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Relatrio de Estgio
Mestrado em Anlises Clnicas
Setembro, 2012
ndice
LISTA DE ABREVIATURAS ........................................................................ III
RESUMO......................................................................................................... V
ABSTRACT .................................................................................................... V
I.
INTRODUO........................................................................................ 1
II.
B.
A.2.
Microbiologia ........................................................................................................................ 7
O Setor ................................................................................................................................... 8
B.2.
B.3.
NDICE
B.3.4. Progesterona ................................................................................................................... 22
B.3.5. Testosterona ................................................................................................................... 22
B.4.
C.
B.5.
B.6.
HEMATOLOGIA................................................................................................................. 26
C.1.
O Setor................................................................................................................................. 26
C.2.
Hemograma ....................................................................................................................... 32
C.3.
C.4.
Hemstase .......................................................................................................................... 38
ii
Lista de Abreviaturas
ACTH
Hormona adrenocorticotrfica
AEQ
AFP
Alfa-fetoprotena
AL
Anticoagulante lpico
aPTT
ativada
hCG
BMG
2-microglobobulina
CA~
Antignio carbohidrato
CEA
Antignio carcinoembrionrio
CIV
Coagulao
GnRH
Hormona
libertadora
de
gonadotrofinas
Hct
Hematcrito
Hgb
Concentrao de hemoglobina
INR
INSA
Ricardo Jorge
Ig
Imunoglobulina
IPO
IRMA
ISI
disseminada
LCR
Lquido cefalorraquidiano
CLIA
Chemiluminescence immunoassay
LH
Hormona luteinizante
CQI
LB
Linfcitos B
DNA
cido desoxirribonucleico
LT
Linfcitos T
MCH
intravascular
ECLIA Electrochemiluminescence
immunoassay
EDTA
cido etilenodiaminotetractico
corpuscular mdia
EMIT
MCV
MN
Mononucleares
MT
Marcador tumoral
NSE
Enolase Neuroespecfica
PCR
Technique
EP
Embolismo pulmonar
EPO
Eritropoetina
FSH
Hormona folculo-estimulante
iii
ABREVIATURAS
PDF
Produtos
de
degradao
da
fibrina
TVP
PMN
Polimorfonuclear
Russel diludo
PSA
T3
Triiodotironina
PT
Tempo de protrombina
T4
Tetraiodotironina
PTH
Paratormona
VCS Technology
RIA
RBC
RDW
Amplitude de distribuio de
VDRL
International
Quality
Assessment Scheme
RNA
cido ribonucleico
SCCA
Antignio do Carcinoma de
Clulas Escamosas
SCT
SPC
TG
Tireoglobulina
Hormona
libertadora
da
Estimuladora
da
tiriotrofina
TSH
Hormona
Tiroide
TT
iv
Tempo de trombina
Venereal
Disease
Research
Laboratory
Reticulcitos
RIQAS Randox
para
eritrcitos
RET
Acrnimo
VS
Velocidade de sedimentao
WBC
Resumo
Com o presente relatrio de estgio, no mbito do Mestrado em Anlises Clnicas,
pretende-se descrever todas as atividades nas quais estive envolvido ao longo deste ano letivo
no servio de Patologia Clnica do Instituto Portugus de Oncologia de Coimbra Francisco
Gentil (IPOCFG).
Aps uma breve introduo instituio de acolhimento e descrio dos objetivos,
ser realizada uma apresentao do servio de Patologia Clnica. Posteriormente sero
abordadas as atividades desenvolvidas atravs de uma descrio muito simples das reas de
Qumica Clnica e Microbiologia e de uma descrio mais detalhada das reas de
Hormonologia/ Imunologia e Hematologia.
Nas reas para maior aprofundamento sero ainda referidos os equipamentos
existentes e esclarecidos os princpios das metodologias utilizadas. Finalmente sero
abordados alguns dos principais parmetros determinados com o respetivo enquadramento
terico.
Palavras-chave: IPO, Patologia Clnica, Hematologia, Imunologia, Endocrinologia.
Abstract
The intention of this report under the Masters Degree in Clinical Analysis is to
describe all the activities in which I have participated throughout the year at the Service of
Clinical Pathology of Francisco Gentil Portuguese Institute of Oncology at Coimbra (IPOCFG).
