INDICE

CINTICA ENZIMTICA.................................................................................... 2
I.

INTRODUCCION.-...................................................................................... 2

II.

MARCO TEORICO.-.................................................................................... 2
2.1.

ENZIMA.-............................................................................................ 2

2.2.

LOS FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA SON:........2

2.2.1.

Concentracin de enzima............................................................2

2.2.2.

Concentracin de sustrato..........................................................3

2.2.3.

pH................................................................................................ 3

2.2.4.

Temperatura................................................................................ 3

2.3.

ENZIMAS COMO CATALIZADORES.-. .Error! Marcador no definido.

2.4.

GRAFICA DE REPRESENTACIN DE LINEWEAVER-BURK.-...................6

2.5.

GRFICA EADIE-HOFSTEE.-................................................................6

2.6.

GRAFICA HANES-WOOLF.-.................................................................8

III.

BIBLIOGRAFIA.-..................................................................................... 9

CINTICA ENZIMTICA
I. INTRODUCCION.Los principios generales de la cintica de las reacciones qumicas son
aplicables a las reacciones catalizadas por las enzimas, en los seres
vivos. No obstante, stas muestran (adems del fenmeno de la
especificidad, antes comentado) un rasgo caracterstico que no se
observa en los catalizadores no enzimticos, se trata de la saturacin por
el sustrato, entendida en trminos de ocupacin de los centros activos
de todas las molculas de enzima.
Estudiar el efecto de la concentracin de sustrato sobre la actividad de
una enzima no es sencillo, si pensamos que lgicamente la
concentracin del sustrato disminuye segn avanza la reaccin. Una
simplificacin en los experimentos cinticos consiste en medir la
velocidad inicial (Vo). Si el tiempo es suficientemente corto la
disminucin de sustrato ser mnima y sta podr considerarse, por
tanto, casi constante.

II. MARCO TEORICO.II.1.ENZIMA.Las enzimas son protenas (RNA) que catalizan reacciones qumicas
en las clulas.
Cada enzima es altamente especfica para la reaccin que cataliza.
Esta especificidad est determinada por el centro activo de la
enzima (en donde se hallan los grupos qumicos responsables de la
catlisis).
Muchas enzimas necesitan co-factores (co-reactivos, co-sustratos)
para cumplir su funcin cataltica. Son Protenas de alto peso
molecular (macromolculas, 104 a 106 g/mol, 102 a 104
aminocidos) Su actividad depende de la integridad de su
conformacin proteica.
Metales pueden formar parte de su centro activo, o de otra parte
de la enzima (co-factor).
Los reactivos de las reacciones catalizadas por enzimas se
denominan sustratos.
Los enzimas son catalizadores especficos: cada enzima cataliza un
solo tipo de reaccin, y casi siempre acta sobre un nico sustrato
o sobre un grupo muy reducido de ellos.
El sitio activo es lugar de unin del sustrato a la enzima y donde se
lleva a cabo la catlisis. La especificidad del sustrato depende del
tamao, estructura, cargas, polaridad carcter hidrfobo.
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas. Estos estudios proporcionan informacin

directa acerca del mecanismo de la reaccin cataltica y de las

enzimas

II.2.LOS FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

SON:
II.2.1. Concentracin de enzima
Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento
en la concentracin de la enzima aumenta la velocidad
enzimtica hacia cierto lmite.

II.2.2. Concentracin de sustrato

A mayor concentracin del sustrato, a una concentracin
fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima. Despus
de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la
concentracin del sustrato no tiene efecto en la velocidad
de la reaccin.

II.2.3. pH
La mayora de las enzimas tienen un pHcaracterstico
al cual su actividad es mxima; por encima o por
debajo de ese pH la actividad disminuye.El pH ptimo de
una enzima no es necesariamente idntico al pH de su
entorno intracelular normal, el cual puede hallarse a su vez
en la pendiente ascendente o descendente de la curva.
Por eso la relacin pH-actividad de una enzima puede
constituir un factor en el control intracelular de su
actividad.

II.2.4. Temperatura.

