TEMA 2.

TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

Tema 2. TOMA, MANIPULACIN Y PREPARACIN DE MUESTRAS

PARA SU ANLISIS

TIPOS DE MUESTRAS

Tipos de muestras
Recipientes de recoleccin
Variables que afectan a la toma de muestra

SANGRE

Transporte de muestras

ORINA

Criterios para el rechazo de muestras

OTROS LIQUIDOS ORGNICOS: Lquido cefalorraqudeo y amnitico

Estabilidad y conservacin

HECES

Preparacin de muestras para el anlisis

ASPIRADOS GSTRICOS

Mtodos de separacin: centrifugacin, precipitacin, extraccin,

cromatografa y electroforesis

CLCULOS RENALES Y BILIARES

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

COAGULACIN SANGUINEA

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

COAGULACIN SANGUINEA

Sangre entera : suspensin de clulas en una matriz de protenas y sales

denominada plasma

Los cogulos de sangre se forman por interaccin de aproximadamente una

docena de protenas denominadas FACTORES DE COAGULACIN que
funcionan simultneamente

SUERO
(parte lquida)

SANGRE ENTERA

1. coagulacin
2. centrifugacin

COGULO

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TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

RECIPIENTES DE RECOLECCIN
COAGULACIN SANGUINEA
1. JERINGAS
2. TUBOS DE VACO:

Factores de coagulacin

PROTROMBINA

TROMBINA

FIBRINGENO

FIBRINA
Polimerizacin
REDES DE FIBRINA

Cogulo: Redes de fibrina + plaqueta + glbulos rojos

Hemostasia: Propiedad de autosellado del sistema circulatorio

*Stat (del latn statim=inmediatamente)

3. OTROS RECIPIENTES DE RECOLECCIN

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

VARIABLES QUE AFECTAN A LA TOMA DE MUESTRA

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

Criterio para el rechazo de muestras

Variables diurnas

1. Inadecuada identificacin

Postura del paciente

2. Recogida de volumen de sangre inadecuado

Estasis (acumulacin de sangre sobre una constriccin)

3. Utilizacin de tubos inadecuados

Hemlisis (prdida de hemoglobina por parte de los eritrocitos)

4. Presencia de hemlisis

Conservacin

5. Transporte inapropiado

Transporte

6. Presencia de interferentes

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ESTABILIDAD Y CONSERVACIN DE MUESTRAS

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

ESTABILIDAD Y CONSERVACIN DE MUESTRAS

La alteracin de muestras puede ser debida a:

1. Adsorcin sobre las paredes del vidrio del recipiente
2. Evaporacin de sustancias voltiles

1. Alteracin de la temperatura

2. Alteracin del pH

3. Paso de agua de los hemates al plasma (adicin de anticoagulantes)

4. Alteraciones en la permeabilidad de los eritrocitos
5. Actividades metablicas de hemates y leucocitos (consumo de O2 y
produccin de CO2

3. Liofilizacin de muestras

4. Conservantes qumicos

6. Hidrlisis
7. Gluclisis
8. Fenmenos de autodegradacin
9. Contaminacin por bacterias u hongos.

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

Conservantes qumicos
PROCESADO DE MUESTRAS
1. SANGRE
1.1. Los que evitan transformaciones qumicas: KF y yodoacetato
1.2. Los que tienen acciones antibacterianas:
timol / KF + monoclorobenceno / KF + monobromobenceno /
Antibiticos

2. ORINA
Suelen aadirse agentes antibacterianos:
formaldehdo / timol / ac. brico / tolueno / cloroformo.

1. OBTENCIN DE SANGRE ENTERA Y PLASMA

1. En ausencia de agentes qumicos

2. En presencia de agentes qumicos:
Heparina
Sales de AEDT
Oxalatos
NaF
Citrato sdico
Polietanol-sulfonato sdico

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PROCESADO DE MUESTRAS

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PROCESADO DE MUESTRAS

1. OBTENCIN DE SUERO. SEPARACIN POR CENTRIFUGACIN

PRECIPITACIN DE PROTEINAS POR PROCEDIMIENTOS QUMICOS

9 Precipitaciones que dependen de la deshidratacin de protenas

1. Separadores de suero
- Por adicin de disolventes miscibles
- Por fraccionamiento salino (salting out)

2. Filtro tipo mbolo

2. PRECIPITACIN PARA LA ELIMINACIN DE PROTENAS

Ultracentrifugacin
Absorcin sobre sustancias como el caoln
Combinacin de las protenas con los correspondientes anticuerpos
Precipitacin por desnaturalizacin por calor, pH adecuado
Precipitacin mediante procedimientos qumicos

9 Precipitaciones que dependen de la formacin de sales insolubles

- Precipitantes aninicos: cidos tungstico, tricloroactico,
metafosfrico, perclrico,etc
- Precipitantes catinicos: Hg2+, Fe3+, Cu2+, combinaciones de
Hg2+- Ba2+ y de Ba2+ - Zn2+
9 Precipitacin mediante adicin de cloroformo

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PROCESADO DE MUESTRAS

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS
3. EXTRACCIN

3. EXTRACCIN

3.1. Extraccin lquido-liquido de forma continua

3.1. Extraccin lquido-liquido

- Extraccin simple
- Extracciones mltiples
- Condiciones ptimas de extraccin:
* Eleccin del disolvente
* Control del pH
* Control de la fuerza inica