After a brief description of the Institution and the objectives of this internship it will be
present the Clinical Pathology Service. Posteriorly will be discussed and simple described the
activities performed in the clinical chemistry and microbiology laboratories and in more detail
the activities performed in the immunology/ endocrinology and haematology laboratories.
Within hormonology/ immunology and haematology activities will be also referred the
existing equipment and the methodologies used. Finally, will be discussed some of the
parameters determined in these laboratories with the respective theoretical framework.
Keywords: IPO, Clinical Pathology, Haematology, Immunology, Endocrinology.
I. Introduo
Nmero de Amostras
2010
2011
Qumica Clnica
792496
790891
Microbiologia
11971
10893
Imunologia
71300
69771
Hormonologia
38980
37501
Hematologia
133062
123675
Nmero de Doentes
65440
67351
Tabela 1 Dados estatsticos relativos ao nmero de anlises realizadas no servio de patologia clnica.
Pode verificar-se um decrscimo do nmero de anlises pedidas mas o nmero de doentes aumentou
N DE ANLISES 2011
Hematologia
Hormonologia
Imunologia
Microbiologia
Qumica Clnica
A.2. Microbiologia
Setor destinado ao estudo microbiolgico de diversos produtos biolgicos e o que
mais depende do analista clnico. As amostras que aqui chegam podem ter como finalidade
estudos bacteriolgicos, parasitolgicos ou at micolgicos. Estas amostras podem ainda ser
dos mais variados tipos, deste uma simples urina at exsudados vaginais, expetoraes, lavados
brnquicos, LCR e outros fluidos biolgicos, ps, sangue (hemocultura), fezes, escamas da pele
e unhas ou at dispositivos mdicos, como cateteres. Como tal requerem cuidados prprios
durante a sua colheita.
Os recursos humanos existentes no setor so constitudos por uma mdica especialista
em patologia clnica, uma tcnica superior de sade e trs tcnicos de diagnstico e
teraputica.
Aps a receo das amostras so verificadas as condies de colheita, segundo as
consideraes do manual das boas prticas para cada tipo de amostra, e quais os exames a
executar. Pode ser necessrio fazer uma simples anlise quantitativa e qualitativa da urina ou
uma observao do sedimento urinrio, com uma cuidadosa pesquisa e identificao de
microrganismos responsveis por graves doenas respiratrias ou por uma septicmia, seguida
da determinao do seu perfil de suscetibilidade aos antibiticos.
Neste setor tambm essencial que se trabalhe em condies de assepsia e que a
escolha dos meios a inocular seja muito bem pensada, de forma a obter uma boa recuperao
dos microrganismos que pensamos ser causadores da situao patolgica para podermos
prosseguir os estudos. O microscpio tico representa um dos mais valiosos suportes que
nos pode guiar num diagnstico preliminar.
No setor de microbiologia so tambm efetuados o CQI e o CQE. O CQI efetuado
periodicamente com estirpes conhecidas, adquiridas comercialmente, s quais so aplicadas as
tcnicas usadas na rotina. Periodicamente tambm executado o CQE do INSA no qual so
fornecidas amostras cegas e solicitado que sejam processadas normalmente e que os
resultados obtidos sejam enviados. Posteriormente so fornecidos os resultados esperados
pela AEQ.
HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA
B. Hormonologia/ Imunologia
B.1. O Setor
O setor da endocrinologia/imunologia , provavelmente, o mais desenvolvido no
servio de patologia clnica, o que compreensvel j que o IPOCFG E.P.E uma unidade
hospitalar de oncologia. Os recursos humanos do setor so compostos por profissionais de
sade, entre os quais, tcnicos superiores de sade especialistas e tcnicos de diagnstico e
teraputica.
A hormonologia e a imunologia so dois setores que ocupam o mesmo espao fsico
comportando-se estrutural e organizacionalmente como um grande setor. De entre todos os
outros, este o setor de maiores dimenses e est dividido em vrios espaos. Num deles,
encontram-se os autoanalisadores de imunoqumica onde so estudados marcadores tumorais
e hormonas, e realizados testes de avaliao cardaca e monitorizao de frmacos, alm da
serologia infeciosa. Possui ainda espaos apropriados execuo de tcnicas manuais. Esta
rea est tambm dedicada ao registo, processamento e validao das amostras do setor. Um
outro espao est destinado ao estudo eletrofortico e imunofixao das protenas tendo
ainda um contador gamma, uma estufa, uma centrfuga refrigerada, uma ultracentrfuga e uma
hotte. Dentro do setor existe, ainda, um microscpio de fluorescncia para estudos especficos
de autoimunidade.
