UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTNOMA DE MXICO
FACULTAD DE QUMICA
ABSORCIN DE GLUCOSA
Prctica No. 6
Grupo 7
Laboratorio de
Fisiologa
Integrantes

Campos Maya Diana

Laura
Jurez Salas Blissa

Alondra
Martnez Carranza

Rodolfo
Ortiz Jimnez Diana

Jazmn
Snchez Vzquez
Vania A.

OBJETIVOS
Verificar el transporte de glucosa a travs
del intestino delgado de rata (leon).
Demostrar de que manera influye la
oxigenacin en la absorcin intestinal.
Determinar el efecto del 2-4 dinitrofenol
en la absorcin intestinal en la glucosa.
HIPTESIS
La absorcin de glucosa es impulsada por un
gradiente de Na+, formado por la accin de la
Na+/K+-ATPasa y la hidrlisis de ATP, y la
formacin de ATP a travs de la fosforilacin oxidativa depende de la
presencia de O2, por lo que la falta de oxigenacin disminuir la
produccin de ATP as como la absorcin de la glucosa.
Debido a que el transporte de glucosa a travs del la mucosa
intestinal requiere de un consumo de energa, ste se ver afectado
por el efecto del 2-4 dinitrofenol, desacoplador de la fosforilacin
oxidativa.

DIAGRAMA DE FLUJO.

Preparacin de sacos intestinales.

Se sacrifica la rata
por medio de
administracin de
pentobarbital
seguida de
traseccin de la
mdula espinal Abrir

Cortar tramos de
intestino con 2 a 3 cm de
longitud, insertar una
cnula en la luz del
segmento intestinal y,
por medio de una jeringa
que contenga solucin
salina de Tyrode, lavar

Se anuda con un hilo uno

de los extremos del
segmento de manera que
quede ocluido
completamente; con
ayuda de una varilla de
vidrio se impulsa el
extremo ocluido hacia el

Sostener con unas

pinzas el saco
intestinal e introducir
por su extremo abierto
el tubo de vidrio d la
cmara de rganos
aislados hasta que
sobrepase unos 5 mm,
se amarra

Se procede a colocar
el saco intestinal en
la cmara de rganos
aislados para hacer
los experimentos con
Experimento
las
diferentes

control.

Acoplar el sistema de aeracin. La

preparacin debe estar en bao de
mara para mantener constante la
temperatura
Llenar uno de los sacos
intestinales con solucin Tyrode a
37 C, utilizando una cnula
acoplada a una jeringa o una
pipeta Pasteur, despus de
verificar que el saco no presenta
fugas.

Sumergirlo en una solucin Tyrode

con glucosa al 2% a 37C,
teniendo cuidado de que la
solucin no sobrepase el borde
superior del saco.

Hacer determinaciones cada 15

minutos hasta completar 5; en
el tiempo de la ltima
determinacin mida
nuevamente la concentracin
Toma de muestra.
Utilizando las tiras reactivas de glucosa en el exterior del
determinar la concentracinsaco
de glucosa en las muestras;
deje pasar 15 minutos y mida
Tome una muestra, tiempo cero, tanto
nuevamente la concentracin
de la solucin exterior como de la
de glucosa, slo de una
interior del saco intestinal, utilice una
muestra del interior del saco.
cnula conectada a una jeringa o una
pipeta Pasteur

Verificar que las

condiciones de aeracin y
temperatura se mantengan
constantes durante todo el
experimento.

Efecto de la ausencia de oxgeno en la absorcin intestinal de

glucosa.

Colocar un saco intestinal que

contenga en su interior
solucin salina de Tyrode a
37C dentro de una cmara
que contenga solucin salina
de Tyrode-glucosa a 37C.

La preparacin se mantiene
sin adaptar el sistema de
aeracin pero manteniendo
la temperatura constante

Se hacen determinaciones de
glucosa de la solucin interior
y de la exterior del saco y
proseguir con las
determinaciones en la misma
forma y en los tiempos
descritos

Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa.

Colocar un saco
intestinal en una
cmara de
rganos aislados

Llenar el saco intestinal con una

solucin de Tyrode a 37C, en
este caso el saco se colocar en
una solucin de Tyrode-glucosa
con 2-4 dinitrofenol (solucin
exterior).

Se mide la
concentracin de
glucosa en el tiempo
cero dentro y fuera
del saco intestinal .

