HIV

PCR QUALITATIVO, QUANTITATIVO E GENOTIPAGEM

A sndrome imunodeficincia adquirida (AIDS) uma doena retroviral, causada
pelo vrus da imunodeficincia humana (HIV), caracterizada por imunossupresso profunda
com diminuio da populao de linfcitos T CD4+, que leva a infeces oportunistas,
neoplasias secundrias e manifestaes neurolgicas. At o presente, foram identificados
dois tipos de HIV que causam AIDS: o HIV-1, isolado pela primeira vez em 1983 e o HIV2, um segundo tipo correlato, mas distinto, que foi isolado pela primeira vez em 1985. O
HIV-1 o tipo predominante e encontra-se distribudo por todos os pases do mundo,
enquanto o HIV-2 tem sido isolado, principalmente, na frica Ocidental Guin Bissau,
Costa do Marfim e Senegal, com alguns casos sndrome da (AIDS) uma pelo vrus da
identificados nas Amricas e Europa Ocidental. Este tipo no Brasil raramente encontrado.
A infeco por HIV pode ser transmitida por contato sexual, exposio a sangue
infectado ou a produtos derivados do sangue, ou por passagem de vrus de mes infectadas
para seus recm-nascidos. A infeco por HIV pode ser dividida em trs fases distintas:
inicia-se com uma infeco primria ou aguda, seguida por uma fase intermediria
assintomtica (ou de latncia clnica), tambm chamada de perodo de latncia. A terceira
fase caracterizada por uma alta susceptibilidade do paciente a infeces oportunistas e
quando o indivduo afetado pelo HIV passa a ser um doente com
AIDS.
TESTES MOLECULARES (PCR) NA INFECO POR HIV
Nos ltimos anos ocorreu o surgimento de tecnologias de amplificao molecular,
como o caso da PCR (Polymerase Chain Reaction), uma ferramenta nica para um
diagnstico mais direto e de maior sensibilidade na infeco por HIV-1 e para anlise
molecular da atividade viral in vivo e in vitro. A grande vantagem da utilizao dos testes
moleculares para o diagnstico e acompanhamento do paciente com HIV que o
resultado no depende de uma resposta imunolgica ao vrus, que pode levar at 6
meses ou mais para ocorrer. testado diretamente a presena do cido nuclico viral
(RNA), podendo detectar a infeco antes da soroconverso ocorrer.

UTILIZAO CLINICA DOS RESULTADOS QUALITATIVOS

O teste qualitativo, por ser de maior sensibilidade quando comparado Carga Viral
(Teste Quantitativo) est indicado para o diagnstico da infeco por HIV nos seguintes
casos:

Identificao de indivduos infectados durante a janela imunolgica (antes da

soroconverso);
Pacientes com sorologia positiva ou indeterminada;
Pacientes com antecedentes de uso de drogas endovenosas;
Profissionais de sade aps exposio ocupacional;
Crianas nascidas de mes HIV-1 positivas, j que os anticorpos maternos podem
persistir de 5 a 14 meses em nveis detectveis;
Pacientes imunossuprimidos.

UTILIZAO CLINICA DOS RESULTADOS QUANTITATIVOS (CARGA VIRAL)

O teste quantitativo por PCR (AMPLICOR HIV-1 Monitor) um teste de
amplificao de cidos nuclicos in vitro destinado quantificao do RNAdo HIV no
plasma humano. Destina-se a ser utilizado em conjunto com a apresentao clnica e com
outros marcadores laboratoriais, como indicador prognstico da doena, com vista ao
tratamento clnico de pacientes infectados pelo HIV-1.
Os nveis de carga viral so de grande importncia no prognstico e na monitorao
teraputica do esquema antiretroviral utilizado no paciente. Enquanto taxas de CD4+
levam cerca de 3 meses para refletirem uma resposta ao tratamento, a carga viral pode
apresentar variao em poucas semanas.
Este teste no se destina a ser utilizado para rastreio nem como um teste diagnstico
visando confirmar a presena de infeco por HIV-1. As indicaes clnicas do teste
quantitativo so:
Avaliao do prognstico de um paciente por determinao da carga viral inicial
(artes do incio do tratamento);
Avaliao da resposta viral teraputica antiretroviral, determinada atravs de
alteraes dos nveis plasmticos de RNA do HIV-1 durante o tratamento.