O sistema informtico do setor de endocrinologia/imunologia possui um software de
processamento de dados, independente dos outros setores, que atribui a cada doente um
nmero de registo independente e interno para melhor organizao e distribuio do servio.
Os tubos so identificados por cdigo de barras com numerao sequencial, para alm do
nmero do dia de registo e do nmero de identificao do paciente (nmero de processo).
Este sistema permite que os autoanalisadores funcionem em rede (LIS) com o software central.
Alm disso a comunicao feita em modo query bidirecional, isto , so enviados para os
equipamentos os parmetros a dosear e estes correspondem com os resultados, completando
o pedido por doente. O processo finalizado com a validao biopatolgica.
Este sistema utiliza perfis analticos internos (MAM, PUL, DI, TI,) consoante os
parmetros a determinar e que facilitam o registo informtico e informam o profissional de
sade sobre o percurso que cada amostra tem de fazer.
HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA
de
imunologia
para
de
funcionamento
se
baseia
na
como recetor (XL665). Trata-se de um ensaio imunomtrico tipo sandwich em que os dois
anticorpos especficos do antignio a dosear esto marcados com um fluorocromo.(4)
Este tipo de interao requer uma proximidade fsica entre o dador e aceitador de
modo que s quando se forma um complexo com o antignio que o fluorocromo aceitador
eficazmente excitado. A formao do complexo antignio-anticorpo e a consequente
transferncia de energia do criptato para o XL665 permite o prolongamento temporal e a
intensificao do sinal de fluorescncia do XL665. A intensidade de sinal obtido ser
proporcional concentrao do antignio.(4)
Estes ensaios baseiam-se no princpio de ensaio homogneo sendo, deste modo,
dispensados os processos demorados de separao e lavagem e tornado possvel a execuo
de medies sem interromper a reao. Isto permite uma anlise cintica que logo no incio
da incubao capaz de reconhecer amostras altamente concentradas possibilitando que
sejam automaticamente diludas por um fator de diluio apropriado e ento analisadas
novamente.(4)
10
de
(ECLIA).(5)
Este
micropartculas
estreptavidina,
especficos
Fig. 3 cobas e 411
eletroquimioluminescncia
equipamento
revestidas
anticorpos
biotinilados
utiliza
com
monoclonais
e
anticorpos
marcados com um quelato de rutnio. Todos estes compostos reagem entre si formando um
complexo tipo sandwich. Esta mistura ento fixada magneticamente, graas as
micropartculas de estreptavinina, na superfcie de um eltrodo permitindo que todo o
material no fixado seja removido. Por fim, aplicada uma corrente eltrica no eltrodo que
induz uma emisso quimioluminiscente, por parte do rutnio, que medida por um
fotomultiplicador. Neste caso a concentrao do analito ser diretamente proporcional
intensidade do sinal.(6)
Este equipamento poder tambm executar ensaios competitivos que no lugar do
antignio monoclonal especfico para o analito, utilizado um derivado do analito marcado
com o complexo de rutnio que ir competir diretamente com o da amostra do doente pelo
local de ligao do anticorpo especfico biotinilado. A concentrao do analito ser
inversamente proporcional intensidade do sinal.
11
HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA
formam-se
imunocomplexos
destinado
principalmente
revestidas
com
os
anticorpos
baseado
na
tecnologia
de
12
Fig. 7 Viva-E
anticorpo
de
interesse.
intensidade
de
amostra.
imunofixao
de
protenas.
necessrio um passo extra no qual usada uma mscara que serve para aplicar os anticorpos.
O mdulo da direita destina-se colorao e secagem do gel de forma a revelar o resultado.
13
HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA
inconvenientes, quer de ordem tcnica, quer de segurana para o analista que manipula este
tipo de substncias. Entre outras, o marcador radioativo tem uma semi-vida curta pelo que os
kits tm de ser utilizados dentro do curto prazo estabelecido pela firma, so tcnicas muito
demoradas, com longos perodos de incubao e muitos passos que requerem grande prtica
de manuseamento por parte do analista. Por estas razes estes mtodos tem vindo a ser
substitudos, sempre que possvel, pelos de quimioluminescncia e de fluorescncia.
