OBTENCION E IDENTIFICACION DE CROMOSOMAS PAQUITENICOS EN

GRILLO COMUN (Acheta sp)

I.

OBJETIVOS

II.

Anlisis de la estructura del cromosoma paquitenicos.

Determinar el patrn de cromomeros.

MATERIALES Y METODOS

Los grillos comunes fueron recolectados en la Universidad Nacional Agraria La Molina

(UNALM). La identificacin de los individuos machos se realiz tomando en cuenta que
las hembras tienen normalmente un color ms oscuro; adems presentan un apndice en el
extremo del abdomen. Ambos sexos presentan adems dos cercos (apndices segmentados
que aparentan colas en la regin dorsal terminal del abdomen.
Para la preparacin de los cromosomas se us como muestra tejido gonadal; ya que en este
tejido se encuentran las clulas en divisin meioticas. El procedimiento realizado se resume
en la siguiente tabla:
TABLA I
TIEMPO
(minutos)

PROCESO

SOLUCION

EXTRACCION
10

DISGREGACION

Solucin
Salina

30

FIJACION

Carnoy

10

Targa
PREPARACION DE LAS
LAMINAS

15

TINCION

Orceina
actica 2%

DESCRIPCION
Diseccin del grillo. Extraccin de las
gnadas (testculos).
Obtencin de los tubos seminferos
procurando disgregar lo ms posible.
Se recomienda enjuagar en agua destilada
pasado el tiempo de fijacin.
Ablandamiento de la muestra.
Se coloca uno o tres tbulos seminfero y
se corta en tres pedazos c/u.
Pasado los 15 min se procede con la
tcnica de squash.

III.

RESULTADOS

N
Cromosoma

N CROMOMEROS
CAMPO
1

N PROMEDIO
CROMOMERO
S

TAMAO
RELATIVO

DESCRIPCION

PEQUEO

Intensamente teido. Se aprecia similar a

un cuerpo de ADN extracromosomico
como el que se describe para cromosomas
paquitenicos en oocitos.

27

29

22

28

26

26.5

GRANDE

Cromosoma autosomico mas grande.

Presencia de 2 cromomeros mayores en el
lado derecho (de acuerdo a la Fig)
Presenta 2 cromomeros grandes en el lado
derecho, un cromomero de similar tamao
en la posicion media cercana al
centromero y un cromomero en la
terminacion izquierda (Ver Fig)
Se observan dos cromomeros de mayor
tamao uno ubicado en la pocision central
y otro en la region terminal izquierda. La
mayor concentracion de cromomeros se
ubica en el lado izquierdo (Ver Fig.)
La mayor concentracion de cromomeros se
presenta en el lado derecho. El cromomero
mas fuertemente teido se ubica en la
region central del cromosoma (Ver Fig.)
Un cromomero teido con mayor
intensidad ubicado en la region terminal
izquierda. Junto a este cromosoma en el
campo 1 puede observarse una macula
teida fuertemente. (Ver Fig.)

22

23

18

22

23

21.25

MEDIO

20

22

17

12

19

17.75

MEDIO

20

23

12

10

14

16.25

MEDIO

18

15

14

12

10

14.75

MEDIO

17

14

12

12.75

PEQUEO

Mayor concentracion de los cromomeros

en la region derecha.

16

15

12

12

13.75

PEQUEO

La ubicacin de los cromomeros es

uniforme a lo largo del cromosoma.

13

14

14

14

13.75

PEQUEO

La mayor concentracion de cromosomas

se da en la region central.

10

12

12

10

12

11.5

PEQUEO

Disposicin uniforme de los cromomeros.

11

11

12

9.25

PEQUEO

Los cromomeros pueden ser apreciados

con mayor facilidad ya que se encuentran
fuertemente teidos.

