Materia

Bioqumica
Responsable
M.C. Roco Caldern Pascacio

Grado y grupo / Carrera

3 B, C, D/ TSU Agrobiotecnologa area vegetal

Unidad temtica
I. Carbohidratos

Fecha y horario
Semana 3, Lunes 27 Mayo
Laboratorio
Instrumentacin analtica, ed. H

PRCTICA 1. IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS

Objetivo
Observar las propiedades qumicas que se utilizan para la identificacin de diferentes tipos de carbohidratos.
Introduccin
Los carbohidratos, glcidos o azcares constituyen una de las ms importantes clases de molculas
constituyentes de los organismos. Los carbohidratos son los compuestos orgnicos ms abundantes de la
biosfera y a su vez los ms diversos. Normalmente se los encuentra en las partes estructurales de los
vegetales y tambin en los tejidos animales, como glucosa o glucgeno. Estos sirven como fuente de energa
para todas las actividades celulares vitales. Son complejos terciarios en los cuales el hidrgeno y el oxgeno
estn en igual proporcin que el agua. Los ms comunes son los sacridos, los cuales se dividen tambin en
monosacridos o azcares simples, disacridos y polisacridos.
Los carbohidratos son derivados aldehdicos o cetnicos de alcoholes polioxidrilados y por lo tanto
tienen las propiedades caractersticas de esos grupos como son la formacin de oxina e hidrazonas. Existen
diferentes tipos de reacciones qumicas que sirven para determinar cualitativamente la presencia de
carbohidratos (monosacridos, disacridos y polisacridos)

PARTE EXPERIMENTAL
REACTIVOS
Reactivo de Fehling A y B
Reactivo De Lugol
Reactivo de Seliwanoff
Reactivo de Molish
Reactivo de Bial
HCl concentrado y diludo

Bicarbonato.
Sacarosa (azcar comn)
Fructosa (refresco)
Lactosa (leche)
Almidn (harina).
Galactosa, xilosa, ribosa, maltosa.

MATERIALES
Tubos de ensayo (18)
Gradilla
Pinza para tubo de ensayo
Pipetas (3 de 1mL, 2 de 5mL)
Vaso de precipitado (2 de 50mL)
Vidrio de reloj

Trpode
Mechero Bunsen o de alcohol
Esptula
Agitador de vidrio
Rejilla con asbesto
Agua destilada

METODOLOGA
REACCIN DE FEHLING
Tomar la muestra que se quiera analizar (aproximadamente 3 mL)
Aadir 1 mL de Fehling A y 1 mL de Fehling B. El lquido del tubo de ensayo adquirir un fuerte color azul.
Calentar el tubo al bao Mara o directamente en un mechero de laboratorio.
La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojo ladrillo.
La reaccin ser negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso.

REACCIN DEL LUGOL

Este mtodo se usa para identificar polisacridos. El almidn en contacto con unas gotas del reactivo de
Lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) toma un color azul-violeta caracterstico.
Agregar en un tubo de ensayo unos 3 mL del glcido a investigar.
Aadir unas gotas de Lugol, si la disolucin del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta, la reaccin es
positiva.
REACCIN DE MOLISH
En un tubo de ensayo, colocar 2 mL de cada una de las muestras indicadas, adicionar 3 gotas de reactivo
de Molish y mezclar. Aadir en zona (dejar resbalar por las paredes del tubo, lentamente), 2 mL de cido
sulfrico concentrado.
La formacin de un anillo de color prpura en la interfase indicar que la reaccin es positiva.
REACCIN DE BIAL
En tubos de pruebas, colocar 2 mL de cada una de las muestras indicadas, adicionar 4 mL de reactivos de
Bial, calentar en bao mara durante 10 a 15 minutos hasta ebullicin.
La coloracin verde indica la presencia de pentosas
REACCIN DE SELIWANOFF
Colocar en tubos de pruebas 5 mL de reactivo de Seliwanoff y 3 mL de las muestras indicadas, llevar a bao
mara durante 4 a 5 minutos. La coloracin salmn 8 rojo cereza evidencia la presencia de cetohexosas.
AZCARES NO REDUCTORES
Tomar una muestra de sacarosa y aadir unas 10 gotas de cido clorhdrico al 10%.
Calentar a la llama del mechero durante un par de minutos. Dejar enfriar y realizar la prueba de Fehling.
Observa el resultado. La reaccin positiva nos dice que hemos conseguido romper el enlace O-glucosdico
de la sacarosa. (Se recomienda antes de aplicar la reaccin de Fehling, neutralizar con bicarbonato, Fehling
sale mejor en un medio que no sea cido.)
Referencias
1. Wilson, K., and Walker, J. 2000. Principles and Techniques of practical Biochemistry. Fifth edition.
Cambridge University Press.
2. Robert, JF., and White B.J. 1990. Biochemical techniques theory and practice. 1st edition. Waveland Press,
Inc. USA.
3. Voet, D., and J.G. Voet. 1995. Biochemistry. Second Edition. John Wiley & Sons, Inc. U.S.A
4. Mathews, C.K., van Holde K.E. and Ahern K.G. 2000. Biochemistry. Third edition. Addison Wesley
Longman Inc. USA.
5. Stryer, L. 1995. Bioqumica. Cuarta edicin. Editorial Reverte. Barcelona Espaa

MC. Roco Caldern Pascacio

P.A. Divisin Agroalimentaria - UTSelva