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PROCESADO DE MUESTRAS

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PROCESADO DE MUESTRAS

3. EXTRACCIN

3.2. Extraccin slido-lquido de forma continua

3.3. Extraccin a contracorriente

disolvente

3.4. Procesado de extractos

Muestra
slida

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

4. CROMATOGRAFIA

4. CROMATOGRAFIA

Clasificacin segn la fase mvil y los aparatos fsicos:

Clasificacin segn el mecanismo de separacin de la fase estacionaria:

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TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

4. CROMATOGRAFIA

4. CROMATOGRAFIA

Componentes bsicos de un equipo de cromatrografa gaseosa:

Diagrama de un sistema de cromatografa lquida:

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PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

4. CROMATOGRAFIA

4. CROMATOGRAFIA

Cromatograma tpico de un sistema de cromatografa lquida en columna:

Parmetros de retencin:
Tiempo de retencin (tr)

tR2
Respuesta del detector

Tiempo muerto (tm)

tR1

Factor de retencin o capacidad: k= tr tm

tm
Selectividad o retencin relativa: = (tr)B - tm
(tr)A tm
Platos tericos : N = 16 tr2
w2

tM

N = 5.55 tr2
w2

V (mL
t (min)

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PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

4. CROMATOGRAFIA

4. CROMATOGRAFIA

Parmetros de retencin:

Parmetros de retencin:

Factor de retencin o capacidad: k= tr tm

tm

Selectividad o retencin relativa: = (tr)B - tm

(tr)A tm
(tr)B

tr
(tr)A

tm
tm

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

4. CROMATOGRAFIA

4. CROMATOGRAFIA

Parmetros de retencin:

Parmetros de retencin:
Platos tericos : N = 16

tr2
w2

tr2

N = 5.55
w2

Resolucin: R =

t2 t1
(w1 +w2)

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TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

4. CROMATOGRAFIA

4. CROMATOGRAFIA

Parmetros de retencin:

Cuantificacin usando un patrn externo:

t2 t1
(w1 +w2)

Altura rea de pico

Resolucin: R =

Concentracin del patrn externo

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TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

4. CROMATOGRAFIA

4. CROMATOGRAFIA

Cuantificacin usando un patrn interno: determinacin de teofilina utilizando

betahidroxietilteofilina como patrn interno

Cuantificacin utilizando la adicin estndar:

0,06

Debe estar completamente separado de

otros picos
Debe ser eludo cerca de la sustancia
analizada
Debe comportarse de forma similar a la
sustancia analizado durante el
pretratamiento de muestra
Debe tener una altura o rea del orden de
un patrn en el intervalo de concentracin
deseada
No debe estar presente en la muestra
Debe poder obtenerse comercialmente
Debe ser agregado en forma lquida

0,05

Altura o rea de
pico
Absorbancia
(u.
A.)

Seleccin del patrn interno:

0,04
0,03
y = 0,0411x + 0,0101
R2 = 0,9995

0,02
0,01
0
-0,4 -0,2

0,2

0,4

0,6

0,8

1,2

Crom
(m g/l)aadida
Concentracin
deopatrn

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TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

4. CROMATOGRAFIA

4. CROMATOGRAFIA

Muestras para HPLC:

Derivatizacin
muestra

Agente
derivatizante

Nuevo
producto

Derivatizacin de barbitricos por tetrametilacin

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

4. CROMATOGRAFIA

5. ELECTROFORESIS

0. Definicin
1. Fuerzas ejercidas sobre la partcula
2. Movilidad de una partcula
3. Efecto del pH sobre la movilidad
4. Electrolitos
5. Movimiento y conductividad de los iones
6. Otros factores que afectan a la movilidad:
carga y conformacin
Atmsfera inica y potencial Z
energa trmica: efecto de relajacin
efecto electrofortico
7. Medios de soporte
8. Tcnicas de aumento de la resolucin
9. Mtodos de separacin en base al tamao molecular
10. Mtodos de separacin en base al tamao y la carga
11. Localizacin del compuesto de inters
12. Aplicaciones clnicas
13. Electroforesis capilar

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TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

5. ELECTROFORESIS

5. ELECTROFORESIS

Aplicacin de un campo elctrico a una disolucin inica:

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

5. ELECTROFORESIS

5. ELECTROFORESIS

10

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TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

5. ELECTROFORESIS

5. ELECTROFORESIS

PERSONA SANA

PRESENCIA DE CIRROSIS
HEPTICA

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

5. ELECTROFORESIS. EJEMPLOS

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

5. ELECTROFORESIS. EJEMPLOS

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TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

5. ELECTROFORESIS. EJEMPLOS

5. ELECTROFORESIS. EJEMPLOS

TEMA 2. TOMA Y MANIPULACIN DE MUESTRAS

PROCESADO DE MUESTRAS

5. ELECTROFORESIS CAPILAR

5. ELECTROFORESIS CAPILAR

Dimetro capilar 5m
Campo elctrico 25 KV
Detector electroqumico
Neurona

Capilar

Respuesta detector

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PROCESADO DE MUESTRAS

Serotonina 3M

Tiempo (min)

12