Ampliao de Escala em Processos

de Cultivo em Perfuso.
Seleo de equipamentos de Reteno celular

Alberto A . R . Drummond
Engenharia de Processos com Clulas animais
Professores : Leda Castilho & Ricardo Medronho

1.

Introduo

Atualmente, o desenvolvimento de processos industriais para a produo de vacinas ,

antibiticos, protenas e outros produtos biotecnolgicos, visando alta eficincia e baixo
custo, depende da introduo de mutaes no DNA dos organismos produtores e da posterior
seleo dos organismos mais produtivos . No passado , estas mutaes eram conduzidas de
forma randmica , porm com o advento da tecnologia do DNA recombinante tornou-se
possvel isolar o gene que contm o cdigo para uma protena e inseri-lo (ou clon-lo) numa
clula diferente da original, que seja mais interessante do ponto de vista industrial. Alm disto ,
os desenvolvimentos na chamada rea de down-stream, ou purificao de bioprodutos
permitiram que produtos de alto valor agregado, como hormnios, vacinas , reagentes para
diagnsticos e produtos de qumica fina, se tornassem economicamente interessantes.
Com o crescimento da produo destes bioprodutos tornou-se necessrio a ampliao de escala da
planta industrial para atender o mercado . O que antes era produzido em escala piloto,atualmente
necessita de uma planta em escala industrial , logo as pesquisas inerentes a ampliao de escala e
seleo de equipamentos tornou-se uma prioridade .

Produo de vacinas em grande escala

- Instituto Butantan

 A ampliao de Escala
Na ampliao de escala em processos com clulas animais ,o alto potencial de ocorrncia de
alteraes biolgicas torna necessrio uma rgida padronizao e monitoramento do processo como
um todo.
Logo embora o soro fetal bovino contenha praticamente todos os nutrientes e fatores de
crescimento indispensveis ao crescimento celular , a impossibilidade de uma padronizao e
maior facilidade de contaminaes levam a necessidade de utilizao de meios de cultivo
balanceados e isentos de soro, para que seja possvel melhor padronizao e controle do processo,
facilitando o down-stream . Atualmente muitas industrias ainda utilizam o soro fetal bovino em
escala industrial devido a fatores como custo e produtividade , porem eleva-se os custos na etapa
de extrao e purificao, o uso de meio isento de soro leva a menores alteraes biolgicas
durante o aumento de escala .
Condies ideais de importncia para ampliao de escala :

1 - Controle on line ( FIA ) em tempo real

2- Meio isento de soro bovino , previamente testado e corretamente balanceado
3- Otimizao do sistema de separao de clulas
4- Geometria do reator
5- Otimizao do sistema de aerao e agitao
6- Controle da concentrao de substrato
7- Controle da osmolaridade do meio ( betaina pode ser usada como osmoprotetor )
O meio de cultivo deve conter glicose e glutamina , a relao entre o lactato produzido e glicose consumida e de
amnio produzida e glutamina consumida so parmetros importantes no monitoramento e controle , visto que
nos informa dados sobre o fluxo interno de metablitos na clula, tratando-se de uma informao sobre a atividade
fisiolgica da clula.

Na escolha de equipamentos e condies de processo devemos levar

em conta a posterior ampliao de escala e o down-stream

O separador de celulas no pode gerar altas tenses cizalhantes e devemos observar

que as clulas animais no resistem bem foras centrifgas superiores a 320 g .
Foras cizalhantes e elevado fator g levam a perda de viabilidade .
O sistema de troca gasosa via permeao em material polimrico ,evitando-se a formao
de bolhas, o ideal .

Seleo de equipamentos e sistemas de separao celular

Filtrao por Membrana ( microfiltrao ) : O equipamento deve possuir um

sistema de retrolavagem e ultra som para evitar fouling.

Centrifugas : Acima de 320 g podemos perder a viabilidade celular baixando a

produtividade . Centrifugas podem ser utilizadas , mas h limitaes inerentes ao

tipo de clulas utilizadas.

Hidrociclones : O tempo de residncia da clula no separador deve ser levado

em conta , possui elevada eficiencia de separao e pode-se utilizar arrays de vrios

hidrociclones em paralelo.

Elutriador centrfugo : Possibilidade de separao de clulas por tamanho, um

controle eficiente da vazo de entrada e da velocidade de rotao pode proporcionar

uma boa separao de clulas . O equipamento ainda recente.

Sedimentadores lamelados : Apresenta menor eficincia , so de grandes

dimenses e muito utilizados na industria, apresentam dificuldades inerentes a

aderncia das clulas as lamelas.

 Concluses

O meio de cultivo fator importante ao se ampliar a escala , meios isento

de soro fetal bovino facilitam o down-stream , permitindo padronizao
do processo e melhor qualidade .
Monitoramento on-line em tempo real importante tambm durante
a ampliao de escala j que o controle contnuo e preciso do
processo em perfuso pode evitar perdas de qualidade e produtividade
( biosensores, FIA, etc ).

Aerao por permeao em tubulao de polmero permevel ao oxignio

leva a melhor controle e obten-se melhor qualidade no produto final,
aerao por disperso pode ser usada desde que se faa uso de um protetor
( Pluronic F-68 ) .
Para ampliao de escala, o melhor equipamento em uso, para separao
de clulas no processo contnuo em perfuso, so os hidrociclones e os
arranjos de pequenos hidrociclones em paralelos. Apresentam alta eficincia .

Biorreator com sistema em perfuso I. Butantan

Produo de vacinas

Bibliografia consultada

1 -http://www.hottopos.com/regeq2/meio_seculo_de_engenharia_bioq.htm
2 -notas de aula EQE028
3- http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-31072001-120313/