TOTAL

17
6

179

13
3

142

129

157.5

En los campos fotografiados se presentan los 10 cromosomas autosmicos y el cromosoma

sexual en paquiteno, en dos estadios diferentes: paquiteno temprano (Ver Fig. 2) y

paquiteno tardo (Ver Fig. 3). Tambien se presentan los cariogramas respectivos, donde los
cromosomas fueron ordenados de acuerdo al tamao relativo entre ellos, excepto el
cromosoma sexual X el cual fue numerado en los cariogramas con el numero 1 (Ver Fig. 4
y Fig. 5). Esta ubicacin (numeracin) del cromosoma sexual puede permitir
comparaciones con el complemento de muestras de oocitos; en los cuales el cromosoma
sexual es el de mayor tamao y por lo tanto su ubicacin en la posicin 1 de los
cariogramas (A. LIMA-DE-FARIA et al 1972). Por otro lado la numeracin de los
cromosomas autosmicos tanto en los cariogramas presentados como en la tabla de conteo
de cromomeros (Ver Tabla II) se establecio de acuerdo al tamao de mayor a menor en
orden correlativo de 2 a 11.

IV.

ANALISIS DE RESULTADOS

La constatacin del nmero cromosmico observado en los campos estudiados es de

2n=21, tal como se describe en la bibliografa utilizada (NILSSON 1968). La
determinacin sexual en Acheta es XX/XO como lo determinaron estudios realizados por
NILSSON et al en 1968; esta aseveracin tambin pudo ser confirmada; ya que, el
cromosoma sexual en espermatocitos tiene la apariencia de un cuerpo de ADN (similar a al
observado en los cromosomas 6 y 11 de oocitos). Dicho cromosoma sexual est presente en
el complemento en ciertos campos observados, en contraste tambin se observaron
complementos (ncleos) en los cuales no estaba presente el cromosoma sexual;
proponindose que dichos espermatocitos no portaban el cromosoma sexual X.
La observacin del cromosoma sexual X, el cual pudiera confundirse con un cuerpo de
DNA como el descrito para el complemento paquitenico en muestras de oocitos de Acheta
(LIMA-DE-FARIA et al 1972); sin embargo, es pertinente considerar que el cuerpo de
ADN est ausente en el complemento paquitenico en espermatocitos. Adems el
cromosoma sexual X en oocitos de Acheta alcanza un menor grado de compactacin,
siendo el cromosoma de mayor longitud en el complemento paquitenico de oocitos (LIMADE-FARIA et al 1972).
Es posible una clasificacin de los cromosomas autosmicos basndonos en el tamao y
patrn cromomerico. Los cromosomas autosmicos del complemento se clasifican, de
acuerdo al tamao, en: un cromosoma de mayor longitud (cromosoma 2); 4 cromosomas de
tamao medio (cromosoma 3-6) y 5 cromosomas pequeos (cromosomas 7-11). La
descripcin de cada cromosoma, el nmero de cromomeros por cromosoma (en cada campo
estudiado); as como el numero promedio de cromomeros se resume en la Tabla II.

V.

DISCUSIN

Los cromomeros estructuralmente son regiones de DNA espiralizado (GALL 1958)