Al igual que sucede con la mayora de las

reacciones
qumicas,
las reacciones enzimticas
incrementan su velocidad con la temperatura.
1

La velocidad de muchas reacciones enzimticas se

duplica, aproximadamente por cada 10 C de aumento
de la temperatura.

El pico de la grfica al representar la actividad cataltica

respecto a la

temperatura se debe a que las enzimas, al ser

protenas, se desnaturalizan por accin del calor y
se inactivan a partir de cierto punto.

A partir de los 55-60 C la mayor parte de las enzimas

se inactivan. Sin embargo, las enzimas de bacterias
termoflicas siguen
siendo activas a temperaturas
superiores a los 85 C.

II.3.MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
Las enzimas aumentan las velocidades de las reacciones qumicas
sin ser alteradas en el proceso de conversin de reactivos a
productos esta conducta define, precisamente, a un catalizador Las
enzimas aumentan las velocidades de reaccin disminuyendo la
cantidad de energa requerida para formar un complejo reactivo,
activado, competente para formar productos esto ocurre por medio
de la formacin de un complejo entre la enzima y el sustrato (ES).

La Figura muestra el efecto de distintas concentraciones de

sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin catalizada por un
enzima.

Figura 01: Cintica enzimtica. Modelo de Michaelis-Menten.

La velocidad de una reaccin catalizada (V) nos indica la cantidad de
sustrato consumido, o producto formado, por unidad de tiempo. En el
Sistema Internacional se designa por U (unidad de actividad
enzimtica) y corresponde a los moles de sustrato consumidos en 1
min, o bien a los moles de producto formado en 1 min.
U mol S/min mol P/min
La curva que expresa la relacin entre la concentracin de sustrato y
la velocidad inicial tiene la misma forma para la mayora de las
enzimas; se trata de una hiprbola rectangular, cuya expresin
algebraica viene dada por la ecuacin de Michaelis-Menten, donde
muestra la relacin entre la velocidad inicial (Vo) y la concentracin
de sustrato, S.

Los trminos Vmax (velocidad mxima) y

Km (constante de
Michaelis) son dos parmetros cinticos caractersticos de cada
enzima, que pueden determinarse experimentalmente.
La velocidad mxima (Vmax) se obtiene cuando la velocidad de
reaccin se hace independiente de la concentracin de sustrato,
cuando esto ocurre la velocidad alcanza un valor mximo. Este valor
depende de la cantidad de enzima que tengamos.
La constante de Michaelis (Km) nos indica la concentracin de
sustrato a la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad
mxima. Este parmetro es independiente de la concentracin de
enzima, y es caracterstico de cada enzima segn el sustrato utilizado
(si tiene varios). La Km tambin indica la afinidad que posee la
enzima por el sustrato, siendo sta mayor, cuanto menor es la Km.
Cuanto menor sea la Km menor ser la cantidad de sustrato

necesaria para alcanzar la mitad de la velocidad mxima, por lo que

mayor ser la afinidad del enzima hacia ese sustrato.
A partir de la ecuacin de Michaelis-Mente podemos explicar
matemticamente las tres fases de la curva de la figura 1.

As:

A baja [S], es decir si Km >>> [S], el trmino Km+[S] podemos

aproximarlo a la Km, quedando un expresin del tipo:

V =K [S]

Esta es una cintica de primer orden, que se caracteriza por una

variacin lineal de la V respecto al tiempo, como tiene lugar en la
primera fase.

A altas [ S], es decir, Km<<<<[S], despreciaramos Km frente a

[S], con lo que V = Vmax (que sera constante); la cintica es de
orden cero y se habra alcanzado la saturacin por sustrato, como
ocurre en la fase final.

El tramo intermedio, en el que la [S] Km correspondiente a una

cintica de orden mixto y se ajusta a la ecuacin de Michaelis.
En muchos casos es de vital importancia conocer estos parmetros
cinticos. En principio, podran obtenerse de forma poco rigurosa a partir
de la curva de Michaelis Menten, para lo cual sera preciso primero
obtener el valor de la Vmax y despus, teniendo en cuenta que la Km es
la concentracin a la cual la velocidad es la mitad de la velocidad
mxima, podramos obtener su valor. Pero existen mtodos grficos ms
fiables que facilitan el clculo preciso de la Km y la Vmax.