B.1.1.10.2. Cromatogrficas
As tcnicas manuais cromatogrficas so utilizadas para a quantificao dos metabolitos
excretados na urina. Estas tcnicas usam colunas de extrao que contm resinas de modo a
permitirem a remoo diferencial do metabolito de interesse. Numa primeira etapa, fica retido
na coluna e s aps a adio de cloreto de sdio (NaCl) que eludo. Posteriormente
quantificado por espetrofotometria.
B.1.2. Controlo de Qualidade
Diariamente, e antes do incio do trabalho, so efetuados dois nveis de CQI para todos
os parmetros doseados em cada equipamento. Uma vez executados, so avaliados segundo
as regras de Westgard. Neste setor existe, ainda, a possibilidade destes controlos internos
serem comparados e consultados atravs de um software informtico com todos os
laboratrios que usem os mesmos kits e os mesmos equipamentos. Isto no s permite avaliar
o desempenho do laboratrio, como tambm permite despistar causas provveis para o desvio
aos valores esperados. So tambm realizados periodicamente controlos de AEQ, sendo que,
este setor participa em dois diferentes programas, o Randox International Quality Assessment
Scheme (RIQAS), e do Instituto Nacional de Sade Dr. Ricardo Jorge (INSA).
14
Um marcador tumoral (MT) pode ser definido como uma molcula biologicamente
estvel e com caractersticas muito variveis, cujo aparecimento ou alterao da sua
concentrao, poder alertar para a gnese, presena ou evoluo de um tumor de
caractersticas malignas.(10) O estabelecimento de uma classificao universal no fcil pois
cada um deles poderia pertencer a mais que um grupo. No entanto, podem considerar-se
genericamente dois grandes grupos de marcadores tumorais, por um lado as molculas
produzidas de novo ou em maior quantidade pelas clulas malignas do que pelo tecido normal,
por outro, molculas que foram induzidas pelo prprio hospedeiro em resposta clulas
malignas possivelmente presentes.(11)
Deste modo um marcador tumoral poder ser qualquer tipo de molcula, com
qualquer tipo de funo biolgica, desde enzimas e hormonas, at antignios de funo
desconhecida ou oncoprotenas. A sua principal utilidade a possibilidade de manipulao
clnica de doentes com cancro, auxiliando nos processos de diagnstico, estadio da doena,
avaliao da resposta teraputica, deteo de recidivas e prognostico. (10)
Como no existe um marcador ideal, e porque as suas elevaes podem estar
associadas a processos fisiolgicos ou de progresso benigna, importante no esquecer que
15
HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA
17
HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA
B.2.7. CA 72.4
Tambm denominado TAG-72, este marcador tem elevada especificidade para o
cancro, mas baixa sensibilidade de rgo. No entanto, em associao com o CEA, o MT de
primeira escolha para despiste do carcinoma do estmago e um MT complementar do CA
125 para o carcinoma do ovrio. Contrariamente ao CA 125, apresenta-se elevado no
carcinoma mucinoso do ovrio e dada a sua especificidade permite a discriminao entre
tumor maligno e doenas benignas gastrointestinais. ainda til na monitorizao teraputica
e controlo de recidiva de carcinomas do trato gastrointestinal.(10, 11)
Aumentos discretos do marcador podem ser encontrados em processos inflamatrios
e em doenas benignas gastrointestinais.
B.2.8. CA 125
Produzido por uma variedade de clulas o MT de eleio no carcinoma do ovrio,
mais particularmente dos adenocarcinomas serosos. Atualmente, a sua principal funo a
monitorizao da resposta teraputica e o follow-up dos doentes com cancro epitelial do ovrio
j que a elevao deste MT pode ocorre dois a doze meses antes de qualquer evidncia clnica
de recorrncia.(10, 11)
Doentes com carcinoma da mama, tero (endomtrio e colo), pulmo, estmago e
colo-retal tambm podem estar associados sua elevao.(10)
Podem ainda encontrar-se nveis elevados desta mucina em mulheres grvidas ou
durante a menstruao, em condies benignas como endometriose e quistos no ovrio e em
pessoas com cirrose, hepatite ou pancreatite.