adems contienen copias de ADN amplificado. La estructura de un cromomero
individualmente consiste de una regin central (core) de ADN rodeado por una regin
externa rica en RNA, lo cual indica un papel funcional de estas molculas de RNA en
cromosomas paquitenicos. Los cromosomas del complemento se pueden caracterizar,
adems de por el tamao, por su patrn cromomerico; los cromomeros estn presentes en
diferente cantidad en los cromosomas. Adems de variar en tamao entre los distintos
cromomeros en un cromosoma, tambin un mismo cromomero puede variar dependiendo el
estadio de desarrollo en el que se encuentre el espermatocito. Esta afirmacin puede ser
apreciada en los campos presentados (Ver Fig 2 y Fig 3) pertenecientes a paquiteno
temprano y paquiteno tardo. Las copias de ADN presentes en los cromomeros son
liberados conforme se avanza a lo largo de la profase. Es de este modo que se aprecia una
disminucin en el tamao de ciertos cromomeros si contrastamos los campos donde el
espermatocito se encuentra en paquiteno temprano y los que se encuentran en paquiteno
tardo. Es lgico suponer adems que la perdida (liberacin) de copias de ADN tambin
afecte (disminuya) la cantidad de ADN, hecho que fue demostrado por experimentos que
demostraron que el nmero de pares de nucletidos disminuye conforme se avanza a lo
largo de paquiteno.
Es pertinente sealar tambin que no todos los cromomeros varan su tamao a lo largo de
la profase, es decir, algunos cromomeros no liberan copias de ADN. Este es uno de los
resultados que se esperaban observar, puesto que esta observacin tiene asidero sobre la
evidencia de que los cromomeros liberan el ADN amplificado, el cual puede pertenecer a
cistrones de RNA ribosomal 18S y 28S o a otros genes, en diferentes estadios (Birnstiel
1971).
Tambin debemos de mencionar sobre las asinapsis observada en algunos cromosomas, que
vendra a ser la falta de apareamiento meiotico entre cromosomas homlogos y resulta
obvio que imposibilita que se produzca el sobrecruzamiento. La asinapsis observada es de
tipo parcial, es decir que afecta a solo algunos pares homlogos. A veces la expresin
fenotpica de tales mutaciones asinapticas muestra penetracin incompleta; es decir que
pueden manifestarse de forma distinta en los meiocitos de un mismo individuo, es por eso
tambin que en los resultados no se apreciaron en todos los cromosomas y no siempre se
repetan en las placas.( Lacadena 1996)
Se presenciaron los nudos paquitenicos en algunos cromosomas, (los nudos paquitenicos
(knobs) conformada por heterocromatina constitutiva), de aqu que se le compare con las
bandas c heterocromatica, los knobs vendran a ser el resultado de una renaturalizacion
muy rpida de ADN satlite tras la desnaturalizacin; los knobs presentes varan en nmero
segn las poblaciones. Es justamente por esta caracterstica estructural que nos sirve para
dilucidar las relaciones entre diferentes poblaciones.

Muchos estudios sobre la distribucin y frecuencia de nudos paquitenicos (knobs) en

muchos organismos, han mostrado que estn estrechamente relacionados con variables
ambientales (Jones, 1995; Bennett and Leitch, 1995).
Todas estas caractersticas anteriormente mencionadas, evidencias que diferentes
estructuras no solo cumplen una funcin determinada en la segregacin o en la forma del
cromosoma, sino que tambin tienen implicancias fenotpicas.

VI.

BIBLIOGRAFIA

BIRNSTIEL, M. L., CHIPCHASE, M. and SPEIRS, J. 1971. The ribosomal RNA

cistrons. - Progr. Nucl. Arid Res. Mol. Biol. 11: 351-389.
GALL, J. G. 1968. Differential synthesis of the genes for ribosomal RNA during
amphibian o8genesis.
Jones, R. N. 1991. B-chromosome drive. The American Naturalist137(3):430-442.
Jones, R.N., 1995. Tansley Review No. 85. B chromosome in plants. New
Phytology 131 :411-434.
LIMA-DE-FARIA, A., BIRNSTIEL, M. and JAWORSKA. H. 1969. Amplification
of ribosomal cistrons in the hetero-chromatin of Acheta- Genetics.
Juan Ramn LACADENA - 1996 - Science- La cadena- pag: 289.
Robert L., Nussbaum; Roderick R. McInnes; Huntington F. Willard (2008).
Captulo 2: El genoma humano y las bases cromosmicas de la herencia.
Thompson & Thompson. Gentica en Medicina (7 edicin). Barcelona: Elsevier
Masson. pp. 16, 18.
Porter, H.L. and A.L. Raybum. 1990. B-chromosome and C-band heterochromatin
variation in Arizona maize populations adapted to different altitudes. Genome 33:
659-662.