II.4.GRAFICA DE REPRESENTACIN DE LINEWEAVER-BURK.Una de las expresiones ms utilizadas es la representacin de

Lineweaver-Burk (Figura 2). En esta forma de clculo se representa
1/V frente a 1/S, esto es la inversa de la velocidad frente a la
inversa de la concentracin (de ah que tambin la representacin
sea conocida como de dobles inversos), as se obtiene una recta
cuya interseccin con el eje X es 1/Km y con el eje Y es 1/Vmax,
siendo la pendiente Km/Vmax.

Figura 02.- representacin de Lineweaver-Burk

De esta forma, y una vez hecha la representacin, podemos
extrapolar el valor de X para Y=0, o el de Y, cuando X=0, y obtener
haciendo el inverso de los valores (y teniendo en cuenta el signo)
el valor de Km y Vmax.
La obtencin de la Km y la Vmax de una enzima, es importante no
slo porque son parmetros que la identifican, sino tambin por
motivos que, en ocasiones, pueden ser de vital importancia.

II.5.GRFICA EADIE-HOFSTEE.Eadie-Hofstee propusieron otro mtodo para graficar los datos

cinticos, ste mtodo consiste en multiplicar ambos lados de
la ecuacin del recproco por v0Vmax

Rearreglando:

SIGNIFICADO DE KM

KM Es un parmetro de afinidad con el sustrato. Mientras

mayor sea KM la unin es ms dbil.

Representa la concentracin de sustrato a la cual la mitad de

los

sitios activos de la enzima estn ocupados por molculas

de sustrato.

El valor de KM vara considerablemente de una enzima a otra.

KM depende de la temperatura, la naturaleza del sustrato, pH,

fuerza inica. Por lo tanto su valor sirve para caracterizar
sistema enzima-sustrato en particular.

Para la mayora de las enzimas, KM est entre 10-1 M y 10-7 M

SIGNIFICADO DE VMAX Y K2

Como su nombre lo indica, Vmax representa la mxima

velocidad que puede alcanzarse.

De acuerdo con la ecuacin, Vmax = k2[E]0, si se conoce

la concentracin de enzima, se puede determinar tambin
la constante k2.

k2 es una constante de primer orden y tiene unidades de

tiempo-1. En cintica enzimtica k2 se conoce tambin
como nmero de recambio de la enzima constante cataltica,
kcat.

El nmero de recambio de una enzima se define como el

nmero mximo de molculas (o moles) de sustrato que
se converten a producto por unidad de tiempo. La mayora
de las enzimas tienen nmeros de recambio entre 1 y 105
s-1 en condiciones fisiolgicas.

II.6.GRAFICA HANES-WOOLF.1

En bioqumica,
el
diagrama HanesWoolf se
emplea
como
herramienta grfica para calcular los parmetros cinticos de
una enzima. En l se representa la relacin concentracin de
sustrato/velocidad de reaccin frente a la concentracin de
sustrato [S]. Es una de las formas de linealizar la ecuacin de
Michaelis-Menten.

Donde:
V es la velocidad de reaccin, Km es la constante de Michaeli
-Menten, Vmax es
la
velocidad
mxima,
y
[S]
es
la concentracin de sustrato.
La ecuacin se puede obtener a partir de la de Michaelis siguiendo los
siguientes pasos:

Invirtiendo y multiplicando por [S]:

Redondeando:

III.BIBLIOGRAFIA.

Bioqumica. (2004). Devlin, T. M. 4 edicin. Revert, Barcelona.

1

Bioqumica 3 Edicin. (2002) C.K. Mathews, K.E. van Holde, K.G.

Ahern. Pearson Educacin S.A.

Bioqumica Mdica. (2009) Pacheco Leal D. Limusa.

Bioqumica de los procesos metablicos 2 Edicin (2006) V. Melo, O

Cuamatzi. Revert.