B.2.9. Enolase NeuroEspecfica (NSE)
A NSE uma enzima glicoltica encontrada em tecido neuronal e nas clulas do sistema
neuroendcrino. utilizado como auxiliar de diagnstico do carcinoma de pequenas clulas
do pulmo, no entanto, tem sido tambm detetado em doentes com neuroblastoma,
carcinoma medular da tiroide, tumores carcinoides, tumores do pncreas endcrino e
melanoma. Parece ser til na monitorizao do tratamento e os seus nveis correlacionam-se
com o estadio da doena, apesentando utilidade prognstica, e at possibilidade de antever
uma recidiva da doena.(10, 11)
Este marcador possui uma fonte de erro pr-analtica importante, que o facto dos
eritrcitos, clulas plasmticas e plaquetas possurem NSE e, portanto, caso haja hemlise ou
se a centrifugao do sangue for executada tardiamente podem-se gerar falsas elevaes.
18
19
HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA
aumento dos nveis sricos de TG, esta protena no tem grande valor na discriminao entre
doena benigna ou maligna. (11, 12)
Apresenta, porm um importante papel na abordagem do tumor da tiroide pois
permite a monitorizao da progresso da doena depois da tiroidectomia total. Aps a
cirurgia a TG srica pode elevar-se temporariamente, retomando aos nveis normais dentro
de 4 a 6 semanas. Nveis residuais ou recorrentes devem levantar suspeita de recidiva local ou
metstases.(13)
Aumentos no especficos podero ocorrer na tiroidite autoimune, adenoma toxico
tiroideio e bcio.
B.2.13. -hCG
Frao beta da Gonadotropina Corinica Humana que normalmente secretada pela
placenta durante a gravidez. Devido aos elevados nveis de HCG no sangue e na urina de quase
todas as mulheres com doena trofoblstica constitui um excelente marcador tumoral para
essa doena. Elevaes deste MT podem ainda estar associadas presena de cancro das
clulas germinativas (testculo e ovrio).(10, 11)
Doentes com patologias benignas como, doena inflamatria do intestino, lceras
duodenais e cirrose ou cancros da mama, pulmo, pncreas, ovrio ou gastrointestinais podem
induzir elevao dos nveis de HCG.(12, 13)
B.2.14. 2-Microglobulina
Polipeptdeo associado a complexo major de histocompatibilidade HLA-tipo I e, por
isso, expresso em quase todas as clulas nucleadas.(10)
O seu aumento no soro tem sido associado a uma variedade de doenas malignas
incluindo o mieloma mltiplo, linfoma e tumores slidos. Nveis elevados de BMG
correlacionam-se com o volume tumoral e com a elevao dos nveis creatinina srica que so
importantes fatores na determinao do desenvolvimento e prognstico no mieloma mltiplo.
Nveis sricos elevados de BMG tm tambm mostrado valor preditivo de insucesso
teraputico e sobrevida insatisfatria em doentes com linfoma. (10, 13)
Por estas razes tornou-se um marcador utilizado poa monitorizar o mieloma mltiplo
e algumas leucemias e linfomas.
20
21
HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA
esta relacionada com a sua dependncia funcional do oligoelemento, iodo, para a sntese das
hormonas tiroideias.(12)
A principal funo da glndula da tiroide a produo e armazenamento das hormonas
tiroideias triidotironina (T3) e tetraiodotironina (T4). A produo destas hormonas ocorre
aps estimulao das clulas pela hormona da hipfise, TSH (Hormona Estimuladora da
Tiroide) que por sua vez previamente regulada pela TRH (Hormona libertadora da
tiriotrofina) ao nvel Hipotalmico.(12)
Na circulao sangunea T3 e a T4 podem circular ligadas a um transportador ou sobre
a forma livre sendo nesta ltima que elas exercem atividade biolgica.
B.4.1. Hormona estimuladora da tiroide (TSH)
Tambm designada de hormona tireotrfica, uma glicoprotena sintetizada pelo
lbulo anterior da hipfise e que se liga aos recetores da TSH permitindo estimular e regular
a produo das hormonas da tiroide T3 e T4.
O doseamento desta hormona permite o diagnstico diferencial do hipotiroidismo e a
monitorizao da teraputica de substituio das hormonas da tiroide. Em casos de
hipertiroidismo, os valores de TSH encontram-se normalmente reduzidos, por outro lado, em
casos de hipotiroidismo os nveis sricos de TSH esto elevados.(12)
B.4.2. Tetraiodotironina (T4)
A T4 a principal hormona da tiroide e encontra-se maioritariamente ligada a protenas
transportadoras plasmticas.