Se realizan 5
determinaciones
cada 15 minutos.

Determinacin de glucosa por medio de tiras reactivas.

Obtener una gota de la

solucin problema, ya sea la
del interior del saco intestinal
o de la solucin exterior, por
medio de una cnula limpia
conectada a una jeringa

Colocar la gota de la solucin problema

en la zona reactiva de la tira y se deja
reaccionar durante el tiempo
establecido por el fabricante de la tira
(el tiempo necesario para la reaccin
est indicado en el recipiente de las
tiras y puede variar.

El cambio de color se efectuar

de acuerdo con la concentracin
de glucosa presente en la
muestra y ste deber ser
comparado con la escala

proporcionada en
el recipiente de las tiras, la
lectura debe efectuarse
bajo buenas condiciones de
cromtica

Los resultados que aparecen

despus de 3 minutos o slo en los
bordes de la zona de prueba no
tienen significado confiable

RESULTADOS.
Tabla 1. Valores obtenidos de concentracin de glucosa
Tiem
po
(min)
0
10
15
20
25

Control (glucosa +
oxigeno)
0
2.8/5
2.8/5 - 5.5/100
5.5/100
------

Glucosa + 24dinitrofenol +
oxigeno
0
5.5/100
5.5/100
2.5/50-5.5/100
2.8/50

Glucosa

0
0 - 2.8/5
5.5/100
5.5/100
2.8/50

Para la construccin de las grficas se le asign un valor a cada uno de los

intervalos de concentracin. 2.8/5=1 5.5/100=2
Grfica 1. Control (glucosa + oxigeno)
2.5

1.5

0.5

10

15

20

25

Grfica 2. Glucosa + 2-4dinitrofenol + oxigeno

2.5

1.5

0.5

10

15

Grfica 3. Glucosa/Ausencia de oxgeno

20

25

30

2.5

1.5

0.5

10

15

20

25

30

Reaccin enzimtica que se produce en una tira reactiva para la

deteccin de glucosa
La glucosa se oxida, para producir cido glucnico y perxido, en presencia de
la glucosa oxidasa. El perxido de hidrgeno reacciona con el chromogen de
potasio yoduro. La extensin en la que el cromogeno es oxidado produce la
coloracin en la tira reactiva (verde-marrn).

ANALISIS DE RESULTADOS
Control / glucosa y oxgeno

En el experimento control las condiciones de temperatura y la aeracin se

mantuvieron constantes. Observamos cmo es que se lleva a cabo la absorcin
de glucosa en el intestino delgado (leon), sin la intervencin de factores que
afecten su transporte desde
la luz intestinal hacia el enterocito, y
determinamos que el movimiento de la hexosa se llevaba a cabo del exterior al
interior del saco intestinal mediante el uso de tiras reactivas de deteccin de
glucosa. En el tiempo cero se determin, que la concentracin glucosa en el
exterior era de 5.5/100; mientras que en el interior la concentracin de glucosa
era 0 ya que fue llenada slo con solucin Tyrode. Observando la Grfica 1.
Control (glucosa + oxigeno), notamos que la absorcin de glucosa aumenta
constantemente, por lo que en el exterior disminuye.
La glucosa entra en las clulas epiteliales intestinales en contra de su
gradiente de concentracin por medio de un mecanismo de cotransporte
dependiente de Na+. El ion sodio, es el que da la fuerza para que la glucosa se
mueva hacia el interior de la clula. El gradiente electro qumico del Na + se
mantiene por la accin de la bomba de Na + y K+, la cual utiliza ATP como fuente
de energa. Una vez que entraron la glucosa y en Na + en la clula, el ion es
bombeado al exterior de nuevo. La glucosa contina su recorrido y se mueve,
por gradiente de concentracin, hacia los vasos sanguneos intestinales y cruza
la membrana basolateral, posteriormente llega a los capilares y los atraviesa
por difusin.
Sabemos que la absorcin de glucosa requiere de ATP para que sta se pueda
llevar a cabo, pero como veremos en los siguientes dos experimentos, hay
condiciones en que inhiben la produccin de sta fuente de energa y por tanto
el proceso de absorcin se ve interrumpido.