SIGNIFICADO CLINICO DOS RESULTADOS

Aps a infeco pelo HIV e durante o curso da doena, bilhes de vrus so
produzidos e destrudos diariamente. Aps a infeco primria, a carga viral atinge um ponto
de equilbrio em cada indivduo. Este ponto parece estar entre 100 e 1 000 000 de cpias de
RNA por mL de plasma e permanece relativamente estvel durante meses e possivelmente
anos.
O ponto de equilbrio da carga viral est fortemente associado com a escala de
progresso da doena e tempo at a morte. Indivduos com linhas basais de nveis de
RNA de HIV abaixo de 5000 cpias/mL possuem menor risco, enquanto que indivduos com
cerca de 50000 cpias/mL possuem grande risco de progresso da doena. Nveis de RNA
de HIV so os mais importantes fatores preditivos da progresso da doena. A
contagem de linfcitos CD4+, por outro lado, o mais importante marcador de
prognstico imediato nestes doentes. Assim nveis de RNA de HIV podem auxiliar a
estimar o incio dos sintomas relacionados ao HIV que so preditivos de alto risco para a
ocorrncia de infeces oportunistas.

VERIFICAA DA RESPOSTA TERAPIA

A carga viral tambm recomendada como guia, juntamente com a contagem de
clulas T CD4+ e com a condio fsica do paciente, para a verificao de resposta terapia.
Vrios estudos utilizando combinaes de drogas antiretrovirais mostraram forte reduo no
ttulo de RNA do HIV-1 dentro de algumas semanas.
Uma considerao importante a ser feita na avaliao de resposta pela quantificao
de RNA viral a flutuao dos nveis virais. Devem ser considerados como variaes
significantes alteraes de pelo menos 0,5 Log, para descartar variabilidade biolgica
da concentrao viral.
Aps o incio da terapia, espera-se uma queda dos nveis de RNA viral de 1,5 a 2 log
em um perodo de 4 semanas de tratamento (quando o exame dever ser repetido). Uma
resposta precoce est associada a maior probabilidade de supresso viral.

Em pacientes com contagem superior a 100.000 cpias/mL, o declnio da carga viral pode
ser mais demorado. Em um perodo de 16 a 24 semanas de tratamento, espera-se que exista
supresso viral levando a resultados de carga viral indetectveis. Caso isto no ocorra,
necessrio investigar a causa desta falncia teraputica.
A principal causa para isto relacionada a problemas de aderncia do paciente ao
esquema medicamentoso. Muito mais raramente, problemas de absoro das drogas ou
resistncia viral s drogas podem ser responsabilizados.
Uma importante recomendao prtica a de sempre repetir, no mesmo
laboratrio, em duas visitas, as contagens de CD4+ e carga viral antes de introduzir ou
modificar a terapia. A monitorizao destes parmetros laboratoriais deve ser realizada
mensalmente em perodos de incio ou modificao da terapia e a cada trs meses, aps sua
estabilizao.
As combinaes multidrogas parecem reduzir o impacto clnico da resistncia viral
s drogas. Entretanto, como o vrus apresenta expressiva mutao, as formas resistentes
surgem por mecanismo de seleo. Os testes e resistncia s drogas tm sido propostos
para a seleo de alternativas teraputicas, sendo a genotipagem do HIV o mtodo
mais corrente em nosso meio. Sugere-se que este teste seja realizado m situaes de alto
risco: pacientes com falncia no tratamento, indivduos que requerem tratamento de resgate,
gestantes e na profilaxia ps-acidentes.

LIMITAES DO PROCEDIMENTO

Um teste com resultado Abaixo do limite de deteco no exclui a possibilidade de

exposio ou infeco pelo HIV-1.
O teste AMPLICOR HIV-1 foi otimizado para o Grupo M do HIV-1, subtipos A-H.
O desempenho do teste com o Grupo O do HIV-1 e com HIV-2 desconhecido.
Apesar de serem relativamente raros no Brasil, este teste no dever ser usado para
controle clnico de doentes infectados com o Grupo O do HIV-1 ou com o HIV- 2.
Alm da carga viral, outros fatores virais ou imunopatolgicos podem contribuir
para as taxas variveis dos nmeros de linfcitos T CD4+ e o resultado clnico da
doena.
Os testes qualitativo e genotipagem foram validados para utilizao exclusiva com
sangue total colhido com EDTA. O teste de outros tipos de amostra podem dar
origem a resultados falsos negativos ou falsos positivos. A heparina inibe a PCR; no
se devem utilizar amostras colhidas usando heparina como anticoagulante.
A obteno de resultados confiveis depende da colheita adequada da amostra e dos
procedimentos de transporte, armazenamento e processamento. As amostras podem
ser congeladas e descongeladas at 3 vezes no mximo.

Bibliografia
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5. www.aids.gov.br