Valores baixos de T4 so encontrados no hipotiroidismo e nas carncias de iodos
enquanto que valores elevados ocorrem no hipertiroidismo e nas subcargas de iodo. A frao
livre da T4 a que reflete melhor o estado funcional da tiroide j que no influenciada pelas
variaes fisiolgicas das protenas transportadoras como a albumina e a TGB.
Em casos de gravidez e de doentes sujeitos a teraputicas base de estrognio e em
hiperproteinmias verifica-se um aumento da T4 total por aumento das protenas plasmticas
de transporte. Doentes com neoplasias hepticas ou gastrointestinais assim como deficincia
gentica da TGB (protena ligadora da tiroxina) apresentam valores de T4 total diminudos.(12)
B.4.3. Triiodotironina (T3)
Esta hormona e proveniente na grande maioria da desiodinao perifrica da T4 e uma
pequena parte da secreo da tiroide. Pode encontrar-se ligada a protenas de transporte ou
23
HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA
sobre forma livre que a fisiologicamente ativa. O doseamento desta forma livre sempre a
mais indicada para a avaliao de patologias associadas tiroide j que no alterada por
variaes de concentrao/produo das protenas transportadoras das hormonas da tiroide.
A elevao dos nveis de T3 livre no soro ocorre em situaes de hipertiroidismo e de doenas
autoimunes da tiroide.(12)
A T3 total utilizada deteo de casos de hipertiroidismo, no entanto, existem outras
patologias no relacionadas com a tiroide que elevam a concentrao de T3.
globulina,
-globulina
-globulina
que
com
todos
os
antissoros
25
HEMATOLOGIA
C. Hematologia
C.1. O Setor
No setor da Hematologia trabalham diversos profissionais de sade, empenhados em
fornecer os melhores resultados. Entre estes, encontram-se tcnicos de diagnstico e
teraputica, tcnicos superiores de sade e mdicos especialistas em patologia clnica.
O local de trabalho est dividido em vrias reas, sendo uma delas dedicada realizao
dos hemogramas, velocidades de sedimentao (VS), observao microscpica de esfregaos
sanguneos e s tcnicas manuais em geral, e a outra hemstase e citometria de fluxo. Dispe
ainda de uma sala polivalente onde se determinam parmetros analticos por biologia molecular
relacionados com a patologia hematolgica.
Tal como nos restantes setores, na hematologia as amostras seguem um circuito
especfico pelo que, logo aps a admisso dos devidos tubos, estes so separados e etiquetados
conforme se destinem a cada uma das reas referidas. Na primeira rea, as amostras com
pedido de VS e hemograma so primeiramente colocadas num agitador de tubos passando de
seguida para o contador de clulas e depois para a determinao da VS. Para pedidos de
coagulao e hemstase, assim como citometria de fluxo, so efetuadas colheitas especficas
para o efeito. Posteriormente, e se necessrio, realizado o esfregao sanguneo, antes das
amostras serem arrumadas.
relevante referir que, neste setor, o volume de sangue um dos fatores mais
importantes a ter em conta. Aquando da colheita, e no prprio setor, o volume de sangue no
tubo deve ser verificado, j que os efeitos de diluio do anticoagulante ou a
hemoconcentrao podem conduzir a alteraes nos resultados.
C.1.1. Equipamentos, princpios de funcionamento e tcnicas manuais
No global existem sete equipamentos a funcionar neste setor. Dois contadores de
clulas, um analisador de VS, dois analisadores de coagulao e hemstase, um citmetro e
um analisador biomolecular. Os contadores de clulas e os analisadores de coagulao e
hemstase geralmente so utilizados alternadamente, a no ser para confirmao dos
resultados, caso se justifique.
26
que
atravessa
uma
abertura
aumenta
impulso eltrico que pode ser detetado e medido. Enquanto o nmero de impulsos indica a
contagem das partculas, a sua amplitude ser proporcional ao volume que cada partcula
ocupa, neste caso, ao volume celular. (16-18)
HEMATOLOGIA
Ilustrao 10 Tecnologia VCS. esquerda aplicada a corrente de baixa frequncia. Segue-se a de alta
frequncia e por fim a disperso lazer. direita pode ser observada a perspetiva tridimensional
coagulomtricos
os
baseiam-se
imunolgicos.