Glucosa / Ausencia de oxigeno

La ausencia de oxgeno en el medio influir en el simporte de la glucosa, bajo
el
siguiente
fundamento:
En el proceso de respiracin celular, ms especficamente en la cadena de
transporte de electrones, en el ltimo paso de sta, el Complejo IV, o tambin
llamado citocromo oxidasa, transporta electrones del citocromo c hacia el O 2
molecular reducindolo a H2O . En total 4 electrones son transferidos y a este
proceso se acopla una translocacin de protones a travs de la membrana
mitocondrial originando un gradiente electroqumico que la enzima ATPsintasa
utiliza para sintetizar ATP.
La reaccin global es la siguiente:
4 Fe2+-citocromo c + 8 H+in + O2 4 Fe3+-citocromo c + 2 H2O + 4 H+fuera

Al no haber oxgeno en el medio no se puede llevar a cabo el proceso

anteriormente descrito, lo que provoca que al no haber un gradiente de
protones (H+) la ATPsintasa no pueda llevar a cabo su funcin, a nivel de
absorcin de glucosa esto afecta debido a que al no haber ATP disponible en
las clulas, la Bomba de Na +/K+ no lleva a cabo su funcin provocando que el
Na+ no salga de los enterocitos, de ste modo al no existir un gradiente de Na +
no se puede llevar a cabo el simporte de glucosa.
A nivel experimental, ms especficamente en un grfico podramos observar
que en cierto punto la concentracin de glucosa en la clula se mantiene
constante, sin embargo el comportamiento que se observa es un tanto
diferente, ya que existe un decaimiento en la concentracin de la misma. Al
buscar explicacin a esto, una primera opcin fue que se haba roto el
intestino, pero al pensar mejor esta hiptesis se llega a la conclusin de que si
este fuera el caso, la concentracin dentro del saco (intestino) sera mayor esto
debido a que se dara una difusin simple en el medio, al no haber nada que
limitar la entrada de la solucin Tyrode.
Otra hiptesis para tratar de explicar el evento es que las clulas al no contar
con la moneda energtica trataron de empezar la respiracin celular, lo cual
propici un descenso en la concentracin de la glucosa, debido a la glucolisis,
esta hiptesis se podra comprobar al hacer una medicin de pH o una prueba
para el piruvato
Glucosa + 2-4dinitrofenol + oxigeno
A continuacin, se muestra la molcula del 2,4-dinitrofenol.

El dinitrofenol (DNP) es un agente desacoplante, porque tiene la capacidad de

aislar el flujo de los electrones y el bombeo de H + de la sntesis de ATP. Esto
significa que la energa de la transferencia de electrones no se puede usar para

la sntesis de ATP. Hace 50 aos, se suministraba DNP como un frmaco para

ayudar a los pacientes a perder peso.
En la fosforilacin oxidativa, el flujo de electrones desde el NADH y el
FADH2 hasta el oxgeno conduce al bombeo de H + desde la matriz hacia el
espacio intermembranoso. Este gradiente de H + puede producir ATP cuando
pasa a travs de la ATP sintasa en la membrana mitocondrial interna.
El dinitrofenol disipa el gradiente de H +, reduciendo la produccin de ATP. Bajo
estas codiciones, los alimentos que se comen no se usan para producir ATP, lo
que hace perder peso. Sin embargo, un exceso de inhibidor puede rebajar
demasiado el nivel de ATP hasta un lmite incompatible con la vida. La
diferencia entre la prdida de peso y la muerte est slo en una pequea
diferencia en la concentracin de dinitrofenol, por lo que este compuesto es
peligroso.
En el experimento control (tabla 1), donde se mantuvieron condiciones de
aeracin y temperatura constantes durante todo el experimento, se observa
que al transcurrir el tiempo la concentracin dentro del intestino incrementa
mientras que la concentracin fuera del intestino disminuye.
Al estudiar el efecto de la oxigenacin en el paso de glucosa a travs de la
mucosa intestinal se observa un cambio en la concentracin dentro del
intestino muy pequea en el intervalo de 20 minutos, ya que en el minuto
cero, al introducir el intestino en la solucin Tyrode con glucosa, la tira de
glucosa no detect ninguna concentracin de glucosa y en el minuto 20
registr una concentracin de 0.1g/dL.
Con respecto al tercer experimento donde se estudia el efecto del 2-4
dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa no hubo ningn cambio en la
concentracin ni dentro ni fuera del intestino.
CONCLUSIONES
Bibliografia.
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp10a.pdf
http://www.facmed.unam.mx/publicaciones/ampb/numeros/2007/02/e_Transpo
Glucosa.pdf