica de la planta, aunque
frecuentemente se localiza en hojas, flores y semillas (Gutirrez, 1988)
Las sustancias que se extraen de las plantas, en general, son molculas orgnicas
que tienen carbonos en su estructura principal, adems de hidrgenos, oxgenos y
a veces nitrgenos, entre otros elementos. En algunas plantas estos elementos se
combinan bajo ciertas condiciones, formando sustancias toxicas.
La extraccin de las sustancias activas de especies vegetales se hace
comnmente con agua, pero con la necesidad de extraer compuestos activos de
fase intermedia, de acuerdo a la polaridad de los compuestos, se utilizan otros
solventes de mayor capacidad de arrastre, como lo es el alcohol o etanol, esto
debido a que las plantas tienen distintas polaridades y se considera que el etanol
es un solvente de extraccin media. Ortega y Schuster (2000) menciona que la
conveniencia de utilizar compuestos polares en la extraccin (como es el caso de
los extractos vegetales) radica en la disminucin de efectos colaterales adems de
los costos de produccin.
Los aceites esenciales son tambin desechos del metabolismo de la planta,
comprende las esencias vegetales y resinas. Se presentan en emulsiones que
tienden a formar gotas y son los compuestos que dan perfume a los vegetales.
Los monoterpenoides son compuestos de los aceites vegetales (alfa pineno, 3careno, gosipol y cucurbitacina), cuyos efectos se han estudiado en la conducta,
fisiologa sensorial, y metabolismo de insectos. Los alcaloides poseen un sabor
amargo, son componentes nitrogenados cuya funcin en la planta no est bien

determinada. La qumica vegetal es compleja y se le clasifica segn a la

composicin del ncleo, rganos o segn su especie vegetal.
PARTE EXPERIMENTAL
Material. Se utiliz extracto de las hojas de P. auritum como materia prima, la cual
fue recolectado de arboles ubicados en la zona sur del estado de Morelos. Como reactivos
se emple lo siguiente: acetato de etilo (AcEt, Merk CAS: 141-78-6), Hexano (reactivos
Karal CAS:1310-73-2), cido sulfrico (Sigma-Aldrich CAS: 7664-93-9),

cloruro de

cobalto 97% (Sigma-Aldrich CAS: 7646-79-9). Placas de cromatografa con revelador UV,
columna de vidrio de 50 cm, silica gel 60 para columna (0.2-0.5 mm, Merk CAS: 7631-869). Yodo sublimado (Faga-Lab, CAS: 7553-56-2)
Equipo. El instrumental utilizado fue: Parrilla con agitador magntico, modelo
MS400 Magnetic Stirer, marca Science MED. Lampara UV con longitud de onda dual 254
nm/366 nm Marca Camag. FTIR marca PerkinElmer modelo Spectrum Two.
Metodologa.
Obtencin del extracto. Se recolecto la hoja de P. auritum en la regin de
Tlaltizapan, Morelos. Se prepararon extractos uno con agua y otro con etanol. El tiempo de
ebullicin con agua fue de 2 h y con alcohol de 15 min.
Cromatografa en papel: La separacin de compuestos que absorben en la luz
visible del extracto de P. auritum en agua y en etanol se llev cabo mediante la tcnica de
absorcin de papel filtro, la cual consiste en mostrar la separacin de compuestos
visibles, logrando visualizar sus distintas tipos de clorofilas. Los extractos analizados
fueron posteriormente concentrados.
Cromatografa de capa fina: Los dos extractos de P. auritum en etanol y agua se
concentraron con l rota vapor, posteriormente se les agreg acetato de etilo esperando una
separacin de fases, y se lav con agua destilada, obteniendo 6 muestras A, B, C, D, E y F,
(ver figura 2), las cuales fueron colocadas sobre una placa de cromatografa con indicador
con diferentes sistemas de elucin, Acetato de etilo 100%, 70:30, 10:90 y 50:50 de Acetato
de Etilo/Hexano.

Figura 2. Muestras obtenidas en los lavados.

Cromatografa en columna: una vez identificados la cantidad de componentes

presentes en cada una de las muestras A, B, C, D, E y F, as como el sistema adecuado para
la elucin, se escogi la muestra B que contena mayor nmero de componentes y se coloc
dentro de una columna cromatogrfica previamente empaquetada. La muestra se dej eluir
en un sistema de acetato de etilo hexano 50:50, recolectando las fracciones obtenidas. A
estas fracciones se les volvi a tomar placa para identificar las fracciones idnticas.
Espectroscopia Infrarroja por Transformadas de Fourier (FTIR): las fracciones
idnticas fueron concentradas y analizadas por espectroscopia infrarroja por Transformada
de Fourier.
RESULTADOS
Cromatografa en papel: No se logr observar la separacin de las clorofilas en el
extracto que estaba en agua, en cambio el extracto en etanol si se observaron (ver figura 3).

Figura 3. Cromatografa en papel, del extracto en etanol.

Cromatografa de capa fina:

Para la preparacin de las muestras el proceso se realiz cortando placas de silica gel
de 5x7 cm. Una vez que se llevo a cabo la elucin se revelaron con la lmpara UV, y
posteriormente en yodo sublimado, encerrando los componentes que se lograran observar,
por ltimo se aplico solucin reveladora de cido sulfrico, cloruro de cobalto y agua,
calentando la placa observando los colores de los componentes que estn presentes en cada
una de las muestras.
En la tabla 1 se observan las placas que contienen los resultados para la seleccin de
muestras con las que se lograron trabajar para el anlisis de componentes, el sistema de
elucin 50% acetato de etilo 50% hexano fue la seleccionada para trabajar
posteriormente.
Tabla 1. Factores de retencin para las muestras en 4 sistemas de elucin diferentes.