Os
no
da
princpio
injetar
suspenso
celular,
atravs
da
focagem
HEMATOLOGIA
30
31
HEMATOLOGIA
C.2. Hemograma
sem dvida um dos exames complementares de diagnstico mais requisitados e que
permite a quantificao dos elementos celulares do sangue tais como eritrcitos, leuccitos e
plaquetas. Este exame , deste modo, fundamental para o estudo da funo hematolgica. No
entanto, consoante a situao clnica do doente, pode ser necessria uma anlise mais
cuidadosa dos elementos celulares, que para alm de uma simples quantificao implica
tambm um estudo morfolgico que pode se realizado atravs de um esfregao sanguneo.
Uma colheita e um processamento apropriado da amostra de sangue essencial para
a obteno de um bom hemograma. Assim, aps uma cuidadosa venipuntura, o sangue
transferido para um tubo contendo anticoagulante, no caso o EDTA tripotssico (EDTA-3K),
cujo objetivo bloquear o clcio necessrio ocorrncia da coagulao ao mesmo tempo que
conserva a morfologia dos leuccitos e eritrcitos permitindo tambm uma contagem das
plaquetas mais correta. No entanto, quando em excesso, este anticoagulante pode alterar
morfologicamente os eritrcitos, que ficam com um aspeto crenado, diminuir o hematcrito
e o volume corpuscular mdio, aumentar a concentrao de hemoglobina corpuscular mdia
e promover a aglutinao das plaquetas levando a contagens falsamente baixas
(pseudotrombocitopenia).(24)
C.2.1. Eritrograma
Os eritrcitos, alm de serem as clulas mais abundantes do organismo humano,
caracterizam-se pela ausncia de ncleo, mitocndrias e ribossomas e por apresentarem a
forma de disco bicncavo. esta forma que lhes permite ter uma extensa rea de superfcie
em relao ao volume citoplasmtico amentando assim a eficincia da difuso das trocas
gasosas. Alm disso como cerca de 98% da protena presente no citoplasma dos eritrcitos
circulantes a hemoglobina estas clulas so altamente especializadas no fornecimento de O2
aos tecidos e o retorno de CO2 dos tecidos para os pulmes. O eritrograma destina-se, assim,
ao rastreio, quantificao e diagnstico causal das anemias e poliglobulias e consiste na
determinao de trs parmetros quantitativos, a contagem dos eritrcitos (RCB),
32
33
HEMATOLOGIA
presena de reticulcitos. Atravs desta contagem ser assim possvel avaliar o funcionamento
da medula em resposta a alteraes na contagem de eritrcitos. Existem no entanto diversas
partculas no RNA, nomeadamente corpos de Heinz e de Howell-Jolly, que facilmente so
confundveis induzindo o profissional de sade a contagens falsamente elevadas. (18, 25)
Ilustrao 16 esquerda possivel observar a aparncia dos reticulcitos. Ao centro corpos de Heinz.
direita corpos de Howell-Jolly
C.2.2. Leucograma
Geralmente os leuccitos so divididos em dois grandes grupos, os polimorfonucleares
(PMN), ou granulcitos, que incluem os neutrfilos, eosinfilos e basfilos e os
mononucleares (MN), ou agranulcitos, que incluem os moncitos e os linfcitos. Enquanto
os granulcitos se caracterizam por terem um citoplasma com grnulos especficos, um ncleo
segmentado e irregular, os agranulcitos possuem um ncleo grande, mais regular e sem
segmentaes, sendo o citoplasma desprovido de granulao especfica.(18)
a partir destas caractersticas que se determina o leucograma e que se torna possvel
a contagem de leuccitos, a determinao da frmula leucocitria e a quantificao e avaliao
morfolgica destas diferentes populaes celulares. A quantificao ser particularmente til
para identificar situaes de infeo e seguir o progresso de certas doenas e terapias, como
leucemias e linfomas alertando, no caso, o profissional de sade para o recuso a metodologias
mais sofisticadas.
C.2.2.1. Neutrfilos
Tambm denominados PMN, so os leuccitos mais abundantes no sangue perifrico
do adulto. Caracterizam-se por ter um ncleo com cromatina densa e segmentada em 2 a 5
lbulos. O citoplasma abundante, apresenta uma granulao fina de origem lisossmica,
contendo principalmente enzimas hidrolticas e cora de rosa aps colorao de Wright. Por
vezes podero aparecer no sangue perifrico os neutrfilos em basto que correspondem aos
neutrfilos que ainda no completaram o seu desenvolvimento.(25)
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HEMATOLOGIA
C.2.2.2. Eosinfilos
Apresentam um ncleo com 2 a 3 lbulos e uma cromatina densa e sem nuclolos. O
citoplasma caracteriza-se pela forte presena de grnulos com afinidade para corantes cidos,
que aps colorao de Wright adquirem uma colorao laranja e por isso so facilmente
identificados por microscopia. Participam nos mecanismos
de defesa contra corpos estranhos e parasitas estando
ainda envolvidos nas reaes alrgicas
e na remoo de fibrina formada
durante o processo inflamatrio. (25)
Ilustrao 18 Aparncia dos eosinfilos ao microscpio
tico
C.2.2.3. Basfilos
eosinfilos
aos
locais
de
eventualmente
clulas
C.2.2.5. Linfcitos
de
um
processo
HEMATOLOGIA
C.4. Hemstase
Na realizao de estudos de hemstase, alm dos cuidados j referidos para o
hemograma, a amostra tem, no entanto, de ser colhida para um tubo prprio contendo o
citrato de sdio (9:1). Apesar deste anticoagulante tambm bloquear o processo de coagulao
atravs da quelao do clcio, tem a vantagem do efeito ser facilmente reversvel pela simples
adio de mais clcio, que essencial para este tipo de estudos, pois um importante ativador
em vrias fazes da cascata de coagulao. Talvez ainda mais importante do que para o
hemograma, o facto do volume de sangue ter de ser rigorosamente o indicado pelo tubo,
pois qualquer fenmeno de diluio poder alterar o equilbrio entre o sangue e o
anticoagulante.
Depois da colheita e etiquetagem, os tubos so centrifugados a 3000 rpm durante 10
minutos. O que nos interessa a obteno de um plasma pobre em plaquetas j que so estas
as condies exigidas neste tipo de estudos. No entanto, caso de trate da pesquisa do
anticoagulante lpico (AL) os tubos devem ser centrifugados novamente, sob as mesmas
condies, de forma a obter um plasma sem plaquetas. Depois de executados estes passos
procede-se as determinaes, sendo que as mais frequentemente solicitadas no IPOCFG so
o Tempo de Protrombina (PT), Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada (aPTT), Tempo de
Trombina (TT) e o Fibrinognio. A determinao de outros parmetros menos requisitados
como os D-Dmeros, o anticoagulante lpico, Anti-trombina, Protena C, Proteina S e outros
fatores especficos envolvidos na cascata de coagulao, tambm pode ser solicitada, no
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39
HEMATOLOGIA
41
HEMATOLOGIA
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IV. Concluso
A realizao deste estgio, no mbito do Mestrado em Anlises Clnicas, foi sem dvida
uma mais-valia para a minha formao pessoal e profissional, pois permitiu o contacto com um
grupo de doentes muito prprio mas, infelizmente, cada vez mais comum. So doentes que
partida j apresentam muitas alteraes nos parmetros analticos, particularmente na
contagem de clulas e nos esfregaos sanguneos de doentes sujeitos a tratamentos com
consequncias devastadoras, como o caso da quimioterapia. Por esta razo valores analticos
que num hospital comum j seriam preocupantes, neste hospital fazem parte do dia-a-dia.
Dada a sua extenso, neste estgio foi ainda possvel a integrao total na rotina dos
setores, principalmente nas reas mais aprofundadas, o que permitiu vivenciar uma experincia
muito prxima do que ser efetivamente trabalhar num laboratrio de anlises clnicas a nvel
hospitalar.
A frequncia das aulas foi tambm essencial para uma melhor integrao e
compreenso dos parmetros determinados, j que reforou o espirito crtico e capacidade
cognitiva de interpretao e correlao clnica dos resultados.
, no entanto, uma pena que no tenhamos total disponibilidade para a realizao do
estgio uma vez que ainda so lecionadas cadeiras no segundo ano do mestrado. Compreendo
que seja difcil ajustar as coisas de outra forma mas acredito que a possibilidade de termos
pelo menos o segundo semestre inteiramente dedicado ao estgio permitiria um melhor
acompanhamento do mesmo. Seria at possvel, quem sabe, desenvolver um projeto de ndole
cientfica no local do estgio.
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