Sistema de elucin

70% acetato de etilo 30% hexano

100% acetato de etilo

10%

acetato de etilo 90% hexano

Placa

Factor de retencin
A: 0.94 cm
B: 0.978 cm
C: 0.94 cm

B: 0.923
C:0.076
D:0.184

B: 0.225cm

50%

acetato de etilo 50% hexano

B: 0.923

Cromatografa en columna: La muestra B se coloc dentro de una columna

cromatogrfica previamente empaquetada con slica gel y como fase mvil acetato de etilohexano 50:50. Se dej eluir la muestra recolectando un total de 26 fracciones. A estas
fracciones se les volvi a tomar placa para identificar las fracciones idnticas. Las cuales se
juntaron y se concentraron etiquetndolas de la siguiente manera F2-3, F15-20 y F21-23
(ver figura 4).

Figura 4. Cromatografa en columna de la muestra B.

Espectroscopia Infrarroja por Transformadas de Fourier (FTIR): Las fracciones

obtenidas se analizaron por FTIR, as como las muestras obtenidas que no se separaron en
cromatografa en columna, obteniendo como resultado los siguientes espectros (ver figura
3):

a)

c)

b
)

d
)

Figura 3. FTIR de Muestras a) A, b) C, c) D y d) E, sin separacin por columna.

En la figura 3 para todos los casos se observaron las seales correspondientes a la

regin aliftica de estiramiento y flexin de los 3000-2800 cm-1 y 1450-1200 cm-1, as como
en la regin de los 3500 3300 cm-1 el estiramiento del hidrgeno enlazado al oxgeno
para las 4 muestras. Para la figura 3a se observa en los 1700 cm -1 la seal correspondiente a
C=O, en 1600 cm-1 C=C y en 1000 cm-1 C-O. Para la figura 3b) se observa en 3700 cm -1 la
vibracin correspondiente al H-N, en 1650 cm-1 el estiramiento de los hidrgenos
enlazados al nitrgeno y en la regin de los 1100-900 cm -1 C-O. Para la figura 3c), se
observa en 1600 cm-1 una seal que puede corresponder a un C=C o hidrogeno enlazado a
nitrgeno. En la regin de 1100900 cm-1 la seal correspondiente a C-O. Y para la figura
3d) se observa la presencia de C=C en los 1600 cm-1.
En la figura 4, se observa la primer fraccin (F2-3) de la muestra B separada por
cromatografa de columna. En los 3500 cm-1 se observa la seal correspondiente del
hidrgeno enlazado a al oxgeno, de los 3000-2800 cm -1 se observa el estiramiento
asimtrico y simtrico del CH3 y CH2, en 1750 cm-1 se observa el estiramiento de C=O, el
cual puede corresponder al grupo carbonilo del acetato de etilo con el cual fue separada esta
fraccin.

Figura 4. FTIR de fraccin F2-3

En la figura 5, se observa el FTIR de la segunda fraccin F15-20, en la cual

podemos observar en los 3700 cm-1 una seal que puede corresponder a un carbono
carbono triple enlace o un nitrgeno-carbono triple enlace. En los 3400 cm -1 la seal
correspondiente para hidrgeno enlazado al oxgeno. En la regin de 30002800 cm-1 se
observa el estiramiento asimtrico y simtrico del CH3 y CH2. En 1750 cm-1 el estiramiento
C=O. de los 1500 -1200 cm-1 las vibraciones correspondientes a la flexin de balanceo del
CH3, tijereteo del CH2 y sombrilla del CH3. En la regin de 1100900 cm-1 C-O.

Figura 5. FTIR de fraccin F15-20

En la figura 6, se observaron las seales correspondientes a la regin aliftica de

estiramiento y flexin de los 3000-2800 cm -1 y 1450-1200 cm-1. En los 1750 cm-1 se
observ la seal correspondiente a C=O y en 1000 cm-1 C-O.

Figura 6. FTIR de fraccin F21-23

CONCLUSIONES
La muestra B debido a su mayor cantidad de componentes revelados por cromatografa
en capa fina fue la seleccionada para su separacin en cromatografa en columna. De
acuerdo a los resultados de espectros de las figuras 5 y 6, en estas fracciones se pudiera
encontrar la molecula llamada safrol la cual es reportada que existe en la planta Piper. Las
tcnicas cromatografas demuestran que son viables para demostrar que se pueden obtener
buenos resultados. Por medio de estudios realizados previamente se pudo identificar y
comparar ciertos compuestos de P. auritum kunth, la cual en un futuro puede servir para
realizar un estudio ms completo acerca de las propiedades y beneficios de esta. Entre los
compuestos a los que se le atribuyen propiedades antibacterianas, componente principal al
safrol. El safrol, adems, tiene una alta demanda en la industria de insecticidas y
plaguicidas en sentido general.
Hasta este momento, las variables estudiadas y los resultados obtenidos aportan
informacin valiosa para continuar con este tema de investigacin, se sugiere continuar con
anlisis de Resonancia Magntica Nuclear de H1 (RMN) y espectrometra de masas (MS),
para corroborar las molculas ya encontradas.
BIBLIOGRAFIA
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